專利名稱：光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物及其制備方法和在制藥中的新用途，具體涉及光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物在制備治療腫瘤藥物中的新用途，尤其是在制備治療膀胱癌等腫瘤光敏劑藥物中的用途。
背景技術(shù)：
蠶砂在我國中醫(yī)藥的應(yīng)用已有悠久歷史，通常用于祛風(fēng)除濕，和胃化濁等。唐代陳藏器《本草拾遺》、明代李時珍《本草綱目》等均載有蠶砂治療婦人血崩、血少和血瘀等疾病。研究顯示，蠶砂含有豐富的葉綠素，它是卟啉類化合物，它的酸水解產(chǎn)物含葉綠酸a和紫紅素-18等化合物，還有研究表明，葉綠素的堿水解產(chǎn)物含葉綠酸e6和葉綠酸e4等化合物。已知光敏劑(photosensitizer,又稱增感劑,敏化劑)是一種本身(或其代謝產(chǎn)物)能選擇的濃集于要作用的細胞的化學(xué)物質(zhì)，它(或其代謝產(chǎn)物)在適當(dāng)波長光的激發(fā)下能發(fā)生光動力反應(yīng)而破壞靶細胞。光敏劑與一般抗癌藥物的不同之處，是其使用受到設(shè)備條件的嚴格限制，因為光敏藥物必須和專用的光動力激光治療儀聯(lián)合使用才能對患者產(chǎn)生治療效果。目前已有三種光敏藥物獲得美國食品與藥品管理局(FDA)的批準(zhǔn)，即PH0T0FRIN(通用名Porfimer sodium)、Visudyne (通用名verteporf in,或化學(xué)結(jié)構(gòu)簡稱BDP-MA)和氨基酮戍酸(5-aminolaevulanic acid, ALA)。后二種主要用于非腫瘤性疾病(老年性眼底黃斑病變、光化學(xué)性角化病)的治療。迄今為止，PH0T0FRIN是已獲得美國FDA批準(zhǔn)可應(yīng)用于多種實體惡性腫瘤治療的唯一的光敏藥物。隨著光敏劑研究的發(fā)展，不同的疾病對光敏劑的有關(guān)參數(shù)的要求也不相同，不同的臨床用途要求不同的光敏劑與之匹配。理想的新型光敏劑需要符合下述要求:①組分單一，結(jié)構(gòu)明確；②方便給藥，縮短給藥到治療的時間；③排泄快、毒、副作用小，避光時間短；④有較高的作用效率，產(chǎn)生足夠的ROS 在病變組織上被選擇性吸收，對健康 組織應(yīng)不吸收或少吸收；⑥與相應(yīng)的治療疾病有匹配的作用波長，等
坐寸ο研究顯示，葉綠酸類化合物對增生迅速的組織，具有蓄積作用，而腫瘤組織的蓄積是正常組織的10-15倍。本發(fā)明擬研究提出葉綠酸類化合物作為治療腫瘤的光敏劑藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物及其制備方法和在制藥中的新用途，具體涉及光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物在制備治療腫瘤藥物中的新用途，尤其是在制備治療膀胱癌等腫瘤光敏劑藥物中的用途。本發(fā)明的光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物包括葉綠酸e4鈉鹽、e6鈉鹽和f鈉鹽，可由中藥蠶砂為原料制備得到。經(jīng)試驗證實，所述的光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物應(yīng)用于光動力學(xué)治療腸道腫瘤和乳腺腫瘤效果良好，尤其是用于治療膀胱原位癌和難治性、反復(fù)復(fù)發(fā)性表淺性膀胱腫瘤時，對腫瘤細胞有明顯的殺傷效應(yīng)，療效好，毒性極小，安全性大，治療時不需避光，有其獨特的優(yōu)勢，是一類理想的光敏劑。
本發(fā)明提供了制備葉綠酸鈉鹽衍生物的方法，其包括步驟:以中藥蠶砂為原料，用有機溶劑提取得到的葉綠素粗品，溶于極性有機溶劑中，經(jīng)過堿水解、分離、提取、純化得到葉綠酸e6，再由葉綠酸e6分別轉(zhuǎn)化為e4、和f，再制備成相應(yīng)的鈉鹽；或在葉綠酸固體中，加入2-10%氫氧化鈉水溶液，使其剛剛完全溶解，真空干燥，得葉綠酸鈉鹽固體。所述的葉綠酸衍生物和氫氧化鈉的摩爾比為1: 2-3;所述的葉綠酸鈉鹽包括如下結(jié)構(gòu)式的葉綠酸e4鈉鹽、e6鈉鹽和f鈉鹽，
權(quán)利要求
1.光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物，其特征在于，所述葉綠酸鈉鹽衍生物包括如下結(jié)構(gòu)式的葉綠酸e4鈉鹽、e6鈉鹽和f鈉鹽化合物，
2.一種如權(quán)利要求1所述的葉綠酸鈉鹽衍生物的制備方法，其特征在于，其包括步驟:以中藥蠶砂為原料，用有機溶劑提取得到葉綠素粗品，溶于極性有機溶劑中，加入氫氧化鈉乙醇溶液，經(jīng)過堿水解、分離、提取、純化得到葉綠酸e6，再由葉綠酸e6分別轉(zhuǎn)化為e4、和f，再制備成相應(yīng)的鈉鹽；或在葉綠酸固體中，加入2-10 %氫氧化鈉水溶液，使其完全溶解，真空干燥，得葉綠酸鈉鹽固體； 所述的葉綠酸衍生物和氫氧化鈉的摩爾比為1: 2-3。
3.如權(quán)利要求2所述的葉綠酸衍生物鈉鹽的制備方法，其特征在于，制備葉綠酸e6鈉鹽采用下述步驟: 用中藥蠶砂為原料，粉碎，加3-5倍體積的80%丙酮溶解，在60°C水浴中攪拌2-4小時,過濾,濾渣再用80 %的丙酮浸提2次，合并濾液，蒸去丙酮，殘留的水溶液用10% NaOH調(diào)PH到10，用等體積的純化汽油提取3-4次，去雜質(zhì)，濃縮，得膏狀葉綠素粗品； 取葉綠素粗品，加入80%的丙酮，攪拌均勻后加入20%的Na0H，60°C水解，蒸去丙酮，放置，分層后取堿性水溶液，用18%的HCl調(diào)溶液的pH到10左右，用純化汽油提取去雜質(zhì)，過濾，濾液再用18%的HCl調(diào)溶液的pH到3，沉淀析出，濾取沉淀，用水洗滌，真空干燥，得墨綠色晶體，經(jīng)硅膠柱層析(洗脫液，丙酮:甲醇:甲酸=50: 25: 1，V/V)得葉綠酸e6; 取葉綠酸e6，溶于無水丙酮中，加入4%NaOH乙醇溶液，pH 9_10，蒸去丙酮和乙醇，真空干燥，得葉綠酸e6鈉鹽。
4.如權(quán)利要求2所述的葉綠酸衍生物鈉鹽的制備方法，其特征在于，制備葉綠酸e4鈉鹽采用下述步驟: 取制得的葉綠酸06,溶于IOOml卩比唳中，在120°C油浴中通氮氣回流60min,減壓蒸去吡啶，加入200ml水，調(diào)pH到3得墨綠色晶體，真空干燥，濾取沉淀，得葉綠酸e4 ;溶于無水丙酮中，加入4%NaOH乙醇溶液，pH 9_10，蒸去丙酮和乙醇，真空干燥，得葉綠酸e4鈉鹽。
5.如權(quán)利要求2所述的葉綠酸衍生物鈉鹽的制備方法，其特征在于，制備葉綠酸f鈉鹽采用下述步驟: 取制得的葉綠酸e6，溶于IOOml吡啶中，加25%K0H甲醇溶液250ml在通氧氣條件下60min ;在通氮氣條件下回流60min,減壓蒸去批唳,加入200ml /K，用18%HC1溶液調(diào)pH到.3，沉淀析出，濾取晶體，用水洗滌，真空干燥得葉綠酸f ；取葉綠酸f，溶于無水丙酮中，加入4%NaOH乙醇溶液，pH 9_10，蒸去丙酮和乙醇，真空干燥，得綠酸f鈉鹽。
6.權(quán)利要求1所述的葉綠酸鈉鹽衍生物在制備光動力學(xué)治療腫瘤光敏劑藥物中的用途。
7.權(quán)利要求1所述的葉綠酸鈉鹽衍生物在制備光動力學(xué)治療膀胱癌光敏劑藥物中的用 途。
全文摘要
本發(fā)明涉及光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物及其制備方法和在制備治療腫瘤藥物中的新用途，尤其是在制備光動力學(xué)治療膀胱癌腫瘤光敏劑藥物中的用途。所述的光敏劑葉綠酸鈉鹽衍生物包括如下結(jié)構(gòu)式的葉綠酸e4鈉鹽、e6鈉鹽和f鈉鹽化合物，本發(fā)明的葉綠酸鈉鹽經(jīng)體外對人膀胱癌細胞的殺傷作用試驗，結(jié)果顯示，其對腫瘤細胞有明顯的殺傷效應(yīng)，尤其治療膀胱原位癌和難治性、反復(fù)復(fù)發(fā)性表淺性膀胱腫瘤時，療效好，毒性極小，安全性大，治療時不需避光，有其獨特的優(yōu)勢，為臨床應(yīng)用提供了有意義的實驗依據(jù)。
文檔編號C07D487/22GK103193782SQ20121016978
公開日2013年7月10日 申請日期2012年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月28日
發(fā)明者張元芳, 陳剛, 李斌, 方杰, 潘小平 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院