專利名稱：一種從花椒油中提取羥基山椒素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于從花椒屬植物中提取生物活性成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從花椒油中提取羥基山椒素的方法。
背景技術(shù)：
花椒油是指直接用食用油浸泡花椒或采用有機(jī)溶劑浸提、超臨界CO2萃取等方法制得的花椒油樹(shù)脂與食用油適量混合所制成的具有麻香味的調(diào)味油。由于花椒油的加工大大減少了花椒在貯藏和銷售等環(huán)節(jié)中造成有效成分的損失 和微生物污染，解決了花椒粒和花椒粉劑給烹飪及食用帶來(lái)的不便，因此越來(lái)越受消費(fèi)者青睞。但是，目前花椒油市場(chǎng)并不規(guī)范，產(chǎn)品標(biāo)簽大多只標(biāo)明原料，而作為花椒油重要指標(biāo)的麻味物質(zhì)含量并沒(méi)有出現(xiàn)在標(biāo)簽上。如何分離出高純度花椒麻味物質(zhì)，以作為花椒及其產(chǎn)品麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品一直是國(guó)內(nèi)研究的熱點(diǎn)，也是各花椒生產(chǎn)企業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。目前，關(guān)于從花椒中提取麻味物質(zhì)的報(bào)道有00112633. 4公開(kāi)了一種經(jīng)高溫高壓水煮制取花椒麻味素的方法，但經(jīng)該方法提取的麻味素除了含有山椒素、山椒醇、青椒醇外，還含有青椒堿、茵芋堿等生物堿，成分較復(fù)雜，根本不能作為產(chǎn)品麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品。03132341. 3公開(kāi)的是一種利用超臨界流體技術(shù)分離花椒麻味成分的工藝，該工藝設(shè)備操作技術(shù)要求較高，且所制備的麻味成分為初步提取物，只能用于工業(yè)化生產(chǎn)中，作為食品和藥品的原料，不適宜作為麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品。本發(fā)明人在前期研究中發(fā)現(xiàn)山椒素是花椒麻味物質(zhì)的主要成分，具有強(qiáng)烈的刺激性，是一類鏈狀不飽和脂肪酸酰胺，在常溫下易溶于氯仿、甲醇、乙醇、無(wú)水乙醚等有機(jī)溶齊U。山椒素又可分為Ct -山椒素、β -山椒素、Y -山椒素、輕基-α -山椒素、輕基_β -山椒素、輕基_ Y _山椒素、輕基_ ε _山椒素等，且其中的輕基_ α _山椒素和輕基_ Y _山椒素的相對(duì)含量明顯大于其他的山椒素。這些山椒素在200 nm到300 nm都有紫外吸收現(xiàn)象，并在270 nm處出現(xiàn)了最大吸收峰。因此，本發(fā)明人認(rèn)為從花椒油中分離純化出這兩種山椒素可作為花椒麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品。但遺憾的是現(xiàn)還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道從花椒油中分離純化出這兩種山椒素的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種從花椒油中提取羥基山椒素的方法。本發(fā)明提供的從花椒油中提取羥基山椒素的方法，其特征在于其工藝步驟和條件如下(I)在20 40 ml的花椒油中，按體積比1:20 30加入甲醇，先室溫機(jī)械振蕩2(T30min，然后在超聲頻率35 55Hz下超聲振蕩5 lOmin，再將浸提液在250(T3000r/min的速度下，離心1(T15 min，取上清液，過(guò)Al2O3層析柱除去多酚，_20°C以下避光冷凍12 18小時(shí)，將提取液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得濃縮物；
(2)先將濃縮物用3 4ml體積百分比濃度為5(Γ80%甲醇溶解，并按樣品與硅膠柱質(zhì)量比1:4(Γ50上樣，然后用體積百分比濃度為70 80%的甲醇，以洗脫流速O. 5 I. 5ml/min進(jìn)行等梯度洗脫，且按每份收集量為8(T120 ml等份收集洗脫液，并結(jié)合薄層層析法，將初步確定的目標(biāo)物所在的洗脫液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得濃縮物；(3)將所得濃縮物用色譜級(jí)甲醇先稀釋至5 10 mg/ml，然后用制備型液相色譜進(jìn)一步純化，并分別收集兩個(gè)最大吸收峰的洗脫液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得羥基山椒素I和II。以上方法中所述的薄層層析法是用體積比1:9的甲醇和氯仿混合液作為展開(kāi)齊U，將上述洗脫液在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)樣，展開(kāi)，并置于254 nm的紫外燈下，將出現(xiàn)明顯紫色斑點(diǎn)的第二組分確定為目標(biāo)物所在組分。 以上方法中所述的制備型液相色譜的色譜柱型號(hào)為ODS -4251K，規(guī)格為10X250mm, 5 Mm，制備條件為先用體積百分比濃度為7(Γ80%的甲醇水溶液洗脫，2(T40 min ;再用體積百分比濃度為8(Γ100%的甲醇水溶液洗脫，并分別收集兩個(gè)最大吸收峰的洗脫液；流速為I. 5 2 ml/min，柱溫25°C，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm ;進(jìn)樣量100 200μ1。本發(fā)明所得羥基山椒素I主要為羥基山椒素、羥基-α-山椒素和羥基-β-山椒素，它們之間為同分異構(gòu)體；所得羥基山椒素II主要為羥基-Y-山椒素和羥基-Y-異山椒素，它們之間也為同分異構(gòu)體，其結(jié)構(gòu)式分別如下
O
,X=========/
羥基-ε-山椒素
O
"^*-·····································^* "- ,. : , .
羥基■ -山椒素
fS
羥基-P-山椒素
權(quán)利要求
1.一種從花椒油中提取羥基山椒素的方法，其特征在于其エ藝步驟和條件如下 (1)在20 40ml的花椒油中，按體積比1:20^30加入甲醇，先室溫機(jī)械振蕩2(T30min，然后在超聲頻率35 55Hz下超聲振蕩5 lOmin，再將浸提液在250(T3000r/min的速度下，離心1(T15 min，取上清液，過(guò)Al2O3層析柱除去多酚，_20°C以下避光冷凍12 18小時(shí)，將提取液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得濃縮物； (2)先將濃縮物用3 4ml體積百分比濃度為5(Γ80%甲醇溶解，并按樣品與硅膠柱質(zhì)量比1:40 50上樣，然后用體積百分比濃度為70 80%的甲醇，以洗脫流速O. 5 I. 5ml/min進(jìn)行等梯度洗脫，且按每份收集量為8(T120 ml等份收集洗脫液，并結(jié)合薄層層析法，將初步確定的目標(biāo)物所在的洗脫液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，即得濃縮物； (3)將所得濃縮物用色譜級(jí)甲醇先稀釋至5 10mg/ml，然后用制備型液相色譜進(jìn)一歩純化，井分別收集兩個(gè)最大吸收峰的洗脫液在< 40°C下進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得羥基山椒素I和II。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的從花椒油中提取羥基山椒素的方法，其特征在于所述的薄層層析法是用體積比1:9的甲醇和氯仿混合液作為展開(kāi)劑，將上述洗脫液在薄層板上進(jìn)行點(diǎn)樣，展開(kāi)，井置于254 nm的紫外燈下，將出現(xiàn)明顯紫色斑點(diǎn)的第二組分確定為目標(biāo)物所在組分。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的從花椒油中提取羥基山椒素的方法，其特征在于所述的制備型液相色譜的色譜柱的型號(hào)為ODS -4251K，規(guī)格為10X250 mm, 5 Mm，制備條件為先用體積百分比濃度為7(Γ80%的甲醇水溶液洗脫，2(T40 min ;再用體積百分比濃度為8(Γ100%的甲醇水溶液洗脫，井分別收集兩個(gè)最大吸收峰的洗脫液；流速為I. 5^2 ml/min,柱溫25°C，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm ;進(jìn)樣量10(Γ200μ1。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)的一種從花椒油中提取羥基山椒素的方法，其工藝步驟是1)將花椒油用甲醇依次進(jìn)行室溫浸提、離心分離、層析除多酚、冷凍、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得濃縮物；2)先將濃縮物用甲醇溶解后，用硅膠柱進(jìn)行梯度洗脫并等份收集洗脫液，再將薄層層析法初步確定的目標(biāo)物所在的洗脫液進(jìn)行濃縮干燥；3)將所得濃縮物用制備型液相色譜進(jìn)行細(xì)分純化，并分別收集兩個(gè)最大吸收峰的洗脫液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得羥基山椒素Ⅰ和Ⅱ。本發(fā)明提供的方法不僅填補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)的空白，為該領(lǐng)域提供了一種可作為花椒麻味定量的標(biāo)準(zhǔn)品，且前處理簡(jiǎn)單、操作方便，分離提純的分離物純度高。
文檔編號(hào)C07C233/20GK102690208SQ20121017552
公開(kāi)日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2012年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月31日
發(fā)明者溫建鎮(zhèn), 祝瑞雪, 趙志峰, 鐘凱, 高鴻 申請(qǐng)人:四川大學(xué)