專利名稱：一種固相合成替莫瑞林的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及替莫瑞林的制備方法，尤其涉及固相多肽合成替莫瑞林的制備方法。
背景技術(shù)：
中文名替莫瑞林或醋酸替莫瑞林。商品名Egrifta。英文名tesamorelin。結(jié)構(gòu)式trans-Tyr-Ala-Asp-Ala-IIe-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-LyS-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-IIe-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2 ;分子式C221H366N72067S1，分子量5135. 9。艾滋病是嚴(yán)重威脅世界人民健康的公共衛(wèi)生問題，1983年，人類首次發(fā)現(xiàn)HIV。目前，艾滋病已經(jīng)從一種致死性疾病變?yōu)橐环N可控的慢性病。我國艾滋病患者也逐年增加。 艾滋病藥物的副作用已經(jīng)不是什么秘密，藥物所產(chǎn)生的副作用就是脂肪代謝障礙。脂肪代謝障礙表現(xiàn)為脂肪重新分布，一種形式為脂肪流失，就是通常所講的肌肉萎縮。特別容易發(fā)生肌肉萎縮的部位有臉、胳膊、腿和屁股。另一種形式為脂肪堆積，容易發(fā)生脂肪堆積的部位有后頸部、胸部和肚子。通常脂肪代謝障礙可導(dǎo)致背部和頸部疼痛，同時(shí)也可引起頭痛和呼吸困難。Egrifta是FDA批準(zhǔn)的首個(gè)脂肪代謝障礙治療藥物，屬于人生長激素釋放因子(GRF)類藥物。Egrifta是通過誘導(dǎo)內(nèi)源性生長激素(GH)的釋放來發(fā)揮作用。采用Egrifta治療可刺激GH分泌和增加血清胰島素樣生長因子I (IGF-I)的水平。中國藥物化學(xué)雜志第21卷，第三期，2011年6月總101期上報(bào)道，替莫瑞林的合成采用Fmoc固相合成法以Fmoc-Pal-PEG樹脂做為固相合成樹脂，用Bop/HoBt作為縮合齊U，將N端被Fmoc保護(hù)的氨基酸和(E) -3-己烯酸反應(yīng)連接到樹脂的支臂上，形成多肽鏈，這種合成方法反應(yīng)時(shí)間長，F(xiàn)moc-Pal-PEG樹脂來源稀缺，價(jià)格貴，該方法限制了替莫瑞林的大規(guī)模生產(chǎn)和使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高收率，低成本，反應(yīng)原料簡單易得，有利用實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的替莫瑞林的固相合成工藝，主要解決現(xiàn)有合成方法存在的反應(yīng)時(shí)間長、原料貴的技術(shù)問題。本發(fā)明的技術(shù)方案一種固相合成替莫瑞林的方法，包括如下步驟
以Rink Amide AM樹脂或Rink Amide MBHA樹脂為起始原料,按照固相合成的方法依次連接具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸和反式己烯酸，合成得到側(cè)鏈全保護(hù)的替莫瑞林的樹月旨，其間依次脫去 Fmoc 保護(hù)基團(tuán)，用 Bop/HoBt、HBTU / HoBt, TBTU/HoBt、DIC/HoBt、HATU/HoBt、PyBop/HoBt、HCTU/HoBt、PyAop/HoBt、TATU/HoBt、Bop/HoAt、HBTU / HoAt、TBTU/HoAt、DIC/HoAt/、HATU/HoAt、PyBop/HoAt、HCTU/HoAt、PyAop/HoAt 或 TATU/HoAt 中的任何一種為縮合劑，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得保護(hù)的替莫瑞林的樹脂后，同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽，獲得替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱進(jìn)行分離純化，經(jīng)冷凍干燥得到產(chǎn)品。本發(fā)明中一些常用的縮寫具有以下含義Rink Amide AM:林克氨甲基
Rink Amide MBHA :林克4-甲苯氫胺
Fmoc :荷甲氧羰基
Bop :卡特縮合劑
HOBt 1 一羥基苯駢三唑
HBTU :苯并三唑-I-四甲基六氟磷酸酯
TBTU:苯并三氮唑-N，N，N’，N’四甲基脲六氟磷酸酯
DIC N, N’ - 二異丙基碳二亞胺
HATU 0-(7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯PyBop:(苯并三唑-I-氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽HCTU: 6-氯苯并三氮唑-1，I, 3，3-四甲基脲六氟磷酸酯
PyAop: (3H-1, 2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3氧基)三-I-吡咯烷基鱗六氟磷酸鹽
TATU: 0-(7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸鹽
HOAt :1_羥基-7-偶氮苯并三氮唑
DIC N, N- 二異丙基碳化二亞胺
NMP N-甲基吡咯烷酮
DCM :二氯甲烷
NMM N-甲基嗎啡啉
PIP :哌啶
Trans:反式己烯酸Tyr:脯氨酸Tbu:叔丁氧基Ala:丙氨酸Asp:天冬氨酸otbu:叔丁酯基He:異亮氨酸Phe :苯丙氨酸Thr :蘇氨酸Asn :天冬酰胺 Ser :絲氨酸Arg :精氨酸
Pbf :2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺?；?br> Lys :賴氨酸
Boc :叔丁氧羰基
Val :纈氨酸
Leu :亮氨酸
Gly :苷氨酸
Gln :谷氨酰胺
Trt :三苯甲基Met :蛋氨酸 Glu :谷氨酸
Fmoc-Leu-OH :荷甲氧羰基亮氨酸 Fmoc-Ala-OH :荷甲氧羰基丙氨酸
Fmoc-Arg (bpf)-OH :芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺?；?精氨
酸
Fmoc-Gly-OH :荷甲氧羰基苷氨酸
Fmoc-Glu (otbu) -OH :荷甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸
Fmoc-Gln (Trt) -OH :芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺
Fmoc-Asn (Trt) -OH :荷甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺
Fmoc-Ser (tbu) -OH :荷甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸
Fmoc-Met-OH :荷甲氧羰基蛋氨酸
Fmoc-Ile-OH :荷甲氧羰基異亮氨酸
Fmoc-Asp (otbu) -OH :荷甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸
Fmoc-Lys (Boc) -OH :荷甲氧羰基叔丁氧羰基賴氨酸
Fmoc-Val-OH :荷甲氧羰基纟顏氨酸
Fmoc-Tyr (tbu) -OH :荷甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸
Fmoc-Phe-OH :荷甲氧羰基苯丙氨酸
Fmoc-Thr (tbu)-OH :荷甲氧羰基叔丁氧基蘇氨酸。按照本發(fā)明，優(yōu)選的依次連接具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸和反式己烯酸，合成得到側(cè)鏈全保護(hù)的替莫瑞林的樹脂，依次包括如下步驟
(1)將RinkAmide AM樹脂或Rink Amide MBHA樹脂用DCM浸泡10-40分鐘，使樹脂溶脹，樹脂的重量體積濃度為6-15ml/g ；
(2)在上述的樹脂中加入脫保護(hù)試劑，進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，然后樹脂用NMP、DCM依次洗滌，抽干，加入用溶劑溶解的具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，用Bop/HoBt、HBTU / HoBt、TBTU/HoBt、DIC/HoBt、HATU/HoBt、PyBop/HoBt、HCTU/HoBt、PyAop/HoBt 或 TATU/HoBt 中任何一種混合物作為縮合劑進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，抽干，分別用NMP、甲醇、DCM洗滌，抽干，然后再加入脫保護(hù)試劑，脫保護(hù)反應(yīng)，再加入用溶劑溶解的具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，如此反復(fù)，最后與反式己烯酸反應(yīng)，獲得 trans-Tyr (tbu) -Ala-Asp (otbu) -Ala-Ile-Phe-Thr (tbu) -Asn (Trt)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Gly-Gln(Trt)-Leu-Ser (tbu)-Ala-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(otbu)-Ile-Met-Ser(tbu)-Arg(pbf)-Gln(Trt)-Gln (Trt)-Gly-Glu(otbu)-Ser (tbu)_Asn(Trt)-Gln (Trt)_Glu(otbu)-Arg(pbf) -GIy-Ala-Arg(pbf)-Ala-Arg(pbf)-Leu-Rink Amide AM 樹脂。所說的具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，依次包括
(I) Fmoc-Leu-OH、(2)Fmoc-Arg(pbf)-OH、(3)Fmoc-Ala-OH、(4)Fmoc-Arg(bpf)-OH>(5)Fmoc-Ala-OH、 (6)Fmoc-Gly-OH、 (7)Fmoc-Arg(pbf)-0H> (8)Fmoc-Glu(otbu)-OH>(9)Fmoc-Gln (Trt)-OH> (10) Fmoc-Asn(Trt)-OH> (I I)Fmoc-Ser (tbu)-OH> (12)Fmoc-Glu (otbu) -OH、(13)Fmoc-Gly-OH、(14) Fmoc-Gln (Trt) -OH、(15) Fmoc-Gln (Trt) -OH、
(16)Fmoc-Arg(pbf)-OH、(17) Fmoc-Ser (tbu)-OH、(18) Fmoc-Met-OH、(19) Fmoc-Ile_0H、(20)Fmoc-Asp (otbu) -OH、(21) Fmoc-Gln (Trt) -OH, (22) Fmoc-Leu-OH, (23)Fmoc-Leu-OH、(24) Fmoc-Lys (Boc) -OH、(25) Fmoc-Arg (pbf) -OH、(26) Fmoc-Ala-OH、
(27)Fmoc-Ser (tbu)-OH、(28) Fmoc-Leu-OH, (29) Fmoc-Gln(Trt)-OH, (30) Fmoc-Gly-OH、
(31)Fmoc-Leu-OH、 (32)Fmoc-Val-OH、 (33)Fmoc-Lys(Boc)-0H> (34)Fmoc-Arg(pbf)-0H>(35) Fmoc-Tyr (tbu) -0H> (36) Fmoc-Ser (tbu) -0H> (37) Fmoc-Asn (Trt) -0H> (38)Fmoc-Thr (tbu) -OH、(39 ) Fmoc-Phe-OH、(40 ) Fmoc-I Ie_OH、(41 ) Fmoc-Ala-OH、(42 )Fmoc-Asp (otbu) -OH、(43) Fmoc-Ala-OH、(44) Fmoc-Tyr (tbu) -OH。所述的Fmoc保護(hù)基通過哌啶處理來去除去。脫保護(hù)試劑的組分和體積比為PIP NMP=I 3-6，脫保護(hù)試劑的體積與樹脂的重量比例為5-16ml/g，即每克樹脂加入5-16ml脫保護(hù)試劑。所述的偶聯(lián)反應(yīng)，偶聯(lián)試劑的組分和體積比為NMM:NMP=I:6-20。偶聯(lián)試劑的體積與樹脂的重量比例為5-16ml/g。所需具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸的摩爾數(shù)為樹脂的3-6倍。Bop、HBTU, TBTU、DIC、HATU、PyBop, HCTU, PyAop或TATU的摩爾數(shù)為樹脂的3_6倍；HoBt的摩爾數(shù)為樹脂的3-6 倍。所述氨基酸偶聯(lián)與脫保護(hù)過程中每一步都經(jīng)過凱撒試驗(yàn)(Kaiser Test)檢測。脫保護(hù)反應(yīng)溫度為10_50°C，時(shí)間為10-30分鐘。偶聯(lián)反應(yīng)溫度為10_50°C，時(shí)間 為30-120分鐘。同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽，獲得替莫瑞林的粗品，包括如下步驟
將預(yù)冷至-2 _5°C的裂解試劑加入替莫瑞林側(cè)鏈保護(hù)的樹脂中，室溫裂解反應(yīng)2-5小時(shí)，過濾加入乙醚沉淀收集沉淀物，再用乙醚洗滌，室溫置于干燥器內(nèi)，真空干燥4-12小時(shí)，獲得替旲瑞林的粗品；
所說的裂解試劑為三氟乙酸、三異丙基硅烷、水和苯甲醚的混合液(體積比90:2. 5:2. 5:5)。優(yōu)選的替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱進(jìn)行分離純化，經(jīng)冷凍干燥得到替莫瑞林成品(MW: 5135. 9)。總收率為9. 8% (以替莫瑞林粗肽來計(jì)算)。本發(fā)明的有益效果替莫瑞林的合成工藝具有工藝穩(wěn)定，原輔材料來源方便，反應(yīng)操作簡單，后處理容易，收率高，成本低，生產(chǎn)氣味小，質(zhì)量穩(wěn)定，極具市場競爭力。采用裂解試劑三氟乙酸，三異丙基硅烷，水，苯甲醚的混合液進(jìn)行裂解，加入乙醚沉淀粗品的方法，避免使用氟化氫等劇毒試劑，數(shù)廢污染少，采用三異丙基硅烷避免使用1，2_乙二硫醇時(shí)產(chǎn)生的氣味污染，采用C18或C4柱進(jìn)行分離純化，總收率約為9. 8%。本發(fā)明采用Fmoc路線，每步脫Fmoc僅需用哌啶，裂解采用少量三氟乙酸，避免使用氟化氫，1，2乙二硫醇，大大減少了數(shù)廢，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
實(shí)施例和前述過程中所采用的原料列表如下
權(quán)利要求
1.一種固相合成替莫瑞林的方法，其特征在于，包括如下步驟以林克氨甲基樹脂或林克4-甲苯氫胺樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸和反式己烯酸，合成得到側(cè)鏈全保護(hù)的替莫瑞林的樹脂，其間依次脫去芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)，用卡特縮合劑/I 一羥基苯駢三唑、苯并三唑_丨-四甲基六氟磷酸酯/ I 一羥基苯駢三唑、苯并三氮唑-N，N, N’，N’四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、N, N’ - 二異丙基碳二亞胺/I 一羥基苯駢三唑、O- (7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、(苯并三唑-I-氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽/I 一羥基苯駢三唑、6-氯苯并三氮唑-1，I, 3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、(3H-1, 2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3氧基)三-I-吡咯烷基鱗六氟磷酸鹽/I 一羥基苯駢三唑、O-(7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸鹽 /I 一羥基苯駢三唑、卡特縮合劑/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、苯并三唑-I-四甲基六氟磷酸酯/ I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、苯并三氮唑-N，N, N’，N’四甲基脲六氟磷酸酯/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、N, N’ - 二異丙基碳二亞胺/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、O- (7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、 (苯并三唑-I-氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、6-氯苯并三氮唑-1，I, 3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑、(3H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3氧基)三-I-吡咯烷基鱗六氟磷酸鹽/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑或.O-(7-氮雜苯并三氮唑)-N, N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸鹽/I-羥基-7-偶氮苯并三氮唑中的任何一種混合物為縮合劑，進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，得保護(hù)的替莫瑞林的樹脂后，同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽，獲得替莫瑞林粗肽，用C18或C4柱進(jìn)行分離純化，經(jīng)冷凍干燥得到產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，依次連接具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸和反式己烯酸，合成得到側(cè)鏈全保護(hù)的替莫瑞林的樹脂，依次包括如下步驟.1)將林克氨甲基樹脂或林克4-甲苯氫胺樹脂用二氯甲烷浸泡10-40分鐘，使樹脂溶脹，樹脂的重量體積濃度為6-15ml/g ；.2)在上述的樹脂中加入脫保護(hù)試劑，進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)，然后樹脂用N-甲基吡咯烷酮、 二氯甲烷洗滌，抽干，加入用溶劑溶解的具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，用卡特縮合劑Λ —羥基苯駢三唑、苯并三唑-I-四甲基六氟磷酸酯/ I 一羥基苯駢三唑、苯并三氮唑-N，N, N’，N’四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、N，N’ - 二異丙基碳二亞胺/I 一羥基苯駢三唑、0-(7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N，N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、(苯并三唑-I-氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽/I 一羥基苯駢三唑、6-氯苯并三氮唑-1，I, 3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/I 一羥基苯駢三唑、(3H-1，2，3-三唑并[4，5-b] 吡啶-3氧基)三-I-吡咯烷基鱗六氟磷酸鹽/I 一羥基苯駢三唑或0-(7-氮雜苯并三氮唑)-N, N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸鹽/I 一羥基苯駢三唑中任何一種混合物作為縮合劑進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，抽干，分別用N-甲基吡咯烷酮、甲醇、二氯甲烷依次洗滌，抽干，然后再加入脫保護(hù)試劑，脫保護(hù)反應(yīng)，再加入用溶劑溶解的具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，如此反復(fù)，最后與反式己烯酸反應(yīng)，獲得保護(hù)的替莫瑞林樹脂；所說的具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸，依次為芴甲氧羰基亮氨酸芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5_磺酰基)精氨酸芴甲氧羰基丙氨酸芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5-磺?；?精氨酸芴甲氧羰基丙氨酸芴甲氧羰基苷氨酸芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5-磺?；?精氨酸芴甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺芴甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸芴甲氧羰基叔丁酯基谷氨酸芴甲氧羰基苷氨酸芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5-磺?；?精氨酸芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸芴甲氧羰基蛋氨酸芴甲氧羰基異亮氨酸芴甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺芴甲氧羰基亮氨酸芴甲氧羰基亮氨酸芴甲氧羰基叔丁氧羰基賴氨酸芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5-磺?；?精氨酸芴甲氧羰基丙氨酸芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸芴甲氧羰基亮氨酸芴甲氧羰基三苯甲基谷氨酰胺芴甲氧羰基苷氨酸芴甲氧羰基亮氨酸芴甲氧羰基纈氨酸芴甲氧羰基叔丁氧羰基賴氨酸芴甲氧羰基(2，2，4，6，7-五甲基-2H-苯并呋喃_5-磺?；?精氨酸芴甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸芴甲氧羰基叔丁氧基絲氨酸芴甲氧羰基三苯甲基天冬酰胺芴甲氧羰基叔丁氧基蘇氨酸芴甲氧羰基苯丙氨酸芴甲氧羰基異亮氨酸芴甲氧羰基丙氨酸芴甲氧羰基叔丁酯基天冬氨酸芴甲氧羰基丙氨酸芴甲氧羰基叔丁氧基脯氨酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的芴甲氧羰基保護(hù)基通過哌啶處理來去除去，脫保護(hù)試劑的組分和體積比為哌啶N-甲基吡咯烷酮=1:3-6，脫保護(hù)試劑的體積與樹脂的重量比例為5_16ml/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所說的偶聯(lián)試劑的組分和體積比為 N-甲基嗎啡啉N-甲基吡咯烷酮=1:6-20，偶聯(lián)試劑的體積與樹脂的重量比例為5-16ml/ g°
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所需具有芴甲氧羰基保護(hù)基團(tuán)的氨基酸的摩爾數(shù)為樹脂的3-6倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，卡特縮合劑、苯并三唑-I-四甲基六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N, N’，N’四甲基脲六氟磷酸酯、N, N’ - 二異丙基碳二亞胺、0-(7-偶氮苯并三氮唑-I-氧)-N, N，N’，N’ -四甲基脲六氟磷酸酯、(苯并三唑-I-氧)三吡咯烷子基磷鎗六氟磷酸鹽、6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯、(3H-1, 2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3氧基)三-I-吡咯烷基鱗六氟磷酸鹽或0-(7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N’，N’ -四甲基脲四氟硼酸鹽的摩爾數(shù)為樹脂的3-6倍；1 一羥基苯駢三唑的摩爾數(shù)為樹脂的3-6倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述氨基酸偶聯(lián)與脫保護(hù)過程中每一步都經(jīng)過凱撒試驗(yàn)檢測。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽，獲得替莫瑞林的粗品，包括如下步驟將預(yù)冷至-2 -5° C的裂解試劑加入替莫瑞林側(cè)鏈保護(hù)的樹脂中，室溫裂解反應(yīng)2-5小時(shí)，過濾加入乙醚沉淀收集沉淀物，再用乙醚洗滌，室溫置于干燥器內(nèi)，真空干燥 4_12小時(shí)，獲得替莫瑞林的粗品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，裂解反應(yīng)用裂解試劑為三氟乙酸、三異丙基硅烷、水和苯甲醚的混合液。
10.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于，脫保護(hù)反應(yīng)溫度為10-50°c，時(shí)間為 10-30分鐘；偶聯(lián)反應(yīng)溫度為10-50°C，時(shí)間為30-120分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種固相合成替莫瑞林的方法，主要解決現(xiàn)有合成方法存在的反應(yīng)時(shí)間長、原料貴的技術(shù)問題。本發(fā)明以RinkAmideAM樹脂或RinkAmide MBHA樹脂為起始原料，依次連接具有Fmoc保護(hù)基團(tuán)的氨基酸和反式己烯酸，合成得到側(cè)鏈全保護(hù)的替莫瑞林的樹脂，同步進(jìn)行脫側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)及切肽，獲得替莫瑞林粗肽，并經(jīng)C18或C4柱進(jìn)行分離純化，再經(jīng)冷凍干燥得到產(chǎn)品。本發(fā)明的方法具有工藝穩(wěn)定，原輔材料來源方便，反應(yīng)操作簡單，后處理容易，收率高，成本低，生產(chǎn)氣味小等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07K14/60GK102702343SQ20121019462
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月14日
發(fā)明者吳逸璘, 張宏偉, 徐紅巖 申請(qǐng)人:上海吉爾多肽有限公司, 吉爾生化(上海)有限公司, 無錫亞肽生物科技有限公司