用于檢測和測定小檗堿的抗體、方法和試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供包括小檗堿或其衍生物的半抗原，與賦予抗原性的載體物質(zhì)結(jié)合的前述半抗原的免疫原，與標(biāo)記試劑結(jié)合的前述半抗原的偶聯(lián)物(包被原)，以及抗前述免疫原的抗體，該抗體能與完整的小檗堿中的至少一種結(jié)構(gòu)性抗原決定部位結(jié)合。本發(fā)明還提供用于檢測或定量樣品中小檗堿的方法和試劑盒，以及前述偶聯(lián)物和前述抗體在檢測或定量小檗堿中的用途。本發(fā)明對小檗堿具有特異性，可用于樣品中檢測小檗堿的存在和測定小檗堿的含量。
【專利說明】用于檢測和測定小檗堿的抗體、方法和試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及小分子半抗原的抗體及其制備方法與應(yīng)用，特別是涉及小檗堿及其衍生物的抗體及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]本發(fā)明涉及用于檢測和定量小檗堿的方法和試劑盒，以及其中使用的半抗原、免疫原、包被原和抗體。
[0003]其中“檢測”是指定性分析物質(zhì)是否存在。
[0004]其中“測定”是指對物質(zhì)進(jìn)行定量分析。
[0005]小檗堿是一種季銨生物堿，分子式[C20H18N04]+C1-，分子量371.8。又稱黃連素。存在于黃連以及其它小檗屬植物中。黃色針狀結(jié)晶。熔點(diǎn)145°C。可溶于熱水、乙醇、難溶于乙醚、苯。能與氯仿和丙酮等生成復(fù)合物。又稱黃連素。常用其鹽酸鹽。黃色結(jié)晶性粉末。無臭，味極苦。微溶于水，不溶于醚、氯仿、醇等。
[0006]藥理作用
[0007]現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明其抗菌譜廣，體外對多種革蘭陽性及陰性菌均具抑菌作用，其中對溶血性鏈球菌、金葡菌、霍亂弧菌、腦膜炎球菌、志賀痢疾桿菌、傷寒桿菌、白喉?xiàng)U菌等有較強(qiáng)的抑制作用，低濃度時(shí)抑菌，高濃度時(shí)殺菌。對流感病毒、阿米巴原蟲、鉤端螺旋體、某些皮膚真菌也有一定抑制作用。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)黃連素能增強(qiáng)白細(xì)胞及肝網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力。痢疾桿菌、溶血性鏈球菌、金葡菌等極易對本品產(chǎn)生耐藥性。本品與青霉素、鏈霉素等并無交叉耐藥性。小檗堿的鹽酸鹽(俗稱鹽酸黃連素)已廣泛用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等，對肺結(jié)核、 猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。中醫(yī)常用黃連、黃柏、三顆針及十大功勞等作清熱解毒藥物，其中主要有效成分即小檗堿。
[0008]小檗堿化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種如下通式的免疫原:
2.根據(jù)權(quán)利要求1的免疫原，R= O，即P1直接與甘草酸羰基碳原子結(jié)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的免疫原，R是C1-C6取代或未取代的、直鏈或支鏈的、飽和或不飽和的亞烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3的免疫原，R是C1-C4未取代的、直鏈的、飽和的亞烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的免疫原，其中載體物質(zhì)為蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段、合成或天然多肽或半合成多肽、合成或天然聚合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5的免疫原，其中蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段選自白蛋白、血清蛋白、球蛋白、和脂蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5的免疫原，其中蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、牛丙種球蛋白、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、鎖眼形血藍(lán)蛋白(keyhole limpet haemocyanin,KLH)等。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或5的免 疫原，其中合成或天然多肽或半合成多肽是具有足夠數(shù)量的可利用氨基的合成聚氨基酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或5的免疫原，其中合成或天然聚合物選自碳水化合物、酵母或多糖。
10.抗如權(quán)利要求1至9的免疫原的抗體，其中抗體能與完整的甘草酸中的至少一種結(jié)構(gòu)性抗原決定部位結(jié)合。
11.制備如權(quán)利要求10中的抗體的方法，該方法包括將如權(quán)利要求1至9的免疫原重復(fù)給予動物而使動物免疫，以及從免疫動物中收集所得到的血清抗體；以及利用免疫學(xué)上可接受的細(xì)胞系與產(chǎn)生抗體的免疫動物單克隆細(xì)胞系融合后產(chǎn)生的細(xì)胞系，所制備的單克隆抗體。
12.—種如下結(jié)構(gòu)的偶合物:
13.如權(quán)利要求12偶合物，其偶合物固定在固相支持物上。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的固相支持物可為聚苯乙烯或聚氯乙烯等具有一定吸附作用的材料。
15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的固相支持物，優(yōu)選化學(xué)處理高吸附表面的聚苯乙烯酶標(biāo)板。
16.用于檢測和測定樣品中甘草酸的方法，該方法包括將供試樣品和如權(quán)利要求10和11中的抗體一同與如權(quán)利要求12至15中的固定在固相支持物的偶聯(lián)物接觸，再與標(biāo)記二抗接觸，檢測或測定標(biāo)記信號，從校準(zhǔn)曲線中推出樣品中甘草酸的存在或含量。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的標(biāo)記二抗，其標(biāo)記試劑選自酶、發(fā)光物質(zhì)、放射性物質(zhì)或它們的混合物。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的二抗，標(biāo)記試劑是過氧化物酶。
19.根據(jù)權(quán)利要求16的二抗，標(biāo)記試劑是辣根過氧化物酶(HRP)。
20.根據(jù)權(quán)利要求14或15的偶合物，發(fā)光物質(zhì)是生物發(fā)光物質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或熒光物質(zhì)。
21.用于檢測和測定甘草酸的試劑盒，該試劑盒包括如權(quán)利要求12至15中任一項(xiàng)的偶聯(lián)物或其混合物，以及如權(quán)利要求10或11的抗體或其混合物。
【文檔編號】C07K14/765GK103483444SQ201210197148
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2012年6月15日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月15日
【發(fā)明者】王慶國, 趙琰, 屈會化, 王雪茜, 續(xù)潔琨, 張?jiān)? 吳婷婷, 孫慧, 李翼飛 申請人:北京中醫(yī)藥大學(xué)