一種棘白菌素類化合物的純化方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種棘白菌素類化合物的純化方法，尤其是指WF11899A的純化方法。該方法包括預(yù)純化溶液的制備、樹脂層析分離、結(jié)晶等過程。本發(fā)明的方法具有簡單、不使用混合溶劑、樣品純度高等優(yōu)點。
【專利說明】一種棘白菌素類化合物的純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種棘白菌素類化合物的純化方法，尤其是指WF11899A的純化方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]棘白菌素類化合物具有抗真菌作用，包括棘白菌素B、WF11899A、棘白菌素C、肺粘菌素A0、肺粘菌素BO等。這類化合物可以進一步制備得到半合成化合物，如卡泊芬凈、米卡芬凈、阿尼芬凈等。棘白菌素類化合物有微生物發(fā)酵得到，含有大量的副產(chǎn)物。這些副產(chǎn)物在后續(xù)的分離純化中往往很難除去。
[0003]US5021403公開了一種棘白菌素化合物的色譜純化方法，該方法包括反復(fù)的樹脂吸附，以及硅膠層析，過程繁雜。W02008048627公開了一種棘白菌素類化學(xué)物的純化方法，包括萃取、洗滌、沉淀等。沉淀過程中需要加混合溶劑，而且沉淀需要加硅藻土等載體，否則沉淀物成油狀很難過濾，且提純效果也不明顯。US20100249371公開了一種棘白菌素化合物鹽吸附劑純化方法，包括反復(fù)的吸附、洗滌、洗脫等步驟。鹽吸附劑穩(wěn)定性不好，實際操作比較困難。這些專利提到棘白菌素類化合物的方法，特別涉及的是棘白菌素B的純化方法，并不針對WF11899A的純化。
[0004]發(fā)明專利US6506726、EP1137663、CN99815515公開了分離和純化環(huán)肽類產(chǎn)品的方法，其包括:含有環(huán)肽化合物的混合物吸附到疏水的反相層析介質(zhì)上，用連續(xù)地近乎線性的
0.1-10%的乙酸水溶液進行梯度洗脫。該方法可以用來分離棘白菌素母核，但是在進行分離WF11899A時，0.1-10%乙酸梯度都無法洗脫化合物，且化合物在酸性條件下容易降解破壞。
[0005]發(fā)明專利CN201010 606370.1公開了一種卡泊芬凈大孔吸附樹脂分離純化的方法。該方法洗脫劑的濃度為10-45%。在溶劑濃度低于35%時，基本洗不出WF11899A。溶劑濃度40-45%時只能洗出少量化合物，導(dǎo)致洗脫時間和洗脫體積增加，且洗脫不完全。
[0006]所以，尋找一種簡單而且能夠制備高純度的WF11899A的純化方法顯得十分重要。因此本發(fā)明公開一種高純度WF11899A的制備方法。該方法得到的樣品純度高，方法簡單，不使用混合溶劑等優(yōu)點。尚沒有任何報道公開過使用該方法分離WF11899A。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供一種棘白菌素類化合物的純化方法，包括預(yù)純化的棘白菌素類化合物溶液的制備、樹脂層析分離和結(jié)晶三個步驟。
[0008]在優(yōu)選的實施方案中，預(yù)純化的棘白菌素類化合物溶液的制備方法，包括如下步驟:
[0009](I)菌絲體收集:通過離心或壓濾等常規(guī)過濾方式收集菌絲體；
[0010](2)浸泡:用適量的有機溶劑浸泡菌絲體，提取有效成分，得浸泡液；
[0011](3)濃縮:減壓濃縮浸泡液，除去有機溶劑，得到預(yù)純化的棘白菌素類化合物溶液。[0012]在優(yōu)選的實施方案中，預(yù)純化的棘白菌素類化合物溶液還可以采用常規(guī)的方法制備得到。
[0013]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述的樹脂層析分離步驟包括吸附、洗滌、洗脫三個過程。
[0014]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述樹脂優(yōu)選聚苯乙烯類樹脂，更優(yōu)選HP20、HP20SS、HZ20SS、SP825、CG161、XAD1600、XAD-4。最優(yōu)選 HP20SS、HZ20SS、CG161。
[0015]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述洗滌過程采用一定濃度的有機溶劑水溶液進行。所述有機溶劑包括但不限于甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮等。優(yōu)選乙醇、異丙醇。
[0016]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述洗滌過程的溶劑濃度以基本不洗出有效成分為準(zhǔn)，比較合適的濃度為0-40% (V/V)，不同溶劑略有差異。
[0017]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述的洗滌過程先使水洗滌，然后再用有機溶劑的水溶液洗滌。
[0018]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述的洗脫過程使用有機溶劑的水溶液為洗脫溶劑，洗脫溶劑濃度為50-70% (V/V)，不同溶劑略有差異。其中所述的有機溶劑包括但不限于甲
醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮等。
[0019]在優(yōu)選的實施方案中，其中所述的結(jié)晶過程優(yōu)選為將洗脫過程中收集到的洗脫液濃縮至濃度為100-500mg/ml，向濃縮液中加入一定量的溶劑，結(jié)晶。其中所述溶劑包括乙醇、丙醇、異丙醇、乙腈、丙酮，優(yōu)選異丙醇。所述溶劑的添加量為濃縮液體積的3-10倍，優(yōu)選4-6倍。所述結(jié)晶在<40°C下進行，優(yōu)選-5-10°C。所述結(jié)晶過程可以在攪拌下進行，也可以靜止條件下進行。所述結(jié)晶時間為4-48小時，優(yōu)選6-12小時。
[0020]在優(yōu)選的實施方案中，其中棘白菌素類化合物優(yōu)選為WF11899A或其鹽，
[0021]WF11899A具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu):
[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種棘白菌素類化合物的純化方法，包括預(yù)純化的棘白菌素類化合物溶液的制備、樹脂層析分離和結(jié)晶三個步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的樹脂層析分離步驟包括吸附、洗滌、洗脫三個過程。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2任一項的方法，其中所述的樹脂為聚苯乙烯類樹脂，優(yōu)選自HP20、HP20SS、HZ20SS、SP825、CG161、XAD1600、XAD-4。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述的洗滌過程使用0%-40%(V/V)的有機溶劑的水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所述的洗滌過程先使水洗滌，然后再用有機溶劑的水溶液洗滌。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述的洗脫過程使用50%-70%(V/V)的有機溶劑的水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一項的方法，其中所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈、丙酮。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述的結(jié)晶過程，其特征在于往100-500mg/ml的棘白菌素類化合物溶液中加入 溶劑，結(jié)晶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述的溶劑選自乙醇、丙醇、異丙醇、乙腈、丙酮；所述溶劑的用量為棘白菌素類化合物溶液體積的3-10倍，優(yōu)選4-6倍；所述結(jié)晶的溫度為< 40°C，優(yōu)選-5~10°C ;所述結(jié)晶時間為4-48小時，優(yōu)選6_12小時。
10.根據(jù)權(quán)利要求1、8、9任一項的方法，其中所述的棘白菌素類化合物為WF11899A或其鹽。
【文檔編號】C07K1/16GK103483427SQ201210199073
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2012年6月9日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月9日
【發(fā)明者】楊華劍, 梁陳宏, 周永健, 陳 峰, 王玲萍, 鄭玲輝, 白驊 申請人:浙江海正藥業(yè)股份有限公司