一種茶皂素粗制品及茶皂素b1的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種茶皂素粗制品的制備方法；本發(fā)明還提供了一種茶皂素B1的制備方法，該方法包括茶皂素粗品的提取，茶皂素的預(yù)純化和茶皂素純品的HPLC純化等三個(gè)步驟。本發(fā)明制備方法簡單，產(chǎn)品純度高，穩(wěn)定性好。
【專利說明】一種茶皂素粗制品及茶皂素BI的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體的涉及茶皂素粗品及茶皂素BI (Camelliasaponin BI)的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]茶皂素是從茶籽、茶籽餅中提取的一種天然表面活性劑，具有優(yōu)良的表面活性，可用其制作高級(jí)無公害洗滌劑、清潔劑、泡沫劑、乳化劑、殺蟲劑、洗發(fā)香波等。同時(shí)，茶皂素也有多種生物活性，如抗保鮮、抗?jié)B、消炎、鎮(zhèn)痛、殺蟲作用等。
[0003]茶皂素是一類由糖體、苷元和有機(jī)酸三部分組成的齊墩果烷型五環(huán)三萜類皂苷。由于各部分連結(jié)方式不同，因此它們能組成多種結(jié)構(gòu)相似的茶皂素，這些茶皂素在實(shí)際應(yīng)用中各有不同，然而目前市售的茶皂素產(chǎn)品都是一些不同茶皂素單體的混合物，嚴(yán)重地限制了茶皂素的應(yīng)用，而且不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品所含皂苷的構(gòu)成也不盡相同，難以獲得一種統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)皂苷和平均分子量，給分析工作帶來較大困難，也給市場上的不法分子帶來可乘之機(jī)。
[0004]目前常用的茶皂素定量方法主要有重量法、比色法、薄層掃描法等，一般是以人參皂苷或自制精制茶皂素為標(biāo)準(zhǔn)品，然后對(duì)茶皂素進(jìn)行水解或者顯色反應(yīng)進(jìn)行含量測定。這些方法普遍存在分析所需時(shí)間長、操作繁復(fù)以及試劑消耗量大、重現(xiàn)性及準(zhǔn)確度不高等問題。另外，這些方法中以人參皂苷為對(duì)照品測定茶皂素含量并不準(zhǔn)確，這是因?yàn)椴枳阎胁缓藚⒃碥?，只是茶皂素和人參皂苷的結(jié)構(gòu)有相似之處，所以會(huì)使得測定結(jié)果不準(zhǔn)確。用自制的高含量的茶皂素也只是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，每個(gè)化合物都有其自身的化學(xué)特性，也不能準(zhǔn)確地測出茶皂素的含量，更無法鑒定產(chǎn)品的真?zhèn)?。以茶皂素中的某一個(gè)主要成份為對(duì)照品，Camellia saponin BI為目前市售的茶阜素產(chǎn)品中的主要成份,該化合物分子式為C58H9tlO26，分子量為1202，但在Camellia saponin BI的純化制備方面沒有報(bào)道，市場上難以見到合格的標(biāo)準(zhǔn)品，因此造成茶皂素含量的測定較為困難。
[0005]為了測定供試樣品中茶皂素的含量，需要建立一種茶皂素Si標(biāo)準(zhǔn)品的制備方法和供試樣品中茶皂素的含量測定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的就是提供一種茶皂素BI的制備方法和該方法制備的茶皂素BI。
[0007]本發(fā)明的另一目的，就是提供茶皂素的含量測定方法。
[0008]本發(fā)明的第一方面，提供了一種茶皂素粗制品的制備方法，所述制備方法包括下述步驟:
[0009](a)將脫脂茶籽餅粉碎至40-100目；
[0010](b)在粉碎好的茶籽餅中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加熱回流提??；過濾后的濾渣再重復(fù)本提取步驟一次；
[0011]Ce)真空濃縮得到茶皂素粗提物浸膏；[0012](d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃??；
[0013](e)取正丁醇相溶液，經(jīng)脫水，真空干燥，獲得茶皂素粗品。
[0014]上述步驟(b)中乙醇或甲醇水溶液的體積百分比濃度為60 - 80%、所述加熱回流時(shí)間為2-3h。
[0015]上述步驟d)萃取時(shí)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇與茶皂素粗提物浸膏的體積比為
2-4:1。
[0016]上述步驟(e)中采用無水硫酸鈉脫水。
[0017]本發(fā)明的第二方面，提供一種茶皂素B I的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
[0018](I)根據(jù)下述步驟制備獲得茶皂素粗品:
[0019]a)將脫脂茶籽餅粉碎至40-100目；
[0020]b)在粉碎好的茶籽餅中加入8 - 12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加熱回流提??；過濾后的濾渣再重復(fù)本提取步驟一次；
[0021]c)真空濃縮得到茶皂素粗提物浸膏；
[0022]d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取；`
[0023]e)取正丁醇相溶液，經(jīng)脫水，真空干燥，獲得茶皂素粗品。
[0024](2)將茶皂素粗品溶于蒸餾水中，采用分子篩層析分離，脫色，加熱回流后過濾，真空濃縮獲得茶皂素浸膏；
[0025](3)將茶皂素浸膏溶于乙醇水溶液中，經(jīng)HPLC分離，收集洗脫液，獲得茶皂素BI成品。
[0026]上述步驟(2)中茶皂素粗品與蒸餾水的W:V比為1:40。
[0027]上述步驟(2)中，采用S印hadexLH-20或MCI GEL CHP20PMCI進(jìn)行分子篩層析，所述洗脫液為40-60%甲醇水溶液。
[0028]上述步驟(3)中，洗脫液為60-90%甲醇水溶液。
[0029]上述步驟(2)中，脫色劑為活性炭或EDTA。
[0030]上述步驟(3)中，HPLC分離時(shí)，色譜柱選用C18、C8或C4色譜柱。
[0031]上述步驟(3)中，HPLC色譜檢測波長為225nm。
[0032]上述步驟(1)中，步驟d)萃取時(shí)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇與茶皂素粗提物浸膏的體積比為2-4:1。
[0033]上述步驟(b)中乙醇或甲醇水溶液的體積百分比濃度為60 - 80%、所述加熱回流時(shí)間為2-3h。
[0034]上述步驟(e)中采用無水硫酸鈉脫水。
[0035]本發(fā)明的第三方面，提供了上述制備方法制備的茶皂素粗制品。
[0036]本發(fā)明的第四方面，提供了上述制備方法制備的茶皂素BI。
[0037]由于本發(fā)明制備的茶皂素BI純度高，可以作為標(biāo)準(zhǔn)品，測定樣品中茶皂素的含量。測定時(shí)，采用HPLC。分析HPLC的色譜條件為:色譜柱Alltech Prevail C18 (5um，
4.6 X 250mm);流動(dòng)相為乙腈:1%冰醋酸=35:65 ;檢測波長為225nm ;流速為1.0ml/min ;柱溫為20° C;進(jìn)樣量20ul。
[0038]本發(fā)明所公開的一種茶皂素BI的制備方法工藝簡單，產(chǎn)品純度高，穩(wěn)定性好。本發(fā)明中以Camellia saponin BI為對(duì)照品，不僅可以檢測茶皂素的含量，還可以衡量產(chǎn)品的質(zhì)量。而且本發(fā)明測定方法操作簡單、分析時(shí)間短、重現(xiàn)性和精確度高，為供試品中的茶皂素含量的測定提供了一種精確的測定方式。
[0039]茶皂素BI的分子式如下:
[0040]
【權(quán)利要求】
1.一種茶皂素粗制品的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (a)將脫脂茶籽餅粉碎至40-100目； (b)在粉碎好的茶籽餅中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加熱回流提?。贿^濾后的濾渣再重復(fù)本提取步驟一次； (C)真空濃縮得到茶皂素粗提物浸膏； (d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃??； Ce)取正丁醇相溶液，經(jīng)脫水，真空干燥，獲得茶皂素粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述茶皂素粗制品的制備方法，其特征在于，所述步驟(b)中乙醇或甲醇水溶液的體積百分比濃度為60 - 80%、所述加熱回流時(shí)間為2-3h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述茶皂素粗制品的制備方法，其特征在于，所述步驟(e)中采用無水硫酸鈉脫水。
4.一種茶皂素B I的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)根據(jù)下述步驟制備獲得茶皂素粗品: a)將脫脂茶籽餅粉碎至40-100目； b)在粉碎好的茶籽餅中加入8-12倍(重量)甲醇水溶液或乙醇水溶液，加熱回流提??；過濾后的濾渣再重復(fù)本提取步驟一次； c)真空濃縮得到茶皂素粗提`物浸膏； d)依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃??； e)取正丁醇相溶液，經(jīng)脫水，真空干燥，獲得茶皂素粗品。 (2)將茶皂素粗品溶于蒸餾水中，采用分子篩層析分離，脫色，加熱回流后過濾，真空濃縮獲得茶皂素浸膏； (3)將茶皂素浸膏溶于乙醇水溶液中，經(jīng)HPLC分離，收集洗脫液，獲得茶皂素BI成品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中茶皂素粗品與蒸餾水的W:V比為1:40。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，采用S印hadexLH-20或MCI GEL CHP20PMCI進(jìn)行分子篩層析，所述洗脫液為40-60%甲醇水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，洗脫液為60-90%甲醇水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，脫色劑為活性炭或EDTA。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8任一權(quán)利要求所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述HPLC分離時(shí)，色譜柱選用C18、C8或C4色譜柱。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中，HPLC色譜檢測波長為225nm。
11.根據(jù)權(quán)利要求4所述茶皂素BI的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，d)部萃取時(shí)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇與茶皂素粗提物浸膏的體積比為2-4:1。
12.一種根據(jù)權(quán)利要求4-8、10或11任一權(quán)利要求所述方法制備的茶皂素B I。
【文檔編號(hào)】C07H15/256GK103509069SQ201210216940
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月27日
【發(fā)明者】王亞 申請(qǐng)人:上海萊博生物科技有限公司