專利名稱：一種替考拉寧單組份的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種工業(yè)微生物技術領域中藥品原料的制備方法，尤其是一種從發(fā)酵培養(yǎng)物中分離純化替考拉寧單組份的制備方法。
背景技術：
替考拉寧(Teicoplanin),為游動放線菌屬iActinoplanes teichomyceticus)發(fā)酵產(chǎn)生的一種糖肽類抗生素。它是由Teicoplanin A2(TA2)五種結(jié)構相似的糖肽類化合物(TA2_rTA2_5)和去?；咸前稵eicoplanin A3(TA3)組成的混合物。替考拉寧是繼萬古霉素后開發(fā)的另一種抗耐藥菌糖肽類抗生素，它主要對革蘭氏陽性需氧菌和厭氧菌具有較強的抗菌活性，特別對MRSA引起的感染有很好的療效，是目前臨床上為數(shù)不多的仍具有對多重耐藥性金黃色葡萄球菌和腸球菌有活性的藥物之一。與當前國際上公認的抗耐藥菌抗生素 萬古霉素相比，替考拉寧具有與之相似的抗菌活性，相同的作用機理，相近或更優(yōu)的臨床療效，但毒性更低，特別是更低的腎毒性，不會發(fā)生使用萬古霉素后引發(fā)的“紅人綜合癥”。替考拉寧具有比萬古霉素更方便、快捷的給藥途徑，可以通過靜注或肌注給藥，應用更方便。此外，它與￠-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類和碳青霉烯類抗生素聯(lián)用對絕大多數(shù)革蘭氏陽性菌有協(xié)同殺菌作用。因此，對替考拉寧的研究與開發(fā)具有重要的經(jīng)濟價值和應用前景。由于替考拉寧是兩性化合物且結(jié)構中含有多個羥基，故易溶于水。另外，它易溶于二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、丙二醇，可溶于甲醇、乙醇等有機溶劑，不溶于無機酸和非極性溶劑。國內(nèi)外對其分離純化方法進行了大量的研究，歸納起來主要有溶媒萃取法、吸附法、離子交換法和色譜法。替考拉寧單組份的結(jié)構式為
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權利要求
1.一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于該方法包括下述步驟， 步驟I)預處理在常溫條件下，在替考拉寧發(fā)酵液中加入堿溶液，調(diào)節(jié)PH至11. (T13. O ;將發(fā)酵液固液分離，所得濾液用酸溶液調(diào)節(jié)PH至7. (T7. 5，得到替考拉寧濾液； 步驟2)脫色將替考拉寧濾液導入大孔脫色樹脂進行脫色，得到替考拉寧脫色液； 步驟3)吸附將替考拉寧脫色液導入大孔吸附樹脂進行吸附，再用溶劑解吸，所得替考拉寧解吸液，經(jīng)濃縮、結(jié)晶、干燥，得到替考拉寧的粗提物； 步驟4)層析將替考拉寧粗提物用水溶解，注入聚合物微球?qū)游鲋M行層析，然后用不同濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，分別收集各段洗脫液，得到含有TA”、TA2_2、TA2_3、TA2_4、TA2_5和TAp1六種單組份的替考拉寧單組份洗脫液； 步驟5)將六種替考拉寧單組份洗脫液分別濃縮、結(jié)晶、干燥，得到替考拉寧的單組份精粉。
2.根據(jù)權利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟I)中堿溶液為氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液；酸溶液為鹽酸、硫酸或有機酸溶液的其中一種。
3.根據(jù)權利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟2)中大孔脫色樹脂為LX-98、LSA-700B、DMl30或D303樹脂的其中一種。
4.根據(jù)權利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟3)中大孔吸附樹脂為HZ816、HZ801、DlOl或D312樹脂的其中一種；所述溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，溶劑濃度為40% 50%。
5.根據(jù)權利要求I所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟4)中層析介質(zhì)為聚合物微球PS25-300、PS30RPC-300或PSA30-300的其中一種；所述洗脫溶劑為甲醇水溶液、乙醇水溶液或丙酮水溶液的其中一種，洗脫溶劑濃度為25%飛0%。
6.根據(jù)權利要求1 5任一項所述的一種替考拉寧單組份的制備方法，其特征在于所述步驟4)中包括如下步驟， 步驟A)將替考拉寧粗提物用蒸餾水溶解，注入聚合物微球?qū)游鲋M行層析，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫； 步驟B)根據(jù)HPLC對替考拉寧中各單組份的檢測結(jié)果，分別收集TA3YTAh和TA2_2的洗脫液；得到TA3+ TA2^1和TA2_2三種替考拉寧單組份洗脫液； 步驟C)根據(jù)HPLC對替考拉寧中各單組份的檢測結(jié)果，分別收集TA2_2與TA2_3的HPLC峰面積百分比為I :2的混合液，TA2_4與TA2_5峰面積百分比為I :1的混合液； 步驟D)將步驟C)中得到的兩種混合液濃縮至混合液濃度為100g/L，再次注入聚合物微球?qū)游鲋M行層析分離，然后依次使用從低濃度到高濃度的洗脫溶劑梯度洗脫，根據(jù)HPLC檢測結(jié)果，分別收集TA2_3、TA2_4和TA2_5的洗脫液，得到TA2_3、TA2_4和TA2_5三種替考拉寧單組份洗脫液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種替考拉寧單組份的制備方法，屬于微生物原料藥品的制備領域。該方法包括將替考拉寧發(fā)酵液通過大孔脫色樹脂脫色后，再用大孔吸附樹脂吸附、解吸，濃縮后得到含有TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六種組份的替考拉寧粗提物；粗提物用水溶解后借助聚合物微球進行層析分離，得到高純度的替考拉寧TA2-1、TA2-2、TA2-3、TA2-4、TA2-5和TA3-1六個單組份。本發(fā)明使用新型層析介質(zhì)—聚合物微球，可以從替考拉寧粗提物中同時分離得到六種單組份；該方法工藝簡潔，樣品處理量大，溶劑消耗少，可以規(guī)模化制備替考拉寧單組份，為替考拉寧單組份的病理學、毒理學等深入研究提供樣品。
文檔編號C07K1/22GK102718843SQ20121022163
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月30日 優(yōu)先權日2012年6月30日
發(fā)明者任風芝, 張志江, 張雪霞, 成曉迅, 朱秀良, 李麗紅, 李寧, 李曉露, 林毅, 段寶玲, 王海燕, 董愛華, 蔣沁, 陳書紅 申請人:華北制藥集團新藥研究開發(fā)有限責任公司