專利名稱：一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于寡肽的自組裝領(lǐng)域，特別涉及一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法。
背景技術(shù)：
寡肽二苯丙氨酸(Phe-Phe，F(xiàn)F)是形成阿爾茨海默氏癥和帕金森綜合癥等疾病有關(guān)的淀粉樣肽粉樣多肽的核心結(jié)構(gòu)單元。由于二苯丙氨酸具有氫鍵、β折疊結(jié)構(gòu)以及芳香環(huán)間的作用，具有良好的自組裝性質(zhì)，因此能在水或有機溶劑中它能夠通過分子之間的氫鍵、范德華力、相互作用、配位鍵等非共價鍵作用而自組裝形成穩(wěn)定的類似蛋白質(zhì)的二級或三級結(jié)構(gòu)。另外，由于其良好的可降解性、生物相容性等優(yōu)點使其備受關(guān)注。自從它被發(fā)現(xiàn)以來，不論是在醫(yī)學(xué)還是納米科技領(lǐng)域都引起了人們很大的研究興趣。一直以來，許多科學(xué)家探索用不同的方法來調(diào)控其自組裝過程。 自然界中廣泛存在著紫外線的輻射，因此，研究紫外線對該類肽的聚集形態(tài)的影響，對于了解紫外線對該生物材料的應(yīng)用影響和應(yīng)用調(diào)控具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，該方法快速、簡捷、高效、廉價并且操作方便，具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，包括(I)將寡肽(上海強耀生物科技有限公司)加入到六氟異丙醇中，震蕩直至寡肽全部溶解，得到寡肽溶液；(2)在上述寡肽溶液中加入重蒸水進行稀釋，將稀釋后的寡肽溶液震蕩，以混合均勻，再在室溫下放置3飛天；(3)將步驟(2)得到的溶液放置到表面皿中，在室溫條件下進行紫外線照射(波長是365nm，功率是30w)，最后將照射后的溶液晾干，即可。步驟(I)中所述的六氟異丙醇與寡肽的用量比為5(Γ60μ L 0. 005^0. 006g。步驟(I)所述的震蕩為用微型振蕩器輕微震蕩，震蕩時間為3(T60s，震蕩時所使用的容器為EP管，所述EP管的量程是O. Γ1. 5mL。步驟(2)所述的稀釋后的寡肽溶液中寡肽的濃度是O. 2^0. 3mg/mL。步驟(2)所述的震蕩為用微型振蕩器輕微震蕩，震蕩時間為5(T60s，震蕩時所使用的容器為EP管，所述EP管的量程是I 5mL。步驟(2)所述的放置時的溫度約為23 25。C。步驟(3)所述的進行紫外線照射中采用紫外線分析儀的型號是ZF-I三用紫外線分析儀(上海強運科技有限公司)，照射時間分別為60min、120min。步驟(3)所述的進行紫外線照射時，表面皿中溶液的體積為3mL。步驟(3)中所述的晾干為將照射后的溶液取l(Tl5yL滴到尼龍膜上晾干。
本發(fā)明在一定紫外照射條件下，寡肽聚集狀態(tài)發(fā)生變化，對于了解紫外線對該生物材料的應(yīng)用影響與應(yīng)用調(diào)控具有重要的意義。有益效果(I)該方法快速、簡捷、高效、廉價并且操作方便。
(2)本發(fā)明所使用的原材料廉價易得，具有良好的可降解性及生物相容性，具有應(yīng)用其做后續(xù)相關(guān)實驗分析的潛力。


圖I為空白對照；圖2為對溶液照射60min后，滴到尼龍I旲上晚干所拍攝的SEM圖；圖3為對溶液的照射時間改為120min后，滴到尼龍膜上晾干所拍攝的SEM圖；圖4為對溶液的照射時間改為200min后，滴到尼龍膜上晾干所拍攝的SEM圖；圖5為對溶液的照射時間改為300min后，滴到尼龍膜上晾干所拍攝的SEM圖；圖6為對溶液的照射時間改為400min后，滴到尼龍膜上晾干所拍攝的SEM圖。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。實施例I(I)取100mg/ml的六氟異丙醇溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入到上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直
至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中。(6)對樣品不進行任何處理，然后取10μ L滴到尼龍膜上晾干。依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片如圖I所示。實施例2(I)取100mg/ml的六氟異丙醇溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入到上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直
至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；
(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中，在室溫條件下使用ZF-I三用紫外線分析儀進行照射。(6)對樣品照射60min后,然后取10 μ L滴到尼龍膜上晾干。依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片及其結(jié)構(gòu)的變化如圖2所示。實施例3(I)取100mg/ml的六氟異丙醇 溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入到上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中，在室溫條件下使用ZF-I三用紫外線分析儀進行照射。(6)對樣品照射120min后，然后取10 μ L滴到尼龍膜上晾干。依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片及其結(jié)構(gòu)的變化如圖3所示。實施例4(I)取100mg/ml的六氟異丙醇溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入到上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直
至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中，在室溫條件下使用ZF-I三用紫外線分析儀進行照射。(6)對樣品照射200min后，然后取10 μ L滴到尼龍膜上晾干。依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片及其結(jié)構(gòu)的變化如圖4所示。實施例5(I)取100mg/ml的六氟異丙醇溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中，在室溫條件下使用ZF-I三用紫外線分析儀進行照射。(6)對樣品照射300min后，然后取10 μ L滴到尼龍膜上晾干。
依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片及其結(jié)構(gòu)的變化如圖5所示。實施例6(I)取100mg/ml的六氟異丙醇溶液50 μ L放入到量程為I. 5ml的EP管內(nèi)；(2)將稱量好的寡肽O. 005g加入到上述EP管內(nèi)，用微型振蕩器輕微震蕩30s，直至寡肽全部溶解；(3)取部分溶解好的寡肽溶液10 μ L放入到量程為5ml的EP管內(nèi)，然后加入ddH205ml對其進行稀釋，稀釋后寡肽的濃度變?yōu)镺. 2mg/ml，然后將稀釋后的溶液用微型震蕩器輕微震蕩60s,使其均勻混合；(4)將最終得到的寡肽溶液在室溫下放置3天；
(5)取部分(3ml)放置3天后的溶液到石英表面皿中，在室溫條件下使用ZF-I三用紫外線分析儀進行照射。(6)對樣品照射400min后，然后取10 μ L滴到尼龍膜上晾干。依照以上步驟所得到結(jié)果的電鏡圖片及其結(jié)構(gòu)的變化如圖6所示。
權(quán)利要求
1.一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，包括 (1)將寡肽加入到六氟異丙醇中，震蕩直至寡肽全部溶解，得到寡肽溶液； (2)在上述寡肽溶液中加入重蒸水進行稀釋，將稀釋后的寡肽溶液震蕩，以混合均勻，再在室溫下放置3飛天； (3)將步驟(2)得到的溶液放置到表面皿中，在室溫條件下進行紫外線照射，最后將照射后的溶液晾干，即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(I)中所述的六氟異丙醇與寡肽的用量比為5(Γ60μ L 0. 005 0. 006g。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(I)所述的震蕩為用微型振蕩器震蕩，震蕩時間為3(T60s，震蕩時所使用的容器為EP管，所述EP管的量程是O. Γ1. 5mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(2)所述的稀釋后的寡肽溶液中寡肽的濃度是O. 2^0. 3mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(2)所述的震蕩為用微型振蕩器震蕩，震蕩時間為5(T60s，震蕩時所使用的容器為EP管，所述EP管的量程是I飛mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(2)所述的放置時的溫度為23 25° C。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(3)所述的進行紫外線照射中采用的紫外線分析儀的型號是ZF-I三用紫外線分析儀，照射時間分別為60min、120min。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(3)所述的進行紫外線照射時，表面皿中溶液的體積為3mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于步驟(3)所述的晾干為將照射后的溶液取l(Tl5yL滴到尼龍膜上晾干。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種自組裝寡肽在紫外照射下自組裝成不同結(jié)構(gòu)的方法，包括(1)將寡肽加入到六氟異丙醇中，震蕩直至寡肽全部溶解，得到寡肽溶液；(2)在上述寡肽溶液中加入重蒸水進行稀釋，將稀釋后的寡肽溶液震蕩，以混合均勻，再在室溫下放置3~5天；(3)將步驟(2)得到的溶液放置到表面皿中，在室溫條件下進行紫外線照射，最后將照射后的溶液晾干，即可。本發(fā)明的方法快速、簡捷、高效、廉價并且操作方便，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號C07K5/065GK102775467SQ20121023806
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月10日
發(fā)明者朱利民, 聶華麗, 魏然 申請人:東華大學(xué)