專利名稱：一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其是涉及一種采用高效液相制備色譜法從云木香根中同時(shí)制備云木香胺A和云木香胺B的方法。
背景技術(shù)：
云木香為菊科植物云木香lappa Clarke的根,別名木香、廣木香,具有行氣化滯、疏肝、健胃等功效，可治療氣滯、停食積聚、胸滿腹脹、嘔吐瀉痢等病癥。云木香中含有多種揮發(fā)油和生物堿類化合物。云木香胺A和云木香胺B是從云木香根中分離得到的倍半萜類生物堿化合物，這兩個(gè)組分均具有抗?jié)冏饔?，云木香胺A在100mg/kg時(shí),對(duì)由HCl/乙醇引起的大鼠胃潰瘍抑制率為59. 8%，云木香胺B在50mg/kg時(shí)，對(duì)由HCl/乙醇引起的大鼠胃潰瘍抑制 率為87. 2%。現(xiàn)有文獻(xiàn)中對(duì)云木香中生物堿的相關(guān)研究報(bào)道相對(duì)較少，未見有同時(shí)制備云木香中倍半萜類生物堿的方法報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，該方法操作簡單，所得產(chǎn)品含量高。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于包含以下步驟
1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，藥材與溶劑質(zhì)量比例為I : (6-15)，合并提取液，減壓濃縮得粗提取物；
2)將上述粗提取物懸溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮得浸膏；
3)將上述浸膏進(jìn)行中壓氧化鎂柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，所得粗品用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至9. 5-10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3-5次，得云木香總生物堿；
4)將上述云木香總生物堿用甲醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離純化，乙腈-水混合溶液洗脫，收集各色譜峰對(duì)應(yīng)化合物流分，減壓濃縮干燥得云木香胺A和云木香胺B。所述步驟2)中的乙酸乙酯用量為提取物體積的1-4倍量。所述步驟3)中的氧化鎂目數(shù)為100-300目，柱層析洗脫條件為采用石油醚-丙酮按體積比為20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫。所述步驟4)中制備液相色譜采用普通C18柱，以體積比為75:25的乙腈和水混合溶劑為流動(dòng)相，I. 5-4ml/min的流速。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明方法通過采用微波提取、溶劑萃取、中壓氧化鎂柱層析、結(jié)晶及制備液相色譜分離等步驟制備得到云木香胺A、云木香胺B、云木香胺C三種倍半萜類生物堿化合物，耗時(shí)短、得率高、操作簡單，易于工業(yè)化。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例I :
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入10倍原料重量的85%乙醇溶液微波提取20分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用2倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至10. 2，過濾，沉淀物用去 離子水洗滌5次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，2. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實(shí)施例2:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取20分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用I倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至9. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌4次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，3. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實(shí)施例3
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入8倍原料重量的80%乙醇溶液微波提取15分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用4倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至10. O，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，I. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實(shí)施例4:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用3倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至9. 8，過濾，沉淀物用去離子水洗滌4次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，3. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。 實(shí)施例5:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取15分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用2倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌5次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，4. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實(shí)施例6:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分鐘，提取液濾出，如此反復(fù)提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用I. 5倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進(jìn)行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至10. O，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進(jìn)行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動(dòng)相，2. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長276nm。分別收集各色譜峰對(duì)應(yīng)的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。
權(quán)利要求
1.一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于包含以下步驟 1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，藥材與溶劑質(zhì)量比例為I : (6-15)，合并提取液，減壓濃縮得粗提取物； 2)將上述粗提取物懸溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮得浸膏； 3)將上述浸膏進(jìn)行中壓氧化鎂柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進(jìn)行薄層層析收集目標(biāo)洗脫液，回收試劑至小體積，所得粗品用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調(diào)節(jié)pH至9. 5-10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3-5次，得云木香總生物堿； 4)將上述云木香總生物堿用甲醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離純化，乙腈-水混合溶液洗脫，收集各色譜峰對(duì)應(yīng)化合物流分，減壓濃縮干燥得云木香胺A和云木香胺B。
2.如權(quán)利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的乙酸乙酯用量為提取物體積的1-4倍量。
3.如權(quán)利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的氧化鎂目數(shù)為100-300目，柱層析洗脫條件為采用石油醚-丙酮按體積比為20:1、10:1、5:1、2:1、1:1 進(jìn)行梯度洗脫。
4.如權(quán)利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟4)中制備液相色譜采用普通C18柱，以體積比為75:25的乙腈和水混合溶劑為流動(dòng)相，I.5-4ml/min 的流速。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，提供了一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法。制備方法包括乙醇溶液提取、有機(jī)溶劑萃取、中壓氧化鎂柱層析以及制備高效液相色譜純化等步驟。本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，質(zhì)量好，制備方法簡單，制備量大，易于產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號(hào)C07D405/06GK102863430SQ20121036283
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司