專利名稱：一種厚花番荔枝靈的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種從厚花番荔枝種子中分離制備厚花番荔枝靈的方法。
背景技術(shù)：
厚花番蒸枝靈，白色無定形粉末，來源于番蒸枝科植物厚花番蒸枝crassiflora的種子。厚花番荔枝種子主要有效成分為こ酰精寧類化合物，以厚花番荔枝靈為主。厚花番荔枝靈具有抗腫瘤活性，對下列腫瘤細胞的ED50( μ g/ml)為A-549(0.006)；HT-29 (0. 6) ；MCF-7 (0. 004) ；RPMI-7951 (0. 001) ;U_251 (0. 01)。其作用強度與阿霉素相當。 目前,番蒸枝科植物次生代謝物番蒸枝こ酰精寧類(annonanceous acetogenins,AAGs)化合物被視為新的抗腫瘤藥物的潛在資源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9細胞復制、誘導癌細胞凋亡，是強效的復合物I抑制劑，抗腫瘤藥物的候選藥物。目前，尚未見高含量厚花番荔枝靈的制備方法相關(guān)專利報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種厚花番荔枝靈的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
(1)取厚花番荔枝種子，超臨界ニ氧化碳流體萃取藥材中的油脂類物質(zhì)；
(2)脫脂藥材加6-8倍80-90%こ醇溶液，在30-45°C的溫度下，進行連續(xù)逆流超聲提取30-70min,過濾得到提取液，濃縮干燥得粗提物；
(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分；
(4)將厚花番荔枝靈組分進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈。所述步驟(I)中所述超臨界萃取溫度為35_45°C，壓カ為25_30MPa，時間為20_50mino所述步驟(2)中超聲頻率為40-60KHZ。所述步驟(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為4-7:3-4:5-7:2-3。本方法積極效果是
(1)本方法采用超臨界流體萃取技術(shù)脫除油脂類物質(zhì)，高效環(huán)保；
(2)本方法采用連續(xù)逆流超聲提取，實現(xiàn)了超聲提取和連續(xù)逆流提取同時進行，提取效果好，同時實現(xiàn)連續(xù)作業(yè)；
(3)本方法采用高速逆流色譜法，收率高、制備量大、制備周期短，解決了柱層析效率低而且污染嚴重的技術(shù)缺陷；
具體實施例方式 下面將結(jié)合具體實施方式
進ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :
取厚花番荔枝種子，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，萃取溫度為35°C，萃取壓カ為30MPa，CO2流量為15L/h，萃取20min，殘留物加6倍90%こ醇溶液在45°C的溫度下進行連續(xù)逆流超聲提取30min，超聲頻率為60KHz，過濾，得到提取液，減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，以體積比5:4:6:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分，進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈，含量98. 1%。
實施例2:
取厚花番荔枝種子，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，萃取溫度為45°C，萃取壓カ為29MPa，CO2流量為15L/h，萃取50min，殘留物加8倍80%こ醇溶液在30°C的溫度下進行連續(xù)逆流超聲提取70min，超聲頻率為60KHz，過濾，得到提取液，減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，以體積比7:4:7:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分，進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈，含量97. 4%。實施例3:
取厚花番荔枝種子，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，萃取溫度為38°C，萃取壓カ為26MPa，C02流量為18L/h，萃取30min，殘留物加7倍850%こ醇溶液在35°C的溫度下進行連續(xù)逆流超聲提取60min，超聲頻率為40KHz，過濾，得到提取液，減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，以體積比6:4:7:3石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分，進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈，含量96. 9%。實施例4:
取厚花番荔枝種子，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，萃取溫度為40°C，萃取壓カ為30MPa，CO2流量為17L/h，萃取50min，殘留物加8倍90%こ醇溶液在40°C的溫度下進行連續(xù)逆流超聲提取50min，超聲頻率為50KHz，過濾，得到提取液，減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，以體積比4:3:5:2石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分，進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈，含量97. 6%。
實施例5:
取厚花番荔枝種子，取lkg，放入超臨界萃取裝置中，萃取溫度為42°C，萃取壓カ為25MPa，CO2流量為15L/h，萃取40min，殘留物加6倍90%こ醇溶液在45°C的溫度下進行連續(xù)逆流超聲提取40min，超聲頻率為50KHz，過濾，得到提取液，減壓濃縮干燥，得粗提物；采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，以體積比7:3:7:3石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做 流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分，進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈，含量98. 3%。
權(quán)利要求
1.ー種厚花番荔枝靈的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取厚花番荔枝種子，超臨界ニ氧化碳流體萃取藥材中的油脂類物質(zhì)； (2)脫脂藥材加6-8倍80-90%こ醇溶液，在30-45°C的溫度下，進行連續(xù)逆流超聲提取30-70min,過濾得到提取液，濃縮干燥得粗提物； (3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水，上相注滿高速逆流色譜柱為固定相，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗提物由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集厚花番荔枝靈組分； (4)將厚花番荔枝靈組分進行真空濃縮，析出 結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入こ酸こ酯回流溶解，放置重結(jié)晶，過濾、洗滌干燥即得厚花番荔枝靈。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種厚花番荔枝靈的制備方法，其特征在于所述步驟(I)中所述超臨界萃取溫度為35-45°C，壓カ為25-30MPa，時間為20_50min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種厚花番荔枝靈的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中超聲頻率為40-60KHz。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種厚花番荔枝靈的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水溶劑系統(tǒng)的體積比為4-7:3-4:5-7:2-3。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種操作簡單、污染少的厚花番荔枝靈的制備方法，工藝步驟為(1)取厚花番荔枝種子，超臨界二氧化碳流體萃取藥材中的油脂類物質(zhì)；(2)脫脂藥材用醇類溶液進行連續(xù)逆流超聲提取，過濾得到提取液，濃縮干燥得粗提物；(3)采用高速逆流色譜法分離純化粗提物中的厚花番荔枝靈，其兩相溶劑系統(tǒng)為石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相為固定相，下相為流動相，收集厚花番荔枝靈組分；(4)將厚花番荔枝靈組分進行真空濃縮，析出結(jié)晶，濾出結(jié)晶，加入乙酸乙酯回流溶解，放置重結(jié)晶。本發(fā)明制備厚花番荔枝靈，產(chǎn)品純度高，易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
文檔編號C07D307/58GK102827114SQ20121036836
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司