專利名稱：一種斯氏木堿的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，具體涉及一種斯氏木堿的提取方法。
背景技術(shù)：
斯氏木堿(Sickingine)，分子式C2tlH22N3,分子量304. 42。斯氏木堿是從茜草科植物染料斯氏木tine tori a (HBK)Schum.及威廉斯氏木wi I IiamsiiStandi.植物中分離得到的一種吲哚類生物堿。實(shí)驗(yàn)研究表明，斯氏木堿具有抑制回腸收縮作用，可抑制豚鼠離體回腸由點(diǎn)刺激引起的收縮，ED50為100 μ M0現(xiàn)有提取斯氏木堿的報(bào)道并不多見(jiàn)，市場(chǎng)上也尚未有斯氏木堿對(duì)照品的出售，因此提供一種斯氏木堿的提取方法則很有必要，可以為其后續(xù)研究提供支持。
目前，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)斯氏木堿的提取純化方法方面的專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種斯氏木堿的提取方法，該方法操作簡(jiǎn)單、得率高、安全環(huán)保，可快速大量分離高純度斯氏木堿。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
(1)提取取威廉斯氏木藥材粉碎成粗粉，用5-10倍量85-95%的乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30-100min，得到乙醇提取液；
(2)氧化鋁柱層析上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品；
(3)制備型液相色譜分離上述粗品采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集斯氏木堿組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得斯氏木堿粗晶；
(4)重結(jié)晶將斯氏木堿粗晶用氯仿-甲醇重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木堿晶體。步驟(I)所述超聲頻率為50-80KHZ。步驟(2)所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1，用量為柱體積的4_8倍。步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-O. 2%乙二胺水溶液，體積比為35:65，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。步驟(4)所述氯仿-甲醇的體積比為2. 5-3:1。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
1)操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，易于產(chǎn)業(yè)化放大；
2)提取、柱層析、制備液相分離等步驟中的溶劑用量少，并可回收再利用；
3)具有較高的經(jīng)濟(jì)效益和學(xué)術(shù)價(jià)值，本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，可為斯氏木堿的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供藥理原料和實(shí)踐支持。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明
實(shí)施例I:
取威廉斯氏木藥材Ikg,粉碎成粗粉,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍95%乙醇溶液，55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30min，超聲頻率為80KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，向浸膏中加氧化鋁(120目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品。以乙腈-O. 2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為35:65，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為15cm、直徑為4cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)O. 45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml,控制流速為50ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm,收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得斯氏木堿粗晶，用氯仿-甲醇(2. 5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木 堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度96. 9%。實(shí)施例2:
取威廉斯氏木藥材Ikg,粉碎成粗粉,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍85%乙醇溶液，45°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取lOOmin，超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(80目)拌勻、干燥后裝柱，用4倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品。以乙腈-O. 2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為35:65，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為10cm、直徑為1cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)O. 45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為5ml,控制流速為10ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm,收集目標(biāo)成分,減壓回收試劑得斯氏木堿粗晶，用氯仿-甲醇(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97. 9%。實(shí)施例3
取威廉斯氏木藥材IOkg,粉碎成粗粉,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入6倍90%乙醇溶液，35°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取50min，超聲頻率為50KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用6倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品。以乙腈-O. 2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為35:65，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m,柱長(zhǎng)為25cm、直徑為4cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)O. 45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20ml，控制流速為20ml/min，紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得斯氏木堿粗晶，用氯仿-甲醇(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97. 5%。實(shí)施例4:
取威廉斯氏木藥材IOkg,粉碎成粗粉,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料,從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入5倍85%乙醇溶液，25°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取80min，超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用8倍柱體積的氯仿-丙酮(I: I)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品。以乙腈-O. 2%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為35:65，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為50cm、直徑為5cm，將粗品加入流動(dòng)相至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)O. 45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液，六通閥進(jìn)樣，進(jìn) 樣體積為50ml，控制流速為120ml/min，紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得斯氏木堿粗晶，用氯仿-甲醇(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度98. 2%。
權(quán)利要求
1.一種斯氏木堿的提取方法，其特征在于它包括以下步驟 (1)提取取威廉斯氏木藥材粉碎成粗粉，用5-10倍量85-95%的乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取30-100min，得到乙醇提取液； (2)氧化鋁柱層析上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集斯氏木堿流分，濃縮干燥得到斯氏木堿粗品； (3)制備型液相色譜分離上述粗品采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集斯氏木堿組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得斯氏木堿粗晶； (4)重結(jié)晶將斯氏木堿粗晶用氯仿-甲醇重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度斯氏木堿晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的斯氏木堿的提取方法，其特征在于步驟(I)所述超聲頻率為50-80KHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的斯氏木堿的提取方法，其特征在于步驟(2)所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為I: I，用量為柱體積的4-8倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的斯氏木堿的提取方法，其特征在于步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-O. 2%乙二胺水溶液，體積比為35:65，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的斯氏木堿的提取方法，其特征在于步驟(4)所述氯仿-甲醇的體積比為2. 5-3:1。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種斯氏木堿的提取方法，其提取方法是(1)取威廉斯氏木藥材粗粉，80-95%的乙醇溶液連續(xù)逆流超聲提取，得到提取液；(2)將提取液濃縮，再經(jīng)氧化鋁柱層析；(3)制備型液相色譜分離；(4)氯仿-甲醇重結(jié)晶，得到高純度的斯氏木堿結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、得率高，可得到高純度產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和學(xué)術(shù)價(jià)值。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102827219SQ201210371888
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬(wàn)冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司