專利名稱：一種吉利柘樹素b的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，特別是涉及一種吉利柘樹素B的制備方法。
背景技術(shù)：
吉利柘樹素B (Gericudranin B),是一種黃酮醇類化合物,分子式C29H24O9,分子量410. 38,黃色粉末，mpl74°C。吉利柘樹素B主要存在于?？?Moraceae)柘樹Cudraniatricuspidata Bureau 的莖皮中?，F(xiàn)代藥理研究表明，吉利柘樹素A具有細(xì)胞毒活性。對人型腫瘤細(xì)胞的ED5tl ( μ g/ml)為皮膚癌CRL1579為13. 12，皮膚癌LOX-IMVI為31. 26，白血病M0LT-4F為23. 07，結(jié)腸癌 KM12 為 28. 05，腎癌 U0-31 為 9. 78。
經(jīng)文獻(xiàn)檢索，尚無適用于高純度吉利柘樹素B的提取純化方法報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種吉利柘樹素B的制備方法，該方法具有工藝簡單，提取完全，高效節(jié)能的優(yōu)點。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的
一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于以柘樹莖皮為原料，采用超臨界二氧化碳萃取，解析液加入活性炭回流脫色，脫色液加入超濾膜超濾，透過液再加入納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺柱吸附，先用水洗脫，再用5-7BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液采用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品。所述超臨界二氧化碳萃取溫度為38_50°C，萃取壓力為30_42MPa，萃取時間為l-2h，二氧化碳流量為3-5ml/g原料/min，夾帶劑為65-80%乙醇，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為5-8%。所述活性炭為藥用活性炭，用量占原料質(zhì)量的O. 3-0. 8%。所述超濾膜為截留分子量2000-5000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維素納濾膜。所述高效液相色譜以反相鍵合硅膠為固定相，甲醇水溶液為流動相。本發(fā)明的優(yōu)勢在于本發(fā)明方法簡單易行，超臨界萃取提取率高；膜過濾技術(shù)進(jìn)行分子截留，屬于物理方法，常溫下進(jìn)行，既實現(xiàn)了除雜，又濃縮了物料，過程中不造成成分分解，操作簡單，耗能少；采用聚酰胺樹脂對萃取液純化，樹脂處理量大，洗脫溶劑簡單，樹脂可重復(fù)利用；所用的反相高效液相制備色譜，具有分離度高、重現(xiàn)性好、分離時間短、制備量大等優(yōu)點，分離的到產(chǎn)品純度可達(dá)98%以上。
具體實施例方式 下面將結(jié)合具體實施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施例。
實施例I :
將柘樹莖皮粉碎，取1kg，置于萃取器中，以70%乙醇溶液作為夾帶劑，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為8%，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度為48°C，萃取壓力為42MPa，萃取時間為2h，二氧化碳流量為4ml/g原料/min，解析液加入8g藥用活性炭回流脫色，脫色液加入截留分子量5000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺吸附，先用水洗脫，再用5BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，以C18反相鍵合硅膠為固定相，55%甲醇水溶液為流動相，紫外在線監(jiān)測，檢測波長為297nm，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品，含量98. 6%。實施例2
將柘樹莖皮粉碎，取1kg，置于萃取器中，以80%乙醇溶液作為夾帶劑，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為5%，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度為38°C，萃取壓力為30MPa， 萃取時間為lh，二氧化碳流量為5ml/g原料/min，解析液加入5g藥用活性炭回流脫色，脫色液加入截留分子量3000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量200的中空纖維素納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺吸附，先用水洗脫，再用6BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，以C18反相鍵合硅膠為固定相，55%甲醇水溶液為流動相，紫外在線監(jiān)測，檢測波長為297nm，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品，含量99. 1%。實施例3:
將柘樹莖皮粉碎，取2kg，置于萃取器中，以80%乙醇溶液作為夾帶劑，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為5%，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度為45°C，萃取壓力為38MPa，萃取時間為2h，二氧化碳流量為3ml/g原料/min，解析液加入6g藥用活性炭回流脫色，脫色液加入截留分子量5000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺吸附，先用水洗脫，再用7BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，以C18反相鍵合硅膠為固定相，55%甲醇水溶液為流動相，紫外在線監(jiān)測，檢測波長為297nm，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品，含量98. 1%。實施例4:
將柘樹莖皮粉碎，取2kg，置于萃取器中，以80%乙醇溶液作為夾帶劑，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為8%，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度為42°C，萃取壓力為38MPa，萃取時間為2h，二氧化碳流量為3. 5ml/g原料/min，解析液加入15g藥用活性炭回流脫色，脫色液加入截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量200的中空纖維素納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺吸附，先用水洗脫，再用7BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，以C18反相鍵合硅膠為固定相，55%甲醇水溶液為流動相，紫外在線監(jiān)測，檢測波長為297nm，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品，含量98. 7%。實施例5:
將柘樹莖皮粉碎，取5kg，置于萃取器中，以65%乙醇溶液作為夾帶劑，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為6%，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，萃取溫度為50°C，萃取壓力為45MPa，萃取時間為I. 5h，二氧化碳流量為5ml/g原料/min，解析液加入40g藥用活性炭回流脫色，脫色液加入截留分子量2000的中空纖維素超濾膜超濾，透過液再加入截留分子量300的中空纖維素納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺吸附，先用水洗脫，再用6BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，以C18 反相鍵合硅膠為固定相，55%甲醇水溶液為流動相，紫外在線監(jiān)測，檢測波長為297nm，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品，含量98. 0%。
權(quán)利要求
1.一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于以柘樹莖皮為原料，采用超臨界二氧化碳萃取，解析液加入活性炭回流脫色，脫色液加入超濾膜超濾，透過液再加入納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺柱吸附，先用水洗脫，再用5-7BV50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液采用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求I所述的一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于所述超臨界二氧化碳萃取溫度為38-50°C，萃取壓力為30-42MPa，萃取時間為l_2h，二氧化碳流量為3_5ml/g原料/min，夾帶劑為65-80%乙醇，用量是占總萃取溶劑的體積百分比為5_8%。
3.如權(quán)利要求I所述的一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于所述活性炭為藥用活性炭，用量占原料質(zhì)量的O. 3-0. 8%。
4.如權(quán)利要求I所述的一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于所述超濾膜為截留分子量2000-5000的中空纖維素超濾膜，納濾膜為截留分子量200-300的中空纖維素納濾膜。
5.如權(quán)利要求I所述的一種吉利柘樹素B的制備方法，其特征在于所述高效液相色譜以反相鍵合硅膠為固定相，甲醇水溶液為流動相。
全文摘要
本發(fā)明提供一種吉利柘樹素B的制備方法，方法步驟包括以柘樹莖皮為原料，采用超臨界二氧化碳萃取，解析液加入活性炭回流脫色，脫色液加入超濾膜超濾，透過液再加入納濾膜濃縮，濃縮液加水分散，加入聚酰胺柱吸附，取50%乙醇溶液洗脫，收集高濃度流分，減壓濃縮，濃縮液采用制備型高效液相色譜儀進(jìn)行分離純化，收集目標(biāo)流分，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得吉利柘樹素B產(chǎn)品。本發(fā)明具有工藝簡單、高效、節(jié)能的優(yōu)點，獲得的產(chǎn)品純度可達(dá)到98%以上，適合工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號C07D311/40GK102827130SQ201210371890
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司