專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)物質(zhì)或藥品的制造方法，具體涉及以金銀花為原料，經(jīng)過(guò)提取分離，并純化后得到多種咖啡?？崴釂误w的方法。
背景技術(shù)：
金銀花又名忍冬，為忍冬科多年生半常綠纏繞木質(zhì)藤本植物?！敖疸y花”一名出自《本草綱目》，由于忍冬花初開(kāi)為白色，后轉(zhuǎn)為黃色，因此得名金銀花。藥材金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開(kāi)的花，金銀花自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥。它性甘寒氣芳香，甘寒清熱而不傷胃，芳香透達(dá)又可祛邪。金銀花既能宣散風(fēng)熱，還善清解血毒，用于各種熱性病，如身熱、發(fā)疹、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等證，均效果顯著。金銀花為四十種家種大宗藥材之一，用途廣、用量巨大，不斷的開(kāi)發(fā)新用途，使其用量不斷增加，同時(shí)，金銀花也是疫情防治的重要品種。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，金銀花所含化學(xué)成分主要有綠原酸(3-咖啡酰奎尼酸)、4_咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸、4，5- 二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴岬瓤Х弱？崴犷?lèi)生理活性物質(zhì)、咖啡酸、木樨草素、肌醇、皂甙、鞣質(zhì)、有機(jī)醇等物質(zhì)，其中咖啡酰奎尼酸類(lèi)及黃酮類(lèi)化合物含量較高。一般認(rèn)為，金銀花的抗菌有效成分為咖啡?？崴峄衔?，且常以綠原酸的含量高低來(lái)評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。綠原酸雖具有廣譜的抗細(xì)菌、抗病毒作用，但其并非是金銀花中唯一的抑菌成分。目前，國(guó)內(nèi)的廠家僅單純的進(jìn)行金銀花茶、金銀花露的生產(chǎn)或者僅僅提取金銀花中的有效成分綠原酸，往往忽略了其它同樣具有生理活性的其它咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)。如
2-咖啡?？崴嵊芍袊?guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院和江中集團(tuán)共同研制開(kāi)發(fā)，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已批準(zhǔn)其進(jìn)入人體臨床試驗(yàn)階段，藥物此前經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)和安全性試驗(yàn)，在艾滋病毒感染MT4細(xì)胞中能顯著抑制病毒復(fù)制，作用顯著強(qiáng)于目前世界公認(rèn)較好治療艾滋病的雞尾酒療法用藥。目前現(xiàn)有對(duì)金銀花活性成分的開(kāi)發(fā)，主要集中在綠原酸的提取純化等領(lǐng)域上，目前常見(jiàn)的有以下幾種石硫醇法、異戊醇法、鉛沉法、醇沉法、異丙醇-乙酸乙酯法等。這些傳統(tǒng)方法都有明顯的缺陷，例如石硫醇法加入石灰乳造成綠原酸類(lèi)物質(zhì)的嚴(yán)重破壞；有機(jī)溶劑萃取的方法不僅效率不高，并且大量的溶劑在回收過(guò)程中損失，耗能大；傳統(tǒng)的水提醇沉法現(xiàn)在仍然廣泛應(yīng)用，但是其耗醇量大，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，大量的乙醇需回收，浪費(fèi)能源，得到的產(chǎn)品純度也不高。對(duì)于咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)的分離純化提取，目前具有的公開(kāi)報(bào)道較少，陳育如等2012年在申請(qǐng)?zhí)?01210055626、名稱(chēng)為“一種以甜葉菊為原料同時(shí)制備總咖啡?？崴岷吞鹁仗堑姆椒ā敝胁捎脤⑻鹑~菊用水或有機(jī)溶劑在加熱、微波或超聲輔助作用下對(duì)原料進(jìn)行浸提，固液分離后得到甜菊糖和咖啡?？崴崽崛∫汉?，然后進(jìn)行萃取分離，最后經(jīng)純化后得到甜菊糖總苷和總咖啡?？崴岬募兤?。該方法采用的微波、超聲等方法不利于工業(yè)化生產(chǎn)，并且得到的產(chǎn)品為總咖啡?？崴?，為混合物，不利于產(chǎn)品附加值的提高及具體應(yīng)用。而在目前集中的綠原酸研究方面，通過(guò)對(duì)公開(kāi)的文獻(xiàn)查詢，目前，對(duì)于綠原酸的制備方法有龐松濤等于2004年在公開(kāi)號(hào)CN1616403、名稱(chēng)為“從金銀花中提取制備綠原酸的工藝”中采用金銀花加水/乙醇進(jìn)行回流提取，，加乙醇沉淀雜質(zhì)，過(guò)夜過(guò)濾，濾液上大孔樹(shù)脂柱，用洗脫劑濃縮，收集含有綠原酸的組分，上聚酰胺柱，用洗脫劑洗脫，收集含有綠原酸的組分，濃縮，精制得到含量大于95%的綠原酸；該方法采用的醇沉淀不僅耗時(shí)長(zhǎng)且試劑及能耗耗費(fèi)大；盧定強(qiáng)等于2009年在公開(kāi)號(hào)CN101503356、名稱(chēng)為“一種制備高純度綠原酸的新方法”中采用將綠原酸原液通過(guò)至少4級(jí)大孔樹(shù)脂串聯(lián)吸附柱、洗雜、洗脫后，再將洗脫液再生進(jìn)行連續(xù)逆流萃取，得到高純度綠原酸；該方法采用的柱分離步驟不易操作且較繁瑣，同時(shí)采用的連續(xù)逆流萃取耗費(fèi)大量的有機(jī)試劑；孫波等于1999年在公開(kāi)號(hào)CN1273964、名稱(chēng)為“杜仲葉制備綠原酸工藝”中采用由超聲預(yù)處理和高溫提取、超濾、乙酸乙酯萃取、D140樹(shù)脂分離等步驟來(lái)完成，其中超聲處理難以用于工業(yè)化放大生產(chǎn)，超濾過(guò)程大大增加生產(chǎn)成本，而乙酸乙酯萃取耗費(fèi)大量的有機(jī)試劑；張東升等于2009年在公開(kāi)號(hào)CN101486651、名稱(chēng)為“一種杜仲葉中提取綠原酸的方法及其應(yīng)用”中采用粉碎、酶處理、超聲波處理、過(guò)濾、提取、濃縮與純化等步驟提取純化綠原酸，其中采用了酶處理提高了提取效率，但其中的超聲處理難以放大，且該技術(shù)運(yùn)用活性炭脫色造成主要成分的部分損失，且經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂分離后結(jié)晶，產(chǎn)品純度不高。目前，還有許多關(guān)于提取、純化、制備綠原酸的方法，但這些方法基本上都耗大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低。而關(guān)于咖啡?？崴釂误w生理物質(zhì)的制備方面的報(bào)道，目前還較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，解決現(xiàn)有制備咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)純度不高，并解決現(xiàn)有提取及制備綠原酸技術(shù)，耗費(fèi)大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低等問(wèn)題。本發(fā)明的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，包括(I)原料前處理步驟；金銀花干品原料粉碎后，加入含有纖維素酶及果膠酶的水溶液進(jìn)行破壁反應(yīng)，烘干后得到提取原料；(2)提取步驟；將步驟(I)得到的提取原料，50 80%乙醇提取，60 90°C下提取，料液比I : 5 I : 10，提取2 4次，合并后得到提取液；(3)大分子沉淀步驟；將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液，加入沉淀劑，經(jīng)過(guò)沉淀反應(yīng)，過(guò)濾后取上清液，得到沉淀分離液；(4)大孔樹(shù)脂分離步驟；將步驟(3)中得到的沉淀分離液，經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂分離，得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)；(5)反相柱分離步驟；將步驟⑷中得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)采用SephadexLH-20柱精制，分別得到3_咖啡?？崴?、4_咖啡酰奎尼酸、2_咖啡?？崴?、4，5- 二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物；(6)結(jié)晶步驟；將步驟(5)中得到的3-咖啡?？崴?、4-咖啡酰奎尼酸、5-咖啡酰奎尼酸、4，5- 二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物，分別用甲醇溶解后，冷卻至-20 4°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置6 18小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡酰奎尼酸、4-咖啡?？崴?、2-咖啡?？崴?、4，5- 二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴?。所述的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，其特征在于所述原料前處理步驟中，所述纖維素酶及果膠酶的水溶液為水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為O. 5 2 I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為O. 5 3 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為O. 5 2 1000(質(zhì)量比)；所述破壁反應(yīng)為反應(yīng)溫度30 60°C，反應(yīng)時(shí)間I 3小時(shí)。所述的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，其特征在于所述大分子沉淀步驟中，所述濃縮液為將提取液濃縮至與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為2 5 I (L/kg);所述沉淀劑為殼聚糖、PEG4000、PEG6000中的一種；所述加入沉淀劑，經(jīng)過(guò)沉淀反應(yīng)，其過(guò)程為在濃縮液中加入沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為O. I I. 5 100 (kg/L)，調(diào)節(jié)pH6 8，攪拌20 40min后，常溫靜置8 16小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。所述的一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法，其特征在于所述大孔樹(shù)脂分離步驟中，所述大孔樹(shù)脂為NK-2，NKA-2, NK-9, D3520, DlOl中的一種；所述經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂分離，其過(guò)程為將沉淀分離液上樣到大孔樹(shù)脂上，用純水或10% 30%的乙醇水溶液洗脫2 4柱體積，棄去洗脫液，再用40% 60%的乙醇水溶液洗脫2 4柱體積，收集洗脫液，干燥得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)。所述的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，其特征在于所述反相柱分離步驟中，所述S印hadex LH-20柱為以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為60 100 : I的分離柱；所述采用S印hadex LH-20柱精制，其過(guò)程為將咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)濕法上樣于分離柱上，以40 80%的甲醇水溶液(V/V)或甲醇三氯甲烷=80 : 20 60 : 40 (V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為O. 5 2柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡?？崴帷?-咖啡?？崴?、2-咖啡?？崴?、4，5- 二咖啡?？崴帷?，4- 二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物。所述的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，其特征在于所述結(jié)晶步驟中，所述用甲醇溶解為所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.5 2 Kml/g)，加熱至40 60°C溶解。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，構(gòu)想合理，方法簡(jiǎn)便，容易推廣，解決現(xiàn)有制備咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)純度不高，并解決現(xiàn)有提取及制備綠原酸技術(shù)，耗費(fèi)大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低等問(wèn)題，并獲取高純度的3-咖啡?？崴?、4-咖啡?？崴?、2-咖啡酰奎尼酸、4，5- 二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴岬葐误w成分。項(xiàng)目技術(shù)包括原料前處理步驟、提取步驟、大分子沉淀步驟、大孔樹(shù)脂分離步驟、反相柱分離步驟和結(jié)晶步驟等，節(jié)省了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率，且工藝簡(jiǎn)便并易于放大到工業(yè)化生產(chǎn)，同時(shí)能大大提高原料利用率。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I(I)原料前處理步驟取金銀花干品為原料,粉碎過(guò)篩后,準(zhǔn)確稱(chēng)取IOOOg,加入含有纖維素酶O. 50g、果膠酶O. 50g的水溶液500ml，其中水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為O. 5 I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為O. 5 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為0.5 1000(質(zhì)量比)，加熱到60°C，反應(yīng)I小時(shí)后，烘干，得到提取原料；(2)提取步驟將步驟(I)中所得的提取原料，80%乙醇提取，60°C下提取，料液比I : 10，提取3次，合并提取液；(3)大分子沉淀步驟將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液5000ml，濃縮液與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為5 I (L/kg)，加入O. 05kg殼聚糖為沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為I : 100(1^/1)，調(diào)節(jié)？!18.0，攪拌401^11后，常溫靜置16小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。(4)大孔樹(shù)脂分離步驟將步驟(3)中得到的沉淀分離液上樣到NKA-2大孔吸附樹(shù)脂后，10%乙醇水溶液洗脫4柱體積，丟棄后，40%乙醇水溶液洗脫3柱體積后，收集洗脫液，干燥后得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)總計(jì)121. IOg ；(5)反相柱分離步驟以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為100 I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)121. 10g，濕法上樣于分離柱上，以40%的甲醇水溶液(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為I柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物26. 65g、4-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物17. 65g、2-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物11. 65g、4，5- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物7. 75g、3，4- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物6. 87g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.5 l(ml/g)，加熱至60°C溶解。溶解后，冷卻至_20°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置18小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的
3-咖啡?？崴?1. 95g、4-咖啡?？崴?3. 39g、2_咖啡?？崴?. 82g、4，5- 二咖啡?？崴?. 28g、3，4- 二咖啡酰奎尼酸4. 77g。實(shí)施例2(I)原料前處理步驟取金銀花干品為原料,粉碎過(guò)篩后，準(zhǔn)確稱(chēng)取2000g,加入含有纖維素酶6. 0g、果膠酶4. Og的水溶液4000ml，其中水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為2 : I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為3 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為2 1000(質(zhì)量比)，加熱到30°C，反應(yīng)3小時(shí)后，烘干，得到提取原料；(2)提取步驟將步驟(I)中所得的提取原料，50%乙醇提取,90 C下提取，料液比I : 5,提取4次，合并提取液；(3)大分子沉淀步驟將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液4000ml，濃縮液與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為2 I (L/kg)，加入O. 06kgPEG4000為沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為1.5 100(1^/1)，調(diào)節(jié)？?jī)?cè).0，攪拌201^11后，常溫靜置8小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。(4)大孔樹(shù)脂分離步驟將步驟(3)中得到的沉淀分離液上樣到NK-2大孔吸附樹(shù)脂后，純水洗脫3柱體積，丟棄后，60%乙醇水溶液洗脫2柱體積后，收集洗脫液，干燥后得到咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)總計(jì)229. 70g ；(5)反相柱分離步驟以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為60 I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)229. 70g，濕法上樣于分離柱上，以80%的甲醇水溶液(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為2柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物48. 89g、4-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物31. 78g、2-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物19. 35g、4，5- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物12. 68g、3，4- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物9. 25g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為2 l(ml/g)，加熱至40°C溶解。溶解后，冷卻至_10°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置12小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡酰奎尼酸40. 55g、4-咖啡酰奎尼酸27. 38g、2-咖啡?？崴?6. 91g、4，5- 二咖啡?？崴?0. 04g、3，4- 二咖啡酰奎尼酸7. 47g。實(shí)施例3(I)原料前處理步驟取金銀花干品為原料,粉碎過(guò)篩后，準(zhǔn)確稱(chēng)取IOOOg,加入含有纖維素酶2. 0g、果膠酶I. Og的水溶液1000ml，其中水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為I : I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為2 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為
I 1000(質(zhì)量比)，加熱到45°C，反應(yīng)2小時(shí)后，烘干，得到提取原料；(2)提取步驟將步驟(I)中所得的提取原料，70%乙醇提取，75°C下提取，料液比I : 8，提取2次，合并提取液；(3)大分子沉淀步驟將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液4000ml，濃縮液與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為4 I (L/kg)，加入O. 004kgPEG6000為沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為O. I 100 (kg/L)，調(diào)節(jié)pH7. 0，攪拌30min后，常溫靜置12小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。(4)大孔樹(shù)脂分離步驟將步驟(3)中得到的沉淀分離液上樣到NK-9大孔吸附樹(shù)脂后，20%乙醇水溶液洗脫2柱體積，丟棄后，50%乙醇水溶液洗脫4柱體積后，收集洗脫液，干燥后得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)總計(jì)109. 76g ；(5)反相柱分離步驟以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為80 I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)109. 76g，濕法上樣于分離柱上，以60%的甲醇水溶液(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為O. 5柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物24. 36g、4-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物15. 91g、2-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物10. 78g、4，5-二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物7. 02g、3，
4-二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物5. 82g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為I : l(ml/g)，加熱至50°C溶解。溶解后，冷卻至4°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置6小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡?？崴?9. 24g、4-咖啡?？崴?1. 56g、2-咖啡?？崴?. 25g、4，5_ 二咖啡?？崴?br> 4.67g、3，4-二咖啡?？崴?. 79g。實(shí)施例4(I)原料前處理步驟取金銀花干品為原料,粉碎過(guò)篩后,準(zhǔn)確稱(chēng)取2000g,加入含有纖維素酶8. 0g、果膠酶8. Og的水溶液4000ml，其中水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為2 : I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為2 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為
2 1000(質(zhì)量比)，加熱到60°C，反應(yīng)I小時(shí)后，烘干，得到提取原料；(2)提取步驟將步驟(I)中所得的提取原料，80%乙醇提取，70°C下提取，料液比I : 10，提取3次，合并提取液；(3)大分子沉淀步驟將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液10000ml，濃縮液與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為5 I (L/kg)，加入O. lkgPEG6000為沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為I : 100 (kg/L)，調(diào)節(jié)pH8. 0，攪拌40min后，常溫靜置16小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。(4)大孔樹(shù)脂分離步驟將步驟(3)中得到的沉淀分離液上樣到D3520大孔吸附樹(shù)脂后，30 %的乙醇水溶液洗脫2柱體積，丟棄后，60%乙醇水溶液洗脫4柱體積后，收集洗脫液，干燥后得到咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)總計(jì)240. 05g ；(5)反相柱分離步驟以Sephadex LH-20為基質(zhì),濕法填充高徑比為100 : I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)240. 05g，濕法上樣于分離柱上，以甲醇三氯甲烷=80 20(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為O. 5柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物50. 02g、4-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物33. 19g、2-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物20. 80g、4，5- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物13. 12g、3，4- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物9. 89g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為0.5 l(ml/g)，加熱至60°C溶解。溶解后，冷卻至_20°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置18小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的
3-咖啡?？崴?2. 10g、4-咖啡酰奎尼酸29. 45g、2_咖啡酰奎尼酸17. 28g、4，5_ 二咖啡酰奎尼酸11. 09g、3，4- 二咖啡?？崴?. 86g。實(shí)施例5步驟(I) (3)同實(shí)施例4(4)大孔樹(shù)脂分離步驟將步驟(3)中得到的沉淀分離液上樣到DlOl大孔吸附樹(shù)脂后，10%乙醇水溶液洗脫3柱體積，丟棄后，60%乙醇水溶液洗脫4柱體積后，收集洗脫液，干燥后得到咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)總計(jì)246. 60g ；(5)反相柱分離步驟以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為80 I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)246. 60g，濕法上樣于分離柱上，以甲醇三氯甲烷=60 40(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為I柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物48. 33g、4-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物31. 90g、2-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物18. 95g、4，5- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物
12.60g、3，4-二咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物9. 15g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為I : l(ml/g)，加熱至50°C溶解。溶解后，冷卻至4°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置6小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡?？崴?9. 00g、4-咖啡?？崴?7. 79g、2-咖啡酰奎尼酸16. 80g、4，5- 二咖啡?？崴?br> 10.83g、3，4- 二咖啡酰奎尼酸7. OOgo實(shí)施例6步驟(I) (4)同實(shí)施例5(5)反相柱分離步驟以S印hadex LH-20為基質(zhì)，濕法填充高徑比為60 I的分離柱；將步驟(4)得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)246. 60g，濕法上樣于分離柱上，以甲醇三氯甲烷=70 30(V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為2柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物46. 00g、4-咖啡酰奎尼酸分離產(chǎn)物30. 35g、2-咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物19. 87g、4，5- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物
13.00g、3，4- 二咖啡?？崴岱蛛x產(chǎn)物8. 79g ；(6)結(jié)晶步驟將步驟(5)中得到的五種分離產(chǎn)物，分別加入甲醇，所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為2 l(ml/g)，加熱至60°C溶解。溶解后，冷卻至_20°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置18小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡?？崴?7. 75g、4-咖啡酰奎尼酸26. 68g、2_咖啡?？崴?7. 02g、4，5- 二咖啡?？崴?1. 15g、3 ，4-二咖啡?？崴?. 90g。
權(quán)利要求
1.一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法,包括(1)原料前處理步驟；金銀花干品原料粉碎后，加入含有纖維素酶及果膠酶的水溶液進(jìn)行破壁反應(yīng)，烘干后得到提取原料；(2)提取步驟；將步驟(I)得到的提取原料，50 80%乙醇提取，60 90°C下提取，料液比I : 5 I : 10，提取2 4次，合并后得到提取液；(3)大分子沉淀步驟；將步驟(2)中得到的提取液濃縮后得到濃縮液，加入沉淀劑，經(jīng)過(guò)沉淀反應(yīng)，過(guò)濾后取上清液，得到沉淀分離液；(4)大孔樹(shù)脂分離步驟；將步驟(3)中得到的沉淀分離液，經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂分離，得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)；(5)反相柱分離步驟；將步驟⑷中得到的咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)采用SephadexLH-20柱精制，分別得到3-咖啡?？崴?、4-咖啡?？崴帷?-咖啡?？崴帷?，5-二咖啡?？崴?、3，4- 二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物；(6)結(jié)晶步驟；將步驟(5)中得到的3-咖啡酰奎尼酸、4-咖啡?？崴?、2-咖啡?？崴帷?，5-二咖啡?？崴?、3，4-二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物，分別用甲醇溶解后，冷卻至-20 4°C，在此溫度下滴加同溫度的乙醚至不再出現(xiàn)沉淀，保持該溫度靜置6 18小時(shí)，過(guò)濾后，分別得到純度大于98%的3-咖啡?？崴帷?-咖啡?？崴?、2-咖啡?？崴?、4，5-二咖啡?？崴?、3，4-二咖啡?？崴?。
2.如權(quán)利要求I所述的一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法，其特征在于所述原料前處理步驟中，所述纖維素酶及果膠酶的水溶液為水溶液的體積與原料的質(zhì)量比為O. 5 2 I (體積質(zhì)量比)，纖維素酶的量與原料的質(zhì)量比為O. 5 3 1000(質(zhì)量比)，果膠酶的質(zhì)量與原料的質(zhì)量比為O. 5 2 1000(質(zhì)量比)；所述破壁反應(yīng)為反應(yīng)溫度30 60°C，反應(yīng)時(shí)間I 3小時(shí)。
3.如權(quán)利要求I所述的一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法，其特征在于所述大分子沉淀步驟中，所述濃縮液為將提取液濃縮至與金銀花干品原料的體積質(zhì)量比為2 5 : I (L/kg);所述沉淀劑為殼聚糖、PEG4000、PEG6000中的一種；所述加入沉淀劑，經(jīng)過(guò)沉淀反應(yīng)，其過(guò)程為在濃縮液中加入沉淀劑，所加入沉淀劑與濃縮液的質(zhì)量體積比為O. I I. 5 100 (kg/L)，調(diào)節(jié)pH6 8，攪拌20 40min后，常溫靜置8 16小時(shí)，過(guò)濾去除沉淀物得到沉淀分離液。
4.如權(quán)利要求I所述的一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，其特征在于所述大孔樹(shù)脂分離步驟中，所述大孔樹(shù)脂為NK-2，NKA-2, NK-9, D3520, DlOl中的一種；所述經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂分離，其過(guò)程為將沉淀分離液上樣到大孔樹(shù)脂上，用純水或10% 30%的乙醇水溶液洗脫2 4柱體積，棄去洗脫液，再用40% 60%的乙醇水溶液洗脫2 4柱體積，收集洗脫液，干燥得到咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)。
5.如權(quán)利要求I所述的一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法，其特征在于所述反相柱分離步驟中，所述Sephadex LH-20柱為以Sephadex LH-20為基質(zhì),濕法填充高徑比為60 100 : I的分離柱；所述采用S印hadex LH-20柱精制，其過(guò)程為將咖啡酰奎尼酸類(lèi)物質(zhì)濕法上樣于分離柱上，以40 80%的甲醇水溶液(V/V)或甲醇三氯甲烷=80 20 60 40 (V/V)為洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為O. 5 2柱體積每小時(shí)，分段收集，分別收集富含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液，蒸干后分別得到3-咖啡?？崴?、4-咖啡酰奎尼酸、2-咖啡?？崴帷?，5- 二咖啡酰奎尼酸、3，4- 二咖啡?？崴岬确蛛x產(chǎn)物。
6.如權(quán)利要求I所述的一種從金銀花中制備多種咖啡?？崴釂误w的方法，其特征在于 所述結(jié)晶步驟中，所述用甲醇溶解為所用甲醇的體積與分離產(chǎn)物的質(zhì)量比為O. 5 ,2 l(ml/g)，加熱至40 60°C溶解。
全文摘要
一種從金銀花中制備多種咖啡酰奎尼酸單體的方法，屬于化學(xué)物質(zhì)或藥品的制造方法，解決現(xiàn)有制備咖啡?？崴犷?lèi)物質(zhì)純度不高，并解決現(xiàn)有提取及制備綠原酸技術(shù)，耗費(fèi)大量有機(jī)溶劑，引起環(huán)境污染；或運(yùn)用較為復(fù)雜的分離技術(shù)難以放大生產(chǎn)；或取效率不高，原料利用率較低等問(wèn)題，并獲取高純度的3-咖啡酰奎尼酸、4-咖啡?？崴?、2-咖啡?？崴帷?，5-二咖啡酰奎尼酸、3，4-二咖啡?？崴岬葐误w成分。項(xiàng)目技術(shù)包括原料前處理步驟、提取步驟、大分子沉淀步驟、大孔樹(shù)脂分離步驟、反相柱分離步驟和結(jié)晶步驟等，節(jié)省了生產(chǎn)成本，提高了生產(chǎn)效率，且工藝簡(jiǎn)便并易于放大到工業(yè)化生產(chǎn)，同時(shí)能大大提高原料利用率。
文檔編號(hào)C07C67/48GK102942483SQ20121040695
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年10月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月19日
發(fā)明者向福, 葉冬三, 向俊, 葉新潮, 閆立新 申請(qǐng)人:湖北楚天舒藥業(yè)有限公司