專利名稱：一種具有抗過(guò)敏活性的大棗中環(huán)磷酸腺苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從大棗中提取具有抗過(guò)敏活性環(huán)磷酸腺苷的方法
背景技術(shù)：
棗樹(shù)是我國(guó)特有的一種果樹(shù)，我國(guó)的棗樹(shù)栽培面積占全世界栽培總栽培面積的95%以上。大棗是一種常用中藥，大棗中環(huán)磷酸腺苷(cAMP)含量為100 600nmol/g，在180多種天然植物中含量最高?！碍h(huán)磷酸腺苷”(簡(jiǎn)稱cAMP)具有擴(kuò)張血管和抗過(guò)敏作用，過(guò)敏性患者大多是由于人體細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度下降，環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)濃度增高，cAMP和cGMP比值偏低所致。cAMP和cGMP是存在于機(jī)體的一對(duì)重要的環(huán)核苷酸酶，廣泛存在于一切細(xì)胞中，在生命活動(dòng)以及疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要的作用。大棗內(nèi)含有豐富的cAMP和cGMP活性物質(zhì)，當(dāng)cAMP活性物質(zhì)被消化道吸收，分布到末梢組織，這些組織內(nèi)cAMP與cGMP的比值將呈顯著持續(xù)的增高，使得免疫細(xì)胞中的環(huán)磷酸腺苷的量增加，進(jìn)而可以對(duì)抑制過(guò)敏免疫反應(yīng)有良好的效果。環(huán)磷酸腺苷可以通過(guò)化學(xué)合成、生物發(fā)酵、天然產(chǎn)物分離提取等方法獲得，但是化學(xué)合成所用溶劑有一定的毒性，易污染環(huán)境，生物發(fā)酵菌種限制且難以分離，而植物尤其是大棗中cAMP含量是目前所知中最高的，如何從天然產(chǎn)物中較簡(jiǎn)便的分離出cAMP，是當(dāng)前研究所要解決的主要問(wèn)題。目前關(guān)于天然來(lái)源cAMP提取物的發(fā)明專利國(guó)內(nèi)外都比較少，國(guó)內(nèi)的劉孟軍、王永惠等以及國(guó)外的Truelsen TA等測(cè)定了多種植物中的cAMP的含量，其中大棗以38nmol/g居首位。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于大棗中cAMP的提取方法比較常用的有Hanabusa K等利用溶劑浸 提的方法從大棗中提取cAMP，李明潤(rùn)等通過(guò)三次陰離子交換柱層析和一次氧化鋁層析提取cAMP。但是提取工藝繁瑣、提取成本較高、提取效率低且提取過(guò)程中糖分沒(méi)有被完全提取出來(lái)。因此，從提高提取效率、降低工藝成本、加強(qiáng)綜合利用等方面來(lái)看，現(xiàn)有的生產(chǎn)工藝都需要大力提高。這對(duì)環(huán)磷酸腺苷的工業(yè)化生產(chǎn)具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是充分利用我國(guó)豐富的大棗資源，深層挖掘大棗以及棗中cAMP抗過(guò)敏的保健價(jià)值，具有工藝簡(jiǎn)單、提取率高、成本低、原料豐富等特點(diǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明由以下步驟組成I)將篩選后的大棗原料進(jìn)行去皮、去核、洗滌、粉碎等預(yù)處理，利用乙醇進(jìn)行閃式提取。提取液冷卻至室溫后通過(guò)抽濾、濃縮、靜置得到澄清透明棗汁。2)將澄清提取液通過(guò)裝有大孔樹(shù)脂的樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附，根據(jù)飽和吸附試驗(yàn)的結(jié)果確定采用HPD-400型樹(shù)脂。在一定pH值下通過(guò)適宜濃度的乙醇洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液。3)將洗脫液收集，經(jīng)過(guò)真空濃縮，濃縮至原體積的1/3，加入無(wú)水乙醇，靜置、過(guò)濾并通過(guò)真空冷凍干燥得到大棗cAMP提取物粉末。將得到的大棗cAMP提取物進(jìn)行Elson-Morgan法抗過(guò)敏檢測(cè),得到其抗過(guò)敏抑制率。
步驟I)所述的乙醇水溶液的濃度為40 % 70 %。步驟I)所述的料液比為I : 20 30。步驟I)所述的提取時(shí)間為20 40s。步驟2)所述的pH值為4. O 5. 5。步驟2)所述的洗脫流速為2 4BV/H。步驟2)所述的洗脫乙醇濃度為40 70%。步驟3)Elson-Morgan法抗過(guò)敏檢測(cè)透明質(zhì)酸酶活性為500_800U/mL。一般植物提取過(guò)敏抑制率達(dá)到50%即認(rèn)為有抗過(guò)敏效果，而本產(chǎn)品抑制率達(dá)到 76. 2%。


下面對(duì)附圖進(jìn)行簡(jiǎn)要說(shuō)明。圖I是大棗環(huán)磷酸腺苷通過(guò)閃式提取、純化并進(jìn)行抗過(guò)敏活性檢測(cè)的工藝流程圖。圖2是樣品濃度在O 30mg/mL范圍內(nèi)的環(huán)磷酸腺苷抗過(guò)敏活性檢測(cè)抑制率圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例I :取IOOg大棗進(jìn)行去皮、去核、洗滌等預(yù)處理后，加入60%的乙醇溶液放入閃式提取器進(jìn)行閃式提取，提取時(shí)間為40s，料液比為I : 20。提取液冷卻至室溫后通過(guò)抽濾、濃縮、靜置得到澄清棗汁。在內(nèi)徑為I. 5cm的交換柱內(nèi)裝入大孔吸附樹(shù)脂HPD-400，大棗閃提液上柱后除雜(去離子水)，pH = 4. 5，吸附以及洗脫流速為4BV/H，選擇40 70%乙醇溶液為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液。洗脫液經(jīng)過(guò)濃縮、真空冷凍干燥后測(cè)定cAMP的提取率為 135. 24ug/g。實(shí)施例2 稱取500g大棗經(jīng)過(guò)進(jìn)行去皮、去核、洗滌等預(yù)處理后加入60%的乙醇溶液放入閃式提取器進(jìn)行閃式提取，提取時(shí)間為40s，料液比為I : 20。提取液冷卻至室溫后通過(guò)抽濾、濃縮、靜置得到澄清棗汁。在內(nèi)徑為5cm的交換柱內(nèi)裝大孔吸附樹(shù)脂HPD-400型500mL，大棗閃提液5000mL上柱后除雜(去離子水)，pH = 4. 0，吸附及洗脫流速為4BV/H，選擇40 70%乙醇溶液為洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液。洗脫液經(jīng)過(guò)濃縮、真空冷凍干燥后測(cè)定cAMP的提取率為121. 43ug/g。實(shí)施例3 對(duì)實(shí)施例I中的cAMP提取物通過(guò)Elson-Morgan法進(jìn)行抗過(guò)敏檢測(cè)，將提取物加入2. 5mol/L的氯化鈣溶液中，加入500U/mL的透明質(zhì)酸酶O. 5mL,加入pH = 5.6的醋酸緩沖液O. 5mL,在37°C下保溫20min,加入I. 6mg/L的透明質(zhì)酸鉀O. 6mL,并在37°C下保溫40min,室溫下放置IOmin并加入NaOH溶液以及ImL乙酰丙酮,經(jīng)過(guò)沸水浴15min、冰水浴5min、放置室溫IOmin后，加入ImLP-DAB顯色劑，室溫放置30min后測(cè)量其在585nm處的吸光值，通過(guò)以下抑制率公式進(jìn)行計(jì)算
權(quán)利要求
1.一種從大棗中提取具有抗過(guò)敏活性環(huán)磷酸腺苷(CAMP)的工藝方法，其特征在于包括下述步驟將篩選后的大棗原料進(jìn)行包括去皮、去核、洗滌和粉碎的預(yù)處理后，利用乙醇溶液進(jìn)行閃式提取，提取液通過(guò)裝有HPD-400型樹(shù)脂的樹(shù)脂柱進(jìn)行吸附、乙醇梯度洗脫、解吸、解吸液濃縮、干燥后得到含cAMP的大棗提取物產(chǎn)品。
2.一種如權(quán)利要求I所述的從大棗中提取具有抗過(guò)敏活性環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝方法，其特征在于包括以下步驟 1)將篩選后的大棗原料進(jìn)行包括去皮、去核和洗滌的預(yù)處理，利用乙醇溶液在閃式提取器進(jìn)行閃式提取，得到提取液； 2)提取液冷卻至室溫后通過(guò)抽濾、濃縮、靜置得到澄清透明棗汁； 3)將澄清提取液在裝有HPD-400型大孔樹(shù)脂的樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附，pH= 4. O 5. 5，吸附及洗脫流速為2 4BV/H，選擇濃度為40 70%的乙醇溶液為適宜的洗脫液進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液； 4)上述步驟中得到的解吸液經(jīng)濃縮、干燥后得到cAMP大棗提取物產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的從大棗中提取具有抗過(guò)敏活性環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝方法，其特征在于對(duì)cAMP大棗提取物產(chǎn)品進(jìn)行Elson-Morgan法進(jìn)行抗敏活性檢測(cè)，并通過(guò)抑制率公式得到其過(guò)敏抑制率最大為76. 2%。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的，其特征在于所述的步驟I)中的乙醇溶液濃度為40 60%。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的，其特征在于所述的步驟I)中的乙醇料液比為I: 20 30。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的，其特征在于所述的步驟I)中的提取時(shí)間為20 40s。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的，其特征在于所述的HPD-400型樹(shù)脂乙醇溶液洗脫梯度為40 70%。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的，其特征在于所述的HPD-400型樹(shù)脂適宜的吸附pH= 4. O 5.0，吸附及洗脫流速為2 4BV/H。
9.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的，其特征在于干燥后cAMP的提取率為120 135μ g/g。
10.一種具有抗過(guò)敏活性環(huán)磷酸腺苷(cAMP)，其特征在于是采用如權(quán)利要求I 9任一項(xiàng)所述的方法進(jìn)行制備。
全文摘要
本發(fā)明是一種從大棗中提取具有抗過(guò)敏活性的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的工藝方法。將大棗經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，利用乙醇進(jìn)行閃式提取(乙醇濃度40％-70％、料液比1∶20～30、提取時(shí)間20～40s)、提取液在裝有大孔吸附樹(shù)脂的樹(shù)脂柱中進(jìn)行吸附(HPD-400型樹(shù)脂、pH＝4.0～5.5、吸附及洗脫流速為2～4BV/H、乙醇濃度40～70％)、經(jīng)過(guò)乙醇梯度洗脫解吸，解吸液濃縮、干燥后得到含cAMP的大棗提取物產(chǎn)品，對(duì)提取物進(jìn)行Elson-Morgan法抗過(guò)敏檢測(cè)，得到抑制率為76.2％。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單、提取率高、成本低、原料豐富、提取測(cè)試周期短等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H19/213GK102875625SQ20121041923
公開(kāi)日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月29日
發(fā)明者任迪峰, 曹晨晨, 王維有, 吳宏力, 魯軍, 歐赟 申請(qǐng)人:北京林業(yè)大學(xué)