一種制備黃芩苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物的提純方法，具體來說，本發(fā)明涉及一種制備高純度黃芩苷的方法及其工藝。采用反相硅膠或反相聚合物樹脂作為DAC制備柱填料，甲醇和水的混合溶劑為流動相的方法分離純化了黃芩苷，分離工藝簡單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，為進(jìn)一步工業(yè)化制備型液相色譜分離純化黃芩苷提供了基礎(chǔ)。
【專利說明】一種制備黃芩苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是動態(tài)軸向壓縮柱分離純化黃芩苷的方法，具體是采用加熱回流提取、動態(tài)軸向壓縮制備柱進(jìn)行分離純化的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]黃芩苷(Baicalin)是從黃芩根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，具有顯著的生物活性，具有抑菌、利尿、抗炎、抗變態(tài)及解痙作用，并且具有較強(qiáng)的抗癌反應(yīng)等生理效能，在臨床醫(yī)學(xué)已占有重要地位。黃芩苷還能吸收紫外線，清楚氧自由基，又能抑制黑色素的生成，因此即可用于醫(yī)藥，也可用于化妝品，是一種很好的功能性美容化妝品原料。目前，國內(nèi)對黃芩苷提取工藝的研究有較多報道，其提取方法主要有溫浸法、煎煮法、微波法、超濾法等，但這些提取工藝操作周期長，條件不易控制，得到的黃芩苷的含量低。
[0003]隨著制藥、生物化工等行業(yè)的迅速發(fā)展，制備型液相色譜分離技術(shù)得到越來越廣泛的開發(fā)和應(yīng)用，已成為分離和純化復(fù)雜混合物的重要方法，尤其適用于天然產(chǎn)物的返利。動態(tài)軸向壓縮(DAC)法具有多方面的優(yōu)越性，因而得到了更為深入的研究和發(fā)展。動態(tài)軸向壓縮柱的核心技術(shù)是通過活塞的上下運動來裝柱、維持柱壓和卸柱，簡化了大直徑色譜柱的填卸過程，填裝的色譜柱性能穩(wěn)定、效率高。DAC柱柱效高，重復(fù)性好，填裝所用的時間短，可以采用粒徑更小的填料，減小柱長，增加柱徑，從而減小管壁效應(yīng)，得到幾乎接近分析柱的柱效。
[0004]本發(fā)明采用乙醇加熱回流提取，反相動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜法分離純化了黃芩苷，分離工藝簡單，提取率高，所得產(chǎn)品純度高，無污染，為進(jìn)一步工業(yè)化制備型液相色譜分離純化黃芩苷提供了基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

`[0005]本發(fā)明的目的是提供一種從冬凌草中提取并用動態(tài)軸向壓縮柱分離純化黃芩苷的生產(chǎn)方法，屬于天然產(chǎn)物的提取分離純化領(lǐng)域，包括醇提取、動態(tài)軸向壓縮柱分離、重結(jié)晶以及成品的純度檢測。
[0006]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用如下步驟:
a、提取:將粉末過60目篩后置于提取器中，95%乙醇為溶劑，70°C水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀；
b、樣品的溶解:a步驟的濃縮物用甲醇與水的混合溶劑溶解，過濾，備用；
C、流動相的配制:流動相采用步驟b的甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為50-70%之
間；
d、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好填料的動態(tài)軸向壓縮柱中泵入上述溶解的樣品溶液，再用步驟c配制好的流動相洗脫，收集目標(biāo)主峰，取樣HPLC檢測；
e、濃縮:將d步驟中收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到黃芩苷純品；
f、成品的純度檢測:泵:NewstyleNP7000型泵；色譜柱(0DS填料4.6*250mm, 5 μ m)；檢測器:漢邦紫外檢測器NewStyleNU3000，檢測波長:274nm，檢測溫度:室溫；流動相:甲醇:2% 乙酸水=57:43,流速:1.2mL/min。
[0007]
【具體實施方式】
[0008]實施方案一
1、提取:將粉末過60目篩后稱取100g置于提取器中，用600mL70%乙醇提取，70°C水浴回流2h，提取2次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用甲醇:水=55:45溶解，濃度為10g/mL，過濾，備用；
3、流動相的配制:流動相為甲醇:水=55:45；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(50*500mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為65mL/min,用流動相洗脫,流速為100mL/min,收集目標(biāo)成分,取樣HPLC檢測；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到黃芩苷純品，經(jīng)HPLC檢測純度為
98.6%。
[0009]實施方案 二
1、提取:將粉末過60目篩后稱取150g置于提取器中，用1200mL70-%乙醇提取，70°C水浴回流2h，提取3次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用甲醇:水=57:43溶解，濃度為15g/mL，過濾，備用；
3、流動相的配制:流動相為甲醇:水=57:43；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為20um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(50*700mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為80mL/min,用流動相洗脫,流速為120mL/min,收集目標(biāo)成分,取樣HPLC檢測；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到黃芩苷純品，經(jīng)HPLC檢測純度為
99.03%。
[0010]實施方案三
1、提取:將粉末過60目篩后稱取200g置于提取器中，用1600mL70%乙醇提取，70°C水浴回流2h，提取3次，合并提取液，減壓濃縮成膏；
2、樣品的溶解:濃縮物用甲醇:水=60:40溶解,濃度為20g/mL，過濾，備用；
3、流動相的配制:流動相為甲醇:水=60:40；
4、DAC柱分離:用進(jìn)樣泵向填裝好粒徑為30um填料的動態(tài)軸向壓縮柱(100*500mm)中泵入樣品溶液，進(jìn)樣流速為150mL/min,用流動相洗脫,流速為200mL/min,收集目標(biāo)成分，取樣HPLC檢測；
5、濃縮:將收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得到黃芩苷純品，經(jīng)HPLC檢測純度為99.24%ο
[0011]上述實施實例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和權(quán)力要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對本發(fā)明做出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種制備黃芩苷的方法，包括: a、黃芩苷粗品的制備:將黃芩粉末過篩后置于提取器中，70%乙醇為溶劑，70°C水浴回流2h，提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮成稠膏狀； b、樣品的溶解:將黃芩苷粗品用甲醇與水的混合溶劑溶解，過濾，備用； C、流動相的配制:流動相采用步驟a的甲醇與水的混合溶劑，甲醇的濃度為50-70%之間； d、上柱洗脫:用進(jìn)樣泵向裝好填料的動態(tài)軸向壓縮制備柱中泵入步驟b溶解好的樣品，再用步驟c配制好的流動相洗脫，收集黃芩苷，取樣用HPLC檢測純度； e、濃縮:對收集到的目標(biāo)組分進(jìn)行濃縮處理，得黃芩苷純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是a步驟中每次回流所用95%乙醇的用量為冬凌草干草粉末的6~10倍量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于b步驟樣品的濃度在10-30g/mL之間。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于d步驟中采用單針上柱吸附、解析并進(jìn)行分段收集；或采用多針分批連續(xù)方式上柱、解析的連續(xù)進(jìn)樣方式，且對每批解析液進(jìn)行分段收集。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于采用的動態(tài)軸向壓縮柱為50-1000mm各系列不同直徑的制備柱，所述填料為C18和C8，填料粒徑為20-40um。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于d步驟樣品溶液的上樣流速為0.02BV/mirT0.10BV/min，洗脫流速為 0.10 BV/mirT0.20BV/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求f6任一項所述的方法，其特征在于重復(fù)進(jìn)行d步驟，直到所得黃芩苷HPLC檢測含量達(dá)到98%以上。
【文檔編號】C07H17/07GK103788154SQ201210428289
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年11月1日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月1日
【發(fā)明者】張大兵, 張寧, 羅軍俠, 劉玉明, 王亞輝 申請人:江蘇漢邦科技有限公司