專利名稱：一種高純度卵磷脂的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物的分離提取技術(shù)領(lǐng)域，具體講是屬于一種高純度卵磷脂的制備方法。
背景技術(shù)：
卵磷脂，又稱磷脂酰膽堿，是含磷的極性脂質(zhì)之一，由法國人Gobley于1846 1847年從蛋黃和腦中首先發(fā)現(xiàn)，由Levenzai于1925年從其他磷脂中分離出來。研究表明，卵磷脂具有乳化、增溶、潤濕、抗氧化、發(fā)泡、晶化控制、與蛋白結(jié)合以及防止淀粉老化等多種理化功能。此外，卵磷脂也是生物膜的構(gòu)成成分，是神經(jīng)遞質(zhì)一乙酰膽堿的主要來源，可以修復(fù)線粒體，參與機(jī)體代謝。同時(shí)，卵磷脂還可促使膽固醇和蛋白質(zhì)分子之間的結(jié)合，減輕血管壁類脂質(zhì)的浸潤，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的產(chǎn)生和改善動(dòng)脈壁的組織結(jié)。純度高達(dá)98%以上的高純度卵磷脂更是載藥脂質(zhì)體/脂微球的首選乳化劑，是制藥行業(yè)不可或缺的藥用輔料。由于卵磷脂的用途廣泛，有關(guān)卵磷脂的提取與純化技術(shù)也已經(jīng)有大量研究。1980年Jorntl]采用色譜法生產(chǎn)出以鮮雞蛋為原料的高純度卵磷脂產(chǎn)品，其純度可達(dá)化學(xué)純標(biāo)準(zhǔn)。其采用體積分?jǐn)?shù)為96%的乙醇提取，同時(shí)并使用了氯化鎘和乙醚。而純化過程以A1203為柱材料，二氯甲烷和甲醇為洗脫劑。1999年Simt2]研究了乙醇溶劑法生產(chǎn)卵黃卵磷脂工藝，并采用低溫冷藏工序來去除中性脂肪，可提出至少86%的磷脂。此法將溶劑提取法和超臨界萃取相結(jié)合，提取蛋黃卵磷脂。提過過程只采用了一種單一溶劑乙醇，方法簡便。但與超臨界萃取相結(jié)合，過程繁復(fù)。2003年西北大學(xué)的趙彬俠等人M用柱層析法分離純化蛋黃卵磷脂，其采用蛋黃磷脂為原料在硅膠柱上進(jìn)行分離，并以氯仿甲醇混合液梯度洗脫。2009年江南大學(xué)食品學(xué)院的楊嚴(yán)俊博士申請(qǐng)了題為《高純度蛋黃卵磷脂及其生產(chǎn)方法與它們的用途》的專利[4]，主要采用了乙醇萃取，而后用環(huán)糊精脫除膽固醇與低溫冷藏分離蛋黃油的技術(shù)，得到了含量達(dá)到90 98%的蛋黃總磷脂，并含有I. 5%左右的葉黃素。[I]Jom R. Nielsen. A Lipids,1980，15 (6) :480 484[2]Sim J S. New extraction and fraction method for lecithin and naturaloil from egg yolk. Nakai CAB International,2001. 129 138[3]趙彬俠等，用柱層析法分離純化蛋黃卵磷脂，西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)2003，Vol. 33P171 173[4]楊嚴(yán)俊等，ZL200910136630. O上述已公開的提取方法，由于產(chǎn)品純度達(dá)不到藥用級(jí)卵磷脂的要求，或受限于設(shè)備的操作規(guī)?；蛴卸居泻θ軇┑氖褂玫葐栴}，均不宜作為藥用輔料注射用高純度卵磷脂的大規(guī)模生產(chǎn)工藝進(jìn)行推廣和使用。

發(fā)明內(nèi)容
本專利涉及一種環(huán)境友好的，以模擬移動(dòng)床連續(xù)色譜分離的方式進(jìn)行的，相對(duì)廉價(jià)的，高效率的，注射用高純度卵磷脂的清潔生產(chǎn)工藝。更為獨(dú)特的是，它涉及一種經(jīng)過改進(jìn)的工藝，這種工藝以乙醇水溶液為卵磷脂的提取溶劑與模擬移動(dòng)床連續(xù)色譜分離系統(tǒng)的洗脫劑，通過模擬移動(dòng)床連續(xù)色譜分離，確保卵磷脂與原料脂質(zhì)中其他組分的徹底分離，得到純度達(dá)到藥典要求(PC ^ 98% )的注射用高純度卵磷脂產(chǎn)品，同步實(shí)現(xiàn)其他組分作為副產(chǎn)物的回收以及溶劑的循環(huán)回用。按照本專利進(jìn)行操作，與此前的傳統(tǒng)方法相比，能夠以經(jīng)濟(jì)可行的方法連續(xù)分離純化，使產(chǎn)品的收率以及產(chǎn)品純度均提高到98%以上的水平，確保卵磷脂產(chǎn)品的品質(zhì)滿足藥用輔料的技術(shù)要求，使生產(chǎn)成本大幅度降低，徹底杜絕廢水和廢渣的產(chǎn)生，實(shí)現(xiàn)卵磷脂生產(chǎn)的清潔化、無污染化。以上這些改進(jìn)對(duì)于注射用高純度卵磷脂的生產(chǎn)而言是至關(guān)重要的。本發(fā)明的最重要的目的之一，就是要解決卵磷脂與原料脂質(zhì)中其他組分，尤其是溶血磷脂，的連續(xù)、徹底分離問題，以確保產(chǎn)品的使用安全。作為一個(gè)順帶的結(jié)果，本發(fā)明的另一個(gè)目的，是要實(shí)現(xiàn)溶劑的無毒無害化，實(shí)現(xiàn)卵磷脂的環(huán)境友好化生產(chǎn)。具體來說，首先，我們發(fā)現(xiàn)，以乙醇水溶液為洗脫劑，采用模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)，可以有效地將待分離混合物中的卵磷脂跟腦磷脂、溶血磷脂、色素、膽固醇等其他成分徹底分離，得到不含任何其他磷脂組分的純度極高的卵磷脂。由此奠定了以乙醇為洗脫劑的卵磷脂分離純化工藝的基礎(chǔ)。其次，我們發(fā)現(xiàn)，以乙醇為溶劑，可有效抑制磷脂酶對(duì)卵磷脂的活性，從而可大大減少溶血磷脂的生成壓力，并且所用乙醇溶劑可以不經(jīng)任何處理，直接循環(huán)回用。由此奠定了模擬移動(dòng)床連續(xù)色譜法卵磷脂清潔生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)。我們發(fā)現(xiàn)，適用的原料可以是雞蛋黃、鴨蛋黃、鵝蛋黃等各種禽類卵黃來源的脂質(zhì)或以其為原料加工而成的磷脂粗品，也可以是大豆、棉籽、花生、菜籽等各種植物來源的含有磷脂的脂質(zhì)或以其為原料加工而成的磷脂粗品。乙醇水溶液的適宜濃度為70% 100%(v/v) 0靜置分層應(yīng)當(dāng)在0-40°C，常壓下進(jìn)行。分離可以以過濾的方式進(jìn)行，也可以以離心沉降的方式進(jìn)行。過濾可以用板框過濾機(jī)、葉濾機(jī)、濾過式離心機(jī)或轉(zhuǎn)鼓式真空過濾機(jī)中的任何一種過濾機(jī)械進(jìn)行。離心沉降可以用高速管式離心機(jī)、碟片式離心機(jī)或沉降式過濾機(jī)中的任何一種離心沉降機(jī)械進(jìn)行。溶劑回收處理可在10 180°C，最好是30 150°C，O. 0001 I. OMPa,的條件下進(jìn)行。模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)所使用的洗脫劑可以是二氯甲烷、三氯甲烷、異丙醚、乙醚、丙酮、甲基叔丁基醚、甲醇、乙醇、水、甲苯以及由它們中的兩種或兩種以上按任意比例所組成的混合溶劑。所使用的吸附劑可以是活性炭、硅膠、變性硅膠、活性氧化鋁、聚丙烯酰胺、離子交換樹脂或其他任何能夠與特定洗脫劑配合將上層中的磷脂酰膽堿與其余組分加以分離的吸附材料。模擬移動(dòng)床色譜分離在溫度為O 100°C，最好是10 60°C，壓力為O. I 3. 5MPa的條件下進(jìn)行。本發(fā)明中所提及的所有重要參數(shù)全部最優(yōu)化后磷脂的收率和溶劑的回收率均可提高至98%以上。產(chǎn)品的純度可提高至98% (色譜純度)以上。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對(duì)本發(fā)明的限定。
實(shí)例一將新鮮蛋黃液46. 5g加入155ml無水乙醇中，邊加邊攪拌，然后抽濾,得到濾液和濾餅。將濾餅放入索氏抽提裝置內(nèi)用無水乙醇進(jìn)行抽提，80°C下抽提12h。將抽提液旋蒸除去溶劑后與濾液合并，得到含卵磷脂的脂質(zhì)與乙醇的混合物?；旌衔镏?°C下靜置分層過夜，然后在4°C下3000rpm離心30min，收集上清液。上清液置以硅膠為吸附劑，以無水乙醇和70% (v/v)乙醇水溶液為梯度洗脫劑構(gòu)成的模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)中分離，洗脫梯度為無水乙醇70% (v/v)乙醇=10 :1 I :9，得到含卵磷脂的組分和含有腦磷脂等其余成分的組分。含卵磷脂的組分置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，然后冷凍干燥，得到高純度卵磷脂。 卵磷脂經(jīng)磷含量和氮含量測(cè)定和高效液相檢驗(yàn)，產(chǎn)品純度達(dá)到了 98% (光譜純)。離心殘?jiān)c含有腦磷脂等其余成分的組分合并，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，得到副產(chǎn)物蛋黃油。溶劑經(jīng)回收循環(huán)使用。實(shí)例二將新鮮蛋黃液噴霧干燥，得到蛋黃粉。將30g蛋黃粉放入索氏抽提裝置內(nèi)用96%(v/v)乙醇進(jìn)行抽提，80°C下抽提12h，得到含卵磷脂的脂質(zhì)與乙醇的混合物?；旌衔镏?TC下靜置分層過夜，然后在10°C下過濾，收集濾液。將濾液置以聚丙烯酰胺為吸附劑，以96%乙醇溶劑為洗脫劑構(gòu)成的模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)中分離，得到含卵磷脂的組分和含有腦磷脂等其余成分的組分。含卵磷脂的組分置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，然后冷凍干燥，得到高純度卵磷脂。卵磷脂經(jīng)磷含量和氮含量測(cè)定和高效液相檢驗(yàn)，產(chǎn)品純度達(dá)到了 98% (光譜純)。濾餅與含有腦磷脂等其余成分的組分合并，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，得到副產(chǎn)物蛋黃油。溶劑經(jīng)回收循環(huán)使用。實(shí)例三將市售大豆磷脂10g加入5000ml濃度為70% (v/v)的乙醇中，邊加邊攪拌，然后抽濾，得到含卵磷脂的脂質(zhì)與乙醇的混合物?；旌衔镏?°c下靜置分層過夜，然后在4°C下8000rpm離心lOmin，收集上清液。將上清液置以活性氧化鋁為吸附劑，以70% (v/v)乙醇為洗脫劑構(gòu)成的模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)中分離，得到含卵磷脂的組分和含有腦磷脂等其余成分的組分。含卵磷脂的組分置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，然后冷凍干燥，得到高純度卵磷脂。卵磷脂經(jīng)磷含量和氮含量測(cè)定和高效液相檢驗(yàn)，產(chǎn)品純度達(dá)到了 98% (光譜純)。離心殘?jiān)c含有腦磷脂等其余成分的組分合并，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收脫除洗脫劑，得到副產(chǎn)物大豆磷脂。溶劑經(jīng)回收循環(huán)使用。
權(quán)利要求
1.一種高純度卵磷脂的制備方法。該工藝由下列步驟組成1)制備一個(gè)含卵磷脂的混合物。該混合物由(i)含卵磷脂的脂質(zhì)，和(ii)乙醇按照I :0· I 500 (v/v)的配比組成；2)讓混合物靜置分層，然后分離，得到上層(以卵磷脂的乙醇溶液為主，同時(shí)含有其他極性成分)和下層(以中性脂質(zhì)為主)；3)下層經(jīng)溶劑回收處理，得到中性脂質(zhì)，作為產(chǎn)品銷售。回收得到的溶劑循環(huán)使用；4)上層用模擬移動(dòng)床進(jìn)行色譜分離，得到洗脫液(僅含磷脂酰膽堿)和洗余液(含有上層中除磷脂酰膽堿外的其余所有成分)。洗余液經(jīng)溶劑回收處理脫除洗脫劑后得到含有膽固醇、色素和腦磷脂的副產(chǎn)物，作為產(chǎn)品銷售。洗脫劑回收，循環(huán)使用；5)洗脫液經(jīng)溶劑回收處理脫除洗脫劑后，得到磷脂酰膽堿含量達(dá)到98%以上的高純度卵磷脂。洗脫劑回收，循環(huán)使用。
2.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的含卵磷脂的脂質(zhì)，可以是雞蛋黃、鴨蛋黃、鵝蛋黃等各種禽類卵黃來源的脂質(zhì)或以其為原料加工而成的磷脂粗品，也可以是大豆、棉籽、花生、菜籽等各種植物來源的含有磷脂的脂質(zhì)或以其為原料加工而成的磷脂粗品。
3.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的乙醇為濃度為70% 100% (v/v)的乙醇水溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的靜置分層在0-40°C，常壓下進(jìn)行。
5.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的分離可以以過濾的方式進(jìn)行，也可以以離心沉降的方式進(jìn)行。過濾可以用板框過濾機(jī)、葉濾機(jī)、濾過式離心機(jī)或轉(zhuǎn)鼓式真空過濾機(jī)中的任何一種過濾機(jī)械進(jìn)行。離心沉降可以用高速管式離心機(jī)、碟片式離心機(jī)或沉降式過濾機(jī)中的任何一種離心沉降機(jī)械進(jìn)行。
6.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的溶劑回收處理系指加熱使溶劑蒸發(fā)，然后冷凝回收的過程，在10 180°C，最好是30 150°C，0. 0001 I. OMPa，的條件下進(jìn)行。
7.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)所使用的洗脫劑可以是二氯甲烷、三氯甲烷、異丙醚、乙醚、丙酮、甲基叔丁基醚、甲醇、乙醇、水、甲苯以及由它們中的兩種或兩種以上按任意比例所組成的混合溶劑。
8.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于所述的模擬移動(dòng)床色譜分離系統(tǒng)所使用的吸附劑可以是活性炭、硅膠、變性硅膠、活性氧化鋁、聚丙烯酰胺、離子交換樹脂或其他任何能夠與特定洗脫劑配合將上層中的磷脂酰膽堿與其余組分加以分離的吸附材料。
9.如權(quán)利要求I所述的高純度卵磷脂的制備方法，其特征在于模擬移動(dòng)床色譜分離在溫度為O 100°C，最好是10 60°C，壓力為O. I 3. 5MPa的條件下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明屬天然產(chǎn)物的分離提取技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種高純度卵磷脂的制備方法。本工藝適用于藥用級(jí)高純度卵磷脂的制備。它提供了一種高效、廉價(jià)的藥用輔料注射用高純度卵磷脂的大規(guī)模制備生產(chǎn)工藝，采用模擬移動(dòng)床連續(xù)色譜分離技術(shù)確保卵磷脂與原料脂質(zhì)中所含其他成分的有效分離，得到高純度的卵磷脂產(chǎn)品，并可實(shí)現(xiàn)副產(chǎn)物的回收和溶劑的循環(huán)回用，避免原輔材料的不合理消耗和浪費(fèi)，徹底杜絕廢水和廢渣的產(chǎn)生，使產(chǎn)品的收率以及產(chǎn)品純度均達(dá)到98％以上的水平，確保卵磷脂產(chǎn)品的品質(zhì)滿足藥用輔料的技術(shù)要求，使生產(chǎn)成本大幅度降低，實(shí)現(xiàn)卵磷脂生產(chǎn)的清潔化、無污染化，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07F9/10GK102924506SQ20121046818
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者湯魯宏, 趙繪繪, 曹雅晴, 滕霏 申請(qǐng)人:江南大學(xué), 湯寧