專利名稱：一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，尤其是一種能夠從苦杏仁中同時提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法。
背景技術：
傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為，苦杏仁具有降氣止咳平喘、潤腸通便的功效，主治咳嗽氣喘、 胸滿痰多、腸燥便秘等。藥理實驗證實，苦杏仁具有鎮(zhèn)咳平喘、抗腫瘤、降血脂、潤腸通便等作用。其成分有脂肪油類、苷類、蛋白質類、黃酮類等。苦杏仁中的脂肪油含有豐富的亞油酸和油酸，對人體有重要的生理作用和藥用價值，亞油酸是人體必需脂肪酸，能降低血液膽固醇，預防動脈粥樣硬化?？嘈尤视涂勺鳛樽o膚化妝品的原料、精密儀器的潤滑油、食品添加劑等，并且是上好的食用油。苦杏仁中的苦杏仁苷在體內分解為氫氰酸和苯甲醛，氫氰酸對呼吸中樞可產生一定的抑制作用，使呼吸趨于安靜而達到鎮(zhèn)咳平喘作用?？嘈尤受占捌渌馑a生的氫氰酸和苯甲醛體外試驗均被證明有抗癌作用，癌細胞內硫氫化酶較正常細胞少，因此對苦杏仁苷水解釋放出的氫氰酸的解毒能力較差，苦杏仁苷加苯甲醛或苦杏仁苷加β_葡糖苷酶可明顯提高抗癌效力。臨床試驗證實，健康人及高血脂癥病人服用苦杏仁后可降低血脂水平，因此苦杏仁具有降血脂作用。
目前，對苦杏仁中苦杏仁油、苦杏 仁苷、苦杏仁總黃酮及苦杏仁蛋白的制備方法較多，但是現(xiàn)有的方法都是從苦杏仁中提取單一的成分，單一提取會造成資源的浪費，而且降低了苦杏仁的綜合利用率，提高了苦杏仁深加工的成本。發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足之處而提供一種能夠從苦杏仁中同時提取得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術方案為一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分別得到苦杏仁油和苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，然后減壓濃縮后靜置析晶，得晶體和濾液I，所得晶體即為苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度， 先通過大孔樹脂柱，然后加水分散成O. 1-0. 4g生藥/ml濃度，再上聚酰胺柱，收集洗脫液， 減壓回收溶劑，真空干燥，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II干燥，即得苦杏仁蛋白。
本發(fā)明所述方法使用的原料苦杏仁來源薔薇科植物山杏Prunus armeniacaL.var. ansu Maxim.、西伯利亞杏Prunus sibirica L.、東北杏Prunus mandshurica (Maxim.) Koehne或杏Prunus armeniaca L.的干燥成熟種子。作為提取苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的原料，可以是市售炮制的飲片，也可以是此植物的原藥材。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)中的苦杏仁水分活度為O. Γ0. 7，苦杏仁粉碎后過1(Γ120目篩。一般選取新鮮的苦杏仁，進行干燥，使得苦杏仁的水分活度為O. Γ0. 7，然后將原料苦杏仁粉碎至1(Γ120目； 所述步驟(2)中先將苦杏仁柏干燥至水分活度為O. 1-0. 7，然后再加入8(Γ95%的乙醇。所述苦杏仁的干燥方式可選擇曬干、風干、烘干、真空烘干、凍干和脫水劑干燥中的至少一種。 當采用脫水劑干燥的方式時，所述脫水劑選自乙醇、甘油、葡萄糖和食鹽中的至少一種，所述脫水劑與所述苦杏仁的用量比為O. 05、. 5L :1kg。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)采用超臨界二氧化碳萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取釜、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取爸中，在分離爸I溫度為30-50°C、萃取爸溫度為35-55°C 條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到25-32MPa、二氧化碳流速為12-24L/h時，保持溫度和壓力，萃取l_2h，收集萃取物，即得苦杏仁油。超臨界流體萃取技術，是20世紀80年代發(fā)展起來的一種獨特、高效、新型分離精制的高新技術。超臨界二氧化碳萃取具有操作溫度低、溶解能力強、無毒、無污染、無溶劑殘留及產品易分離等優(yōu)勢，克服了其他提取方法分離過程的確定，特別適合于熱敏性物質及生物活性物質的提取分離，因此，超臨界二氧化碳流體萃取法是較為理想的工藝方法。
當所述步驟(I)采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油時，本發(fā)明所述方法所得苦杏仁油的收率40-50% ;所得苦杏仁苷的純度大于90% ;所得苦杏仁總黃酮的純度大于50%;所述步驟(4)中濾渣II中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]大于42g/100g ;所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2. 6-6. 6%。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與萃取劑按照1:廣1:20的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30-50°C、萃取壓力為2-10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取1-2次，每次萃取5_10min，萃取流量為10-200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為30-50°C、分離壓力為1_2公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油。亞臨界流體是指某些化合物在溫度高于其沸點但低于臨界溫度，且壓力低于其臨界壓力的條件下，以流體形式存在的該物質。在亞臨界流體狀態(tài)存在時，分子的擴散性能增強，傳質速度快，對天然產物中弱極性以及非極性物質的滲透性和溶解能力顯著提高。亞臨界流體萃取技術，可以在比較低的壓力下實現(xiàn)比較好的萃取效果，提供了一種投資少、成本低、并且更安全、無毒的萃取方法。與超臨界流體萃取相比，亞臨界流體萃取的主要優(yōu)點是工作壓力低，萃取條件更加溫和，而且亞臨界萃取大大降低了設備投資，減少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了與超臨界流體萃取相似的優(yōu)點，如具有較強的溶解能力，可溶解多種物質等。
當所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油時，本發(fā)明所述方法所得苦杏仁油的收率45-52% ;所得苦杏仁苷的純度大于90% ;所得苦杏仁總黃酮的純度大于50% ;所述步驟(4)中濾渣II中所含苦杏仁蛋白的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]大于42g/100g ;所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2. 6-6. 6%。
在實踐中，步驟(I)首選使用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，因為與壓榨法、有機溶劑浸出法相比，亞臨界流體萃取法大大提高了萃取率，縮短了萃取時間，同時所述亞臨界流體萃取法選用二氧化碳、烷烴類等無毒無害溶劑，從而無有害溶劑殘留現(xiàn)象；與超臨界流體萃取法相比，亞臨界流體萃取的工作壓力低，萃取條件更加溫和如二氧化碳超臨界萃取必須在25MPa以上的超高壓狀態(tài)下能夠進行萃取加工，而二氧化碳亞臨界萃取的工作壓力為6 7MPa，工作溫度為2(T30°C。更重要地，亞臨界流體萃取大大降低了設備投資，減少了二氧化碳的用量，降低了成本，提高了安全性，并且保持了超臨界二氧化碳相似的優(yōu)點，具有較強的溶解能力，可溶解多種物質等。同時，利用亞臨界流體萃取技術可以一次性處理，實現(xiàn)萃取精制，無需后續(xù)的脫臭、脫色等處理，整個萃取過程是在密閉絕氧、低溫低壓的條件下進行，沒有高溫過程，因此特別適合于類似苦杏仁油等富含不飽和脂肪酸油脂的工業(yè)化連續(xù)性生產，操作方便、安全，環(huán)保。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，當步驟(I)使用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油時，所述萃取劑為丙烷、丁烷、 異丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油氣、六氟化硫、1，1，1，2-四氟乙烷中的任意一種或其組合。二氧化碳(CO2)無色、無味、無毒，且通常條件下為氣體。CO2的臨界溫度 (Tc=304. 21K)和臨界壓力(pe=7. 38MPa)溫和，萃取過程中不產生任何副產品，可直接排入空氣，無環(huán)境污染；萃取后無溶劑殘留問題，可獲取純天然中藥原料；操作上易于實現(xiàn)；可通過控制溫度和壓力改變其溶解度和狀態(tài)，實現(xiàn)選擇性提取分離。六氟化硫常態(tài)下是一種無色、無味、無嗅、無毒的非燃燒氣體，分子量146. 06，密度6. 139克/升，約為空氣的5倍， 微溶于水、 乙醇、乙醚，是已知化學安定性最好的氣態(tài)物質之一，具有極好的熱穩(wěn)定性和化學穩(wěn)定性。二甲醚(DME)是一種無色、具有輕微醚香味的氣體，具有惰性、無腐蝕性、無致癌性。還具有優(yōu)良的混溶性，能同大多數(shù)極性和非極性有機溶劑混溶。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(2)中減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C;所述步驟(4) 中采用真空干燥濾渣II，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為 20 80。。。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(3)中將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為1:1 3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 1-0. 4g生藥 /ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1飛1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，真空干燥得苦杏仁總黃酮。所述大孔樹脂一般采用AB-8大孔樹脂，上述純化方法采用聚酰胺-大孔樹脂聯(lián)用對苦杏仁總黃酮純化，使得純化后苦杏仁總黃酮的產品純度大于50%。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(3)中減壓濃縮的條件均為壓力20-100kpa，時間20_120min，溫度2(T80°C ;所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C。
作為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法的優(yōu)選實施方式，所述步驟(2)中6(Γ95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1 ;所述步驟(3)中5(Γ80%的乙醇與濾渣I的重量比為6 10:1。
本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，通過對苦杏仁萃取、乙醇提取等過程，能夠同時從苦杏仁中提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮及苦杏仁蛋白，所得苦杏仁油的收率大于40%，所得苦杏仁苷的純度大于90%，所得苦杏仁總黃酮產品純度大于50%，所得濾渣II中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。本發(fā)明所述方法從苦杏仁中同時提取分離得到多種有效成分，避免了現(xiàn)有技術中單一提取所帶來的資源浪費， 提高了苦杏仁的綜合利用率，降低了苦杏仁深加工的成本。


圖1為本發(fā)明所述從苦杏仁中同時提取多種有效成分的工藝流程圖。
具體實施方式
為更好的說明本發(fā)明的目的、技術方案和優(yōu)點，下面將結合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
實施例1
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為30°c、萃取釜溫度為35°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到30MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為1:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為40%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為94%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為53%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為42. 9g/100g。
實施例2
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為45°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜 壓力達到32MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為41. 2%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為52%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為42g/100g。
實施例3
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為50°c、萃取釜溫度為50°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到25MPa、二氧化碳流速為24L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入80 95%的乙醇浸泡2 3h， 所述8(Γ95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為1: 1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂， 上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為45. 3%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為51%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為42. 3g/100g。
實施例4
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為40°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到28MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 5g生藥/ml濃度，將所述O. 5g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 2g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為4:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為49%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為58%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為42. 6g/100g。
實施例5
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為45°c、萃取釜溫度為55°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到26MPa、二氧化碳流速為12L/h時，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為50%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為95%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為56%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為43. 2g/100g。
實施例6
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，采用超臨界流體萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取爸、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在分離釜I溫度為50°c、萃取釜溫度為45°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到32MPa、二氧化碳流速為24L/h時 ，保持溫度和壓力，萃取 2h，收集萃取物，即得苦杏仁油，萃取釜中剩余的即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f2h，提取I飛次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為43. 8%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為93%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為54%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為44. 7g/100g。
實施例7
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與丙烷按照1:1的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30°C、萃取壓力為2公斤壓力的條件下，萃取I次，萃取lOmin，萃取流量為10L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為 30°C、分離壓力為I公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，將所述O. 4g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為1:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O.1g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為45%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為92%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為51%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為43. 5g/100g。
實施例8
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與異丁烷按照1:3的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為35°C、萃取壓力為4公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取5min，萃取流量為20L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為35°C、分離壓力為1. 5公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油， 剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 6g生藥/ml濃度，將所述O. 6g生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 2g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為3:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為49. 5%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為94%， 步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮 的純度為53%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為43. 5g/100g。
實施例9
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與二氧化碳按照1:5的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為40°C、萃取壓力為6公斤壓力的條件下，萃取I次，萃取時間5min，萃取流量為40L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為35°C、分離壓力為1. 8公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成Ig生藥/ml濃度，將所述Ig生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集50 80% 乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 4g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為6:1，依次用1(T15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為 5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為46%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為55%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010 第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟 (4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為46. 7g/100g。
實施例10
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁1kg，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與二甲醚按照1:20的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為50°C、萃取壓力為10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取5min，萃取流量為200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為50°C、分離壓力為2公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. Sg生藥/ml濃度，將所述O. Sg生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為2:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 3g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為5:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為52%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為96%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為58%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為49. 5g/100g。
實施例11
—種從苦杏仁中同時提取分離得到苦杏仁油、苦杏仁苷、苦杏仁總黃酮和苦杏仁蛋白的方法，包括以下步驟
(I)提取苦杏仁油選取新鮮的原料苦杏仁100g，粉碎至1(Γ120目，亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與1，I, I, 2-四氟乙烷按照 1:15的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為40°C、萃取壓力為8 公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取2次，每次萃取lOmin，萃取流量為150L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為45°C、分離壓力為1. 6公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油，剩余的物料即為苦杏仁柏；
(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h·， 所述80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1，微沸狀態(tài)下保溫2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，減壓濃縮，得晶體和濾液I，減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后將所得晶體在無水乙醇中進行重結晶，得苦杏仁苷；
(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫f 2h，提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. Sg生藥/ml濃度，將所述O. Sg生藥/ml濃度水分散液先通過AB-8大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為2. 5:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集 5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 25g生藥/ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為4:1，依次用1(T15BV 蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，減壓濃縮壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C，然后真空干燥，真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，得苦杏仁總黃酮；
(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II進行真空干燥，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C，即得苦杏仁蛋白。
所述步驟(I)中苦杏仁油的收率為48%，步驟(2)中所得苦杏仁苷的純度為91%，步驟(3)中所得苦杏仁總黃酮的純度為56%，步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量按照以下方法計算容量法[GB 5009. 5-2010第一法(蛋白質=含氮量X6. 25)]，本實施例步驟(4)中所述濾渣II中所含蛋白質的含量為44. 8g/100g。
實施例12
1.苦杏仁總黃酮的含量測定
精密稱取蘆丁對照品適量(約5mg)，置于IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，作為對照品溶液。精密吸取蘆丁對照品溶液O. 5，1. O, 2. O, 3. 0,4. O, 5. OmL,置于25mL 容量瓶中，加 5%NaN02lmL，放置 6min，加入 10%Al(N03)3lmL,放置 6min，再加 10%Na0H10mL, 加70%乙醇定容至刻度，靜置15min，于510nm處測吸光度。以蘆丁對照品濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。
精密稱取苦實施例1-11所得苦杏仁總黃酮提取物樣品各3份，每份50mg，置于 25mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液精密吸取樣品溶液5mL置于25mL容量瓶中，加5%NaN021mL，放置6min，加入10%A1 (NO3) 3lmL，放置 6min,再加10%Na0H10mL，加甲醇定容至刻度，靜置15min，于510nm處測吸光度，外標兩點法計算含量。計算得知，實施例1-11所得苦杏仁總黃酮以蘆丁含量計為O. 5%。
2.苦杏仁苷含量的測定
色譜條件色譜柱AKZ0N0BELKromasil C18 柱(250_X 4. 6mm, 5 μ m),流動相: 甲醇-水(25:75)，流速lmL/min，柱溫30°C，檢測波長為225nm，進樣量10 μ L，理論塔板數(shù)按苦杏仁苷計大于5000。在此色譜條件下苦杏仁苷的分離度大于10。
標準曲線繪制精密量取對照品溶液O. 5、l、2、3、4、5mL至5mL容量瓶中，依次進樣，測定各色譜峰峰面積，以峰面積值縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線。
含量測定分別精密稱取實施例1-11中所得苦杏仁柏樣品各3份，每份O. 5g，置于錐形瓶中，加甲醇25mL，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，取上清液過O. 45 μ m微孔濾膜，取續(xù)濾液注入色譜液相儀，測定各色譜峰峰面積，計算含量。計算得知，實施例1-11所得苦杏仁苷的含量為5. 8%。
3.蘆丁、槲皮素、異鼠李素的含量測定
色譜條件色譜柱KromasailC18 (4. 6X 250mm, 5 μ m)色譜柱,流動相甲醇_0.4% 磷酸(46 :54)，流速為1. OmL.min-Ι，柱溫:30°C，檢測波長:370nm，進樣量為IOyL0供試品溶液色譜中與各對照品對應的吸收峰的理論塔板數(shù)均不低于6000，對應的色譜峰的分離度均大于1. 5，拖尾因子在O. 95 1. 05。
標準曲線繪制:精密量取對照品溶液O. 5、1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5mL置5mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得系列混合對照品溶液。測定各色譜峰峰面積，以峰面積值縱坐標，進樣量(ug)為橫坐標,繪制標準曲線。
含量測定分別精密稱取實施例1-11所得苦杏仁總黃酮提取物樣品各3份，每份O.lg，置于IOmL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻。精密吸取溶液10 μ L，注入色譜液相儀，測定各色譜峰峰面積，計算含量。計算得知，實施例1-11的苦杏仁中蘆丁、槲皮素、異鼠李素的含量分別為 5. 65%、1. 5%、0· 86%O
4.苦杏仁油的檢測
采用以下表格中的方法對實施例1-11所得苦杏仁油成分進行檢測，檢測方法及結果如下表I所示
表I苦杏仁油中各各組分檢測方法及結果
權利要求
1.一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)提取苦杏仁油選取苦杏仁，粉碎，然后萃取，分別得到苦杏仁油和苦杏仁柏；(2)提取苦杏仁苷將步驟(I)中得到的苦杏仁柏加入8(Γ95%的乙醇浸泡2 3h，微沸狀態(tài)下保溫f2h，提取I飛次，趁熱過濾，得苦杏仁苷提取液和濾渣I，將得到的苦杏仁苷提取液合并，然后減壓濃縮后靜置析晶，得晶體和濾液I，所得晶體即為苦杏仁苷；(3)提取苦杏仁總黃酮將步驟(2)中的濾渣I加入5(Γ80%的乙醇在微沸狀態(tài)下保溫 r2h,提取f 5次，趁熱過濾，得總黃酮提取液和濾渣II，將得到的總黃酮提取液與步驟(2) 中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂柱，然后加水分散成O. 1-0. 4g生藥/ml濃度，再上聚酰胺柱，收集洗脫液，減壓回收溶劑，真空干燥，得苦杏仁總黃酮；(4)提取苦杏仁蛋白將步驟(3)中得到的濾渣II干燥，即得苦杏仁蛋白。
2.如權利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(I)中的苦杏仁水分活度為O. Γ0. 7，苦杏仁粉碎后過1(Γ120目篩；所述步驟(2)中先將苦杏仁柏干燥至水分活度為O. 1-0. 7，然后再加入8(Γ95%的乙醇。
3.如權利要求1或2所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于， 所述步驟(I)采用超臨界二氧化碳萃取法從苦杏仁萃取苦杏仁油，具體過程為所述超臨界流體萃取裝置包括萃取釜、分離釜1、分離釜I1、二氧化碳儲氣罐、高壓泵，將粉碎后的苦杏仁置于超臨界流體萃取裝置的萃取爸中，在分離爸I溫度為30-50°C、萃取爸溫度為 35-55°C條件下，打開二氧化碳儲氣罐，對萃取釜進行加壓，當萃取釜壓力達到25-32MPa、二氧化碳流速為12-24L/h時，保持溫度和壓力，萃取l_2h，收集萃取物，即得苦杏仁油。
4.如權利要求1或2所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(I)采用亞臨界流體萃取法從苦杏仁中萃取苦杏仁油，具體過程為將粉碎后的苦杏仁與萃取劑按照1:廣1:20的質量比投入到亞臨界流體萃取裝置的萃取釜中，在萃取溫度為30-50°C、萃取壓力為2-10公斤壓力的條件下，連續(xù)萃取1-2次，每次萃取5_10min，萃取流量為10_200L/h，得萃取物，將所得到的萃取物在分離溫度為30-50°C、分離壓力為1_2 公斤壓力條件下進行分離，得到萃取液，即為苦杏仁油。
5.如權利要求4所述的從苦杏仁油中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于， 所述萃取劑為丙烷、丁烷、異丁烷、四氟丁烷、二甲醚、二氧化碳、液化石油氣、六氟化硫、 1，I, I, 2-四氟乙烷中的任意一種或其組合。
6.如權利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(2)中減壓濃縮的壓力為20-100kpa，時間為20-120min，溫度為2(T80°C;所述步驟(4) 中采用真空干燥濾渣II，所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為 20 80。。。
7.如權利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(3)中將得到的總黃酮提取液與步驟(2)中的濾液I合并，然后濃縮回收溶劑至無醇味后加水分散成O. 4-lg生藥/ml濃度，先通過大孔樹脂，上樣量為生藥量大孔樹脂量的質量比為I Γ3:1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV1(T30%的乙醇和50 80%的乙醇洗脫，收集5(Γ80%乙醇洗脫部分，洗脫液減壓濃縮回收溶劑至無醇味，再加水分散成O. 1-0. 4g生藥 /ml濃度，然后通過聚酰胺樹脂，上樣量為生藥量聚酰胺樹脂量的質量比為2:1飛1，依次用10 15BV蒸餾水、6 10BV5(T80%的乙醇洗脫，收集50 80%乙醇洗脫部分，減壓濃縮回收溶劑，真空干燥得苦杏仁總黃酮。
8.如權利要求7所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(3)中減壓濃縮的條件均為壓力20-100kpa，時間20_120min，溫度2(T80°C ;所述真空干燥的真空度為5(Tl200kpa，時間為4(Tl80min，溫度為2(T80°C。
9.如權利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述步驟(2)中80 95%的乙醇與苦杏仁柏的重量比為6 10:1 ;所述步驟(3)中50 80%的乙醇與濾渣I的重量比為6 10:1。
10.如權利要求1所述的從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，其特征在于，所述方法所得苦杏仁油的收率40-52%，所得苦杏仁苷的純度大于90%，所得苦杏仁總黃酮的純度大于50%，所得苦杏仁中不飽和脂肪酸的含量為93-96. 8%、飽和脂肪酸的含量為2.6-6. 6% ;所述濾渣II中苦杏仁蛋白的含量大于42g/100g。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從苦杏仁中同時提取多種有效成分的方法，所述方法包括以下步驟(1)提取苦杏仁油將苦杏仁粉碎后萃取，得苦杏仁油和苦杏仁粕；(2)提取苦杏仁苷將苦杏仁粕加乙醇浸泡，微沸狀態(tài)保溫，提取過濾得苦杏仁苷提取液和濾渣Ⅰ，將提取液減壓濃縮后靜置析晶，得苦杏仁苷和濾液Ⅰ；(3)提取苦杏仁總黃酮將濾渣Ⅰ加入乙醇在微沸狀態(tài)下保溫，提取過濾得總黃酮提取液和濾渣Ⅱ，將總黃酮提取液濃縮得總黃酮粗品，純化后得苦杏仁總黃酮；(4)提取苦杏仁蛋白將濾渣Ⅱ干燥，得苦杏仁蛋白。本發(fā)明所述方法能夠同時提取多種成分，避免單一提取所帶來的資源浪費，提高苦杏仁的綜合利用率。
文檔編號C07H15/18GK102994222SQ20121054414
公開日2013年3月27日 申請日期2012年12月14日 優(yōu)先權日2012年12月14日
發(fā)明者高英, 玉榮 申請人:高英