專(zhuān)利名稱(chēng)：一種阿維菌素B2a的提取制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗生素的提取制備方法，具體地說(shuō)是一種阿維菌素B2a的提取制備方法。
背景技術(shù)：
阿維菌素是近20年來(lái)在我國(guó)發(fā)展起來(lái)的新型抗生素農(nóng)藥，屬于微生物發(fā)酵產(chǎn)品，是目前替代有機(jī)磷高毒農(nóng)藥的最理想的農(nóng)藥產(chǎn)品。阿維菌素是由鏈霉菌中灰色鏈霉菌(Streptomyces avermitilis)發(fā)酵產(chǎn)物分離提取得到的一組結(jié)構(gòu)類(lèi)似的十六元大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，由一組結(jié)構(gòu)相近的8個(gè)同系物組成，BI和B2是該同系物中的兩大類(lèi)組分。阿維菌素B類(lèi)組分對(duì)線蟲(chóng)、昆蟲(chóng)、螨類(lèi)具有極高的生物殺蟲(chóng)活性，但對(duì)不同靶標(biāo)的殺蟲(chóng)能力Bla 和B2a又有顯著的區(qū)別。BI組分對(duì)家畜消化道線蟲(chóng)的毒理活性最高，而B(niǎo)2對(duì)非消化道體外線蟲(chóng)的毒理活性則是BI組分的2倍，對(duì)玉米食根(甲)蟲(chóng)的毒力活性B2a是Bla的3倍。目前阿維菌素BI的生產(chǎn)制備方法已是一種比較成熟的技術(shù)，它通常包括以下步驟從阿維菌素發(fā)酵液中提出干燥菌絲體，浸提后濃縮、加萃取劑萃取，萃取液加入乙醇，升溫至70°C左右后，降溫至35— 25°C，進(jìn)行結(jié)晶，然后再經(jīng)抽濾，得到阿維菌素BI晶體粗品，再經(jīng)提取，即可獲得純度可達(dá)95%以上的阿維菌素BI。在阿維菌素BI的生產(chǎn)過(guò)程中，抽濾所得到的母液通常是濃縮成油膏作為廢棄物處理。阿維菌素B2a雖有已研究人員發(fā)現(xiàn)其具有與阿維菌素BI不一樣的毒理活性，但因其不便于分離純化，因此，至今未得到產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。而追蹤阿維菌素發(fā)酵液中不同阿維菌素同系物的含量，其中Bla和B2a兩個(gè)組分的含量基本上相同，都達(dá)到了 40-45%，即阿維菌素B的含量占總阿維菌素總量的90%以上。可是按照現(xiàn)有的提取方法，從發(fā)酵液中僅可獲得高純度阿維菌素BI。由此可見(jiàn)，大量的阿維菌素B2a在提取分離阿維菌素BI的過(guò)程中被白白浪費(fèi)。在如何解決提取、分離阿維菌素B2的問(wèn)題上，CN201010192026. 2提出了一種從殘留阿維菌素中分離提取阿維菌素中不同組分的方法。該方法是采用柱層析法，來(lái)實(shí)現(xiàn)回收阿維菌素結(jié)晶母液中的B2a、Bib、Bla、Ala、A2a的目的。該方法雖然能有效回收阿維菌素結(jié)晶母液的各個(gè)組分，但其不僅成本高，而且回收規(guī)模有限，不適于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種成產(chǎn)成本低、提取效果好、且易于工業(yè)化生產(chǎn)的阿維菌素B2a的提取制備方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所提供的阿維菌素B2a的提取制備方法，在一個(gè)總的發(fā)明構(gòu)思框架下有以下兩種方案第一種方法包括以下步驟a.將阿維菌素發(fā)酵液制成干菌絲體，加乙醇浸提、過(guò)濾，得浸提液；(本發(fā)明所述浸提是指通過(guò)乙醇浸泡菌絲體，使菌絲體中的阿維菌素溶解到乙醇中，從而使有效成分溶解至乙醇溶液中)。b.將浸提液濃縮后，加入甲苯、DMF、或乙酸乙酯中的任意一種萃取劑萃取，得到萃取液I ;萃取劑的加入量可參照現(xiàn)有阿維菌素有效成分提取方法中的加入量。一般可為被萃取物質(zhì)質(zhì)量的5 6倍。C.萃取液I過(guò)濾，除去萃取劑后，加入乙醇，升溫至68-72°C后，降溫至3525°C，進(jìn)行結(jié)晶，然后再經(jīng)抽濾，得到濾餅I為阿維菌素BI晶體粗品，得到的濾液為母液；d.將c步所獲母液，濃縮成油膏；e.油膏中加入甲苯萃取劑萃取，得到萃取液II ；
f.在萃取液II中加入助濾劑(助濾劑的加入量沒(méi)有特別限定，以能夠達(dá)到助率效果為宜)，攪拌均勻后，降溫至10 0°C，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾；得到濾餅II，濾餅II中加甲苯溶解，升溫至80 100°C，過(guò)濾，除去助濾劑，濾液再次降溫至10 0°C，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾；所得濾餅用0 10°C甲苯進(jìn)行漂洗，得到阿維菌素B2a晶體粗品；；g.將阿維菌素B2a晶體粗品進(jìn)行重結(jié)晶，抽濾，干燥，獲得阿維菌素B2a晶體精品。該方法中f工序所述的助濾劑可選用硅藻土、?；⒅?、珍珠巖，其中珍珠巖安全性高、來(lái)源廣泛、助濾效果好，故為優(yōu)選。加入量為按萃取液II總料液質(zhì)量計(jì)為1-2%為更優(yōu)選。該方法中f工序所述的攪拌均勻后，降溫條件優(yōu)選10 0°C，在該條件下，所提取分離的阿維菌素B2a純度更高。該方法中g(shù)工序所述的將阿維菌素B2a晶體粗品進(jìn)行重結(jié)晶，是將f工序得到阿維菌素B2a晶體粗品加入5-7倍質(zhì)量的甲苯以及質(zhì)量分子為0. 5-2%的活性炭，攪拌后升溫至80— 100°C，待阿維菌素B2a晶體粗品融化，過(guò)濾，除去溶液中的助濾劑及活性炭，回收濾液至結(jié)晶罐，攪拌，同時(shí)降溫至10 0 °C，待晶體大量析出后，保溫20— 30分鐘，抽濾。由此也可獲得給更純、更好的阿維菌素B2a晶體。本發(fā)明所提供的第二種阿維菌素B2a的提取制備方法，包括以下步驟a.將阿維菌素發(fā)酵液制成干菌絲體，加乙醇浸提、過(guò)濾，得浸提液；b.將浸提液濃縮后，加入甲苯萃取劑萃取，得到萃取液I ;c.在萃取液I中加入助濾劑，攪拌均勻后，降溫至10 0°C，析出大量晶體后，抽濾；得到濾餅II，濾餅II中加甲苯溶解，升溫至80 100°C，過(guò)濾，除去助濾劑，濾液再次降溫至10 (TC，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾；所得濾餅用0 10°C甲苯進(jìn)行漂洗，得到阿維菌素B2a晶體粗品；d.將阿維菌素B2a晶體粗品進(jìn)行重結(jié)晶，干燥，獲得阿維菌素B2a晶體精品。同前所述，該方法中c工序所述的助濾劑優(yōu)選珍珠巖助濾劑，其加入量按萃取液II總料液質(zhì)量計(jì)為1_2%。該方法中c工序所述的攪拌均勻后，降溫條件優(yōu)選至10 0°C。該方法中d工序所述的阿維菌素B2a晶體粗品重結(jié)晶，優(yōu)選將c工序得到阿維菌素B2a晶體粗品加入5-7倍質(zhì)量的甲苯以及質(zhì)量分子為0. 5-2%的活性炭，攪拌后升溫至80-100°C，待阿維菌素B2a晶體粗品融化，過(guò)濾，回收濾液至結(jié)晶罐，攪拌，同時(shí)降溫至10 O0C，待晶體大量析出后,保溫20-30分鐘，抽濾。
本發(fā)明方法可將阿維菌素B2a從阿維菌素發(fā)酵液中有效分離出來(lái)，其提取率高、提取效果好，為阿維菌素B2a產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供了技術(shù)保障。本發(fā)明方法工藝簡(jiǎn)單，流程易控制，生產(chǎn)成本低，尤其是其還可充分利用阿維菌素BI生產(chǎn)過(guò)程中的廢棄物，由此進(jìn)一步提高了阿維菌素發(fā)酵液的整體利用水平，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了收益率。


圖I是本發(fā)明的流程圖。圖2是按照本發(fā)明方法提取制備的阿維菌素B2a組分的液相色譜圖。以下結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I參照流程圖I，具體步驟為a、采用阿維菌素發(fā)酵液為起始原料，用泵打入板框進(jìn)行過(guò)濾。為提高濾速，阿維菌素發(fā)酵液中可加入適量助濾劑，也可將發(fā)酵液升溫至80°C 90°C。過(guò)濾后得到菌絲體，然后烘干，得到干菌絲體。將干菌絲體放置在反應(yīng)罐中，加入乙醇浸泡提取(簡(jiǎn)稱(chēng)浸提)。乙醇的加入量以能夠完全浸沒(méi)菌絲體為宜，乙醇的濃度可按照以常規(guī)浸提方法所示范圍選擇，本發(fā)明以75-95%為優(yōu)選。干菌絲體經(jīng)乙醇浸泡2-5小時(shí)后，收集浸提液，備用；濾渣可用乙醇重復(fù)浸提2-3次，收集浸提液，合并后備用；b、將浸提液打入蒸發(fā)罐內(nèi)，用夾層蒸汽加熱將浸提液濃縮，然后測(cè)定浸提濃縮液中阿維菌素BI的含量，加入5倍于阿維菌素BI質(zhì)量的甲苯，和I倍阿維菌素BI重量的水，攪拌30min 40min，靜置，排放出底部的水溶液，收集有機(jī)溶液，得到萃取液I。C、在萃取液I蒸除甲苯后所得料液中，加入2-5倍質(zhì)量的乙醇，攪拌30min 40min,轉(zhuǎn)入結(jié)晶罐中，升溫至70°C左右后，然后降溫至28_25°C，進(jìn)行結(jié)晶，然后再經(jīng)抽濾，得到濾餅I為阿維菌素BI晶體粗品。所得阿維菌素BI晶體粗品可按照現(xiàn)有提取制備阿維菌素BI的方法進(jìn)行再次重結(jié)晶，從而獲得純度為95%以上的阿維菌素BI精品；抽濾得到的濾液為母液；d、將c步所得母液中的乙醇回收后，濃縮成油膏。以上部分提取得到的有效組分是阿維菌素BI，在所得油膏中含有大量的阿維菌素B2。e、對(duì)油膏中加入適量甲苯(能夠使其溶解即可)，進(jìn)行萃取，得到萃取液II ；f、在萃取液II中加入2%的珍珠巖助濾劑(100公斤萃取液II總料液，加入2公斤珍珠巖)，攪拌均勻后，降溫至10 (TC，待析出大量晶體后，放置20-30分鐘(養(yǎng)晶)，真空抽濾，得到濾餅II (含有助濾劑)。濾餅II再加入甲苯，加熱至80-100°C，使之全部融化后，過(guò)濾，濾除助濾劑，回收濾液，濾液再次降溫至10 0°C，待析出大量晶體后，養(yǎng)晶，真空抽濾，所得濾餅用0-10°C的甲苯漂洗至顏色發(fā)白后，烘干，得到的白色結(jié)晶粉末經(jīng)檢測(cè)為阿維菌素B2a粗品。g、阿維菌素B2a粗品可再加入甲苯，升溫至80-100°C，使之溶解，(此刻也可加入活性炭，進(jìn)行除色處理)，過(guò)濾，回收濾液，濾液再次降溫至10 o°c，待析出大量晶體后，養(yǎng)晶，真空抽濾，所得濾餅用o-io°c的甲苯漂洗至顏色發(fā)白后，烘干，得到經(jīng)過(guò)重結(jié)晶的阿維菌素B2a。如此反復(fù)重結(jié)晶3次，即得到純度達(dá)89. 7%的阿維菌素B2a精品。收率為95%。其檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表1，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)附圖2、表2。表I :
權(quán)利要求
1.一種阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于它包括以下步驟 a.將阿維菌素發(fā)酵液制成干菌絲體，加乙醇浸提、過(guò)濾，得浸提液； b.將浸提液濃縮后，加入甲苯、DMF或乙酸乙酯中的任意一種萃取劑萃取，得到萃取液I ； C.萃取液I除去萃取劑后，加入乙醇，升溫至68-72°C后，降溫至35—25°C，進(jìn)行結(jié)晶，然后再經(jīng)抽濾，得到濾餅I為阿維菌素BI晶體粗品，得到的濾液為母液； d.將c步所獲母液,濃縮成油膏； e.油膏中加入甲苯，得到萃取液II； f.在萃取液II中加入助濾劑，攪拌均勻后，降溫至10 (TC，析出大量晶體II后，養(yǎng)晶，抽濾；得到濾餅II，濾餅II中加甲苯溶解，升溫至80 100°C，過(guò)濾，除去助濾劑，濾液再次降溫至10 (TC，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾；所得濾餅用O 10°C甲苯進(jìn)行漂洗，得到阿維菌素B2a晶體粗品； g.將阿維菌素B2晶體粗品進(jìn)行重結(jié)晶，抽濾，干燥，獲得阿維菌素B2a晶體精品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于f工序中所述的助濾劑為珍珠巖助濾劑，其加入量按萃取液II總料液質(zhì)量計(jì)為I 2%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于f工序所述的攪拌均勻后，降溫至10 o°c。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于g工序所述將阿維菌素B2a晶體粗品進(jìn)行重結(jié)晶，是將f工序得到阿維菌素B2a晶體粗品加入5_7倍質(zhì)量的甲苯以及質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 5 2%的活性炭，攪拌后升溫至80-100°C，待阿維菌素B2a晶體粗品融化，過(guò)濾，回收濾液至結(jié)晶罐；然后，降溫至10 0°C，待晶體大量析出后，保溫20 30分鐘，抽濾。
5.一種阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于它包括以下步驟 a.將阿維菌素發(fā)酵液制成干菌絲體，加乙醇浸提、過(guò)濾，得浸提液； b.將浸提液濃縮后，加入甲苯、DMF或乙酸乙酯中的任意一種萃取劑，得到萃取液I; C.萃取液I，加入助濾劑，攪拌均勻后，降溫至10 0°C，析出大量晶體II后，養(yǎng)晶，抽濾；到濾餅II，濾餅II中加甲苯溶解，升溫至80 100°C，過(guò)濾，除去助濾劑，濾液再次降溫至10 (TC，析出大量晶體后，養(yǎng)晶，抽濾；所得濾餅用O 10°C甲苯進(jìn)行漂洗，得到阿維菌素B2a晶體粗品； d.將阿維菌素B2a晶體粗品重結(jié)晶，抽濾，干燥，獲得阿維菌素B2a晶體精品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于c工序中所述的助濾劑為珍珠巖助濾劑，其加入量按萃取液II總料液質(zhì)量計(jì)為I 2%。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的阿維菌素B2a的提取制備方法，其特征在于g工序所述的阿維菌素B2a晶體粗品重結(jié)晶，是將c工序得到阿維菌素B2a晶體粗品加入5_7倍質(zhì)量的甲苯以及質(zhì)量分子為O. 5 2%的活性炭，攪拌后升溫至80— 100°C，待阿維菌素B2a晶體粗品融化，過(guò)濾，回收濾液至結(jié)晶罐，然后，降溫至10 0°C，待晶體大量析出后，保溫20 30分鐘，抽濾。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種阿維菌素B2a的提取制備方法，它包括將阿維菌素發(fā)酵液制成干菌絲體，浸提；浸提液濃縮、加入甲苯等萃取劑萃??；萃取液Ⅰ進(jìn)行結(jié)晶處理；所獲母液濃縮成油膏；油膏中加入甲苯，得到萃取液Ⅱ；萃取液Ⅱ中加入助濾劑，攪拌、降溫、析晶后，養(yǎng)晶，抽濾；得到濾餅加甲苯溶解，升濾液再次降溫、析晶后，養(yǎng)晶，抽濾；得到阿維菌素B2a晶體粗品；阿維菌素B2a晶體粗品重結(jié)晶，獲得阿維菌素B2a晶體精品。本發(fā)明方法可將阿維菌素B2a從阿維菌素發(fā)酵液中有效分離出來(lái)，其提取率高、提純效果好。
文檔編號(hào)C07H17/08GK102977168SQ201210548729
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月17日
發(fā)明者張海航, 王琳慧, 暴連群, 侯東偉, 劉現(xiàn)偉 申請(qǐng)人:石家莊市興柏生物工程有限公司