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一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法

文檔序號(hào):3590100閱讀:1341來源:國(guó)知局
專利名稱:一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及天然藥物制備方法技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法。
背景技術(shù)
生姜是姜科姜屬植物姜的的新鮮根莖,是我國(guó)常用中藥材之一,也是衛(wèi)生部公布的首批藥食同源中藥之一。生姜傳統(tǒng)上在世界各地都用于人類各種各樣疾病的治療,包括關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕病、扭傷、肌肉痛、疼痛、喉嚨痛、便秘、消化不良、嘔吐、高血壓、老年癡呆、發(fā)熱、感染性疾病和蠕蟲病等。生姜的藥用歷史已經(jīng)有2500年,在中國(guó)始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》, 列為中品,其后歷代本草均有記載。中國(guó)藥典記載生姜性辛,微溫,歸肺、脾、胃經(jīng),具有解表散寒、溫中止嘔、化痰止咳之功,用于治療風(fēng)寒感冒、胃寒嘔吐、寒痰咳嗽等癥。另外,生姜廣泛應(yīng)用作為香料和調(diào)味品,食物添加劑等。姜酚是生姜的主要活性成分,藥理試驗(yàn)證明,姜酚能刺激黏膜,促進(jìn)胃液分泌;在腸道中能抑制異常發(fā)酵,促進(jìn)氣體排放;對(duì)大腦皮質(zhì)和血管運(yùn)動(dòng)中樞有興奮作用,能增進(jìn)血液循環(huán)?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí),姜酚具有抗菌、抗腫瘤、抗氧化、抗炎、抗血小板等作用,還具有強(qiáng)心、防治心血管疾病、抗凝血、抗?jié)?、止嘔、止暈、抑制前列腺素合成、利膽、防腐殺蟲、驅(qū)蟲和護(hù)膚美容等生物活性。因此,姜酚可廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、保健食品及化妝品中。姜酚中6-姜酚出-gingerol)含量最高,占姜酚類物質(zhì)的75% 以上,其生物活性也最強(qiáng)。
目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)6-姜酚的活性研究較多,對(duì)生姜中6-姜酚的分離純化研究較少。 因此,開展6-姜酚化合物的分離純化對(duì)推進(jìn)該化合物的進(jìn)一步開發(fā)具有重要的價(jià)值和實(shí)用意義。
文獻(xiàn)查新發(fā)現(xiàn),中國(guó)專利CN1247510C公開了一種從生姜中分尚6_姜酌·的方法。該方法先將鮮生姜烘干粉碎,采用丙酮浸泡得到姜油樹脂,再硅膠柱分離制備粗姜酚,然后經(jīng)過HPLC分離、大孔樹脂分離得到較純6-姜酚。該方法工藝路線繁瑣,且第一步丙酮浸泡所得姜油樹脂的成分復(fù)雜,不利于后續(xù)分離;第二步硅膠柱分離采用極易揮發(fā)且價(jià)格昂貴的正己烷和乙醚作為洗脫液,增加了分離成本;第三步HPLC分離采用甲醇-水-冰醋酸作為流動(dòng)相,不利于后續(xù)處理。
中國(guó)專利CN100595183C公開了一種從生姜中制備6-姜酚和8-姜酚的方法。該方法采用丙酮或乙酸乙酯回流提取干姜中的姜酚成分,通過硅膠柱分離制備粗姜酚,再經(jīng)過Sephadex LH-20凝膠柱分離得到較純的6_姜酹。但Sephadex LH-20柱層析所用填料昂貴,操作時(shí)間長(zhǎng),分離效能低,不適合大規(guī)模應(yīng)用;且溶劑系統(tǒng)是氯仿-甲醇,在制備工藝中一般要避免使用毒性較大的氯仿作為溶劑。
中國(guó)專利CN100595183C公開了一種分離純化6-姜酚的方法。該方法采用超臨界萃取獲得姜酚粗體物,再經(jīng)硅膠柱分離,HPLC純化,重結(jié)晶等步驟得到高純度的6-姜酚。超臨界萃取法可同時(shí)獲得生姜的揮發(fā)油和姜辣素,成分相對(duì)復(fù)雜,姜酚含量不高,不利于后續(xù)的分離;在HPLC分離步驟中,采用純甲醇作為流動(dòng)相,分離效能低,成本高,不適合大規(guī)模應(yīng)用。
綜上所述,現(xiàn)有制備工藝步驟相對(duì)較長(zhǎng),操作繁瑣,產(chǎn)品得率不高,只適合在實(shí)驗(yàn)室小量制備,較難應(yīng)用與大規(guī)模的生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便且分離效率和分離純度高的從生姜中提取純化6-姜酚的方法。
為解決上述問題,本發(fā)明所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,包括以下步驟⑴姜酚的提取濃縮切片生姜置于小型多功能提取濃縮罐,用質(zhì)量濃度為80、5%的乙醇按I :6 15的料液質(zhì)量體積比在6(T80°C下加熱回流提取,提取的時(shí)間為每次2 3小時(shí),每批生姜提取2 4次, 每次提取的提取液流入所述小型多功能提取濃縮罐中,經(jīng)統(tǒng)一濃縮得到生姜提取物;⑵姜酚萃取將所述生姜提取物置于玻璃反應(yīng)釜中,用乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取次數(shù)2 4次,合并得到萃取液;該萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收得到姜酚粗提物;所述生姜提取物與所述乙酸乙酯的體積比為I :2 4;⑶硅膠柱層析將所述姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入所述姜酚粗提物重量2 4倍的硅膠拌樣, 溶劑乙酸乙酯揮干后,干法上硅膠柱;用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫,薄層層析 TCL檢測(cè),收集含有6-姜酚的洗脫液部分,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收所述洗脫液得到6-姜酚粗品;將所述6-姜酚粗品再次上硅膠柱,按照上述方法經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到較純6-姜酚;⑷制備HPLC純化將所述步驟⑶所得的較純6-姜酚用甲醇-水混合溶劑溶解,以制備HPLC純化,以甲醇-水混合溶劑作為流動(dòng)相等度洗脫,收集最大色譜峰,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干至恒重,即得到高純度的6-姜酚。
所述步驟⑴中的濃縮條件是指在60°C的溫度下減壓回收乙醇。
所述步驟⑵中的減壓回收條件是指在40°C的溫度下減壓回收乙酸乙酯。
所述步驟⑶中硅膠柱層析的條件是指硅膠為10(Γ300目柱層析用硅膠;流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯中石油醚與乙酸乙酯的體積比為5:廣3:1。
所述步驟⑶中TCL檢測(cè)條件是指采用硅膠GF254板,展開劑為體積比為I :1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑,以購買標(biāo)準(zhǔn)品6-姜酚為對(duì)照,紫外或碘缸顯色。
所述步驟⑷溶解6-姜酚的甲醇-水混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 :40。
所述步驟⑷中制備HPLC的條件是指采用C18 250X30 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為15mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm ;所述甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 :4(Γ50 50ο
所述步驟⑷分析HPLC的條件是指采用C18 250X4. 6 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ;所述甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 40o
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)(請(qǐng)指出因果關(guān)系)I、由于本發(fā)明采用正相硅膠柱色譜與反相HPLC色譜相結(jié)合的方法,將6-姜酚粗提物進(jìn)行快速分離純化,因此,分離效率和分離純度高。采用本發(fā)明方法,Ikg生姜能得到約O.35g 6-姜酚,純度蘭98.0%。
2、由于本發(fā)明僅涉及姜酚的提取濃縮、萃取、硅膠柱層析和制備HPLC純化四個(gè)步驟,制備過程簡(jiǎn)單。因此,工藝簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便。
3、由于本發(fā)明分離效率和分離純度高,且工藝簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便,因此,可適用于規(guī)?;墓I(yè)大生產(chǎn),所得6-姜酚可用于藥品、食品和化妝品等。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I 一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,包括以下步驟⑴姜酚的提取濃縮切片生姜IOkg置于小型多功能提取濃縮罐(HL-300、武漢暉鵬制藥機(jī)械設(shè)備有限公司),用質(zhì)量濃度為80%的乙醇按I :15的料液質(zhì)量體積比(kg/L)在60°C下加熱回流提取, 提取的時(shí)間為每次2小時(shí),每批生姜提取2次,每次提取的提取液流入小型多功能提取濃縮罐中,在60°C的溫度下減壓回收乙醇得到生姜提取物。
⑵姜酚萃取將生姜提取物置于玻璃反應(yīng)釜中,用乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取次數(shù)3次,合并得到萃取液;該萃取液在40°C的溫度條件下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收得到20 g姜酚粗提物。生姜提取物與乙酸乙酯的體積比(L/L)為I :3。
⑶硅膠柱層析將姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入姜酚粗提物重量2 4倍的硅膠拌樣,溶劑乙酸乙酯揮干后,干法上硅膠柱;用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫,薄層層析TCL檢測(cè),收集含有6-姜酚的洗脫液部分,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收洗脫液得到5g 6-姜酚粗品;將6_姜酚粗品再次上硅膠柱,按照上述方法經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到4. Ig較純6-姜酚。 經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為89. 4%。
其中硅膠柱層析的條件是指硅膠為100目柱層析用硅膠;流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯中石油醚與乙酸乙酯的體積比(L/L)為3:1。
TCL檢測(cè)條件是指采用硅膠GF254板,展開劑為體積比為I :1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑,以購買標(biāo)準(zhǔn)品6-姜酚為對(duì)照,紫外或碘缸顯色。
⑷制備HPLC純化將步驟⑶所得的較純6-姜酚用甲醇與水的體積比為60 40的甲醇-水混合溶劑溶解, 以制備HPLC純化,以甲醇-水混合溶劑作為流動(dòng)相等度洗脫,收集最大色譜峰,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干至恒重,即得到3. 4g高純度的6-姜酚。經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為98. 8%。
其中制備HPLC的條件是指采用C18 250X30 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為15mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/ L)為 50:50。
分析HPLC的條件是指采用C18 250 X 4. 6 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/L)為 60 40o
實(shí)施例2 —種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,包括以下步驟⑴姜酚的提取濃縮切片生姜20kg置于小型多功能提取濃縮罐(HL-300、武漢暉鵬制藥機(jī)械設(shè)備有限公司),用質(zhì)量濃度為95%的乙醇按I :6的料液質(zhì)量體積比(kg/L)在70°C下加熱回流提取,提取的時(shí)間為每次2. 5小時(shí),每批生姜提取4次,每次提取的提取液流入小型多功能提取濃縮罐中,在60°C的溫度下減壓回收乙醇得到生姜提取物。
⑵姜酚萃取將生姜提取物置于玻璃反應(yīng)釜中,用乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取次數(shù)4次,合并得到萃取液;該萃取液在40°C的溫度條件下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收得到43g姜酚粗提物。生姜提取物與乙酸乙酯的體積比(L/L)為I :2。
⑶硅膠柱層析將姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入姜酚粗提物重量2 4倍的硅膠拌樣,溶劑乙酸乙酯揮干后,干法上硅膠柱;用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫,薄層層析TCL檢測(cè), 收集含有6-姜酚的洗脫液部分,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收洗脫液得到Ilg 6-姜酚粗品;將 6-姜酚粗品再次上硅膠柱,按照上述方法經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到8. 5g較純 6-姜酚。經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為90. 2%。
其中硅膠柱層析的條件是指硅膠為300目柱層析用硅膠;流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯中石油醚與乙酸乙酯的體積比(L/L)為4:1。
TCL檢測(cè)條件是指采用硅膠GF254板,展開劑為體積比為I :1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑,以購買標(biāo)準(zhǔn)品6-姜酚為對(duì)照,紫外或碘缸顯色。
⑷制備HPLC純化將步驟⑶所得的較純6-姜酚用甲醇與水的體積比為60 40的甲醇-水混合溶劑溶解, 以制備HPLC純化,以甲醇-水混合溶劑作為流動(dòng)相等度洗脫,收集最大色譜峰,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干至恒重,即得到6. Sg高純度的6-姜酚。經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為98. 5%。
其中制備HPLC的條件是指采用C18 250X30 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為15mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/ L)為 60 40o
分析HPLC的條件是指采用C18 250 X 4. 6 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/L)為 60 40o
實(shí)施例3 —種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,包括以下步驟⑴姜酚的提取濃縮切片生姜20kg置于小型多功能提取濃縮罐(HL-300、武漢暉鵬制藥機(jī)械設(shè)備有限公司),用質(zhì)量濃度為90%的乙醇按I :8的料液質(zhì)量體積比(kg/L)在80°C下加熱回流提取,提取的時(shí)間為每次3小時(shí),每批生姜提取3次,每次提取的提取液流入小型多功能提取濃縮罐中,在60°C的溫度下減壓回收乙醇經(jīng)統(tǒng)一濃縮得到生姜提取物。
⑵姜酚萃取將生姜提取物置于玻璃反應(yīng)釜中,用乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取次數(shù)2次,合并得到萃取液;該萃取液在40°C的溫度條件下經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收得到41g姜酚粗提物。生姜提取物與乙酸乙酯的體積比(L/L)為I :4。
⑶硅膠柱層析將姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入姜酚粗提物重量3倍的硅膠拌樣,溶劑乙酸乙酯揮干后,干法上硅膠柱;用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫,薄層層析TCL檢測(cè),收集含有6-姜酚的洗脫液部分,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收洗脫液得到12g 6-姜酚粗品;將6_姜酚粗品再次上硅膠柱,按照上述方法經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到9. 2g較純6-姜酚。 經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為92. 3%。
其中硅膠柱層析的條件是指硅膠為200目柱層析用硅膠;流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯中石油醚與乙酸乙酯的體積比(L/L)為5:1。
TCL檢測(cè)條件是指采用硅膠GF254板,展開劑為體積比為I :1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑,以購買標(biāo)準(zhǔn)品6-姜酚為對(duì)照,紫外或碘缸顯色。
⑷制備HPLC純化將步驟⑶所得的較純6-姜酚用甲醇與水的體積比為60 40的甲醇-水混合溶劑溶解, 以制備HPLC純化,以甲醇-水混合溶劑作為流動(dòng)相等度洗脫,收集最大色譜峰,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干至恒重,即得到6. 2g高純度的6-姜酚。經(jīng)分析HPLC檢測(cè),6-姜酚的含量為98. 7%。
其中制備HPLC的條件是指采用C18 250X30 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為15mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/ L)為 55 45o
分析HPLC的條件是指采用C18 250 X 4. 6 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ;甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比(L/L)為 60 40o
權(quán)利要求
1.一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,包括以下步驟 ⑴姜酚的提取濃縮 切片生姜置于小型多功能提取濃縮罐,用質(zhì)量濃度為80、5%的乙醇按I :6 15的料液質(zhì)量體積比在6(T80°C下加熱回流提取,提取的時(shí)間為每次2 3小時(shí),每批生姜提取2 4次,每次提取的提取液流入所述小型多功能提取濃縮罐中,經(jīng)統(tǒng)一濃縮得到生姜提取物; ⑵姜酚萃取 將所述生姜提取物置于玻璃反應(yīng)釜中,用乙酸乙酯進(jìn)行萃取,萃取次數(shù)2 4次,合并得到萃取液;該萃取液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收得到姜酚粗提物;所述生姜提取物與所述乙酸乙酯的體積比為I :2 4; ⑶硅膠柱層析 將所述姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入所述姜酚粗提物重量21倍的硅膠拌樣,溶劑乙酸乙酯揮干后,干法上硅膠柱;用石油醚_乙酸乙酯混合溶劑等度洗脫,薄層層析TCL檢測(cè),收集含有6-姜酚的洗脫液部分,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收所述洗脫液得到6-姜酚粗品;將所述6-姜酚粗品再次上硅膠柱,按照上述方法經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到較純6-姜酚; ⑷制備HPLC純化 將所述步驟⑶所得的較純6-姜酚用甲醇-水混合溶劑溶解,以制備HPLC純化,以甲醇_水混合溶劑作為流動(dòng)相等度洗脫,收集最大色譜峰,置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干至恒重,即得到高純度的6-姜酚。
2.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑴中的濃縮條件是指在60°C的溫度下減壓回收乙醇。
3.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑵中的減壓回收條件是指在400C的溫度下減壓回收乙酸乙酯。
4.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑶中硅膠柱層析的條件是指硅膠為10(T300目柱層析用硅膠;流動(dòng)相石油醚-乙酸乙酯中石油醚與乙酸乙酯的體積比為5:廣3:1。
5.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑶中TCL檢測(cè)條件是指采用硅膠GF254板,展開劑為體積比為I :1的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑,以購買標(biāo)準(zhǔn)品6-姜酚為對(duì)照,紫外或碘缸顯色。
6.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑷溶解6-姜酚的甲醇-水混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 :40。
7.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑷中制備HPLC的條件是指采用C18 250 X 30 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為15mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm ;所述甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 40 50 :50。
8.如權(quán)利要求I所述的一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,其特征在于所述步驟⑷分析HPLC的條件是指采用C18 250 X 4. 6 mm色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水的混合溶劑,流速為lmL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ;所述甲醇-水的混合溶劑中甲醇與水的體積比為60 :40。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從生姜中提取純化6-姜酚的方法,該方法包括以下步驟⑴姜酚的提取濃縮切片生姜用乙醇加熱回流,經(jīng)濃縮得到生姜提取物;⑵姜酚萃取將生姜提取物萃取得到萃取液;該萃取液經(jīng)減壓回收得到姜酚粗提物;⑶硅膠柱層析將姜酚粗提物溶于乙酸乙酯,然后加入硅膠拌樣,溶劑揮干后,干法上硅膠柱;經(jīng)等度洗脫、薄層層析TCL檢測(cè)后收集含有6-姜酚的洗脫液部分,洗脫液減壓回收得到6-姜酚粗品;將6-姜酚粗品再次上硅膠柱,經(jīng)洗脫、檢測(cè)、收集、回收溶劑,得到較純6-姜酚;⑷制備HPLC純化將較純6-姜酚溶解,以制備HPLC純化,等度洗脫后,收集最大色譜峰,蒸干至恒重,即得到高純度的6-姜酚。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單、易于操作、產(chǎn)品收率高且質(zhì)量好。
文檔編號(hào)C07C45/78GK102976909SQ201210553119
公開日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月19日
發(fā)明者岳會(huì)蘭, 邵赟, 梅麗娟, 陶燕鐸 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所
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