血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白和使用此類蛋白的方法。
【專利說明】血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白
[0001]本申請要求2011年1月6日提交的美國專利申請序列號61/430，442的優(yōu)先權(quán)。在先申請的公開內(nèi)容被視為本申請公開內(nèi)容的一部分(并以引用方式并入)。
[0002]發(fā)明背景
[0003]血漿前激肽釋放酶一種絲氨酸蛋白酶。前激肽釋放酶是血漿前激肽釋放酶的前體。
發(fā)明概要
[0004]血漿前激肽釋放酶是接觸系統(tǒng)的絲氨酸蛋白酶組分并為不同炎性、心血管、感染性(敗血病)和腫瘤疾病的潛在藥物靶標(biāo)(Sainz 1.M.等，Thromb Haemost98, 77-83,2007)。接觸系統(tǒng)通過因子Xlla在暴露于外來物或帶負(fù)電表面時或在內(nèi)皮細(xì)胞表面上通過脯氨酰羧肽酶而激活(圖1) (Sainz 1.M.等，Thromb Haemost98，77-83，2007)。血漿前激肽釋放酶的激活通過其因子XII的反饋激活而增強(qiáng)內(nèi)源性凝血并通過產(chǎn)生促炎性九肽緩激肽而加重炎癥。作為循環(huán)中的主要激肽原酶，血漿前激肽釋放酶主要負(fù)責(zé)在脈管中生成緩激肽。C1-抑制劑蛋白(C1-1NH)(血漿前激肽釋放酶的主要天然抑制劑)中的遺傳缺陷導(dǎo)致遺傳性血管性水腫(HAE)?；加刑弁葱运[急性發(fā)作的HAE患者通常因未知的觸發(fā)因素而促成(Zuraw B.L.等，N Engl J Med359,1027-1036, 2008)。通過在動物模型中使用藥理學(xué)藥劑或遺傳研究，已發(fā)現(xiàn)血漿前激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(血漿KKS)涉及多種疾病。
[0005]血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如抗體，例如抑制性抗體)是許多疾病和病狀(例如涉及血漿前激肽釋放酶活性的疾病和病狀)的有用治療劑，因?yàn)樗鼈兙哂懈咝?、特異性和長期的血清停留。高效能可轉(zhuǎn)化成療效和低藥物劑量，而高特異性則可因?yàn)橐种葡嚓P(guān)的脫靶絲氨酸蛋白酶而減少副作用。一般來講，小分子絲氨酸蛋白酶的特異性不如抗體抑制劑。長期的血清停留可允許降低給藥頻率。
[0006]在一些方面，本公開的特征在于結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶(例如人類前血漿前激肽釋放酶和/或小鼠前血漿前激肽釋放酶)的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)。
[0007]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合本文所述的激肽釋放酶結(jié)合蛋白的相同表位或與其競爭結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合本文所述的蛋白(例如ep1-Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或與其競爭結(jié)合并且不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0008]在一些實(shí)施方案中，本文所述的蛋白選自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01 (在本文也稱為 DX-2922)、X81-B01、X67-D03、X67-G04、父115-807、父115-005、父115409、父115-!106、父115-六03、父115-001、父115-卩02、父124-601(在本文也稱為 DX-2930)、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0009]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X81-B01競爭或結(jié)合與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。[0010]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X67-D03競爭或結(jié)合與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0011]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X101-A01競爭或結(jié)合到與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0012]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與M162-A04競爭或結(jié)合到與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。 [0013]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與XI15-F02競爭或結(jié)合到與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0014]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X124-G01競爭或結(jié)合到與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0015]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X63-G06競爭或結(jié)合到與其相同的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0016]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0017]在某些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合在血漿前激肽釋放酶或其片段的催化結(jié)構(gòu)域的活性位點(diǎn)處或附近，或結(jié)合重疊血漿前激肽釋放酶活性位點(diǎn)的表位并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0018]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到形成血漿前激肽釋放酶的催化三元組的一個或多個氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578 (編號基于人類序列)并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0019]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到以下一個或多個氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585(編號基于人類序列)并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0020]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下一個或多個氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (編號基于人類激肽釋放酶序列)。在其他實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下兩個、三個、四個或五個(即所有)氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (編號基于人類序列)并且例如不結(jié)合前血漿前激肽釋放酶。
[0021]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下一個或多個氨基酸:S478、N481、S525和K526 (編號基于人類激肽釋放酶序列)。在其他實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下兩個、三個或四個(即所有)氨基酸:S478、N481、S525和K526 (編號基于人類激肽釋放酶序列)。
[0022]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。
[0023]在一些實(shí)施方案中，血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白具有小于1000、500、100、10、1、
0.5或0.2nM的表觀抑制常數(shù)(Ki，app)。
[0024]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。[0025]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0026]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。 [0027]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部分。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白經(jīng)修飾以包含例如PEG化、與血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、與人血清白蛋白的偶聯(lián)、HES化(利用羥乙基淀粉(“HES”)的HES化)、連接到藥物以便改變藥物特性的衍生物或與非結(jié)構(gòu)化重組聚合物(URP)的融合。
[0028]在其他實(shí)施方案中，該血衆(zhòng)前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體(minibody)、scFv::Fc 融合體、Fab::HSA 融合體、HSA::Fab 融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為 IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1 或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0029]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0030]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0031 ] 在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0032]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。“靈長類”包括人類(智人Homo sapiens))、黑猩猩類(chimpanzees)(黑猩猩(Pan troglodytes)和倭黑猩猩(Panpaniscus)(巴諾布猿(bonobos)))、大猩猩類(gorillas)(大猩猩(Gorilla gorilla))、長臂猿(gibons)、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿(Daubentonia madagascariensis))和眼鏡猴。
[0033]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0034]在某些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0035]在某些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。
[0036]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0037]在一些方面，本公開的特征在于結(jié)合本文所述的激肽釋放酶結(jié)合蛋白的相同表位或與其競爭結(jié)合的分離蛋白(例如抗體，例如人類抗體)。
[0038]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或與其競爭結(jié)合。
[0039]在一些實(shí)施方案中，該分離的蛋白包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列，其中:
[0040]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或 [0041]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0042]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0043]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)。
[0044]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)(分別地)。
[0045]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0046]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X81-B01和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X81-B01。
[0047]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X67-D03和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X67-D03。
[0048]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X63-G06和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X63-G06。
[0049]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自M162-A04和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自MJ162-A04。
[0050]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X115-F02和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X115-F02o
[0051]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X124-G01和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X124-G01。[0052]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0053]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(分別地)。
[0054]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0055]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0056]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0057]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04的重鏈，
[0058]和/ 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、父115402、父124-601、父115-604、]?29-009、]\1145-011、]\106-009和]\05-604 的輕鏈(分別地)。
[0059]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X81-B01的重鏈和/或X81-B01的輕鏈。
[0060]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X67-D03的重鏈和/或X67-D03的輕鏈。
[0061]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04的重鏈和/或M162-A04的輕鏈。
[0062]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X115-F02的重鏈和/或X115-F02的輕鏈。
[0063]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X124-G01的重鏈和/或X124-G01的輕鏈。
[0064]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0065]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。
[0066]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含以下特征中的一種或多種:(a)人類CDR或人類骨架區(qū)；(b)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的CDR至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)CDR ;(c)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、88、89、
90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)CDR ; (d)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、
95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或⑶R中)；(e)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中)；(f)該蛋白結(jié)合本文所述蛋白結(jié)合的表位或與本文所述蛋白競爭結(jié)合；(g)靈長類CDR或靈長類骨架區(qū)；(h)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的CDR1相差至少一個氨基酸但不超過2或3個氨基酸的⑶Rl ； (i)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R2相差至少一個氨基酸但不超過2 、3、4、5、6、7或8個氨基酸的CDR2 ; (j)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R3相差至少一個氨基酸但不超過2、3、4、5或6個氨基酸的CDR3 ； (k)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的CDR1相差至少一個氨基酸但不超過2、3、4或5個氨基酸的CDR1 ; (1) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的CDR2相差至少一個氨基酸但不超過2、3或4個氨基酸的CDR2 ； (m)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的CDR3相差至少一個氨基酸但不超過2、3、4或5個氨基酸的CDR3 ； (n)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域相差至少一個氨基酸但不超過2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中)；以及(o)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域相差至少一個氨基酸但不超過2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中)。
[0067]在一些實(shí)施方案中，該蛋白具有小于1000、500、100、10、1、0.5或0.2nM的表觀抑
制常數(shù)(U。
[0068]在一些實(shí)施方案中，該抗體不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0069]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0070]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0071]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0072]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0073]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0074]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0075]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0076]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0077]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)重鏈 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 ；
[0078]以及選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分別地)的抗體(例如人類抗體)。
[0079]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0080]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0081]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0082]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X81-B01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0083]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。[0084]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0085]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0086]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0087]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。 [0088]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0089]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0090]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0091]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X67-D03的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0092]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0093]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0094]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0095]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0096]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0097]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X124-G01或X115-F02的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0098]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X124G01或X115R)2的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0099]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X124-G01或X115-F02的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0100]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X124-G01或X115-F02的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0101]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X124-G01或X115-F02的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0102]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X124-G01或X115-F02的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0103]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X124-G01或X115-F02重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體)。
[0104]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X124-G01或X115-F02輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0105]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X124-G01或X115-F02的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR和來自X124-G01或X115-F02輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0106]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。 [0107]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0108]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部分。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白經(jīng)修飾以包含例如PEG化、與血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的融合、與人血清白蛋白的偶聯(lián)、HES化(利用羥乙基淀粉(“HES”)的HES化)、連接到藥物以便改變藥物特性的衍生物或與非結(jié)構(gòu)化重組聚合物(URP)的融合。
[0109]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該蛋白為IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0110]在其他實(shí)施方案中，該蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體、scFv::Fc融合體、Fab::HSA融合體、HSA::Fab融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0111]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0112]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0113]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0114]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、
96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域?！办`長類”包括人類(智人)、黑猩猩類(黑猩猩和倭黑猩猩(巴諾布猿))、大猩猩類(大猩猩)、長臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼鏡猴。
[0115]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0116]在某些實(shí)施方案中，該蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0117]在某些實(shí)施方案中，該蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。[0118]在一個實(shí)施方案中，該蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0119]在一些方面，本公開的特征在于包含本文所述的激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如包括藥學(xué)上可接受的載體)的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，該組合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含其他蛋白種類。在一個實(shí)施方案中，該藥物組合物可以至少10、20、30、50、75、85、90、95、98、99或99.9%不含以下結(jié)合蛋白的片段，該結(jié)合蛋白不結(jié)合血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶)或以5000nM或更高的Ki，app結(jié)合血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶)。
[0120]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的方法，該方法包括: [0121]向受試者施用結(jié)合血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)并且例如不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)。
[0122]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或與其競爭結(jié)合。
[0123]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合本文所述的激肽釋放酶結(jié)合蛋白的相同表位或與其競爭結(jié)合。
[0124]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架上的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎和燒傷。在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10%。在其他實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100% (即，無可檢測的異常凝結(jié))。
[0125]在一些實(shí)施方案中，將該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白聯(lián)合病癥的另一種治療一起施用。
[0126]在一些實(shí)施方案中，本文所述的蛋白選自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0127]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X81-B01競爭或結(jié)合與其相同的表位。
[0128]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X67-D03競爭或結(jié)合與其相同的表位。
[0129]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與M162-A04或X115-F02競爭或結(jié)合到與其相同的表位。[0130]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0131]在某些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合在血漿前激肽釋放酶或其片段的催化結(jié)構(gòu)域的活性位點(diǎn)處或附近，或結(jié)合重疊血漿前激肽釋放酶活性位點(diǎn)的表位。
[0132]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到形成血漿前激肽釋放酶的催化三元組的一個或多個氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578 (編號基于人類序列)。
[0133]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到以下一個或多個氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585 (編號基于人類序列)。 [0134]在其他實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到以下一個或多個氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560 (編號基于人類序列)。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下一個或多個氨基酸:S478、N481、S525和K526 (編號基于人類激肽釋放酶序列)。
[0135]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。
[0136]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、
1、0.5或0.2nM的表觀抑制常數(shù)(&,_)。
[0137]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。
[0138]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0139]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部分。
[0140]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0141]在其他具體實(shí)施中，該血衆(zhòng)前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體、scFv::Fc融合體、Fab::HSA融合體、HSA::Fab融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為IgG、Fab、Fab2、Fab2 '、scFv、PEG 化 Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1 或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0142]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0143]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0144]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0145]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域?！办`長類”包括人類(智人)、黑猩猩類(黑猩猩和倭黑猩猩(巴諾布猿))、大猩猩類(大猩猩)、長臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼鏡猴。
[0146]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0147]在某些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0148]在某些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。
[0149]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0150]一種治療或預(yù)防受試者的血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的方法，該方法包括:
[0151]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0152]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0153]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0154]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0155]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎和燒傷。在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%、至少99%或甚至100% (即，無可檢測的異常凝結(jié)))。
[0156]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合病癥的另一種治療一起施用。
[0157]在一些實(shí)施方案中,將該蛋白聯(lián)合選自艾卡拉肽(ecallantide)、C1酯酶抑制劑、抑肽酶、緩激肽B2受體抑制劑(例如艾替班特(icatibant))的第二藥劑一起施用。
[0158]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0159]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)(分別地)。
[0160]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶。
[0161]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X81-B01和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X81-B01。 [0162]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X67-D03和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X67-D03。
[0163]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自M162-A04和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自M162-A04。
[0164]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X115-F02和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X115-F02o
[0165]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0166]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(分別地)。
[0167]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0168]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0169]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0170]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 的重鏈和 / 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、XI15-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的輕鏈(分別地)。
[0171]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X81-B01的重鏈和/或X81-B01的輕鏈。
[0172]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X67-D03的重鏈和/或X67-D03的輕鏈。
[0173]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04的重鏈和/或M162-A04的輕鏈。
[0174]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X115-F02或X124-G01的重鏈和/或X115-F02或X124-G01的輕鏈。
[0175]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0176]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。
[0177]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含以下特征中的一種或多種:(a)人類CDR或人類骨架區(qū)；(b)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、
88、89、90、91、92、93、 94、95、96、97、98、99或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)⑶R ； (c)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)CDR ;(d) LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中)；(f)該蛋白結(jié)合本文所述蛋白結(jié)合的表位或與本文所述蛋白競爭結(jié)合；和(g)靈長類CDR或靈長類骨架區(qū)。
[0178]在一些實(shí)施方案中，該蛋白具有小于1000、500、100、10、5、1、0.5或0.2nM的表觀
抑制常數(shù)況,_)。
[0179]在一些實(shí)施方案中，該抗體不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0180]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0181]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0182]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、XI24-GO 1, XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0183]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0184]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。 [0185]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0186]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0187]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0188]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)重鏈 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04以及選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈⑶R:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分別地)的抗體(例如人類抗體)。
[0189]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0190]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0191]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0192]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X81-B01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0193]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0194]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0195]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0196]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。 [0197]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0198]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0199]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0200]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0201]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X67-D03的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0202]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0203]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0204]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0205]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0206]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0207]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0208]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0209]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0210]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X115-F02或X124-G01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。[0211]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0212]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0213]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體)。
[0214]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0215]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR和來自X115-F02或X124-G01輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0216]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。
[0217]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0218]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部 分。
[0219]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該蛋白為IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0220]在其他具體實(shí)施中，該蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體、scFv::Fc融合體、Fab::HSA融合體、HSA::Fab融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0221]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0222]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、
97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0223]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0224]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、
96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。“靈長類”包括人類(智人)、黑猩猩類(黑猩猩和倭黑猩猩(巴諾布猿))、大猩猩類(大猩猩)、長臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼鏡猴。
[0225]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0226]在某些實(shí)施方案中，該蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0227]在某些實(shí)施方案中，該蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。[0228]在一個實(shí)施方案中，該蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0229]在一些方面，本公開的特征在于促進(jìn)受試者的傷口愈合的方法，該方法包括:
[0230]向受試者施用結(jié)合血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或小鼠血漿前激肽釋放酶)并且例如不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或小鼠前激肽釋放酶)的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)。
[0231 ] 在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合本文所述的激肽釋放酶結(jié)合蛋白的相同表位或與其競爭結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合本文所述的蛋白(例如epi_Kal2)和/或小分子(例如AEBSF)的相同表位或與其競爭結(jié)合。 [0232]在一些實(shí)施方案中，將該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白聯(lián)合傷口愈合的另一種治療一起施用。
[0233]在一些實(shí)施方案中，本文所述的蛋白選自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-R07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0234]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X81-B01競爭或結(jié)合與其相同的表位。
[0235]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X67-D03競爭或結(jié)合與其相同的表位。
[0236]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與M162-A04競爭或結(jié)合與其相同的表位。
[0237]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與X115-F02或X124-G01競爭或結(jié)合到與其相同的表位。
[0238]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0239]在某些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合在血漿前激肽釋放酶或其片段的催化結(jié)構(gòu)域的活性位點(diǎn)處或附近，或結(jié)合重疊血漿前激肽釋放酶活性位點(diǎn)的表位。
[0240]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到形成血漿前激肽釋放酶的催化三元組的一個或多個氨基酸:His434、Asp483和/或Ser578(編號基于人類序列)。在其他實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到形成底物識別區(qū)的一個或多個氨基酸:Arg551、Gln553、Tyr555、Thr558和/或Arg560(編號基于人類序列)。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合以下一個或多個氨基酸:S478、N481、S525和K526 (編號基于人類激肽釋放酶序列)。
[0241]在一些實(shí)施方案中，該蛋白結(jié)合到以下一個或多個氨基酸:Ser479、Tyr563和/或Asp585 (編號基于人類序列)。
[0242]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。[0243]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白具有小于1000、500、100、10、5、
1、0.5或0.2nM的表觀抑制常數(shù)(&,_)。
[0244]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。
[0245]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0246]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部分。
[0247]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為IgG，例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0248]在其他具體實(shí)施中，該血衆(zhòng)前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體、scFv::Fc融合體、Fab::HSA融合體、HSA::Fab融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為IgG、Fab、Fab2、Fab2/、scFv、PEGKFab、 PEGK scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0249]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0250]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0251 ] 在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0252]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域?！办`長類”包括人類(智人)、黑猩猩類(黑猩猩和倭黑猩猩(巴諾布猿))、大猩猩類(大猩猩)、長臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼鏡猴。
[0253]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0254]在某些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0255]在某些實(shí)施方案中，該蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。
[0256]在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0257]在一些方面，本公開的特征在于促進(jìn)受試者的傷口愈合的方法，該方法包括:
[0258]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:[0259]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0260]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0261 ] 其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0262]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合傷口愈合的另一種治療一起施用。
[0263]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，
[0264]和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D11、M06-D09和M35-G04的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)(分別地)。
[0265]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶。
[0266]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X81-B01和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X81-B01。
[0267]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X67-D03和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自X67-D03。
[0268]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自M162-A04和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自M162-A04。
[0269]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自M199-A08和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)來自M199-A08。
[0270]在一些實(shí)施方案中，來自重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)來自X115-F02或X124-G01和/或來自輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR 區(qū)來自 X115-F02 或 X124-G01。
[0271 ] 在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0272]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09和M35-G04的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、XI24-GO 1, X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(分別地)。
[0273]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X81-B01的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0274]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含X67-D03的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0275]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0276]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、 M145-D11、 M06-D09 和M35-G04 的重鏈和 / 或 M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、XI15-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04 的輕鏈(分別地)。
[0277]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X81-B01的重鏈和/或X81-B01的輕鏈。
[0278]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X67-D03的重鏈和/或X67-D03的輕鏈。
[0279]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含M162-A04的重鏈和/或M162-A04的輕鏈。
[0280]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含X115-F02或X124-G01的重鏈和/或XI15-F02或X124-G01的輕鏈。
[0281]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0282]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生與標(biāo)準(zhǔn)(例如在相同條件下但不存在該蛋白時因子Xlla和/或緩激肽的產(chǎn)生)相比減少超過約 5%、約 10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約 35%、約 40%、約 45%、約 50%、約 55%、約 60%、約 65%、約 70%、約 75%、約 80%、約 85%、約 90%或約 95%。
[0283]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含以下特征中的一種或多種:(a)人類CDR或人類骨架區(qū)；(b)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、
88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)⑶R ； (c)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域的⑶R至少85、88、
89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或 100%相同的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)CDR ;
(d)LC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述LC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中);(e)HC免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列與本文所述HC可變結(jié)構(gòu)域至少85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%相同(例如整體或在骨架區(qū)或CDR中)；(f)該蛋白結(jié)合本文所述蛋白結(jié)合的表位或與本文所述蛋白競爭結(jié)合；和(g)靈長類CDR或靈長類骨架區(qū)。[0284]在一些實(shí)施方案中，該蛋白具有小于1000、500、100、5、1、0.5或0.2nM的表觀抑制
常數(shù)(U。
[0285]在一些實(shí)施方案中，該抗體不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。 [0286]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X-124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0287]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0288]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、 X67-G04、 X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、XI15-F02、X124-G01、XI15-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0289]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0290]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0291 ] 在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下的抗體的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35-G04。
[0292]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。
[0293]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈⑶R的抗體(例如人類抗體):M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、 X115-G04、 M29-D09、M145-D1UM06-D09 和 M35-G04。[0294]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自以下抗體的重鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如 1、2 或 3 個)重鏈 CDR:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、X115-D05、X115-E09、X115-H06、X115-A03、X115-D01、X115-F02、X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和M35-G04以及選自以下抗體的輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈⑶R:M162-A04、M199-A08、M160-G12、M142-H08、X63-G06、X101-A01、X81-B01、X67-D03、X67-G04、X115-B07、 X115-D05、 X115-E09、 X115-H06、 X115-A03、 X115-D01、 X115-F02、 X124-G01、X115-G04、M29-D09、M145-D11、M06-D09 和 M35_G04(分別地)的抗體(例如人類抗體)。
[0295]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。 [0296]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0297]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0298]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X81-B01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0299]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0300]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X81-B01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0301]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0302]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0303]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X81-B01的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X81-B01輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0304]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0305]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0306]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0307]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X67-D03的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0308]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0309]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X67-D03的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。[0310]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0311]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0312]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X67-D03的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R和來自X67-D03輕鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0313]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈和重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0314]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的重鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0315]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈的抗體(例如人類抗體)。
[0316]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有選自X115-F02或X124-G01的抗體的輕鏈和重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0317]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的重鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0318]在一個優(yōu)選 的實(shí)施方案中，該蛋白為具有X115-F02或X124-G01的輕鏈抗體可變區(qū)的抗體(例如人類抗體)。
[0319]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01重鏈的相應(yīng)⑶R的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈⑶R的抗體(例如人類抗體)。
[0320]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0321]在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，該蛋白為具有來自X115-F02或X124-G01的重鏈的一個或多個(例如1、2或3個)重鏈CDR和來自X115-F02或X124-G01輕鏈的相應(yīng)CDR的一個或多個(例如1、2或3個)輕鏈CDR的抗體(例如人類抗體)。
[0322]在一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為同一多肽鏈的組分。
[0323]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長的血清停留時間。在一個實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白為在體內(nèi)例如在人體內(nèi)具有1周、2周、3周、4周、5周或更長血清停留時間的IgG，例如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4。
[0324]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白與改善血清停留時間的部分物理相關(guān)，例如本文所述的部分。
[0325]在另一個實(shí)施方案中，HC和LC可變結(jié)構(gòu)域序列為不同多肽鏈的組分。例如，該蛋白為IgG,例如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。該蛋白可以為可溶性Fab (sFab)。
[0326]在其他具體實(shí)施中，該蛋白包含F(xiàn)ab2'、scFv、微型抗體、scFv::Fc融合體、Fab::HSA融合體、HSA::Fab融合體、Fab::HSA::Fab融合體或包含本文結(jié)合蛋白之一的抗原結(jié)合位點(diǎn)的其他分子。這些Fab的VH和VL區(qū)可作為IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG 化 scFv、PEG 化 Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合適的構(gòu)建體而提供。
[0327]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為人類或人源化抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包括一個或多個人類抗體骨架區(qū)，例如所有人類骨架區(qū)。
[0328]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含人類Fc結(jié)構(gòu)域，或與人類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。
[0329]在一個實(shí)施方案中，該蛋白為靈長類或靈長源抗體或在人類中為非免疫原性的。例如，該蛋白包含一個或多個靈長類抗體骨架區(qū)，例如所有靈長類骨架區(qū)。
[0330]在一個實(shí)施方案中，該蛋白包含靈長類Fc結(jié)構(gòu)域，或與靈長類Fc結(jié)構(gòu)域至少95、96、97、98或99%相同的Fc結(jié)構(gòu)域。“靈長類”包括人類(智人)、黑猩猩類(黑猩猩和倭黑猩猩(巴諾布猿))、大猩猩類(大猩猩)、長臂猿、猴、狐猴、狐猿(栗鼠猿)和眼鏡猴。
[0331]在一個實(shí)施方案中 ，該蛋白包含人類骨架區(qū)，或與人類骨架區(qū)至少95、96、97、98或99%相同的骨架區(qū)。
[0332]在某些實(shí)施方案中，該蛋白不含來自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗體)。
[0333]在某些實(shí)施方案中，該蛋白能夠結(jié)合到例如表達(dá)血漿前激肽釋放酶的組織或細(xì)胞。
[0334]在一個實(shí)施方案中，該蛋白與納米粒子物理相關(guān)并可用于將納米粒子引導(dǎo)到表達(dá)血漿前激肽釋放酶的細(xì)胞或組織。
[0335]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括:
[0336]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0337]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0338]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0339]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0340]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0341]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的另一種治療一起施用。
[0342]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0343]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0344]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0345]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中痛風(fēng)的方法，該方法包括:
[0346]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0347]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0348]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0349]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0350]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0351]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合痛風(fēng)的另一種治療一起施用。
[0352]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0353]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0354]在一些實(shí)施方案中 ，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0355]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中腸道疾病的方法，該方法包括:
[0356]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0357]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0358]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0359]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0360]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0361]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合腸道疾病的另一種治療一起施用。
[0362]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0363]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0364]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0365]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中口腔粘膜炎的方法，該方法包括:[0366]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0367]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0368]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0369]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0370]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0371]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合口腔粘膜炎的另一種治療一起施用。 [0372]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0373]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0374]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0375]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中神經(jīng)性疼痛的方法，該方法包括:
[0376]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0377]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0378]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0379]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0380]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0381]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合神經(jīng)性疼痛的另一種治療一起施用。
[0382]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0383]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0384]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0385]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中炎性疼痛的方法，該方法包括:
[0386]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0387]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0388]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0389]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0390]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0391]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合炎性疼痛的另一種治療一起施用。
[0392]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0393]在一些 實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0394]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0395]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中椎管狹窄-退行性脊柱疾病的方法，該方法包括:
[0396]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0397]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，和/或
[0398]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0399]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0400]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0401 ] 在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合椎管狹窄-退行性脊柱疾病的另一種治療一起施用。
[0402]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0403]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0404]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0405]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中動脈或靜脈血栓形成的方法，該方法包括:
[0406]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0407]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0408]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0409]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0410]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。 [0411]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合動脈或靜脈血栓形成的另一種治療一起施用。
[0412]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0413]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0414]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0415]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中術(shù)后腸梗阻的方法，該方法包括:
[0416]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0417]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0418]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0419]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0420]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0421]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合術(shù)后腸梗阻的另一種治療一起施用。
[0422]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0423]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。[0424]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0425]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中主動脈瘤的方法，該方法包括:
[0426]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0427]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0428]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0429]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0430]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。 [0431 ] 在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合主動脈瘤的另一種治療一起施用。
[0432]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0433]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0434]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0435]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中骨關(guān)節(jié)炎的方法，該方法包括:
[0436]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0437]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0438]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0439]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0440]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0441]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合骨關(guān)節(jié)炎的另一種治療一起施用。
[0442]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0443]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0444]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0445]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中脈管炎的方法，該方法包括:
[0446]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0447]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0448]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0449]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0450]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0451]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合脈管炎的另一種治療一起施用。
[0452]在一些實(shí)施方案中 ，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0453]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0454]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0455]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中頭部外傷或瘤周腦水腫的方法，該方法包括:
[0456]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0457]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0458]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0459]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0460]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0461]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合頭部外傷或瘤周腦水腫的另一種治療一起施用。
[0462]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。[0463]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0464]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0465]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中敗血病的方法，該方法包括:
[0466]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0467]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0468]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)， [0469]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0470]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0471]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合敗血病的另一種治療一起施用。
[0472]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0473]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0474]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0475]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))的方法，該方法包括:
[0476]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0477]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0478]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0479]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0480]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0481]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))的另一種治療一起施用。[0482]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0483]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0484]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0485]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中再狹窄(例如血管成形術(shù)后)的方法，該方法包括:
[0486]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0487]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或 [0488]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0489]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0490]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0491]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合再狹窄(例如血管成形術(shù)后)的另一種治療一起施用。
[0492]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0493]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0494]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0495]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎的方法，該方法包括:
[0496]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0497]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0498]該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0499]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0500]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0501]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎的另一種治療一起施用。
[0502]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0503]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0504]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0505]在一些方面，本公開的特征在于治療或預(yù)防受試者中燒傷的方法，該方法包括:
[0506]向受試者施用包含重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列和輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的分離的蛋白(例如抗體，例如人類抗體)，其中:
[0507]該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)CDR區(qū)，和/或
[0508]該輕鏈免疫球 蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含來自本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的一個、兩個或三個(例如三個)⑶R區(qū)，
[0509]其中該蛋白結(jié)合到血漿前激肽釋放酶。
[0510]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0511]在一些實(shí)施方案中，將該蛋白聯(lián)合燒傷的另一種治療一起施用。
[0512]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0513]在一些實(shí)施方案中，該重鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或該輕鏈免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列包含本文所述蛋白的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
[0514]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含本文所述蛋白的重鏈，和/或本文所述蛋白的輕鏈。
[0515]在一些方面，本公開的特征在于檢測樣本中血漿前激肽釋放酶的方法，該方法包括:將樣本與血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)接觸；以及檢測該蛋白與血漿前激肽釋放酶之間若存在的相互作用。
[0516]在一些實(shí)施方案中，該蛋白包含可檢測的標(biāo)記。
[0517]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，和血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0518]在一些方面，本公開的特征在于檢測受試者中血漿前激肽釋放酶的方法，該方法包括:向受試者施用血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)；以及檢測受試者中該蛋白與血漿前激肽釋放酶之間若存在的相互作用。例如，檢測包括對受試者成像。
[0519]在一些實(shí)施方案中，該蛋白還包含可檢測的標(biāo)記。
[0520]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，和血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0521]在一些方面，本公開的特征在于調(diào)節(jié)血漿前激肽釋放酶活性的方法，例如在治療或預(yù)防血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的方法中。該方法包括:將血漿前激肽釋放酶與血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)接觸(例如在人類受試者中)，從而調(diào)節(jié)血漿前激肽釋放酶活性。
[0522]在一些實(shí)施方案 中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0523]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎/脈管炎和燒傷。
[0524]在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10%。在其他實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少20%、至少30 %、至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、至少99%或甚至100% (即，無可檢測的異常凝結(jié))。
[0525]在一些方面，本公開的特征在于治療血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的方法，該方法包括:以足以治療受試者中血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的量向受試者施用血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)。該方法還可以包括向受試者提供作為血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥療法的第二療法，例如如本文所述。
[0526]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎/脈管炎和燒傷。
[0527]在一些方面，本公開的特征在于對受試者成像的方法。該方法包括:向受試者施用血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)以及例如檢測受試中該蛋白與血漿前激肽釋放酶之間若存在的相互作用。
[0528]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，和血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0529]在一些實(shí)施方案中，該蛋白不抑制血漿前激肽釋放酶活性。
[0530]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶活性(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0531]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白可包含可檢測的標(biāo)記(例如放射性核素或MRI可檢測的標(biāo)記)。 [0532]在一些實(shí)施方案中，受試者患有或疑似患有血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥。該方法可用于例如診斷血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥。
[0533]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎和燒傷。
[0534]在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，無可檢測的異常凝結(jié)))。
[0535]在一些方面，本公開的特征在于對例如受試者或樣本(例如活檢樣本)中的血漿前激肽釋放酶成像的方法。該方法包括:例如向受試者或樣本施用血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白(例如本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白)，以及檢測該蛋白與血漿前激肽釋放酶之間若存在的相互作用。
[0536]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，和血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0537]在一些實(shí)施方案中，該蛋白不抑制血漿前激肽釋放酶活性。
[0538]在一些實(shí)施方案中，該蛋白抑制血漿前激肽釋放酶活性(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)。
[0539]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白可包含可檢測的標(biāo)記(例如放射性核素或MRI可檢測的標(biāo)記)。
[0540]在一些實(shí)施方案中，受試者患有或疑似患有血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥。該方法可用于例如診斷血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥。
[0541]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎和燒傷。
[0542]在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，無可檢測的異常凝結(jié)))。
[0543]在一個方面，本公開的特征在于將本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白用于治療本文所述的病癥，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎或燒傷；或促進(jìn)傷口愈合。
[0544]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白結(jié)合 前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，和血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0545]在一個方面，本公開的特征在于將本文所述的血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白用于制造治療本文所述的病癥的藥物，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、水腫、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架引起的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎或燒傷；或用于制造用于傷口愈合的藥物。
[0546]在一些實(shí)施方案中，如通過例如APTT凝結(jié)測定法測量，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白將與接觸激活系統(tǒng)(即內(nèi)在激活系統(tǒng))相關(guān)的異常凝結(jié)減少至少10% (例如至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95 %、至少99 %或甚至100 % ( 即，無可檢測的異常凝結(jié)))。
[0547]在一些實(shí)施方案中，該血漿前激肽釋放酶結(jié)合蛋白不結(jié)合前激肽釋放酶(例如人類前激肽釋放酶和/或鼠前激肽釋放酶)，但結(jié)合到血漿前激肽釋放酶(例如人類血漿前激肽釋放酶和/或鼠血漿前激肽釋放酶)的活性形式。
[0548]本發(fā)明一個或多個實(shí)施方案的細(xì)節(jié)在附圖和下文的【具體實(shí)施方式】中示出。本發(fā)明的其他特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)通過【具體實(shí)施方式】和附圖以及通過權(quán)利要求書將顯而易見。
[0549]所有引用的參考(包括在本申請全文中引用的參考文獻(xiàn)、授權(quán)專利、已公布或未公布的專利申請)以及下文列出的那些的內(nèi)容據(jù)此明確地整體以引用方式并入。如發(fā)生矛盾，則以本申請(包括本文的任何定義)為準(zhǔn)。
[0550]附圖簡述
[0551]圖1是血漿前激肽釋放酶(pKal)在內(nèi)源性凝血途徑和炎癥中的作用的示意圖。
[0552]圖2示出了 M162-A04對角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足跖水腫的作用。足跖腫脹通過水置換進(jìn)行測量。
[0553]圖3示出了 M162-A04對角叉菜膠誘導(dǎo)的熱痛敏的作用。疼痛潛伏期在注射角叉菜膠后通過Hargreaves法測量。
[0554]圖4示出了使用R0LIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化(X63-G06)和種系化、密碼子優(yōu)化(X81-B01)形式的輕鏈DNA序列比對。由星號(*)表示的位置為保守的，而空白區(qū)則對應(yīng)于X81-B01中因密碼子優(yōu)化或種系發(fā)生而變化的堿基。 [0555]圖5示出了使用R0LIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化(X63-G06)和種系化、密碼子優(yōu)化(X81-B01)形式的輕鏈氨基酸序列比對。由星號(*)表示的位置為保守的，而空白區(qū)則對應(yīng)于X81-B01中因種系化(germlining)而變化的氨基酸。在非種系化(X63-G06)與種系化、密碼子優(yōu)化的抗體(X81-B01)之間存在總共11個氨基酸。
[0556]圖6示出了使用R0LIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化(X63-G06)和種系化、密碼子優(yōu)化(X81-B01)形式的重鏈DNA序列比對。由星號(*)表示的位置為保守的，而空白區(qū)則對應(yīng)于X81-B01中因密碼子優(yōu)化而變化的DNA堿基。
[0557]圖7示出了使用R0LIC親和力成熟發(fā)現(xiàn)的相同抗體的非種系化(X63-G06)和種系化、密碼子優(yōu)化(X81-B01)形式的重鏈氨基酸序列比對。由星號(*)表示的位置為保守的。兩個抗體在重鏈中具有相同的氨基酸序列。
[0558]圖8A 示出了 EP1-KAL2 與 X81-B01 競爭結(jié)合 pKal。X81-B01 (IgG)被捕獲在CM5 BIACORF?芯片的抗人類Fc片段特異性表面上。pKal(lOOnM)在存在(圖中的下傳感圖)或不存在1 μ M EP1-KAL2 (圖中的上傳感圖)的情況下在表面上流過。
[0559]圖8B 示出了 EP1-KAL2 與 X67-D03 競爭結(jié)合 pKal。X67-D03 (IgG)被捕獲在CM5Biacore芯片的抗人類Fc片段特異性表面上。pKal (ΙΟΟηΜ)在存在(圖中的下傳感圖)或不存在ΙμΜ EP1-KAL2(圖中的上傳感圖)的情況下在表面上流過。
[0560]圖9示出了表12所列抗體的CLIPS表位作圖結(jié)果。
[0561]圖10A-10C示出了不同物種的pKal序列的ClustalW比對。指示的位置是在物種之間的保守位置，而“:”指示的位置則表示物種之間的保守取代。指示的位置在一些物種中具有非保守取代。符號指示的氨基酸段通過溶劑可及表面積計算表明為高度溶劑暴露的?！?+ ”指示的氨基酸段被鑒定為表12中所列抗體的潛在表位。與Kunitz結(jié)構(gòu)域活性位點(diǎn)抑制劑相比時，通過溶劑可及表面積計算，據(jù)發(fā)現(xiàn)灰色突出顯示的氨基酸為隱蔽的。帶下劃線的位置為形成催化三元組的氨基酸(His434、Asp483和Ser578，基于人類序列編號)。
[0562]圖 11A 和 11B 示出了 印i_kal2 對(i)DX_2922 和(ii)M6_D09 抗體的 Biacore 競爭分析，如本文實(shí)施例12中所述。
[0563]圖12示出了 AEBSF對(i)DX_2911和(ii)M6_D09抗體的Biacore競爭分析，如本文實(shí)施例12中所述。[0564]圖13示出了 Biocore分析，顯示了 DX-2922結(jié)合到鍵合到高分子量激肽原(HMWK)的血漿前激肽釋放酶。
[0565]圖14示出了曲線圖，顯示了在大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的足跖水腫(CPE)中X101-A01對水腫的劑量依賴性抑制。
[0566]圖15示出了曲線圖，顯示了在大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的足跖水腫中腹膜內(nèi)施用DX-2930對水腫的劑量依賴性抑制。
[0567]圖16示出了曲線圖，顯示了在大鼠角叉菜膠誘導(dǎo)的足跖水腫中皮下施用DX-2930對水腫的劑量依賴性抑制。
[0568]圖17示出了曲線圖，顯示了對于藥代動力學(xué)評估在向SD大鼠IV和SC施用后的平均DX-2930血清濃度。
[0569]圖18示出了曲線圖，顯示了對于藥代動力學(xué)評估在向食蟹猴IV和SC施用后的平均DX-2930血清濃度。
【具體實(shí)施方式】[0570]定義
[0571]為了方便起見，在進(jìn)一步描述本發(fā)明前，在此定義用于說明書、實(shí)施例和所附權(quán)利要求書中的某些術(shù)語 。其他術(shù)語在它們出現(xiàn)在說明書中時定義。
[0572]除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式“一”、“一個/種”、“該/所述”也包括復(fù)數(shù)指代。
[0573]如本文所用的術(shù)語“激動劑”旨在表示模擬或上調(diào)(例如增強(qiáng)或補(bǔ)充)蛋白生物活性的藥劑。激動劑可以是野生型蛋白或其具有野生型蛋白至少一種生物活性的衍生物。激動劑還可以是增強(qiáng)蛋白的至少一種生物活性的化合物。激動劑也可以是增強(qiáng)多肽與另一種分子例如靶標(biāo)肽或核酸間相互作用的化合物。
[0574]如本文所用的“拈抗劑”旨在表示下調(diào)(例如壓抑或抑制)蛋白的至少一種生物活性的藥劑。拈抗劑可以是抑制或降低蛋白與另一種分子例如靶標(biāo)肽或酶底物之間相互作用的化合物。拈抗劑也可以是降低所存在的表達(dá)蛋白的量的化合物。
[0575]術(shù)語“抗體”是指包含至少一個免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域(可變區(qū))或免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域(可變區(qū))序列的蛋白。例如，抗體可包含重(H)鏈可變區(qū)(本文縮寫為VH或HV)和輕(L)鏈可變區(qū)(本文縮寫為VL或LV)。在另一個實(shí)例中，抗體包含兩個重(H)鏈可變區(qū)和兩個輕(L)鏈可變區(qū)。術(shù)語“抗體”涵蓋抗體的抗原結(jié)合片段(例如單鏈抗體、Fab和sFab片段、F(ab’)2、Fd片段、Fv片段、scFv和結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)片段(de Wildt等,Eur JImmunOl.1996 ；26(3):629-39))以及完整的抗體。抗體可具有 IgA、IgG、IgE、IgD、IgM(及其亞型)的結(jié)構(gòu)特征。抗體可以來自任何來源，但靈長類(人類和非人類靈長類)和靈長源為優(yōu)選的。
[0576]VH區(qū)和VL區(qū)可進(jìn)一步細(xì)分為與稱為“骨架區(qū)”(“FR”)的更保守區(qū)域交替的具有高變性的區(qū)域(稱為“互補(bǔ)決定區(qū)”(“CDR”))。骨架區(qū)和CDR的范圍已有定義(參見Kabat，Ε.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services, NIH 公開第 91-3242 號，以及 Chothia,C.等(1987) J.Mol.Biol.196:901-917)。Kabat定義用于本文。每個VH和VL通常由按以下順序從氨基末端排列到羧基末端的三個⑶R和四個FR組成:FR1、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、CDR3、FR4。
[0577]如本文所用，“免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列”是指可形成免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)的氨基酸序列，使得一個或多個CDR區(qū)處于適合抗原結(jié)合位點(diǎn)的構(gòu)象。例如，該序列可包含天然存在的可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列的全部或一部分。例如，該序列可省去一個、兩個或更多個N-或C-端氨基酸、內(nèi)部氨基酸，可包含一個或多個插入或附加末端氨基酸，或可包含其他改變。在一個實(shí)施方案中，包含免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列的多肽可與另一免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域序列相關(guān)以形成抗原結(jié)合位點(diǎn)，例如優(yōu)先地與血漿前激肽釋放酶相互作用的結(jié)構(gòu)。
[0578]抗體的VH或VL鏈還可包含重鏈或輕鏈恒定區(qū)的全部或一部分，從而分別形成免疫球蛋白重鏈或輕鏈。在一個實(shí)施方案中，抗體為兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋白輕鏈的四聚體，其中免疫球蛋白重鏈和輕鏈通過例如二硫鍵互連。在IgG中，重鏈恒定區(qū)包含三個免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域:CH1、CH2和CH3。輕鏈恒定區(qū)包含CL結(jié)構(gòu)域。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)通常介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子(包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(Clq))的結(jié)合。免疫球蛋白的輕鏈可具有κ或λ型。在一個實(shí)施方案中，抗體為糖基化的?？贵w可以為抗體依賴性細(xì)胞毒性和/或補(bǔ)體介導(dǎo)細(xì)胞毒性功能性的。 [0579]抗體的一個或多個區(qū)可以為人類的或有效地為人類的。例如，可變區(qū)的一個或多個可以為人類的或有效地為人類的。例如，⑶R的一個或多個可以為人類的，例如HC⑶R1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2 和 / 或 LC CDR3。輕鏈(LC)和 / 或重鏈(HC)CDR 的每一個可以為人類的。HC CDR3可以為人類的。骨架區(qū)的一個或多個可以為人類的，例如HC和/或LC的FR1、FR2、FR3和/或FR4。例如，F(xiàn)c區(qū)可以為人類的。在一個實(shí)施方案中，所有骨架區(qū)均為人類的，例如衍生自人類體細(xì)胞，例如產(chǎn)生免疫球蛋白的造血細(xì)胞或非造血細(xì)胞。在一個實(shí)施方案中，人類序列為種系序列，例如由種系核酸編碼的。在一個實(shí)施方案中，所選Fab的骨架區(qū)(FR)殘基可在許多相似的靈長類種系基因中特別是人類種系基因中轉(zhuǎn)化成相應(yīng)殘基的氨基酸型。恒定區(qū)的一個或多個可以為人類的或有效地為人類的。例如，免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的至少70、75、80、85、90、92、95、98或100%，恒定區(qū)，恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2、CH3和/或CL1)或整個抗體可以為人類的或有效地為人類的。
[0580]抗體的全部或一部分可由免疫球蛋白基因或其片段編碼。示例性人類免疫球蛋白基因包括 κ、λ、a (IgAl 和 IgA2)、y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε 和 μ 恒定區(qū)基因以及許多免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長免疫球蛋白“輕鏈”(約25KDa或約214個氨基酸)由NH2-末端的可變區(qū)基因(約110個氨基酸)和C00H-末端的κ或λ恒定區(qū)基因編碼。全長免疫球蛋白“重鏈”(約50KDa或約446個氨基酸)類似地由可變區(qū)基因(約116個氨基酸)和其他前述恒定區(qū)基因之一例如Y (編碼約330個氨基酸)編碼。人類HC的長度差異巨大，因?yàn)镠C⑶R3在約3個氨基酸殘基至超過約35個氨基酸殘基之間變化。
[0581]術(shù)語全長抗體的“抗原結(jié)合片段”是指保持特異性結(jié)合到所關(guān)注靶標(biāo)的能力的全長抗體的一個或多個片段。由術(shù)語全長抗體的“抗原結(jié)合片段”涵蓋并保持功能性的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，其為由VL、VH、CL和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab’)2片段，其為包含由鉸鏈區(qū)的二硫橋鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature341:544-546),其由VH結(jié)構(gòu)域組成；以及(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域VL和VH由單獨(dú)的基因編碼，但是它們可通過合成接頭使用重組方法而接合，所述合成接頭使得它們能夠成為單條蛋白鏈，其中VL和VH區(qū)配對形成稱為單鏈Fv(scFv)的單價分子。參見例如美國專利N0.5，260, 203,4, 946，778和4，881，175 ；Bird 等(1988) Science242:423-426 ；以及 Huston 等(1988) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883o
[0582]可使用任何合適的技術(shù)獲得抗體片段，包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)。術(shù)語“單特異性抗體”是指顯示出對特定靶標(biāo)例如表位的單一結(jié)合特異性和親和力的抗體。該術(shù)語包括“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”，如在本文所用其是指單分子組合物的抗體或其片段的制備物，而不論抗體如何生成。
[0583]抗體通過將骨架區(qū)中的一個或多個非種系氨基酸回到抗體的相應(yīng)種系氨基酸而為“種系化的”，只要結(jié)合性質(zhì)基本上得以保持即可。
[0584]抑制常數(shù)(Ki)提供抑制劑效力的度量；它是將酶活性降低一半所需的抑制劑濃度并且不依賴于酶或底物濃度。表觀Ki(Ki，app)在不同的底物濃度下通過測量不同濃度抑制劑(例如抑制性結(jié)合蛋白)對反應(yīng)程度(例如酶活性)的抑制作用而獲得；將隨著抑制劑濃度變化的擬一階速率常數(shù)的變化擬合到Morrison公式(公式1)得出表觀Ki估計值。Ki通過從Ki，app與底物濃度的圖線的線性回歸分析提取的y_截距獲得。
【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)合人類血漿前激肽釋放酶的活性形式的抗體或其功能片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含來自X115-F02的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的三個⑶R區(qū)和/或來自X115-F02的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的三個CDR區(qū)，或者其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含來自X124-G01的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的三個⑶R區(qū)和/或來自X124-G01的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的三個⑶R區(qū)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含X115-F02的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或所述輕鏈可變區(qū)包含X115-F02的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含X124-G01的所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域，和/或所述輕鏈可變區(qū)包含X124-G01的所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其功能片段，其中所述抗體或其功能片段結(jié)合并抑制血漿前激肽釋放酶。
5.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體。
6.一種治療或預(yù)防受試者的血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥的方法，所述方法包括:向所述受試者施用權(quán)利要求1的抗體或其抗原結(jié)合片段。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法， 其中所述血漿前激肽釋放酶相關(guān)病癥選自:水腫、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、腸道疾病、口腔粘膜炎、神經(jīng)性疼痛、炎性疼痛、椎管狹窄-退行性脊柱疾病、動脈或靜脈血栓形成、術(shù)后腸梗阻、主動脈瘤、骨關(guān)節(jié)炎、脈管炎、遺傳性血管性水腫、腦水腫、肺栓塞、中風(fēng)、心室輔助裝置或支架上的凝結(jié)、頭部外傷或瘤周腦水腫、敗血病、急性大腦中動脈(MCA)缺血事件(中風(fēng))、再狹窄(例如血管成形術(shù)后)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡性腎炎和燒傷。
8.—種檢測受試者中血漿前激肽釋放酶的方法，所述方法包括:向受試者施用權(quán)利要求1的抗體或其抗原結(jié)合片段；以及檢測所述受試者中所述蛋白與所述血漿前激肽釋放酶之間若存在的相互作用。
【文檔編號】C07K16/36GK103635489SQ201280011286
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2012年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2011年1月6日
【發(fā)明者】D·J·塞克斯頓 申請人:戴埃克斯有限公司