診斷和治療多發(fā)性硬化癥的方式和方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種包含SEQ?ID?NO:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基、或者由SEQ?ID?NO:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的肽或相應(yīng)的肽模擬物，條件是所述肽不由SEQ?ID?NO:3中示出的序列構(gòu)成，其中所述肽或肽模擬物結(jié)合至來自患者的樣本中包含的抗-KIR4.1抗體，所述患者具有多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)，其中優(yōu)選（i）所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基是KIR4.1胞外域的子序列，所述胞外域由SEQ?ID?NO:1或2中示出的序列構(gòu)成；或（ii）所述肽包含SEQ?ID?NO:1或2的序列或由SEQ?ID?NO:1或2的序列構(gòu)成。本發(fā)明另外涉及一種用于診斷主體中多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)的方法，所述方法包括測定獲自所述主體的樣本中抗-KIR4.1抗體的存在，其中所述樣本中抗-KIR4.1抗體的存在指示多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。還提供了用于多發(fā)性硬化癥治療的新方式和方法。
【專利說明】診斷和治療多發(fā)性硬化癥的方式和方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種包含SEQ ID NO:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基、或者由SEQ ID NO: 3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的肽或相應(yīng)的肽模擬物(peptidomimetic),條件是所述肽不由SEQ ID NO: 3中示出的序列構(gòu)成，其中所述肽或肽模擬物結(jié)合至患者樣本中包含的抗-KIR4.1抗體，所述患者患有多發(fā)性硬化癥或具有多發(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)，其中優(yōu)選(i)所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基是KIR4.1胞外域(胞外結(jié)構(gòu)域，extracellular domain)的子序列(亞序列),所述胞外域由SEQ ID N0:1或2中示出的序列構(gòu)成；或(^)所述肽包含SEQ ID NO: 1或2的序列或由SEQ ID NO: 1或2的序列構(gòu)成。本發(fā)明另外涉及一種用于診斷主體中多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)的方法，所述方法包括測定獲自所述主體的樣本中抗-KIR4.1抗體的存在，其中所述樣本中抗-KIR4.1抗體的存在指示多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。 【背景技術(shù)】
[0002]在本說明書中，引用了許多文獻(xiàn)，包括專利公開和制造商的手冊。這些文獻(xiàn)的公開內(nèi)容，盡管不考慮對本發(fā)明的專利性相關(guān)，但都以其全文結(jié)合于本文中作為參考。更特別地，引用的所有文件都以相同程度結(jié)合于本文中作為參考，就如同每個單獨(dú)的文獻(xiàn)專門而各個指出結(jié)合到本文中作為參考。
[0003]多發(fā)性硬化癥(MS)是導(dǎo)致絕大多數(shù)受病患者殘疾的最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)慢性炎癥性疾病(1)。MS的病因未知，但流行病學(xué)證據(jù)表明是遺傳和環(huán)境因素之間的復(fù)雜相互作用(2-4)。各個患者結(jié)局的不確定性致病機(jī)理、臨床異質(zhì)性和不可預(yù)測性增加了這種疾病的復(fù)雜性(5)。
[0004]MS發(fā)病機(jī)理目前正在流行的假說認(rèn)為，自身反應(yīng)性T細(xì)胞發(fā)揮了核心作用(6)。然而，組織病理學(xué)的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一部分MS患者在急性脫髓鞘病灶中表現(xiàn)出顯著沉積免疫球蛋白和補(bǔ)體激活(7，8)。這些患者對治療性血漿交換的反應(yīng)尤其好(9)。此外，治療性單克隆抗體的B-細(xì)胞耗竭在MS中對發(fā)炎活性有著突出的影響(10)。所有這些發(fā)現(xiàn)都支持的論點(diǎn)是，至少在一部分(subset，亞群)MS患者中B細(xì)胞和抗體大大有助于此病的發(fā)生和發(fā)展(11，12)。盡管存在這樣的間接證據(jù)，然而MS中臨床上相關(guān)抗體的直接證據(jù)還尚未建立，這是因?yàn)镸S中體液反應(yīng)的特異性分子靶標(biāo)仍未被發(fā)現(xiàn)的事實(shí)。
[0005]可以看出，在提供診斷和/或治療多發(fā)性硬化癥的替代或改進(jìn)方式(means)和方法中還存在技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明在第一方面中提供了一種包含SEQ ID N0:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基、或者由SEQ ID NO:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的肽或相應(yīng)的肽模擬物(peptidomimetic),條件是所述肽不由SEQ ID NO: 3中示出的序列構(gòu)成，其中所述肽或肽模擬物結(jié)合至患者樣本中包含的抗-KIR4.1抗體，所述患者患有多發(fā)性硬化癥或具有多發(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)，其中優(yōu)選(i)所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基是KIR4.1胞外域(胞外結(jié)構(gòu)域)的子序列(亞序列)，所述胞外域由SEQ ID N0:1或2中示出的序列構(gòu)成；或(ii)所述肽包含SEQ ID NO: 1或2的序列或由SEQ ID N0:1或2的序列構(gòu)成。因此，也優(yōu)選對應(yīng)于根據(jù)選項(xiàng)(i)和(ii)的所述肽的肽模擬物。也優(yōu)選所述肽并不包含SEQ IDNO:3的序列。
[0007]“KIR4.1” 是特異性內(nèi)向整流鉀通道(specific inward rectifying potassiumchannel)的簡寫名稱。優(yōu)選所述KIR4.1是人源性的。人KIR4.1的序列提供于SEQ ID NO: 3中。術(shù)語“人KIR4.1蛋白的序列”和“SEQ ID N0:3的序列”，在本文中用于表征相同的實(shí)體(物質(zhì)，entity)。
[0008]所引述的抗-KIR4.1抗體也稱為根據(jù)本發(fā)明的“自身抗體”。所述自身抗體是天然存在的抗體且優(yōu)選是IgG抗體。特別地，所述自身抗體是在MS患者和具有發(fā)展MS的易患病體質(zhì)的主體中出現(xiàn)而區(qū)別于任何所述患者或主體中未出現(xiàn)的其它抗-KIR4.1抗體的抗KIR4.1抗體以及可以適用于如本文中以下公開的治療目的的其它抗體。后者類型的抗-KIR4.1抗體并不是天然存在的，且不是所述疾病的指示。所述自身抗體優(yōu)選結(jié)合至KIR4.1的胞外域,所述胞外域由示出于SEQ ID N0:1或2的序列構(gòu)成。優(yōu)選所述自身抗體結(jié)合至由示出于SEQ ID N0:1的序列構(gòu)成的胞外域。[0009]序列SEQ ID NO: 1和2的優(yōu)選子序列分別是SEQ ID NO:4和5的序列。所述序列SEQ ID N0:4和5預(yù)期全部是胞外的。因此，也優(yōu)選所述肽包含SEQ ID N0:4或5的序列或由SEQ ID N0:4或5的序列構(gòu)成。此外，對應(yīng)于后者肽的肽模擬物被有意地考慮在內(nèi)。
[0010]盡管優(yōu)選具有以下序列，其包含SEQ ID NO: 1、2、4或5任一個的序列或由SEQ IDNO: 1、2、4或5任一個的序列構(gòu)成，但是還設(shè)想進(jìn)一步的肽序列，其中所述肽序列可能僅僅部分或根本不會與SEQ ID N0:l、2、4和5任何之一的序列重疊。為了進(jìn)一步解釋說明，而正如本領(lǐng)域中所知，T-細(xì)胞和B-細(xì)胞在給定的抗原中可以具有不同的表位偏好(epitopepreference)。
[0011]術(shù)語“肽”是指氨基酸的縮聚物。優(yōu)選所述氨基酸選自20種天然的氨基酸。根據(jù)本發(fā)明的肽具有的長度為至少8個氨基酸殘基。所述肽長度的優(yōu)選上限是100、50、40、30、25、20、15、14、13、12、11、10或9個氨基酸殘基而以其最廣泛的形式，沒有長度上限而因此包括任何長度的多肽。優(yōu)選所述肽的長度經(jīng)過選擇而使之是獨(dú)特的(unique)。正如下文詳述，所述長度優(yōu)選經(jīng)過選擇而使所述肽能夠結(jié)合至MHC分子。特別地，MHC I分子已知一般會對能夠結(jié)合至其上的肽施加一定的尺寸限制。因此，優(yōu)選的長度和長度范圍為8~12、8~10個，而最優(yōu)選9個氨基酸。在另一方面MHC II分子一般也能夠結(jié)合更大長度的肽而因此不會對根據(jù)本發(fā)明的肽長度施加上限。
[0012]術(shù)語“肽模擬物”在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的。其是指肽的衍生物，所述衍生物另外在以下結(jié)構(gòu)術(shù)語中進(jìn)行定義?！跋鄳?yīng)的肽模擬物”是結(jié)合至所引述抗體的肽模擬物。這樣的結(jié)合可以通過保持其由之衍生的所述肽的每一組成氨基酸的結(jié)構(gòu)特性而實(shí)現(xiàn)，這種親本肽也結(jié)合至所引述的抗體。在一個優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基每一側(cè)鏈以修飾(改性，modify)或未修飾形式保留于所述相應(yīng)的肽模擬物中。側(cè)鏈修飾包括一個或多個氫原子用鹵原子，優(yōu)選F原子取代。進(jìn)一步優(yōu)選的側(cè)鏈修飾包括環(huán)化。與其獨(dú)立的是，一個或多個主鏈肽鍵可以獨(dú)立地用電子等排體或換句話說模擬肽鍵的官能團(tuán)取代。優(yōu)選妝鍵 _CO_NH 可以用 _NH_CO_、_CH_ (OH) _CH2_、_C0_CH2_、_CH2_NH_、_CH2_0_、_CH2_CH2-、-CH=CH-、-⑶-N(CH3)-和F 02-X-中任意之一取代，X優(yōu)先選自NH、0和CH2。作為一個實(shí)例，在相應(yīng)的肽模擬物中，親本肽(parent peptide)的所有肽鍵可以用反轉(zhuǎn)-變型鍵(retro-1nverso bonds) (-NH-C0-)替代。
[0013]應(yīng)理解，所述親本肽功能上基本上不變的特性對本發(fā)明的肽模擬物是固有的。特別地，相應(yīng)的肽模擬物結(jié)合至包含于患有多發(fā)性硬化癥的患者的樣本之中的抗-KIR4.1抗體。這種結(jié)合無需再費(fèi)周折就能使用本文中所述的方式和方法進(jìn)行評價(jià)。
[0014]應(yīng)理解，本發(fā)明的第一方面，一方面涉及一種肽而在替代方案中涉及一種肽模擬物。而具體放棄(disclaimer)從所述肽的定義中去除了由示出于SEQ ID N0:3中的序列所構(gòu)成的氨基酸序列。換句話說，第一方面涉及(a)—種肽，包含或由示出于SEQ ID NO:3中的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成，條件是所述肽不由示出于SEQ ID N0:3中的序列構(gòu)成，或(b )相應(yīng)的肽模擬物，其中所述肽或肽模擬物結(jié)合至包含于患者樣本之中的抗-KIR4.1抗體，所述患者患有多發(fā)性硬化癥或具有對其的易患病體質(zhì)，其中優(yōu)選(i)所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基是KIR4.1胞外域的子序列，所述胞外域由示出于SEQ ID N0:1或2的序列構(gòu)成；或(^)所述肽包含或由SEQ ID NO: 1或2的序列構(gòu)成。
[0015]根據(jù)本發(fā)明的肽或肽模擬物結(jié)合至抗-KIR4.1抗體，其中所述抗-KIR4.1抗體包含于多發(fā)性硬化癥(MS)患者或具有發(fā)展MS的易患病體質(zhì)的患者樣本之中。正如下文詳述，本發(fā)明提供了檢測MS患者是否攜帶抗KIR4.1自身抗體以及從MS患者分離出這種抗體的各種方式(裝置，means)和方法。所述方式包括本文中統(tǒng)稱為“受體”的試劑。根據(jù)本發(fā)明分離出自身抗體的方法包括使所述受體接觸獲自主體的樣本的步驟，所述樣本被懷疑含有抗-KIR4.1抗體。使用獲自MS患者的這種抗KIR4.1抗體，技術(shù)人員不用再費(fèi)周折(withoutfurther ado)就能確定包含或由KIR4.1的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的肽或相應(yīng)肽模擬物能否結(jié)合至所述抗體。技術(shù)人員能夠使用的優(yōu)選方式是ELISA分析。在這種分析中，根據(jù)主要實(shí)施方式的肽或肽模擬物固定于載體上，MS患者或具有對MS的易患病體質(zhì)的主體的自身抗體容許結(jié)合所述肽或肽模擬物，而所述結(jié)合通過繼而進(jìn)行酶聯(lián)的二級抗體(二抗,secondary antibody)的方式進(jìn)行檢測。所述二級抗體，例如，可以是能夠結(jié)合Fc片段的抗體，因此將會結(jié)合所述自身抗體的Fc部分。
[0016]與上述內(nèi)容有關(guān)的是，本發(fā)明另外提供了可獲自多發(fā)性硬化癥患者或具有發(fā)展MS的易患病體質(zhì)的主體的抗-KIR4.1抗體。這是如上文所定義的自身抗體。
[0017]正如在隨附的實(shí)施例中更詳細(xì)描述的，至少兩個胞外域存在于KIR4.1中。兩個胞外域也稱為大胞外域和小胞外域。指示多發(fā)性硬化癥的抗-KIR4.1抗體優(yōu)選結(jié)合至大胞外域、小胞外域或這兩者胞外域。KIR4.1大小胞外域的序列分別提供于SEQ ID NO: 1和2中。其嚴(yán)格胞外部分分別提供于SEQ ID N0:4和5中。
[0018]術(shù)語“多發(fā)性硬化癥”是指影響神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性疾病；也參見以上【背景技術(shù)】部分中引用的文獻(xiàn)。主體或患者是否患有多發(fā)性硬化癥都可以采用根據(jù)本發(fā)明的診斷方法進(jìn)行確定，這是本發(fā)明的第二方面，并在以下進(jìn)一步描述。可替換地或此外，多發(fā)性硬化癥的診斷能夠以確認(rèn)的臨床癥狀為基礎(chǔ)而建立，所述臨床癥狀對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的。多發(fā)性硬化癥的臨床癥狀包括視力問題、頭暈、眩暈、感覺障礙、無力、協(xié)調(diào)問題、失去平衡、疲勞、疼痛、神經(jīng)認(rèn)知缺陷、心理健康缺陷、膀胱功能障礙、腸道功能障礙、性功能障礙、熱敏感。
[0019]雖然在取自患者或主體的樣本中檢測到抗-KIR4.1自身抗體指示多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)，但必須理解到，多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)其特征并不一定在于所述自身抗體存在于所述主體或患者或由其取得的樣本中。
[0020]因此，抗-KIR4.1自身抗體的存在限定了具有發(fā)展MS的易患病體質(zhì)的個體的亞群，所述亞群的特征在于其具有所述自身抗體。同樣，本文公開了 MS患者的亞群，所述亞群的特征在于其具有所述自身抗體。換句話說，自身抗體的存在限定了多發(fā)性硬化癥指示之中的子指示(次級指示，sub-1ndication)。據(jù)預(yù)期，表現(xiàn)出這種MS子指示的患者，當(dāng)相比于并沒有所述自身抗體的MS患者時，對治療會反應(yīng)不同。同樣，據(jù)預(yù)期，具有所述自身抗體的主體的風(fēng)險(xiǎn)分布(risk profile)不同于并不具有所述自身抗體的主體的風(fēng)險(xiǎn)分布。因此，不同的治愈性治療(curative treatment)以及不同的預(yù)防性治療可以分別根據(jù)MS患者是否含有自身抗體，和處于發(fā)展MS風(fēng)險(xiǎn)之中的主體是否具有所述自身抗體而進(jìn)行選擇。
[0021]術(shù)語“子序列”是指取自較大序列的一段連續(xù)氨基酸殘基。換句話說，如果所述較大序列由η個殘基構(gòu)成，則最大長度的子序列為(η-1)個殘基。
[0022]本發(fā)明另外提供了一種編碼上述根據(jù)本發(fā)明定義的肽的核酸。所述核酸可以是DNA，如cDNA或基因組DNA，或RNA。另外本發(fā)明還提供包含所述核酸的載體。此外，本發(fā)明涉及包含根據(jù)本發(fā)明的核酸和/或載體的宿主細(xì)胞。所述宿主細(xì)胞可以是任何來源，優(yōu)選體外，如分離的或培養(yǎng)的。雖然應(yīng)該指出的是人胚胎干細(xì)胞系可由本領(lǐng)域技術(shù)人員處理，但是優(yōu)選這種宿主細(xì)胞并不通過使用或破壞人胚胎而獲得。此外，優(yōu)選所述宿主細(xì)胞，在一定程度上它是一種胚胎細(xì)胞或胚胎干細(xì)胞，是非人的。
[0023]在第二方面中，本發(fā)明提供了一種用于診斷主體中多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)的方法，所述方法包括檢測獲自所述主體的樣本中抗-KIR4.1抗體的存在，其中所述樣本中抗-KIR4.1抗體的存在指示多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。
[0024]這種方法允許診斷多發(fā)性硬化癥，或在一定程度上多發(fā)性硬化癥在所述主體中并不顯現(xiàn)時，診斷對其的易患病體質(zhì)。術(shù)語“易患病體質(zhì)(predisposition)”具有本領(lǐng)域內(nèi)建立的意義而傾向于是指發(fā)展疾病的可能性。特別地，所述可能性比正常對照主體高。在正常對照主體中的所述可能性可以表示為群體隨機(jī)樣本中發(fā)展MS的平均可能性。
[0025] 檢測所述抗-KIR4.1抗體存在的合適試劑，以下將進(jìn)一步進(jìn)行描述，特別地是作為關(guān)于所公開的診斷組合物和診斷用途的活性試劑進(jìn)行描述。
[0026]對所述易患病體質(zhì)進(jìn)行檢測的優(yōu)選個體組是家族中具有MS病史的個體。
[0027]本發(fā)明人是第一個在MS中識別以前懷疑的自身免疫反應(yīng)的分子靶標(biāo)的人。值得注意的是，揭示MS中自身抗體的傳統(tǒng)策略主要集中于免疫球蛋白的血清學(xué)篩選，從而基于其與動物模型中髓磷脂生物學(xué)和致腦炎可能性的功能相關(guān)性的預(yù)選候選靶分子(13)。此外，大腸桿菌表達(dá)，噬菌體展示和肽文庫都進(jìn)行篩選而確定MS特異性自身抗體的線性靶標(biāo)(14-17)。兩種策略都還沒有產(chǎn)生可能是MS-特異性的或預(yù)后的任何潛在的靶標(biāo)(18，19)。
[0028]本發(fā)明人在50.8%的兩個獨(dú)立群組(隊(duì)列，cohort)的患者血清中檢測到高滴度的抗-KIR4.1抗體。因此，本文中所描述的方式和方法允許分別在大約一半的MS病例或處于發(fā)展這種疾病的風(fēng)險(xiǎn)之中的主體中診斷MS或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)。特別地，本發(fā)明的方法允許早期診斷MS或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)或?qū)Σ淮_定的診斷進(jìn)行確診。所述抗體測試可以允許無創(chuàng)傷性操作(如腦脊髓液分析)診斷CIS或MS，以及比本【技術(shù)領(lǐng)域】已知的診斷方法可能更早地診斷MS、CIS或?qū)S的易患病體質(zhì)?！癈IS”是指“臨床孤立綜合癥(clinicallyisolated syndrome)”,在下面進(jìn)一步討論。眾所周知的是,MS療法在患病期間盡可能早地開始治療時效果最好。因此，早期診斷可以允許實(shí)施CIS、MS或處于發(fā)展成這些疾病的風(fēng)險(xiǎn)之中的患者的早期治療。在處于風(fēng)險(xiǎn)中的一些個體中，治療甚至可以防止疾病的(進(jìn)一步)發(fā)展。
[0029]正如隨附的實(shí)施例所示，所述自身抗體可以通過抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)或補(bǔ)體激活作用來耗竭KIR4.1表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(圖6)。此外，所述抗體可以干擾鉀通道的功能導(dǎo)致離子緩沖和神經(jīng)遞質(zhì)穩(wěn)態(tài)的功能性后果(20，21，22)。這可以導(dǎo)致組織損傷或髓鞘再生受損。
[0030]在根據(jù)本發(fā)明的方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，假使抗-KIR4.1抗體存在于所述樣本中，則(i)所述主體中多發(fā)性硬化癥的至少一種臨床癥狀的存在指示多發(fā)性硬化癥；和
(ii)多發(fā)性硬化癥的任何臨床癥狀都不存在則指示對多發(fā)性硬化癥的所述易患病體質(zhì)。
[0031]正如上文所公開的，根據(jù)本發(fā)明的所述方法提供用于診斷多發(fā)性硬化癥以及用于診斷對其的易患病體質(zhì)。本優(yōu)選的實(shí)施方式提供了對于所述主體要采集的更多信息，所述進(jìn)一步的信息輔助疾病診斷和對其易患病體質(zhì)診斷之間的區(qū)分。特別地，所述進(jìn)一步的信息包含或由多發(fā)性硬化癥的至少一種臨床癥狀構(gòu)成。多發(fā)性硬化癥是具有已確認(rèn)的(established)臨床癥狀的眾所周知的疾病。技術(shù)人員對多發(fā)性硬化癥的特征性或指示性的臨床癥狀非常了解(也進(jìn)一步參見下文)并能夠毫不費(fèi)力地確定其存在或不存在。
[0032]根據(jù)本優(yōu)選的實(shí)施方式，多發(fā)性硬化癥的任何臨床癥狀都不存在，當(dāng)伴隨抗-KIR4.1抗體的存在一起發(fā)生時，就指示對多發(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。換句話說，在已經(jīng)確立的診斷或預(yù)后方法失敗的情況下，本發(fā)明允許識別出這些表現(xiàn)出在未來某些(時間)點(diǎn)發(fā)展多發(fā)性硬化癥的風(fēng)險(xiǎn)升高的主體。
[0033]另一方面，在存在多發(fā)性硬化癥的至少一種臨床癥狀的主體中，抗-KIR4.1抗體的檢測進(jìn)一步證實(shí)多發(fā)性硬化癥的診斷。在這些單靠臨床參數(shù)不容許明確診斷的情況下，本發(fā)明輔助進(jìn)行和證實(shí)所述診斷。這特別地適用于多發(fā)性硬化癥的早期形式。正如在本【技術(shù)領(lǐng)域】眾所周知的是，多發(fā)性硬化癥的早期診斷是非常合乎需要的，因?yàn)樵缙陔A段通常更順從于治療。
[0034]根據(jù)進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方式，所述臨床癥狀是選自視力問題、頭暈、眩暈、感覺障礙、無力、協(xié)調(diào)問題、失去平衡、疲勞、疼痛、神經(jīng)認(rèn)知缺陷、心理健康缺陷、膀胱功能障礙、腸道功能障礙、性功能障礙、熱敏感、腦脊髓液(CSF)中炎癥標(biāo)記物的存在、大腦和/或脊髓中病變的存在中的至少一種。所提到的病變可以在MRT圖像中檢測。通常情況下，這種病變發(fā)生于腦室周圍(室周)、近皮層和/或大腦的幕下區(qū)域(infratentorial region)。指示MS的炎癥標(biāo)記物在本領(lǐng)域內(nèi)是眾所周知的，而優(yōu)先選自腦脊液細(xì)胞異常增多(在CSF中細(xì)胞數(shù)異常增加，其中增加的細(xì)胞數(shù)典型值為5~50個細(xì)胞/ μ L或更多)、鞘內(nèi)IgG合成和CSF中寡克隆IgG區(qū)帶(oligoclonal IgG bend)的出現(xiàn)。
[0035]根據(jù)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，所述主體具有臨床孤立綜合癥(CIS)，或所述至少一種臨床癥狀是CIS。CIS在本領(lǐng)域中通常認(rèn)為是MS的早期階段，其中后者的特征性臨床參數(shù)尚未完全開發(fā)。對于CIS的討論，請參閱，例如，文獻(xiàn)Thrower, Neurology68,S12-S15(2007)。根據(jù)本發(fā)明的方式和方法優(yōu)點(diǎn)在于它們?nèi)菰S對那些具有CIS的患者進(jìn)一步收集證據(jù)。
[0036]根據(jù)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，所述抗-KIR4.1抗體，即，可能出現(xiàn)于MS患者以及處于發(fā)展MS風(fēng)險(xiǎn)之中的主體中的抗-KIR4.1抗體，結(jié)合至KIR4.1 (SEQ ID N0:3)或由示出于SEQ ID NO: 1、2、4或5任何一個中的序列構(gòu)成的KIR4.1的胞外域。KIR4.1結(jié)構(gòu)進(jìn)一步在隨之附上的實(shí)施例中描述。特別地，它包含(至少)兩個胞外域，據(jù)估計(jì)其由一個跨膜段(transmembrane spanning segment)分離；請參閱圖4c。這兩個胞外域在本文中也稱為大胞外域和小胞外域，并示出于SEQ ID N0:1和2中。在圖4 (c)中所示的殘基范圍分別是SEQ ID N0:4和5的殘基范圍。 [0037]在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述樣本中抗-KIR4.1抗體的檢測通過選自由ELISA法、免疫沉淀法、蛋白免疫印跡法、免疫熒光法、免疫組織化學(xué)法、流式細(xì)胞術(shù)、金屬免疫分析法(如GLORIA)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)分析法和質(zhì)譜法組成的組中的方法完成。這些方法是完善的且可由技術(shù)人員實(shí)施。例如，在ELISA分析中，也可以使用結(jié)合至所述抗-KIR4.1抗體的抗體。類似的考慮也適用于免疫沉淀、蛋白免疫印跡法、免疫熒光法和免疫組化法。如上所述，技術(shù)人員，當(dāng)提供有本發(fā)明的教導(dǎo)時，可以不用再費(fèi)周折地分離和表征抗-KIR4.1抗體。這種表征優(yōu)選使用質(zhì)譜。一旦進(jìn)行表征，質(zhì)譜就可以用于檢測任何給定樣本中抗-KIR4.1抗體的存在或不存在。FRET分析可用于，例如，結(jié)合(binding assay)測定的情況中，所述結(jié)合測定優(yōu)選利用受體，所述受體在下面進(jìn)一步定義。這種FRET分析可以如此設(shè)計(jì)而使所述FRET對的供體和受體之間的可檢測轉(zhuǎn)移只發(fā)生于受體和抗-KIR4.1抗體緊密的特別接近(close special proximity)的情況下，所述緊密的特別接近指示抗-KIR4.1抗體的存在。
[0038]在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中,所述抗-KIR4.1抗體的存在通過以下步驟檢測:(a)將所述樣本與結(jié)合至所述抗-KIR4.1抗體的受體接觸；和(b)檢測受體-抗-KIR4.1抗體復(fù)合物的形成，其中所述受體優(yōu)先選自由根據(jù)本發(fā)明的肽或肽模擬物、KIR4.1蛋白(SEQ ID勵:3)和結(jié)合至所述抗-1(11?4.1抗體的抗體組成的組。正如以下進(jìn)一步的描述，制備抗給定抗體的抗體(包括抗體)的方式和方法可被技術(shù)人員利用。
[0039]盡管以前的優(yōu)選實(shí)施方式提供了不同的讀出方式(readout scheme),本優(yōu)選實(shí)施方式提供了用于檢測抗-KIR4.1抗體的特異性方式，所述特異性方式特征在于結(jié)構(gòu)方面。因此，這些優(yōu)選的實(shí)施方式-以及任何本文中公開的其它實(shí)施方式-如果沒有另外指出則適合進(jìn)行組合，任何所述組合都是根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式的主題。在一個優(yōu)選的分析法中，KIR4.1蛋白表達(dá)于細(xì)胞中，所述細(xì)胞用血清培養(yǎng)，而所述自身抗體結(jié)合至KIR4.1蛋白通過流式細(xì)胞儀或使用二級抗體的免疫組織化學(xué)法的方式進(jìn)行檢測。正如上文所述，所述二級抗體優(yōu)選結(jié)合至所述自身抗體，例如通過結(jié)合至其Fc部分。隨之附上的實(shí)施例中描述了進(jìn)一步的優(yōu)選分析方法。
[0040]所引述的受體的優(yōu)選實(shí)施方式是根據(jù)本發(fā)明的一種肽或肽模擬物和結(jié)合至所述抗-KIR4.1抗體的抗體。在這兩種情況下，另外優(yōu)選所述受體對所述抗-KIR4.1抗體是特異性的。能夠在對比或競爭試驗(yàn)中檢測特異性，其中要檢測所述受體一方面對所述抗-KIR4.1抗體，以及對其它蛋白，結(jié)合蛋白或抗體的結(jié)合。優(yōu)選所述受體對所述自身抗體的結(jié)合常數(shù)(Kd)比對其它測試的蛋白低至少一個數(shù)量級，優(yōu)選至少2個、3個、4個、5個或6個數(shù)量級?！皵?shù)量級”是10的指數(shù)(factor)。
[0041]本文中所公開的治療或診斷抗體可以是單克隆或多克隆抗體。另外，特別地在本文中公開的診斷和治療抗體的上下文中，術(shù)語“抗體”另外包括特異性結(jié)合至各自的靶標(biāo)的單鏈抗體或其片段，以及雙特異性抗體、合成抗體，抗體片段如Fab、F (ab2) '、Fv和scFv片段等及其化學(xué)修飾的衍生物。
[0042]單克隆抗體能夠，例如，通過最初在文獻(xiàn)K0h丨er and Milstein,Nature256 (1975)，495，和 Galfre, Meth.Enzymol.73(1981) ,3 中描述的技術(shù)進(jìn)行制備，其包括將小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合至衍生于含有現(xiàn)有技術(shù)開發(fā)的修飾的免疫哺乳動物的脾細(xì)胞中。另外，對上述肽的抗體或其片段使用，例如，文獻(xiàn)Harlow and Lane〃Antibodies, ALaboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988 中描述的方法就能夠獲得。當(dāng)所述抗體的衍生物通過該噬菌體展示技術(shù)獲得時，能夠使用BIAcore系統(tǒng)中采用的表面等離子體共振增加結(jié)合至本發(fā)明的肽或多肽的表位的曬菌體抗體的效率(Schier, HumanAntibodies Hybridomas7(1996), 97-105 ；Malmborg, J.1mmunol.Methodsl83(1995),7-13)。嵌合抗體的制備，例如，描述于W089/09622中。根據(jù)本發(fā)明要利用的進(jìn)一步的抗體源就是所謂的異種抗體(異源抗體，xenogenic antibody)。生產(chǎn)異種抗體如小鼠中人抗體的一般原理描述于，例如，W091/10741, W094/02602, W096/34096 和 W096/33735 中。根據(jù)本發(fā)明要采用的抗體或其相應(yīng)的免疫球蛋白鏈能夠使用本領(lǐng)域中已知的常規(guī)技術(shù)，例如，通過使用氨基酸缺失、插入、取代、增加和/或重組和/或現(xiàn)有技術(shù)中已知的任何其它單獨(dú)和/或組合的修飾法進(jìn)行進(jìn)一步修飾(改性)。在構(gòu)成免疫球蛋白鏈氨基酸序列基礎(chǔ)的所述DNA序列中引入這種修飾的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是眾所周知的；參見，例如，文獻(xiàn)Sambrook，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor, NY, 19890
[0043]術(shù)語“單克隆”或“多克隆抗體”(參見Harlow and Lane, (1988)，引文同上)也涉及所述保留或基本上保留其結(jié)合特異性的抗體的衍生物。盡管所述衍生物特別優(yōu)選的實(shí)施方式將在本文以下進(jìn)一步進(jìn)行說明，但是這種抗體的其它優(yōu)選衍生物是包含例如小鼠或大鼠的可變區(qū)和人恒定區(qū)的嵌合抗體。
[0044]術(shù)語“scFv片段”(單鏈Fv片段)在本領(lǐng)域內(nèi)是充分理解的并由于其尺寸小和重組生產(chǎn)這種片段的可能性而是優(yōu)選的。
[0045]在本發(fā)明所述方法尤其優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述抗體或抗體結(jié)合部分是或源自人抗體或人源化抗體。術(shù)語“人源化抗體”是指，按照本發(fā)明，非人源的抗體，其中可變區(qū)中的至少一個互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)如⑶R3而優(yōu)選所有6個⑶R已被具有所需特異性的人源抗體的CDR取代。可選地，所述抗體的非人恒定區(qū)已經(jīng)被人抗體的恒定區(qū)取代。用于生產(chǎn)人源化抗體的方法描述于，例如，EP-A10239400和W090/07861中。
[0046]在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述樣本選自血液、血清、血衆(zhòng)、淋巴節(jié)、CSF、淚液、尿、痰(唾液，sputum)和腦活檢組織(brain biopsy)。
[0047]在第三個方面中，本發(fā)明提供了以上定義而適用于治療多發(fā)性硬化癥或診斷多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)的受體。本文中以上定義的受體以及整個KIR4.1蛋白(SP，由示出于SEQ ID N0:3中的序列構(gòu)成的蛋白)設(shè)想適用于這些醫(yī)藥用途。這些試劑的給予適用于減少循環(huán)(circulating)抗-KIR4.1抗體的數(shù)量。正如將在下面更詳細(xì)的描述，這些試劑不僅可以向遭受MS的患者或具有或懷疑具有對其的易患病體質(zhì)的主體給予，而且也可以用于離體(離體回輸，ex vivo)方法，所述離體方法提供用于從MS患者，或更特別地，從所述患者或處于發(fā)展MS的風(fēng)險(xiǎn)之中的主體的體液中去除自身抗體。
[0048]術(shù)語“治療”是指通過療法治療并包括疾病和/或其癥狀的改善以及完全緩解。另外，術(shù)語“治療”延伸到預(yù)防。
[0049]在根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥用途的優(yōu)選實(shí)施方式中，一種或多種所引述的試劑是要使用的唯一活性劑。在替代的優(yōu)選實(shí)施方式中，一種或多種所述明確引述的試劑可以結(jié)合一種或多種已知對MS患者有益的或輔助MS診斷的試劑一起使用。到現(xiàn)在為止，通過給予以下一種或多種試劑能夠預(yù)防或緩解MS發(fā)展或防止復(fù)發(fā):干擾素β、醋酸格拉替雷、那他珠單抗、米托蒽醌、芬戈莫德、硫唑嘌呤。復(fù)發(fā)采用高劑量的甲基強(qiáng)的松龍和/或血漿置換療法進(jìn)行治療。
[0050]在優(yōu)選的實(shí)施方式，所述受體要接觸主體的血液、血清、血漿、淋巴節(jié)、CSF、淚液、尿、痰和/或腦活檢組織。此實(shí)施方式是指要在診斷中使用的優(yōu)選樣本。
[0051]在本發(fā)明第三方面的進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述第三方面涉及療法的程度上，受體將給予患者至少兩次。多次給予提供高程度的去除，優(yōu)選完全去除自身抗體而實(shí)際上改善或緩解所述疾病。
[0052]在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，所述肽可以如此選擇而使其結(jié)合至要治療患者的MHC等位基因。所述MHC分子可以是MHC I類或II類分子。為了確保結(jié)合至MHC I類分子，優(yōu)選所述肽由8~12,優(yōu)選8~10,最優(yōu)選9個氨基酸構(gòu)成。另外,優(yōu)選存在錨定氨基酸殘基，所述錨定氨基酸殘基是已知參與MHC結(jié)合的殘基。選擇SEQ ID N0:1和2中合適的肽序列充分屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員的技能范疇。例如，文獻(xiàn)Rammensee et al.(Immunogenetics,41:178-228,1995)描述了包括MHC結(jié)合肽的錨定氨基酸的特性。在MHC上下文中提出的所述肽在治療或預(yù)防MS中容許靶向其它或替換`的機(jī)理。更特別地，它允許驅(qū)動KIR4.1特異性的T細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞凋亡，從而降低或消除對內(nèi)源性KIR4.1蛋白的自身免疫反應(yīng)。在還有進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方式中，提供了適用于治療多發(fā)性硬化癥的MHC-肽復(fù)合物。特別優(yōu)選的用途是諸如MHC四聚體的MHC多聚體，其中優(yōu)選每個MHC分子具有根據(jù)本發(fā)明結(jié)合的一種肽或肽模擬物。優(yōu)選所述肽或肽模擬物對于所述多聚體或四聚體的所有MHC分子是相同的。正如本領(lǐng)域中是已知的，四聚體的形成可以通過使用生物素化的MHC分子獲得。MHC分子的羧基末端是生物素化的優(yōu)選靶標(biāo)。當(dāng)用鏈霉素培養(yǎng)時，因?yàn)殒溍顾鼐哂兴膫€生物素結(jié)合位點(diǎn)而形成四聚體。這種多聚體或四聚體以特別高的親合力結(jié)合抗原特異性T細(xì)胞受體。因此，使用多聚體，優(yōu)選結(jié)合MHC分子的肽四聚體容許識別和另外失活KIR4.1-特異性T細(xì)胞。
[0053]此外，而不受具體理論的束縛，據(jù)設(shè)想，給予根據(jù)本發(fā)明的肽或肽模擬物容許脫敏負(fù)責(zé)所述疾病的T細(xì)胞和B細(xì)胞。在這方面，所述肽或肽模擬物的一個或多個位置，所述位置與T細(xì)胞受體相互作用，可以為了微調(diào)所述肽或肽模擬物的T-細(xì)胞受體相互作用的目的而進(jìn)行改性(修飾)。對其修飾的這種位置和方法在本領(lǐng)域是公知的；參見，例如，文獻(xiàn)Kappos et al., Nature Med.6,1176-1182(2000)。
[0054]換句話說，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)KIR4.1耐受的方式和方法。術(shù)語“耐受”具有本領(lǐng)域內(nèi)所建立的含義，并指免疫系統(tǒng)對給定抗原的非反應(yīng)性。通常情況下，存在關(guān)于自身抗原的耐受性。在缺乏自身抗原的耐受性情況下，可以產(chǎn)生自身抗體并可能出現(xiàn)自身免疫性疾病。這由本發(fā)明的公開內(nèi)容是顯而易見的，多發(fā)性硬化癥具有自身免疫性疾病的特點(diǎn)。為了減少或消除抗KIR4.1蛋白的自身抗體的產(chǎn)生，誘導(dǎo)耐受性或脫敏(desensitisation)是優(yōu)選的方法之一。所設(shè)想的效果是建立關(guān)于KIR4.1的自身耐受性。由于耐受性是抗原依賴性的作用，它可以存在于B細(xì)胞、T細(xì)胞或同時存在于B細(xì)胞和T細(xì)胞中。耐受性的現(xiàn)象，以及諸如導(dǎo)致B細(xì)胞和T細(xì)胞耐受性的機(jī)理在本領(lǐng)域中是已知的。
[0055]在第四方面中，本發(fā)明提供了適用于治療多發(fā)性硬化癥而結(jié)合至KIR4.1 (SEQ IDN0:3)或KIR4.1胞外域的抗體，所述域由示出于SEQ ID NO: 1或2中的序列構(gòu)成，而所述抗體干擾包含于患者樣本之中的抗-KIR4.1抗體結(jié)合至KIR4.1，所述患者患有多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)。
[0056]優(yōu)選，所述結(jié)合至KIR4.1胞外域的抗體對其是特異性的。檢測抗體特異性的方式和方法可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用且如上文所描述的。特別優(yōu)選的是，在療法中可以使用的上述抗體能夠結(jié)合至通過任何自身抗體無法識別的表位(epitope)。在這方面,應(yīng)該指出，表位作圖(表位定位，epitope mapping)的方式和方法可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用。通過選擇適當(dāng)?shù)谋砦?，上述提到的功能性要求，即，干擾自身抗體的結(jié)合，就可以得到保證。另外優(yōu)選治療性抗體的結(jié)合沒有干擾或沒有顯著干擾KIR4.1的生化或細(xì)胞功能。KIR4.1已知參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的水和鉀離子的穩(wěn)態(tài)。因此，可以設(shè)想維持或重新建立KIR4.1的功能展現(xiàn)對神經(jīng)元和透明細(xì)胞的保護(hù)作用。
[0057]這些實(shí)施方式提供了干擾自身抗體對其同源靶標(biāo)的結(jié)合從而緩解所述疾病的方式。
[0058]在第五方面中，本發(fā)明提供了一種組合物，包含(i) 一種本發(fā)明的肽，(ii)以上定義的結(jié)合至抗-KIR4.1抗體的抗體(即，結(jié)合至自身抗體的抗體),和/或(iii)前述實(shí)施方式的抗體，即，干擾自身抗體結(jié)合至其靶標(biāo)的抗體。
[0059]因此，本發(fā)明公開內(nèi)容是指三種不同類型的抗體。首先，公開的是結(jié)合至KIR4.1胞外環(huán)的自身抗體。這是在大約一半的MS患者中被認(rèn)為是MS致病和/或?qū)ζ渲甘镜目贵w。其次，本發(fā)明提供了一種能夠結(jié)合至所述自身抗體的抗體。這種第二種類型的抗體適合于本文以上詳述的治療和診斷的目的。最后，本發(fā)明提供了一種結(jié)合至KIR4.1而同時干擾自身抗體結(jié)合至其靶標(biāo)的抗體。這后者抗體適合用于本文以上所述的治療目的。
[0060]根據(jù)本發(fā)明的組合物優(yōu)選的實(shí)施方式涉及一種可選進(jìn)一步包含藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，而在一定程度上所述組合物涉及一種結(jié)合至抗-KIR4.1抗體的肽或抗體，并涉及診斷組合物。合適的藥用載體、賦形劑和/或稀釋劑能夠由本領(lǐng)域的技術(shù)人員毫不費(fèi)力地進(jìn)行選擇。例如，所述抗體也可以提供于溶液如緩沖溶液中。
[0061]緩沖溶液在本【技術(shù)領(lǐng)域】內(nèi)是眾所周知的而這些技術(shù)人員根據(jù)要分析的物質(zhì)能夠知曉合適的緩沖液。常見的緩沖溶液包括(括號內(nèi)是？1值)成?04/他4?04 (pKaa=2.12)、甘氨酸34)、乙酸(4.75)、檸檬酸(4.76)、MES (6.15)、二甲胂酸(6.27)、H2C03/NaHC03(pKaa=6.37)、Bis-Tris (6.50), ADA (6.60)、Bis-Tris 丙烷(pKaa=6.80)、PIPES (6.80)、ACES (6.90)、咪唑(7.00)、BES (7.15)、MOPS (7.20)、NaH2P04/Na2HP04 (pKa，2=7.21 )、TES(7.50)、HEPES (7.55)、HEPPS0 (7.80)、三乙醇胺(7.80)、三羥甲基甘氨酸(8.10)、Tris(8.10)、甘氨酰胺(8.20)、N-二 (羥乙基)甘氨酸(8.35)、甘氨酰甘氨酸(pKa.2=8.40),TAPS(8.40), Bis-Tris 丙烷(pKa 2=9.00)、硼酸(H3B03/Na2B407) (9.24), CHES (9.50)、甘氨酸(pKa 2=9.60)、NaHC03/Na2C03 (pKa 2=10.25),CAPS (10.40)和 Na2HP04/Na3P04 (pKa.3=12.67)。
[0062]此外，所述緩沖液的離子強(qiáng)度可以，例如，通過加入氯化鈉和/或氯化鉀進(jìn)行調(diào)節(jié)。優(yōu)選的氯化鈉濃度為0~2M，優(yōu)選100~200mM。包含氯化鈉的緩沖液實(shí)例包括10倍原液水溶液(aqueous stock solution)含有 1.37M NaCl、27mM KCl、43mM Na2HP04_7H20 和14mM KH2P04的PBS (磷酸鹽緩沖鹽水)，調(diào)節(jié)pH值至7.3 ；20倍原液水溶液含有3M NaCl和0.3M檸檬酸鈉的SSC，調(diào)節(jié)pH至7.0 ;和含有10mM Tris堿、10mM氯化鈉和ImM ETA (酸)的STE (鹽水Tris EDTA)?？商鎿Q地，氯化鈉在緩沖液配制中不存在。常見無氯化鈉或氯化鉀的緩沖液制劑的實(shí)例是50倍原液水溶液含2M Tri乙酸鹽和0.1M EDTA的TAE (Tris乙酸鹽EDTA)，pH8.5 ；10倍原液水溶液含有0.89M Tris堿、0.89M硼酸和0.02M EDTA的TBE (Tri 硼酸鹽 EDTA)，pH8.0 ;和含有 10mM Tris 堿和 ImM EDTA (酸)的 TE (Tris EDTA),ρΗ7.5。
[0063]本文中所述的藥物組合物能夠以合適的劑量向主體給予。給予所述合適的組合物可以通過不同的方式完成，例如，通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下，以及透皮給予。
[0064]更特別地，這種藥物組合物可以按照可選包含常規(guī)藥用賦形劑的劑量單位制劑口服給予、非腸道給予，如皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、透皮、經(jīng)粘膜、硬膜下、鼻內(nèi)、經(jīng)由離子導(dǎo)入的局部(locally)或表面(topically)、舌下、通過吸入噴霧、氣溶膠或直腸等給予。
[0065]劑量方案將由主治醫(yī)師和臨床因素確定。如在醫(yī)療領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的，對任何一個患者的劑量都取決于許多因素，包括患者的大小、體表面積、年齡、要給予的具體化合物、性別、時間和給予途徑、總體健康狀況和其它同時給予的藥物。
[0066]用于腸胃外給予的制劑包括無菌水溶液或非水溶液、懸浮液和乳液。非水性溶劑的實(shí)例有丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格氏(Ringer)葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化林格氏溶液、或不揮發(fā)性油。靜脈載體包括流體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(例如，基于林格氏葡萄糖的那些)等。防腐劑和其它添加劑也可以存在，諸如，例如，抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。另外，本文中所述的這種藥物組合物可以包含其它試劑，這要取決于所期望的藥物組合物用途。
[0067]在制劑中可以使用的藥用賦形劑可以包括載體、賦形劑、稀釋劑、溶劑如一元醇，如乙醇、異丙醇，和多元醇如二醇，和食用油如大豆油、椰子油、橄欖油、紅花油、棉籽油，油酯如油酸乙酯、肉豆蘧酸異丙酯；粘合劑、助劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、崩解劑、助流劑、潤滑劑、緩沖劑、乳化劑、潤濕劑、懸浮劑、增甜劑、著色劑、調(diào)味劑、涂層劑、防腐劑、抗氧化劑、加工劑、藥物遞送改性劑和促進(jìn)劑如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石、單糖、二糖、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、葡萄糖、羥丙基-β -環(huán)糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔點(diǎn)蠟和/或離子交換樹脂。
[0068]其它適宜的藥用賦形劑描述于文獻(xiàn)Remington' s Pharmaceutical Sciences,第15版，Mack出版公司，新澤西州(1991)中。
[0069]口服給予的劑型 包括片劑、膠囊劑、錠劑、丸劑、糯米紙囊劑(wafer )、顆粒劑、口服液如糖衆(zhòng)、懸浮液、溶液、乳液或重構(gòu)液(reconstitution)。
[0070]局部/表面給予的劑型包括吹入劑、氣溶膠、計(jì)量氣溶膠、透皮治療系統(tǒng)、藥貼、直腸栓劑和/或陰道栓劑(ovula)。
[0071]對于本發(fā)明的目的，所述試劑(藥劑，agent)的治療有效劑量一般為約2.5~lOOmg/天，優(yōu)選約5~約50mg/天，最優(yōu)選約10~約30mg/天，其可以按照單劑量或多個劑
量給予。
[0072]然而，應(yīng)該理解到，本發(fā)明的化合物對于任何具體患者的具體劑量水平將取決于多種因素，如年齡、性別、體重、總體(一般，general)健康狀況、飲食、要進(jìn)行治療的患者的各自反應(yīng)、給予時間、待治疾病的嚴(yán)重程度、所施用的具體化合物的活性、劑型、施用模式和伴隨用藥(concomitant medication)。治療有效量，對于給定的情況,將很容易地通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定，而都屬于普通臨床醫(yī)生或醫(yī)師的技能和判斷之內(nèi)。
[0073]在第六方面中，本發(fā)明提供了一種適用于治療患者中的多發(fā)性硬化癥的選自利妥昔單抗、奧瑞珠單抗、奧法木單抗和F。-結(jié)合劑(Fe-binding agent)的試劑,所述患者特征在于血液、血清、血衆(zhòng)、淋巴節(jié)、腦脊髓液(CSF)、淚液、尿、痰和腦活檢組織(brain biopsy)任意之一中抗-KIR4.1抗體的存在。正如本文以上的解釋，預(yù)期一方面具有自身抗體的MS患者和另一方面無自身抗體的MS患者對這些試劑的反應(yīng)不同。
[0074]Fc-結(jié)合劑是適合于去除抗體的已知試劑。這種試劑結(jié)合至抗體的F。部分，并適于去除或滅活抗體。這種去除過程也稱為“免疫吸附”。
[0075]在第七方面中，本發(fā)明另外提供了一種篩選藥物或先導(dǎo)化合物(lead compound)的方法，所述方法包括:用測試化合物接觸包含或由(i)以上定義的抗-KIR4.1抗體(即，自身抗體);和(ii)KIR4.1蛋白或以上定義的肽或肽模擬物構(gòu)成的復(fù)合物，其中所述復(fù)合物量的減少指示所述測試化合物是藥物或先導(dǎo)化合物。
[0076]鑒于抗-KIR4.1抗體參與多發(fā)性硬化癥的令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明另外提供了識別藥物和先導(dǎo)化合物的方式和方法，所述藥物和先導(dǎo)化合物適用于治療多發(fā)性硬化癥或開發(fā)適合治療多發(fā)性硬化癥的藥物。應(yīng)該理解到，所述接觸在維持所述復(fù)合物的條件下完成。技術(shù)人員知悉這種適合的條件，其包括，例如，包含所述測試化合物的緩沖溶液、抗-KIR4.1抗體和KIR4.1蛋白或根據(jù)本發(fā)明的肽或肽模擬物。
[0077]優(yōu)選地，所述方法以高通量形式實(shí)施。高通量分析法，獨(dú)立于生化、細(xì)胞或其它分析法，一般可以在微量滴定板的孔中實(shí)施，其中每塊板可以包含96、384或1536孔。處理這種孔板，包括在不同于環(huán)境溫度的溫度下培養(yǎng)，和使測試化合物接觸分析混合物，優(yōu)選通過一個或多個包括移液裝置的計(jì)算機(jī)控制機(jī)器人系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)施。假使大的測試化合物文庫要進(jìn)行篩選和/或篩選要在很短的時間之內(nèi)完成，則可以將例如10、20、30、40、50或100種測試化合物的混合物加入到每個孔中。假使某個孔表現(xiàn)出生物活性，則測試化合物的所述混合物可不費(fèi)事地識別出所述混合物中產(chǎn)生所述活性的一種或多種測試化合物。
[0078]測試化合物、先導(dǎo)化合物和/或藥物優(yōu)選小分子，更優(yōu)選有機(jī)小分子。分子量優(yōu)選低于2000，更優(yōu)選低于1500、1000、900、800、700、600、500或400道爾頓。在篩選中識別出來的任何命中化合物可以進(jìn)行其藥理學(xué)性質(zhì)(包括吸收、分布、代謝和排泄)的優(yōu)化，從而將所述先導(dǎo)化合物開發(fā)成藥物。
[0079]篩選中識別出來的化合物(一般簡稱為先導(dǎo)化合物(lead compound))的藥理學(xué)性質(zhì)的優(yōu)化方法，在本領(lǐng)域中是已知的且包括對識別作為先導(dǎo)化合物的化合物修飾而實(shí)現(xiàn)以下方面的方法:(i)改變的作用位點(diǎn)、活性譜、器官特異性，和/或(ii)改善的效力，和/或(iii)降低的毒性(改善的治療指數(shù))，和/或(iv)降低的副作用，和/或(V)治療作用生效、作用持續(xù)時間改變，和/或(Vi)改變的藥動學(xué)參數(shù)(再吸收、分布、代謝和排泄)，和/或(Vi i )改變的物理化學(xué)參數(shù)(溶解性、吸濕性、顏色、味道、氣味、穩(wěn)定性、狀態(tài))，和/或(viii)改善的一般特異性、器官/組織特異性，和/或(ix)通過以下方式的優(yōu)化施用形式和途徑:(i)羧基酯化，或(ii)羥基用羧酸酯化，或(iii)羥基酯化成，例如磷酸酯、焦磷酸酯或硫酸酯或半琥珀酸酯，或(iv)形成藥用鹽，或(V)形成藥用復(fù)合物，或(Vi)合成藥學(xué)活性聚合物，或(Vii)引入親水部分，或(viii)引入/交換芳香烴化合物的取代基或側(cè)鏈，改變?nèi)〈Ｊ?，?ix)通過引入電子等排體或生物電子等排體部分改性，或(X)同源性化合物的合成，或(xi )引入支化側(cè)鏈，或(xi i )烷基取代基轉(zhuǎn)化成環(huán)狀類似物，或(xi i i )羥基衍生成縮酮、縮醛，或(xiv)N-乙酰化成酰胺、苯甲酰胺，或(XV)合成曼尼希堿、亞胺，或(xvi)酮或醛轉(zhuǎn)化成希夫堿、肟、縮醛、縮酮、烯醇酯、噁唑烷、噻唑烷或其組合。
[0080] 以上引述的各種步驟一般在本【技術(shù)領(lǐng)域】內(nèi)是已知的。它們包括或依賴于定量的構(gòu)效關(guān)系(QSAR)分析(Kubinyi, 〃Hausch_Analysis and Related Approaches", VCH Verlag,Weinheim, 1992)、組合生物化學(xué)、經(jīng)典化學(xué)等(參見，例如,Holzgrabe and Bechtold,Deutsche Apotheker Zeitungl40 (8)，813-823，2000)。
[0081]本發(fā)明，在第八方面中，提供了以上定義的受體用于從血液中去除抗-KIR4.1抗體或血清或減少其量的用途，其中所述用途將會離體(離體回輸)實(shí)施。
[0082]與之相關(guān)的是，本發(fā)明提供了從體液如血液或血清中去除抗-KIR4.1抗體或減少其量的離體(離體回輸)方法，所述方法包括
[0083](a)將從主體中移出的血液接觸以上定義的受體和/或Fc-結(jié)合劑；和/或
[0084](b)實(shí)施血衆(zhòng)置換術(shù)(plasmapheresis)。
[0085]這些方面涉及離體回輸應(yīng)用，所述離體回輸應(yīng)用旨在減少自身抗體量或完全將其耗竭。優(yōu)選MS患者或攜帶發(fā)展MS的易患病體質(zhì)的主體的血液或血清經(jīng)受離體回輸治療。應(yīng)該理解到，所述使之接觸是在允許自身抗體結(jié)合至如果存在的所述受體的條件下進(jìn)行實(shí)施。在一個實(shí)施方式，所述條件可以通過使血液或血清接觸根據(jù)本發(fā)明的載體或裝置而建立，所述載體或裝置將在下文中進(jìn)一步定義。血漿置換術(shù)，正如本領(lǐng)域中已知的可以，根據(jù)本發(fā)明，用于減少循環(huán)自身抗體的量。
[0086]在根據(jù)本發(fā)明的離體回輸方法的一個優(yōu)選實(shí)施方式中，血液或血清，在進(jìn)行接觸之后，要返回到同一主體中。
[0087]在根據(jù)本發(fā)明的離體回輸應(yīng)用或離體回輸方法進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述蛋白、肽和/或抗體結(jié)合至載體。任何載體，包括固體載體，都能夠設(shè)想。在本領(lǐng)域中常用而包括玻璃、塑料、金和娃的擔(dān)載體(support)或載體材料對于本發(fā)明的目的都能夠設(shè)想。載體或擔(dān)載體的合適涂層，如果存在，包括聚-L-賴氨酸-和氨基-硅烷-涂層以及環(huán)氧-和醛-活化的表面。在一個優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述載體是柱子的基質(zhì)。合適的基質(zhì)在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的而可以通過所述受體的連接進(jìn)行衍生化。
[0088]本發(fā)明另外涉及一種具有以上定義的受體固定于其上的載體。
[0089]與之相關(guān)的是，還提供了一種用于從血液中去除抗-KIR4.1抗體的裝置，所述裝置包含以上定義的載體。
[0090]在所述裝置的一個優(yōu)選實(shí)施方式中，所述裝置還包含進(jìn)口和/或出口，允許讓所述主體的血液或血清流過過濾器和/或使血液或血清返回到同一主體中。
[0091]至于本說明書中，特別地是在權(quán)利要求中表征的實(shí)施方式，預(yù)想在從屬權(quán)利要求中提及的每一個實(shí)施方式將組合每一所述從屬權(quán)利要求所從屬的權(quán)利要求(獨(dú)立的或從屬的)的每一實(shí)施方式。例如，在一個獨(dú)立權(quán)利要求1引述3種替代方式A、B和C的情況下，一個從屬權(quán)利要求2引述3種替代方式D、E和F，而權(quán)利要求3從屬權(quán)利要求1和2引述3種替代方式G、Η和I的情況下，應(yīng)該理解到，除非另外明確指出，所述說明書明確公開對應(yīng)于組合 A、D、G ;A、D、H ;A、D、I ;A、E、G ;A、E、Η ;A、E、I ;A、F、G ;A、F、H ;A、F、I ;B、D、G ;B、D、H ;B、D、I ;B、E、G ;B、E、H ;B、E、I ;B、F、G ;B、F、H ;B、F、I ;C、D、G ;C、D、H ;C、D、I ;C、E、G ;C、E、H ;C、E、I ;C、F、G ;C、F、H ;C、F、I 的實(shí)施方式。[0092]同樣，也是在這些獨(dú)立和/或從屬權(quán)利要求并未引述替代方式的情況下，應(yīng)該理解到，如果從屬權(quán)利要求返回引用多個前述權(quán)利要求，則由此涵蓋的主題的任何組合都被認(rèn)為是明確公開的。例如，在一個獨(dú)立的權(quán)利要求1，返回引用權(quán)利要求1的從屬權(quán)利要求2和一個同時返回引用兩個權(quán)利要求2和1的從屬權(quán)利要求3的情況下，應(yīng)該遵循權(quán)利要求3和1的所述主題的組合被清楚而明確地公開，如同根據(jù)權(quán)利要求3、2和1的主題的組合。假使還有一個從屬權(quán)利要求4存在而引用權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)，則遵循根據(jù)權(quán)利要求4和1，根據(jù)權(quán)利要求4、2和1，根據(jù)權(quán)利要求4、3和1以及根據(jù)權(quán)利要求4、3、2和1的所述主題的組合，都清楚而明確地進(jìn)行公開。
[0093]上述考慮作為必要修正適用于所有所附權(quán)利要求。舉幾個實(shí)例而言，根據(jù)權(quán)利要求6、5、4 (b)、3和2的組合根據(jù)所述權(quán)利要求結(jié)構(gòu)而清楚明確地設(shè)想。這同樣適用于根據(jù)權(quán)利要求6、5、4 (a)、3和2的組合，并且給出幾個并非限制性的進(jìn)一步的實(shí)例，權(quán)利要求4(a)和2的組合和權(quán)利要求5、4 (a)和2的組合。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0094]這些附圖示出:
[0095]圖1:與CNS膜抗原的MS血清I gG反應(yīng)性
[0096](a)采用來自如所示患有MS的患者或0ND患者的血清IgG而在大鼠小腦(上圖)和人腦部分(下圖)上實(shí)施的免疫熒光標(biāo)記的代表性顯微照片。比例尺ΙΟΟμπι (上圖)和20 μ m (下圖)。
[0097](b)采用由大鼠腦組織制備的膜蛋白部分(fraction)的捕獲ELISA分析。顯示了MS和0ND患者中的血清反應(yīng)性(0D，光學(xué)密度)。
[0098]圖2:KIR4.1作為MS中血清IgG靶標(biāo)的識別
[0099](a)用0ND或MS患者的匯合(pooled)IgG沉淀的人腦裂解物(lysate)的一維SDS凝膠電泳(左)。請注意，IgG重鏈帶(箭頭)上面和下面的獨(dú)特的帶(第3泳道)在采用由MS患者純化的匯合血清IgG免疫沉淀之后獲得。在采用MS患者的血清IgG免疫沉淀之后獲得的腦抗原二維電泳(右)。包含通過MALD1-MS/MS分析識別的KIR4.1蛋白的斑點(diǎn)用方框標(biāo)記。箭頭標(biāo)記所述I gG重鏈斑點(diǎn)。
[0100](b)通過所示各種免疫沉淀中的蛋白質(zhì)免疫印跡分析的KIR4.1檢測。采用0ND或MS患者的血清IgG分別對大鼠腎臟和人腦裂解物的富集膜蛋白部分進(jìn)行免疫沉淀。
[0101](c)KIR4.1在用0ND或MS患者的血清IgG免疫沉淀體外翻譯KIR4.1蛋白中的蛋白免疫印跡分析。
[0102]圖3:KIR4.1作為MS患者中血清IgG反應(yīng)性靶標(biāo)的驗(yàn)證
[0103](a)顯示大鼠腦小腦部分中用單克隆抗-KIR4.1對MS患者血清IgG的共定位的雙免疫熒光標(biāo)記。用0ND患者血清染色顯示作為對照物。比例尺200 μ m。
[0104](b)采用MS患者的純化血清IgG的野生型(左圖)和Kir4.Yh小鼠(右圖)的小腦部分的免疫突光標(biāo)記。比例尺100 μ m (上圖)和50 μ m (下圖)。
[0105](c)小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)物的免疫熒光雙染色。0ND血清IgG (上圖)和MS血清IgG (下圖)的染色在綠通道中檢測。其它GFAP染色(右圖)在紅通道中檢測。
[0106](d)采用MS和0ND患者血清的小鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的染色和流式細(xì)胞儀分析。
[0107]圖4:MS患者亞群中對KIR4.1的高滴度血清反應(yīng)性
[0108](a)抗-KIR4.1血清反應(yīng)性的蛋白基ELISA篩選方法。HEK293細(xì)胞的純化重組KIR4.1共價(jià)偶聯(lián)至ELISA孔板的固相。結(jié)合至KIR4.1的血清抗體在HD、0ND、MS患者中進(jìn)行檢測?？贵w陽性和陰性血清的頻率在HD (n=14),0ND (n=71)和MS患者(n=122)之間通過Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行對比。抗KIR4.1抗體陽性的閾值(截止0D0.866，超過HD主體的中值0D達(dá)5SD)由水平虛線表示。
[0109](b)描繪抗KIR4.1抗體E`LISA試驗(yàn)在兩個獨(dú)立的MS和0ND患者組中的診斷性能的R0C曲線。發(fā)現(xiàn)群組(discovery cohort)(實(shí)線)對應(yīng)于(a)中所示的群組。驗(yàn)證群組(validation cohort)(虛線)由132個0ND和147個MS患者組成。R0C曲線下的面積(AUC)，發(fā)現(xiàn)群組:0.76 (95%C1:0.69-0.81)，驗(yàn)證群組:0.82 (95%C1:0.76-0.87)。
[0110](c) KIR4.1蛋白基于uniprot數(shù)據(jù)庫的序列注釋的二維圖形圖示說明(http://www.uniprot.0rg/uniprot/P78508)。大小胞外環(huán)分別以紅色和黃色突出顯示。
[0111](d)采用包含KIR4.1的第一胞外環(huán)的板(plate)結(jié)合肽KIR4.183_12(|的ELISA分析法。在發(fā)現(xiàn)群組的HD、0ND患者和MS患者中測定抗KIR4.183_12(|的血清反應(yīng)性(參見(a))?？贵w陽性和陰性血清在HD、0ND和MS患者之間通過Kruskal-Wallis檢驗(yàn)進(jìn)行對比。抗KIR4.1陽性的閾值(截止0D0.7558，超過HD主體中值0D達(dá)5SD)通過水平虛線指示。
[0112]圖5:KIR4.1-特異性的MS血清IgG抗體對胞外環(huán)或KIR4.1 (KIR4.183_120)是特異性的。
[0113](a)通過相對于全長純化重組His-標(biāo)記的KIR4.1的KIR4.183_12(| (第一胞外環(huán))或KIR4.1356-375 (C-端域)的親和純化抗-KIR4.1血清IgG的競爭結(jié)合?？?KIR4.1血清IgG固定于ELISA板上，并用濃度漸增的肽(濃度范圍0.045-150nM)在固定濃度(150nM)的His標(biāo)記重組KIR4.1蛋白存在下進(jìn)行培養(yǎng)。KIR4.1蛋白的結(jié)合通過抗-His標(biāo)記檢測抗體進(jìn)行檢測。
[0114](b)基于板結(jié)合KIR4.1蛋白或KIR4.183_12(|肽的用于量化MS患者樣本中的抗-KIR4.1血清反應(yīng)性的ELISA分析的相關(guān)性(n=122)。
[0115](c)細(xì)胞基競爭性結(jié)合分析。HEK293細(xì)胞表達(dá)KIR4.1，其采用MS血清IgG在沒有競爭(左)或在KIR4.183_120 (中)或KIR4.1356-375 (右)存在下進(jìn)行免疫標(biāo)記。代表性的顯微照片。[0116]圖6:
[0117](a)在P10小鼠小腦切片上進(jìn)行的免疫熒光標(biāo)記。用MS血清IgG(左圖)和抗GFAP抗體(右圖)染色。比例尺50 μ m。
[0118](b)采用MS血清IgG (左圖)和抗GFAP抗體免疫標(biāo)記(右圖)在人腦皮層切片上獲得的血管周染色模式。方框顯示下圖中示出的高倍放大的區(qū)域。比例尺ΙΟΟμπι (上圖)和20 μ m (下圖)。
[0119]圖7:KIR4.1特異性MS血清IgG抗體誘導(dǎo)KIR4.1染色損失，GFAP纖絲(filament)結(jié)構(gòu)的中斷和體內(nèi)補(bǔ)體激活。
[0120]PBS (第一行)，MS患者血清IgG耗竭KIR4.1特異性抗體的反應(yīng)性(第二行)，或具有保留抗KIR4.1反應(yīng)性的血清IgG (第三和第四行)連同人補(bǔ)體注入到C57BL/6小鼠的小腦延髓池。注射后24h處死小鼠，而腦切片通過免疫組織化學(xué)法對GFAP (左)，KIR4.1 (中)和C9neo反應(yīng)性(右)進(jìn)行評價(jià)。比例尺50 μ m和20 μ m (底圖)。
[0121]圖8:
[0122](a)來自采用KIR4.1表達(dá)構(gòu)建體[PcDNA3.1 (+)/KIR4.1]轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞的His-標(biāo)記KIR4.1蛋白的純化。泳道1:HEK293澄清裂解物(裂解液)；泳道2:流過物(流過液，flow-through);泳道3-5:沖洗部分(wash fraction);泳道6_8:洗脫部分。
[0123](b)MS患者的血清IgG的抗-KIR4.1反應(yīng)性的耗竭。泳道1:用模擬轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞裂解物混合的珠粒，而泳道2:用PcDNA3.1 ( + ) /KIR4.1轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞裂解物混合的珠粒。這些珠粒分別用于產(chǎn)生模擬預(yù)吸附柱和預(yù)吸附柱。右邊的免疫印跡顯示由基于珠結(jié)合KIR4.1的預(yù)吸附柱捕獲的血清IgG。
[0124](c)模擬(mock)預(yù)吸附柱和預(yù)吸附`柱的非濃縮流過液通過重組純化的KIR4.1ELISA對KIR4.1反應(yīng)性進(jìn)行測試。
【具體實(shí)施方式】
[0125]這些實(shí)施例舉例說明本發(fā)明:
[0126]實(shí)施例1:
[0127]物料和方法
[0128]患者和對照
[0129]患者和對照在慕尼黑工業(yè)大學(xué)Klinikum rechts der Isar的神經(jīng)病學(xué)系招收。兩個獨(dú)立的群組，MS患者、具有高風(fēng)險(xiǎn)臨床孤立綜合癥的患者納入研究中。對照組由年齡相匹配的健康供者(HD)或具有其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者(0ND)組成。表1中給出患者和對照的特性。所述大學(xué)的倫理委員會批準(zhǔn)這項(xiàng)研究。
[0130]
【權(quán)利要求】
1.一種包含SEQ ID N0:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基、或由SEQ ID NO:3中示出的序列的至少8個連續(xù)氨基酸殘基構(gòu)成的肽或相應(yīng)的肽模擬物，條件是所述肽不由SEQ ID N0:3中示出的序列構(gòu)成,其中所述肽或肽模擬物結(jié)合至來自患者的樣本中所包含的抗-KIR4.1抗體，所述患者具有多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)， 其中優(yōu)選 (i)所述至少8個連續(xù)氨基酸殘基是KIR4.1的胞外域的子序列，所述胞外域由SEQ IDN0:1或2中示出的序列構(gòu)成；或 (ii)所述肽包含SEQID NO:1或2的序列或由SEQ ID NO:1或2的序列構(gòu)成。
2.一種用于診斷主體中的多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)的方法，所述方法包括測定獲自所述主體的樣本中抗-KIR4.1抗體的存在，其中所述樣本中抗-KIR4.1抗體的存在指示多發(fā)性硬化癥或?qū)Χ喟l(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中，在所述樣本中存在抗-KIR4.1抗體的情況下， (i)所述主體中多發(fā)性硬化癥的至少一種臨床癥狀的存在指示多發(fā)性硬化癥；而 (ii)多發(fā)性硬化癥的任何臨床癥狀都不存在則指示所述對多發(fā)性硬化癥的易患病體質(zhì)。
4.根據(jù)以下權(quán)利要求所述的方法 Ca)權(quán)利要求2，其中所述主體患有臨床孤立綜合癥(CIS);或 (b)權(quán)利要求3，其中至少一種臨床癥狀是CIS。`
5.根據(jù)權(quán)利要求2~5任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗-KIR4.1抗體結(jié)合至KIR4.1(SEQ ID NO:3)或其胞外域，所述胞外域由SEQ ID NO: 1、2、4或5任一個中示出的序列構(gòu)成。
6.根據(jù)權(quán)利要求2~5任一項(xiàng)所述的方法，其中所述抗-KIR4.1抗體的存在是通過以下測定 Ca)使所述樣本與結(jié)合至所述抗-KIR4.1抗體的受體接觸；以及 (b)檢測受體-抗-KIR4.1抗體復(fù)合物的形成， 其中所述受體優(yōu)先選自由根據(jù)權(quán)利要求1所述的肽或肽模擬物、KIR4.1蛋白和結(jié)合至所述抗-KIR4.1抗體的抗體所組成的組。
7.—種如權(quán)利要求6中限定的受體，用于在治療多發(fā)性硬化癥或在診斷多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)中應(yīng)用。
8.一種結(jié)合至KIR4.1 (SEQ ID NO:3)或其胞外域的抗體，用于在治療多發(fā)性硬化癥中應(yīng)用，所述域由SEQ ID NO:1或2中示出的序列構(gòu)成,且所述抗體干擾來自患者的樣本中所包含的抗-KIR4.1抗體結(jié)合至KIR4.1，所述患者具有多發(fā)性硬化癥或?qū)ζ涞囊谆疾◇w質(zhì)。
9.一種組合物，包含 (i)權(quán)利要求1所述的肽或肽模擬物， (ii)結(jié)合至如在權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)中限定的抗-KIR4.1抗體的抗體，和/或 (iii)權(quán)利要求8所述的抗體。
10.一種選自利妥昔單抗、奧瑞珠單抗、奧法木單抗和F。-結(jié)合劑的試劑,用于在治療患者的多發(fā)性硬化癥中應(yīng)用，所述患者的特征在于，在血液、血清、血漿、淋巴節(jié)、腦脊髓液(CSF)、淚液、尿、痰和腦活檢組織任一個中存在抗-KIR4.1抗體。
11.一種篩選藥物或先導(dǎo)化合物的方法，所述方法包括: 使包含以下或由以下構(gòu)成的復(fù)合物與測試化合物接觸 (i)如在權(quán)利要求1~5任一項(xiàng)中限定的抗-KIR4.1抗體；和 (ii)KIR4.1蛋白或如在權(quán)利要求1中限定的肽或肽模擬物， 其中所述復(fù)合物的量減少指示所述測試化合物是藥物或先導(dǎo)化合物。
12.—種如權(quán)利要求6中限定的受體用于從血液或血清中去除抗-KIR4.1抗體或減少其量的應(yīng)用，其中所述應(yīng)用是離體實(shí)施的。
13.—種從 血液或血清中去除抗-KIR4.1抗體或減少其量的離體方法，所述方法包括 (a)使從主體中移出的血液與權(quán)利要求6中限定的受體和/或F。-結(jié)合劑接觸；和/或 (b)實(shí)施血漿置換術(shù)。
14.一種載體，具有固定于其上的權(quán)利要求6中限定的受體。
15.一種用于從血液中去除抗-KIR4.1抗體的裝置，所述裝置包含權(quán)利要求14所述的載體。
【文檔編號】C07K16/18GK103687871SQ201280025923
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月30日
【發(fā)明者】伯恩哈德·黑默爾, 拉伊尼什·斯里瓦斯塔瓦 申請人:慕尼黑技術(shù)大學(xué)伊薩爾分診所