多價(jià)免疫球蛋白的濃縮物的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種由富含免疫球蛋白的血漿或血漿成分的初始溶液制造多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的方法及其治療應(yīng)用，包括以辛酸沉淀移除蛋白質(zhì)污染物以獲得不含蛋白酶的溶液，且經(jīng)流體化床層析分離所述不含蛋白酶的溶液，該方法可獲得每公升血漿超過4.5g免疫球蛋白的人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物。
【專利說明】多價(jià)免疫球蛋白的濃縮物的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于治療使用的多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002]免疫球蛋白(Ig)由B淋巴細(xì)胞和衆(zhòng)細(xì)胞(plasmocytes)合成,其分布于血衆(zhòng)、血管外液及分泌物中。根據(jù)其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，可被分為5個(gè)種類:IgG、IgA、IgM、IgE和IgD。其在人體內(nèi)的自然分布為:75%的IgG，20%的IgA，5%的IgM，以及〈1%的IgE和IgD。一般來說，每公升的血漿中含有8至15g的IgG。在血漿中，循環(huán)性IgG免疫球蛋白的半衰期為約21 天，IgA、IgM、IgD 和 IgE 則小于 7 天。
[0003]相對(duì)于針對(duì)各種傳染性病原的抗體具有高度多樣性，人源多價(jià)免疫球蛋白和所使用的藥學(xué)組成有97%為IgG。
[0004]富含多價(jià)免疫球蛋白的人類血漿成分已知可用于治療各種先天性感染或缺陷?？赏ㄟ^施用多價(jià)或一般免疫球蛋白以改善原發(fā)性免疫缺陷和繼發(fā)性缺陷(白血病、骨髓瘤或復(fù)發(fā)性感染)。其可從特定抗體(抗-恒河猴(Rhesus)或抗-D毒性抗體)中分離。其可以非常高的劑量，高達(dá)2g/kg/day，以緩和病情的發(fā)展，目前對(duì)病理生理所知甚少，但其中包含免疫形式的部分。施用多價(jià)免疫球已顯示至少可暫時(shí)治療免疫性的血小板減少，也稱為免疫性血小板缺乏紫斑癥。多價(jià)免疫球蛋白也可用于治療Guillain-Barr6’s癥候群、脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)炎、多發(fā)性硬化癥、肌無力Lambert-Eaton’ s癥候群、皮肌炎。
[0005]多價(jià)免疫球蛋白含有多種分子，因此其作用機(jī)制復(fù)雜:作用發(fā)生于多個(gè)層次，其改變病患免疫系統(tǒng)的平衡，且因此達(dá)到治療效果。
`[0006]目前已知許多多價(jià)免疫球蛋白的制造方法。最佳的制造方法包含多個(gè)乙醇沉淀步驟(Cohn et al.1946, J.Am.Chem.Soc.68, 459)。
[0007]特別是專利EP0703922 (Laboratoire Fran^ais du Fractionnement et des Biotechnologies, uConcentrediimmunoglobulines Gausage therapeutique et procededeproduction dudit concentre，， (Immunoglobulin G concentrate for therapeutic useand method for producing said concentrate))揭不一種由人類血衆(zhòng)或冷凍沉淀血衆(zhòng)上清液制造免疫球蛋白G的方法。該方法不包含乙醇沉淀，且包括一系列的層析步驟和利用溶劑/界面活性劑的病毒去活化步驟。由于一系列的層析步驟，使得該方法的產(chǎn)率比較低，該方法實(shí)質(zhì)上包括2個(gè)陰離子及陽(yáng)離子交換串聯(lián)循環(huán)，以及2個(gè)超過濾步驟。
[0008]專利EP1385886 (Laboratoire FraH^aiS du Fractionnement et desBiotechnologies, uProcedede preparation de concentres d’ immunoglobulineshumainesausage therapeutique，， (Method for preparing human immunoglobulinconcentrates for therapeutic use))揭示一種人類免疫球蛋白的制造方法,包括脂質(zhì)及蛋白質(zhì)沉淀污染物的前純化，以及陰離子交換樹脂和堿性PH環(huán)境的層析步驟。該方法可獲得每公升起始處理血漿4g以上的免疫球蛋白。[0009]Tanaka K.等人 2000(“High quality human immunoglobulin G purified fromCohn fractions by liquid chromatography,?Braz J Med Bio Res2000, 33(1):27-30)揭示一種由Cohn’ s方法獲得的“I+II+II”和“II+III”部分來純化免疫球蛋白G的方法，其利用3種膠體的層析分離,2種離子交換膠體(Q-Sepharose FF和CM-Sepharose FF)以及I種過濾膠體(S^hacryl S-300HR)。該方法可獲得每公升血漿4.3±0.2g以上的免疫球蛋白G。
[0010]然而，可用免疫球蛋白治療的適應(yīng)癥大量增加，免疫球蛋白的需求量也顯著提升，且須確保最終產(chǎn)物具有高純度且無病毒無染。
[0011]因此，本發(fā)明的目的為提供一種人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的制造方法，相比較于已知的方法，其具有更高的產(chǎn)率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明因此涉及一種由一血衆(zhòng)或富含免疫球蛋白的血衆(zhòng)成分(plasma fraction)的初始溶液來制造多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的方法，其特征在于:
[0013](a)利用辛酸移除污染蛋白以獲得不含蛋白酶的溶液的步驟，
[0014](b)對(duì)所述不含蛋白酶的溶液進(jìn)行流體化床層析步驟(f luidized bedchromatography step),
[0015]該方法可獲得人類多價(jià)免疫球蛋白的濃縮物，其產(chǎn)率大于4.5g(免疫球蛋白)/L (血漿或富含免疫球蛋白的血漿成分)。
[0016]本發(fā)明方法中利用辛酸移除污染蛋白的步驟(a)最后所獲得的溶液，其中蛋白酶的濃度符合歐洲藥典7.5版01/2012:0918的2.6.15標(biāo)準(zhǔn)，相比較于含有30g/L免疫球蛋白的稀釋液，最多為35IU/mL。
[0017]發(fā)明發(fā)現(xiàn)根據(jù)結(jié)合利用辛酸移除污染蛋白的步驟和流體化床層析步驟可大幅增加免疫球蛋白的產(chǎn)量。
【具體實(shí)施方式】
[0018]在一實(shí)施例中，本發(fā)明包括結(jié)合在酸性pH值下利用辛酸移除污染蛋白的步驟，接著將經(jīng)辛酸處理結(jié)束所獲得的上清液于酸性pH值下進(jìn)行澄清(clarification),使免疫球蛋白可在流體化管柱(一種陰離子交換型及/或親和性型及/或“偽親和性(pseudo-affinity) ”型樹酯,優(yōu)選的為“混合(mixed-mode) ”型)中結(jié)合至層析膠體上,其可增加多價(jià)免疫球蛋白的產(chǎn)量。優(yōu)選的，若將多價(jià)免疫球蛋白由層析膠體沖提下來的條件可直接進(jìn)行后續(xù)程序，不需經(jīng)過任何透析或超過濾(ultrafiltration)技術(shù)的步驟,則可增加產(chǎn)率。特別是，本發(fā)明的方法可提升每公升血漿0.25%的多價(jià)免疫球蛋白產(chǎn)率及高純度(99%)的終產(chǎn)物。
[0019]在一具體實(shí)施例中，本發(fā)明的方法包括`在利用辛酸移除污染蛋白(a)和流體化床層析步驟(b)之間有一于酸性pH值下的澄清步驟，優(yōu)選的地使用深層過濾。
[0020]沖提步驟優(yōu)選的是指選擇性萃取G型免疫球蛋白(IgG)。
[0021]本發(fā)明還有關(guān)于一種由一血漿或富含免疫球蛋白的血漿成分的初始溶液來制造多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的方法，其特征在于:[0022](a)于酸性pH值下利用辛酸移除污染蛋白以獲得不含蛋白酶的溶液的步驟，
[0023](b)于酸性pH值下的澄清步驟，
[0024](c)對(duì)所述不含蛋白酶的溶液進(jìn)行的流體化床層析步驟，
[0025](d)于免疫球蛋白的沖提緩沖液中的沖提步驟。
[0026]特別是，利用盡可能高孔隙(porosity)的深層過濾來進(jìn)行步驟(b)的酸性pH值澄清，但所述經(jīng)澄清的上清液可通過一流體化床管柱。
[0027]本發(fā)明方法中利用辛酸移除污染蛋白的步驟(a)中最后所獲得的溶液，其蛋白酶的濃度符合歐洲藥典7.5版01/2012:0918的2.6.15標(biāo)準(zhǔn)，相對(duì)于含30g/L免疫球蛋白的稀釋液，最多為35IU/mL。
[0028]本發(fā)明有關(guān)于上述方法，且在酸性pH值后的澄清步驟(b)后，合并一提高pH值的步驟，使其可對(duì)應(yīng)于多價(jià)免疫球蛋白在流體化床模式中結(jié)合至層析樹酯的條件。
[0029]令人驚訝的是，由本發(fā)明方法最終所獲得的人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物具有小于30%的抗-補(bǔ)體活性(ant1-complementary activity),其以歐洲藥典7.5版01/2012:0918，第2.6.17段所述的方法測(cè)定。[0030]本發(fā)明中所述的“多價(jià)免疫球蛋白”是指所有的免疫球蛋白，或免疫球蛋白的片段，例如，F(xiàn)(ab，)2或F(ab),和任何在生產(chǎn)過程中所獲得的中間產(chǎn)物(intermediatefraction)。
[0031]“血漿成分”是指任何經(jīng)處理的血液溶液，其可為天然人類血漿的分離或分餾，尤其是任何在制備多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的方法中所獲得的中間產(chǎn)物。
[0032]“富含免疫球蛋白的血漿成分”是指一含有免疫球蛋白的血漿成分，其免疫球蛋白的程度高于天然人類血漿。
[0033]“I+II+III” 或“II+III” 沉淀物(precipitate)是指由根據(jù) Cohn，s 方法(Cohnet al.1946, J.Am.Chem.Soc.68, 459)或Kistler 和 Nitschmann (1962, Vox Sang.7, 414)方法經(jīng)乙醇分離的血漿所獲得的沉淀物。
[0034]“污染蛋白”是指除了 G型免疫球蛋白之外所有的蛋白質(zhì)，例如，但不限于，A、E或M型免疫球蛋白以及其他血漿蛋白，例如，但不限于:
[0035]-白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、纖維蛋白原等，
[0036]-凝血因子，例如，但不限于，F(xiàn)X、FXI或FXII，
[0037]-蛋白酶,例如,但不限于,激肽釋放酶(kallikrein)、前激肽釋放酶或激肽釋放酶的活化劑，以及
[0038]-抗-A和抗-B血凝素。
[0039]“流體化床層析”是指一種技術(shù)，其在高密度層析磁珠中利用一種和重力反方向的流體，造成與后者之間產(chǎn)生一空間，使澄清溶液可通過層析管柱而不造成任何溶液流體的阻塞。流體化床層析可為離子交換型、親和型、“偽親和型”、“混合型”(例如，同時(shí)具有離子交換和偽親和性)層析。
[0040]特別是，流體化床層析為“混合型”的UpFront IVIG膠體，其包括結(jié)合靜電荷的化學(xué)配體和疏水基團(tuán)，以對(duì)免疫球蛋白提供特定的偽-親和性。
[0041]本發(fā)明中所用的辛酸濃度須小心控制，例如，須以夠低最終濃度的辛酸以達(dá)成污染物的沉淀，在溶液其他成分的沉淀過程中不會(huì)捕捉多價(jià)免疫球蛋白。辛酸的濃度優(yōu)選的為0.5至1.5%，優(yōu)選的為0.8至1.2%，更優(yōu)選的為0.9至1.1%，且最優(yōu)選的等于1%(辛酸百分比為每單位溶液體積的辛酸克重)。
[0042]在一實(shí)施例中，利用辛酸移除蛋白污染物的步驟是在pH值為4.3至4.9，優(yōu)選的為4.6至4.8下進(jìn)行。
[0043] 申請(qǐng)人:驚人地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)之后包括一后續(xù)的澄清步驟時(shí)，本發(fā)明的多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的制造方法中所使用的辛酸濃度會(huì)對(duì)該方法的產(chǎn)量造成直接的影響。若辛酸的濃度過低，會(huì)導(dǎo)致沉淀情況不佳(特別是大部分的脂質(zhì)會(huì)殘留于溶液中)，且選擇性的澄清步驟將難以進(jìn)行。另一方面，若辛酸濃度過高，在經(jīng)過選擇性澄清后，多價(jià)免疫球蛋白會(huì)形成沉淀，且不存在于上清液中。
[0044]在一實(shí)施例中，酸性pH值的澄清步驟可為移除污染蛋白的步驟和流體化層析步驟之間。所述酸性PH值澄清步驟是在pH4.3至4.9下進(jìn)行，優(yōu)選的為pH4.4至4.8，優(yōu)選的為 ρΗ4.6 至 4.8。
[0045]在一具體實(shí)施例中，所述酸性pH的澄清步驟為利用深層過濾(depthfiltration)的澄清步驟。所述澄清步驟僅擋住可能會(huì)影響流體化床運(yùn)作的比較大顆粒。優(yōu)選的使用滯留率為15至100 μ m,優(yōu)選的為25至70 μ m或15至40 μ m的濾膜。在一實(shí)施例中，在該步驟中使用SEITZ T5500的澄清濾膜，其滯留率為25-70 μ m，且更優(yōu)選的為T2600濾膜，其滯留率為15-40μπι。任何種類的濾膜，不論帶電或不帶電，只要具有相同的澄清效果都可使用。澄清優(yōu)選的在濾土(filtration earths)的存在下進(jìn)行，由此可降低濾膜的表面。為了增加溶液過濾時(shí)的流動(dòng)性，澄清優(yōu)選的在4至30°C，更優(yōu)選的是10至25°C，例如為20至25°C下進(jìn)行。本發(fā)明澄清步驟中所使用濾膜的特性優(yōu)選的為至少40L/m2，即8kg沉淀物/m2,更優(yōu)選的是55L/m2,即Ilkg沉淀物/m2。
[0046]在深層過濾結(jié)束后，根據(jù)該方法接續(xù)步驟的需要，優(yōu)選的將濾液的pH值和滲透壓調(diào)整至不需透析或超過濾步驟。
[0047]在一具體實(shí)施例中，流體化床層析步驟可為一 “混合型”層析，其包括:
[0048]-添加至一層析管柱,其已利用pH值為4.5至8 ;優(yōu)選的為4.5至7.5 ;4.5至7.0 ;
4.5至6.8 ;4.5至6.5 ；5.0至7.0 ;5.0至6.5 ;5.5至6.3 ;或?yàn)?.7至6.3的緩沖液進(jìn)行事先平衡，事先將深層過濾中澄清步驟的溶液調(diào)整至相同的PH值，即pH值為4.5至8，更優(yōu)選的為 4.5 至 7.5 ;4.5 至 7.0 ；4.5 至 6.8 ;4.5 至 6.5 ;5.0 至 7.0 ；5.0 至 6.5 ;5.5 至 6.3 ;或?yàn)?.7至6.3，
[0049]-以緩沖溶液清洗上述管柱直到移除管柱中所有的非吸附蛋白，
[0050]-利用pH 值為 8 至 10，優(yōu)選的為 8 至 9.8 ;8.3 至 9.8 ;8.5 至 9.8 ；8.8 至 9.8 ;9.0至9.8 ;9.5至9.8的沖提緩沖液沖提吸附于管柱上的多價(jià)免疫球蛋白，以及
[0051]-回收所述富含人類多價(jià)免疫球蛋白的溶液。
[0052]本發(fā)明流體化床所的“混合型”層析使用具有不同尺寸的磁珠(beads)，其可保持流體化床的穩(wěn)定。本發(fā)明流體化床的“混合型”層析中所使用的磁珠具有2.5至3.5kg/L的平均密度，直徑為20至400 μ m，以及在本發(fā)明條件下具和多價(jià)免疫球蛋白結(jié)合的能力，其較佳的大于70g/L。
[0053]為了在簡(jiǎn)單地調(diào)整pH和導(dǎo)電度后，即可直接進(jìn)行下個(gè)步驟，流體化床層析所使用的沖提例如為一堿性PH值和低離子強(qiáng)度的沖提。本發(fā)明中所使用的沖提緩沖液例如可為含有:5至500mM的甘胺酸，優(yōu)選的是20mM，以及5至500mM的NaCl，優(yōu)選的是20mM，pH值為7至10，優(yōu)選的是為9至10，優(yōu)選的是為9.5至10，且更優(yōu)選的是為pH9.5至9.8。
[0054]當(dāng)接續(xù)流體化床層析的步驟無法接受高離子強(qiáng)度的條件，且流體化床層析步驟所獲得的沖提液需要事先大量稀釋或透析時(shí)，可使用具高PH值但低離子強(qiáng)度的沖提緩沖液。本發(fā)明所使用的沖提緩沖液可例如為含有:5to20mM的甘胺酸，優(yōu)選的是10mM，pH值為9.5至10.5，優(yōu)選的為9.8至10.5，且更優(yōu)選的為pH9.8至10.2。
[0055]在一具體實(shí)施例中，本發(fā)明的方法在流體化床層析步驟后還包括，一個(gè)或多個(gè)下列步驟:
[0056](i)病毒去活化步驟；
[0057](ii)對(duì)先前步驟所獲得的溶液進(jìn)行陰離子交換的層析步驟，以移除病毒去活化步驟中化學(xué)物質(zhì)并降低IgA和IgM的污染；
[0058](iii)移除先前步驟所獲得的溶液中抗-A和抗-B抗體的步驟；
[0059](iv)通過減小孔徑由100至15nm的納米濾膜進(jìn)行的過濾步驟；
[0060](V)將先前步驟所獲得的溶液經(jīng)超過濾的濃縮步驟和配制步驟；
[0061](vi)常規(guī)的消毒過濾步驟。
[0062]本發(fā)明方法所獲得的多價(jià)免疫球蛋白濃度物通常至少經(jīng)過一移除或去活化至少一致病因子(infectious agent)的步驟。本發(fā)明的多價(jià)免疫球濃縮物一般具有至少經(jīng)過一移除或去活化至少一致病因子的步驟。在致病因子之中，可為病毒和非傳統(tǒng)的傳染性因子(NCTAs)，例如，朊病毒(prions)。病毒去活性通常包括一化學(xué)處理，例如，一溶劑及/或界面活性劑及/或熱，例如UVC、伽瑪射線、及/或巴氏殺菌。納米過濾也有助于移除致病因子，特別是病毒。此優(yōu)選的包括至少一溶劑和界面活性劑的處理，以及納米過濾。溶劑及/或界面活性劑(一般稱為溶劑/界面活性劑處理)的處理特別包括磷酸三丁酯(TnBP)及/或界面活性劑的處理，其擇自于Triton X-100、Tween (優(yōu)選的為TweenSO)、膽酸鈉及2-[4-(2，4，4_三甲基戊-2-基)苯氧]乙醇(辛苯昔醇)。納米過濾一般是指多價(jià)免疫球蛋白濃縮物透過一孔徑小于80nm的濾膜的過濾?？墒褂玫臑V膜包括，例如 BioEx, Planova?75nm> Planova?35nm> Planova?20nm 或 Planova?15nm(Asahicorporation)、Ultipor DV50 或 DV20 (Pall corporation)、Virosart CPV (Sartorius)、Viresolve NFR或NFP(Millipore)濾膜。優(yōu)選的納米過濾在步驟(V)的濃縮多價(jià)免疫球蛋白的超過濾和配制步驟之前完成。在一具體實(shí)施例中，經(jīng)純化的多價(jià)免疫球蛋白濃縮物經(jīng)過一序列孔徑為15至50nm,例如20或35nm的濾膜的過濾。
[0063]本發(fā)明方法中所使用的陰離子交換層析在一堿性pH和低離子強(qiáng)度下進(jìn)行以結(jié)合多價(jià)免疫球蛋白。該步驟可參照例如專利EP1385886 (Laboratoire Fran^aiS duFractionnement et des Biotechnologies, “Procedede preparation de concentresd’ immunoglobulines humainesausage therapeutique，， (Method for preparing humanimmunoglobulin concentrates for therapeutic use))所述的方法。樹脂以任何低濃度、具緩沖特性、PH8.5至9.5的緩沖液進(jìn)行平衡，例如Tris緩沖液或特別是甘氨酸緩沖液。甘氨酸濃度可包括為5至50mM，例如為5至20mM，且優(yōu)選的為8至10mM。pH值可調(diào)整為8.5至9.5，且優(yōu)選的為8.9至9.1。
[0064]優(yōu)選的流體化床層析的沖提液經(jīng)稀釋且調(diào)整pH值使多價(jià)免疫球可結(jié)合至陽(yáng)離子交換層析的載體上。稀釋以水進(jìn)行使導(dǎo)電率為l，500yS/cm，且優(yōu)選的為l，100yS/cm。以平衡緩沖液清洗管柱，接著以20mM Na/Na2P04緩沖液(pH6.2)沖提多價(jià)免疫球蛋白。最后，以150mM NaCl溶液清洗管柱。
[0065]由陰離子層析所獲得溶液中的抗-A和抗-B抗體的移除可參照專利申請(qǐng) W02007/077365 (Laboratoire Fran^aiS du Fractionnement et desBiotechnologies, "Immunoglobulin G(IgG) concentrate depleted of ant1-A andant1-B antibodies and of polyreactive IgGs")中所述的方法。先前步驟所獲得的溶液經(jīng)過一移除抗-A和抗-B抗體的步驟,該步驟通過過濾載體混合物上多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的免疫親和性層析，且其基質(zhì)上具有和A及B血型抗原類似的寡糖。
[0066]在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，初始溶液為血漿或以現(xiàn)有方法所制備的富含免疫球蛋白的血漿成分，且特別以乙醇及/或?qū)游龇蛛x的部分。
[0067]在一具體實(shí)施例中，初始溶液為一參照Cohn或Kistler和Nitschmann方法(1962, Vox Sang.7,414)由血漿乙醇分餾所獲得的“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物，并回溶成溶液。在本發(fā)明的范圍中，優(yōu)選的所述“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物回溶至經(jīng)純化的注射用水(wfi)或含離子溶液中。本發(fā)明中的離子溶液可為濃度少于或等于20mM，優(yōu)選的為5至15mM，優(yōu)選的為10mM，的NaCl溶液。
[0068]在另一實(shí)施例中，將“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物回溶至溶液是在可使污染性纖維蛋白原沉淀的條件下進(jìn)行。將“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物以專一性針對(duì)纖維蛋白原的沉淀溶液處理后，可獲得污染性纖維蛋白原的沉淀，沉淀溶液例如為CaCl2溶液，其濃度少于或等于20mM，優(yōu)選的為5至15mM，優(yōu)選的為含IOmM鹽類的溶液。在該實(shí)施例中，纖維蛋白原保持沉淀形式，但多價(jià)免疫球蛋白為溶解狀態(tài)。
[0069]本發(fā)明一特定實(shí)施`例涉及一種多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的制造方法，包括:
[0070](i)利用辛酸移除污染蛋白的步驟；
[0071](ii)利用深層過濾的澄清步驟；
[0072](iii) “混合型”的流體化床層析步驟；
[0073](iv)經(jīng)溶劑/界面活性劑處理的病毒去活化步驟；
[0074](V)離子交換層析步驟；
[0075](vi)移除抗-A和抗-B抗體的步驟；
[0076](vii)經(jīng)孔徑為100至15nm的納米濾膜的過濾步驟；
[0077](viii)將先前步驟所獲得的溶液經(jīng)超過濾的濃縮步驟和配制步驟，以及接著傳統(tǒng)消毒過濾步驟。
[0078]在另一具體實(shí)施例中，本發(fā)明涉及一種多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的制造方法，包括:
[0079]⑴將血漿或富含免疫球蛋白的血漿成分的初紿溶液經(jīng)乙醇處理，以獲得“I+II+III”or “II+III”沉淀物，該方法可參照Cohn’ s方法(已揭示)或Kistler和Nitschmann 方法(1962, Vox Sang.7, 414)；
[0080](ii)將“I+II+III”或“II+III”沉淀物回溶至注射用中，于20°C (優(yōu)選的為4至15°C)下攪拌?？商砑痈鞣N離子以促使沉淀的多價(jià)免疫球蛋白回溶至溶液中，例如，陽(yáng)離子，如Na+，陰離子，如Cl-，例如NaCl。鹽類的濃度小于或等于20mM，優(yōu)選的為5至15mM，且優(yōu)選的等于IOmM,例如，IOmM的NaCl ；
[0081](iii)以辛酸使“I+II+III”或“II+III”沉淀物回溶至溶液中的蛋白質(zhì)污染物沉淀，辛酸的濃度為0.5至1.5%，優(yōu)選的是0.8至1.2%，優(yōu)選的是0.9至1.1%，以獲得不含蛋白酶的血漿溶液，且接著將PH值調(diào)整至4.3至4.9，優(yōu)選的為4.4至4.8，且優(yōu)選的為4.6至4.8。在一實(shí)施例中，以HCl進(jìn)行pH的調(diào)整；
[0082](iv)將由步驟(iii)所獲得的不含蛋白酶的血漿溶液于酸性pH值以深層濾膜進(jìn)行過濾，深層濾膜具有最大的孔徑，可容許濾液注入使用于流體化床模式的層析管柱中；
[0083](V)調(diào)整由步驟(iv)獲得的溶液的滲透壓和pH值；
[0084](vi)將上述步驟所獲得的溶液進(jìn)行流體化床層析，以獲得富含人類多價(jià)免疫球蛋白的血液溶液。優(yōu)選的所述層析容許多價(jià)免疫球蛋白沖提液于一近似于后續(xù)步驟所需緩沖液的緩沖液中，以限制因透析、超過濾、或任何重新配制溶液所需步驟中造成多價(jià)免疫球蛋白的流失；
[0085](vii)以溶劑/界面活性劑處理，特別包括以三-η-丁基磷酸鹽(TnBP)及/或一界面活性劑的處理，其擇自于Triton X-100、Tween(優(yōu)選的為Tween80)、膽酸鈉及2-[4-(2，4，4-三甲基戊-2-基)苯氧]乙醇(辛苯昔醇)，以去活化上述步驟中所獲得的溶液中的病毒；
[0086](viii)利用交聯(lián)多醣或乙烯聚合物膠體、TMAE基團(tuán)骨架對(duì)上述步驟中所獲得的溶液進(jìn)行陰離子交換層析，以移除上述步驟中所使用的溶劑及界面活性劑，并移除IgA和IgM污染物；
[0087](ix)如專利申請(qǐng)W02007/077365 (Laboratoire FranfaiS du Fractionnement etdes Biotechnologies, "Immunoglobulin G (IgG) concentrate depleted of ant1-A andant1-B antibodies and of polyreactive IgGs〃.)所不的親和性層析，以移除上述步驟中所獲得溶液中的抗-A和抗-B抗體；`
[0088](x)對(duì)上述步驟中所獲得溶液進(jìn)行納米過濾，利用孔徑50nm (例如PALL DV20濾膜)或35nm(例如PLAN0VA35N濾膜)的前濾膜(pre-filter)，接著利用孔徑20nm(例如PLAN0VA20N濾膜)或15nm(例如PLAN0VA20N或BIOEX濾膜)的濾膜，以移除可抵抗步驟
(ix)處理的朊病毒(prion)或病毒；
[0089](xi)對(duì)上述步驟中所獲得溶液進(jìn)行濃縮或滲濾(diafiltration)，以獲得含至少50g/L多價(jià)免疫球蛋白的溶液。
[0090]本發(fā)明方法中步驟(iii)利用辛酸移除污染物所獲得溶液，其符合歐洲藥典6.7版01/2012:0918的2.6.15標(biāo)準(zhǔn)，含30g/L免疫球蛋白的沉淀稀釋液，最多為35IU/mL。
[0091]本發(fā)明的目的還包括本發(fā)明方法所獲得的人類多價(jià)免疫球濃縮物，其特征在于所述濃縮物具有小于30%的抗補(bǔ)體活性。
[0092]本發(fā)明的目的還包括制備一種液體、冷凍或凍干的人類多價(jià)免疫球蛋白藥學(xué)組合物，其特征在于:
[0093]a.添加一個(gè)或多個(gè)種藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑至本發(fā)明方法所獲得的人類多價(jià)免疫球濃縮物中，以及
[0094]b.選擇性地，冷凍或凍干上述步驟所獲得的藥劑；
[0095]因此，所述藥劑為液體、冷凍或凍干形式。[0096]本發(fā)明中所使用的藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑為，例如，專利申請(qǐng)F(tuán)R2853551、FR2961107和FR2962650中所述。專利申請(qǐng)F(tuán)R2853551揭示一種包含醇糖(al coho I sugar)，例如甘露醇、甘氨酸和非離子性界面活性劑的穩(wěn)定配方。優(yōu)選的甘露醇的濃度為30g/L至50g/L,甘氨酸的濃度為7g/L至10g/L，且非離子性界面活性劑的濃度為20至50ppm。專利申請(qǐng)F(tuán)R2961107揭示一種包含甘氨酸和非離子界面活性劑，且pH值小于或等于4.8的穩(wěn)定配方。甘氨酸的濃度為至少200mM，優(yōu)選的為250mM±50mM，且非離子性界面活性劑的濃度為20至100mg/L，優(yōu)選的為35mg/L土 15mg/L，優(yōu)選的為50mg/L。專利申請(qǐng)F(tuán)R2962650揭示人類免疫球蛋白G制劑的賦形劑，其擇自于氨基酸、糖類、糖類衍生物、鹽類和界面活性劑(surfactants),其界面活性劑添加的濃度須小于該界面活性劑的臨界微胞濃度。
[0097]本發(fā)明的目的還包括所述人類多價(jià)免疫球蛋白的液體、冷凍或凍干藥學(xué)組合物的應(yīng)用，特別是，用于治療病征，例如，脫髓鞘性神經(jīng)炎，多發(fā)性硬化癥，蘭伯特-伊頓(Lambert-Eaton)肌無力癥候群，皮肌炎，用于原發(fā)性免疫缺陷的替代治療，例如，先天性丙球蛋白缺乏癥、先天性低丙球蛋白缺乏癥、多樣性免疫缺乏癥、嚴(yán)重復(fù)合型免疫缺乏癥、Wiskott Aldrich癥候群、嚴(yán)重性二次免疫球蛋白低下和反復(fù)感染的多發(fā)性骨髓瘤或慢性淋巴白血病、HIV-感染病童的反復(fù)感染、或治療免疫球蛋白低下或體液免疫功能障礙的原發(fā)性免疫缺陷。本發(fā)明還包括所述人類多價(jià)免疫球蛋白的液體、冷凍或凍干藥學(xué)組合物的應(yīng)用，用于治療體液性免疫的二次性免疫缺陷，特別是，免疫球蛋白低下和反復(fù)感染相關(guān)的慢性淋巴細(xì)胞白血病或多發(fā)性骨髓瘤、感染相關(guān)的免疫球蛋白低下的干細(xì)胞移植、以及治療重大出血風(fēng)險(xiǎn)或改正血小板數(shù)量的醫(yī)療或手術(shù)前的成人和兒童特發(fā)性血小板減少性紫癒(ITP)、鳥槍彈樣網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病變(Birdshot retinochorioditis)、Guillain-Barr6 癥候群、多源性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病變(MMN)、慢性脫髓鞘性神經(jīng)炎(CIDP)、以及川崎癥(Kawasaki’ sdisease)。
[0098]以下詳述本發(fā)明方法的實(shí)施例。下述的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的目的及優(yōu)選的實(shí)施例，但不可用于限制本發(fā)明的范圍。
[0099]實(shí)施例1
[0100]1.1將“I+II+III”沉淀物回溶至溶液中
[0101]使用“I+II+III”沉淀物作為起始物，其可參照Cohn或Kistler和Nitschmann方法(1962，Vox Sang.7，414)由血漿成分經(jīng)乙醇處理后獲得。將56.7g的沉淀物回溶至228mL的軟化水中，或使用其相同比例。將混合物于15°C ±5°C下攪拌20分鐘。接著將溫度提高至22°C ±2°C，且緩慢地將辛酸(1%重量/體積)加入回溶“I+II+III”沉淀物的溶液中。將加入辛酸后所獲得的溶液的PH值調(diào)整至4.8，且持續(xù)攪拌該溶液60分鐘。
[0102]1.2深層過濾
[0103]將所獲得的溶液以SEITZ?T260濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行深層過濾。該過濾阻擋“I+II+III”沉淀物中的過濾佐劑，以及因加入辛酸所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀。
[0104]為了獲得最佳的過濾產(chǎn)量，可調(diào)整樣本的pH值。
[0105]過濾后，蛋白質(zhì)溶液的pH值僅被調(diào)整為6.0。pH值由4.8調(diào)整至6.0會(huì)產(chǎn)生少量的沉淀(不可溶的多價(jià)免疫球蛋白)并被濾膜阻擋，因而降低多價(jià)免疫球蛋白的過濾產(chǎn)率。
[0106]濾膜的沖洗體積(apyrogenous purified water)和初始樣本的體積相同，以獲得
最佳的最終產(chǎn)量。[0107]1.3流體化床的“混合型”層析
[0108]操作條件如下所示:
[0109].平衡和清洗緩沖液:20mM Na/Na2P04, pH6。
[0110].沖提緩沖液:20mM 甘氨酸 /20mM NaCl，pH9.8。
[0111]利用甘氨酸/NaCl緩沖液的pH影響進(jìn)行選擇沖提，可通過簡(jiǎn)單地稀釋(導(dǎo)電度及pH值的調(diào)整)，以獲得可注入離子交換管柱(TMAE Fractogel)的樣本。
[0112]1.4溶劑/界面活性劑的處理
[0113]將由實(shí)施例1.3的流體化床“混合型”層析所獲得的沖提液以溶劑/界面活性劑進(jìn)行病毒去活化處理，如Neurath和Horowitz (US4, 764, 369)所不。
[0114]10倍濃縮溶劑/界面活性劑混合物含有3%的TnBP (磷酸三丁酯)和10%的辛苯聚醇(Octoxinol)。沖提液中的最終濃度為0.3%的TnBP和1%的辛苯聚醇。
[0115]經(jīng)I小時(shí)的去活化后，將沖提液的pH值調(diào)整至9.0，并以水稀釋，使導(dǎo)電度小于I, 100 μ S/cm。
[0116] 1.5離子交換層析
[0117]所使用的離子交換樹酯為TM A E-F rac toge I (M erc k)。
[0118].預(yù)平衡緩沖液:甘胺酸80mM/NaC180mM，pH9。
[0119].平衡緩沖液:甘胺酸9mM/NaC19mM，pH9。
[0120]在注入樣本后，以平衡緩沖液清洗，并接著以pH6.2的20mM Na/Na2P04緩沖液進(jìn)行沖提。
[0121]1.6親和性層析
[0122]所使用的親和性樹酯為Iso A/Iso B Hypercel (Pall Corporation)
[0123]將TMAE層析的沖提液以親和性層析處理，以移除抗-A和抗-B抗體。
[0124]所期望的多價(jià)免疫球蛋白會(huì)通過管柱，不會(huì)被阻擋下來。
[0125].于去離子水中平衡樹酯
[0126].不清洗管柱，回收未吸附附的部分。
[0127]1.7 過濾
[0128]由親和性層析所獲得的蛋白質(zhì)溶液以深層濾膜90LA CUNO(3M)過濾，接著以孔隙
0.2 μ m的濾膜過濾。以水沖洗濾膜,并合并沖洗液和濾液。
[0129]1.8納米過濾
[0130]前述ρΗ4.5 的濾液先以孔徑 0.1 μ m 的 Fluorodyne II 濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行預(yù)過濾，并以DV5濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行納米過濾,接著以Planova20N濾膜(Asahi)進(jìn)行過濾。
[0131]L 9 配制
[0132]以30kDa閥值進(jìn)行超過濾，將產(chǎn)物前-濃縮至約80g/L，接著以相同體積進(jìn)行濾析(diafiltered)直到導(dǎo)電度〈600 μ S/cm。接著，制備該產(chǎn)物并將蛋白質(zhì)濃度調(diào)整至50g/L。
[0133]實(shí)施例2:以本發(fā)明方法獲得試產(chǎn)規(guī)模的多價(jià)免疫球蛋白濃縮物
[0134]2.1將“I+II+III”沉淀物回溶至溶液中
[0135]使用“I+II+III”沉淀物作為起始物，其可參照Cohn或Kistler和Nitschmann方法(1962，Vox Sang.7，414)，由血漿成分經(jīng)乙醇處理后獲得。將3kg的沉淀物回溶至12L的軟化水中。將該混合物于10°c ±3°C下攪拌20分鐘。接著，將溫度上升至22°C ±2°C，并將辛酸(1%重量/體積)緩慢地加至回溶“Ι+Π+ΙΙΙ”沉淀物的溶液中。將加入辛酸后所獲得的溶液的PH值調(diào)整至4.8，且持續(xù)攪拌該溶液60分鐘。
[0136]2.2深層過濾
[0137]將所獲的溶液以SEITZ?T260濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行深層過濾。該過濾會(huì)阻擋“I+II+III”沉淀物中的過濾佐劑以及因加入辛酸所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀。對(duì)該測(cè)試，所使用的表面積為8.7kg沉淀物/m2過濾介質(zhì)。
[0138]濾膜的沖洗體積(apyrogenous purified water)和初始樣本的體積相同，即15L,以獲得最佳的最終產(chǎn)率。
[0139]2.3流體化床的“混合型”層析
[0140]所使用的層析樹酯為Rhobust IGIV gel (Upfront)。
[0141]直徑IOcm的管柱中具有4.3L的樹酯。
[0142]操作條件如下所示:
[0143].平衡和清洗緩沖液:20mM Na/Na2P04，pH6。
[0144].沖提緩沖液:20mM 甘氨酸 /20mM NaCl，pH9.8。
[0145]2.4溶劑/界面活性劑的處理
[0146]將由流體化床“混 合型”層析所獲得的沖提液以溶劑/界面活性劑進(jìn)行病毒去活化處理，如 Neurath 和 Horowitz (US4, 764, 369)所不。
[0147]10倍濃縮的溶劑/界面活性劑混合物含有3%的TnBP (磷酸三丁酯)和10%的辛苯聚醇(Octoxinol)。沖提液中的最終濃度為0.3%的TnBP和1%的辛苯聚醇。
[0148]經(jīng)I小時(shí)的去活化后，將沖提液的pH值調(diào)整至9.0，并以水稀釋，使導(dǎo)電度小于
I,100 μ S/cm。
[0149]2.5離子交換層析
[0150]所使用的離子交換樹酯為BMD-TMAE Fractogel? (Merck)
[0151]直徑12.7cm的管柱中具有4L的樹酯。
[0152].預(yù)平衡緩沖液:甘氨酸80mM/NaC180mM，pH9。
[0153].平衡緩沖液:甘氨酸9mM/NaC19mM，pH9。
[0154]在注入樣本后，以平衡緩沖液清洗。
[0155]接著，以pH6.2的20mM Na/Na2P04緩沖液進(jìn)行沖提。
[0156]2.6親和性層析
[0157]所使用的親和性樹酯為Iso A/Iso B Hypercel (Pall Corporation)。
[0158]直徑7cm的的管柱中具有154mL的樹酯。
[0159]將TMAE層析的沖提液以親和性層析處理，以移除抗-A和抗-B抗體。所欲的多價(jià)免疫球蛋白會(huì)通過管柱，不會(huì)被阻擋下來。
[0160].于去離子水中平衡樹酯。
[0161].不清洗管柱，將非吸附的部分回收。
[0162]2.7 過濾
[0163]將由Iso A/Iso B Hypercel親和性層析所獲得的蛋白質(zhì)溶液以深層濾膜90LACUNO (3M)過濾，接著以孔隙0.2 μ m的濾膜過濾。以水沖洗濾膜,并合并沖洗液和濾液。[0164]2.8納米過濾
[0165]前述ρΗ4.5 的濾液先以孔徑 0.1 μ m 的 Fluorodyne II 濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行預(yù)過濾，并以DV50濾膜(Pall Corporation)進(jìn)行納米過濾,接著以Planova20N濾膜(Asahi)進(jìn)行過濾。
[0166]2.9 配制
[0167]以30kDa閥值進(jìn)行超過濾,將產(chǎn)物預(yù)濃縮(pre-concentrated)至約80g/L,接著以相同體積進(jìn)行濾析(diafiltered)直到導(dǎo)電度〈600 μ S/cm。接著,制備所述產(chǎn)物并將蛋白質(zhì)濃度調(diào)整至50g/L。
[0168]實(shí)施例3:產(chǎn)量的方法
[0169]依照本發(fā)明實(shí)施例1且特別是實(shí)施例3的方法，以三個(gè)不同的“I+II+III”沉淀物進(jìn)行個(gè)3個(gè)生產(chǎn)批次。以1%的辛酸移除蛋白酶。利用SEITZ T2600板式壓濾機(jī)進(jìn)行過濾。
[0170]對(duì)照組批次依專利申請(qǐng)EP1385886所示的方法進(jìn)行處理。
[0171]所述新方法的產(chǎn)量如下表所示:
[0172]在配制濃縮步驟階段的累積產(chǎn)量(g)/蛋白質(zhì)或血漿Ig(L)
[0173]
【權(quán)利要求】
1.一種制造人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物的方法，所述多價(jià)免疫球蛋白來自血漿初始溶液或富含免疫球蛋白的血漿成分，其特征在于包括: (a)利用辛酸移除污染蛋白以獲得不含蛋白酶的溶液的步驟， (b)之后對(duì)所述不含蛋白酶的溶液進(jìn)行流體化床層析步驟， 所述方法獲得產(chǎn)率大于每公升血漿4.5g免疫球蛋白的人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述辛酸的使用濃度為0.5至1.5%，優(yōu)選的為0.8至1.2%，更佳為0.9至1.1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述利用辛酸移除污染蛋白的步驟(a)于ρΗ4.3至4.9下進(jìn)行，優(yōu)選的為ρΗ4.6至4.8。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)所述的方法，其中，在所述利用辛酸移除污染蛋白的步驟(a)和流體化床層析步驟(b)之間，還包括在酸性pH值下的澄清步驟，優(yōu)選的為深層過濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述不含蛋白酶的溶液的流體化床層析步驟(b)是以離子交換型、親和型、“偽親和型”或“混合型”的層析載體進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述“混合型”的流體化床層析步驟包括: -添加至已事先利用pH值為4.5至8的緩沖液預(yù)平衡的層析管柱，所述溶液經(jīng)過深層過濾的澄清步驟，且事先調(diào)整至相同的pH值， -以緩沖溶液清洗所述管柱直到管柱中所有未吸附的蛋白都被移除， -以PH值為8至10的沖提緩沖液沖提吸附于所述管柱上的多價(jià)免疫球蛋白，以及 -回收富含人類多價(jià)免疫球蛋白的溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任意一項(xiàng)所述的方法，還包括在步驟(b)后有一個(gè)或多個(gè)下列步驟: (i)病毒去活化步驟， (?)對(duì)上述步驟所獲得的溶液進(jìn)行的陰離子交換層析步驟， (iii)移除上述步驟所獲得的溶液中抗-A和抗-B抗體的步驟， (iv)通過孔徑100至15nm的納米濾膜進(jìn)行的過濾步驟， (V)將上述步驟所獲得的溶液經(jīng)超過濾的濃縮步驟和配制步驟，以及 (vi)常規(guī)的消毒過濾步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述起始溶液為經(jīng)乙醇分離或?qū)游龇蛛x的富含免疫球蛋白的血漿成分。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述起始溶液為由乙醇分離的血漿成分所獲得的“ I+II+III ”沉淀物或“ II+III ”沉淀物，且回溶至溶液中。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物回溶至經(jīng)純化的注射用水或一含離子的溶液中。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述含離子的溶液為包含NaCl濃度小于或等于20mM的溶液，優(yōu)選的為5至15mM，優(yōu)選的等于10mM。
12.根據(jù)權(quán)利要求8至11任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述“I+II+III”沉淀物或“II+III”沉淀物以CaCl2溶液處理，所述CaCl2濃度小于或等于20mM，優(yōu)選的為5至15mM，優(yōu)選的為IOmM的CaCl2溶液。
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12任意一項(xiàng)所述的方法，包括: (i)一利用辛酸移除污染蛋白的步驟， (?) 一深層過濾的澄清步驟， (iii)一“混合型”流體化床層析步驟， (iv)一經(jīng)溶劑/界面活性劑處理的病毒去活化步驟， (v)一離子交換層析步驟， (vi)—移除抗-A和抗-B抗體的步驟， (vii)—通過孔徑100至15nm的納米濾膜的過濾， (viii)一將上述步驟所獲得的溶液經(jīng)超過濾的濃縮步驟和配制步驟，之后進(jìn)行常規(guī)的消毒過濾步驟。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至13任意一項(xiàng)所述的方法，還包括下列步驟: (a)將一個(gè)或多個(gè)藥學(xué)上可接受的穩(wěn)定劑添加至權(quán)利要求1至13任意一項(xiàng)所述的人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物中，以及 (b)可選擇性地冷凍或凍干所述由上述步驟所獲得的藥學(xué)組合物； 使所述藥學(xué)組合物為一液體、冷凍或凍干形式。
15.一種由權(quán)利要求1至13任意一項(xiàng)所述的方法所獲得的人類多價(jià)免疫球蛋白濃縮物，其特征在于所述濃縮物的抗-補(bǔ)體活性小于30%。
16.一種液體、冷凍或凍干的人類多價(jià)免疫球蛋白組合物在制備治療下列病理的藥物中的應(yīng)用，所述病理是從下列所組成的組中選擇:脫髓鞘性神經(jīng)炎、多發(fā)性硬化癥、蘭伯特-伊頓肌無力癥候群、皮肌炎，用于原發(fā)性免疫缺陷的替代治療，例如，先天性丙球蛋白缺乏癥、先天性低丙球蛋白缺乏癥、多樣性免疫缺乏癥、嚴(yán)重復(fù)合型免疫缺乏癥、WiskottAldrich癥候群、嚴(yán)重性二次免疫球蛋白低下和反復(fù)感染的多發(fā)性骨髓瘤或慢性淋巴白血病、HIV-感染病童的反復(fù)感染、或治療免疫球蛋白低下或體液免疫功能障礙的原發(fā)性免疫缺陷、用于治療體液性免疫的二次性免疫缺陷，特別是，免疫球蛋白低下和反復(fù)感染相關(guān)的慢性淋巴細(xì)胞白血病或多發(fā)性骨髓瘤、感染相關(guān)的免疫球蛋白低下的干細(xì)胞移植、以及治療重大出血風(fēng)險(xiǎn)或改正血小板數(shù)量的醫(yī)療或手術(shù)前的成人和兒童特發(fā)性血小板減少性紫癒(ITP)、鳥彈樣網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病變(Birdshot retinochorioditis) > Guillain-Barre癥候群、多源性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病變(MMN)、慢性脫髓鞘性神經(jīng)炎(CIDP)及川崎癥(Kawasaki’ sdisease)
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其中所述多價(jià)免疫球蛋白的藥學(xué)組合物為以權(quán)利要求14所述的方法所獲得的組合物。
【文檔編號(hào)】C07K1/36GK103687874SQ201280034086
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年7月11日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月11日
【發(fā)明者】阿布迪莎特·克托羅, 達(dá)米恩·巴塔耶, 喬治斯·米修 申請(qǐng)人:法國(guó)分裂與生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室