血管生成素樣3(ANGPTL3)iRNA組合物及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供iRNA組合物，該組合物影響RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)介導(dǎo)的ANGPTL3基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的切割。該ANGPTL3可以在一個細(xì)胞內(nèi)，例如在一個受試者，例如一個人的體內(nèi)的一個細(xì)胞內(nèi)。本發(fā)明還提供使用本發(fā)明的iRNA組合物的方法，用于抑制ANGPTL3基因的表達(dá)和/或用于治療將受益于ANGPTL3基因表達(dá)抑制或減少的受試者，例如一個經(jīng)受或易于經(jīng)受脂類代謝作用失調(diào)的受試者，例如一個經(jīng)受或易于經(jīng)受高血脂癥或高甘油三酯血癥的受試者。
【專利說明】血管生成素樣3 (ANGPTL3) i RNA組合物及其使用方法
[0001]相關(guān)申請
[0002]本申請要求2011年6月21日提交的美國臨時申請?zhí)?1/499，620以及2012年四月25日提交的美國臨時申請?zhí)?1/638，288的優(yōu)先權(quán)，將它們每個的全部內(nèi)容通過引用結(jié)合在此。
[0003]發(fā)明背景
[0004]血管生成素樣3 (ANGPTL3)是調(diào)節(jié)脂質(zhì)新陳代謝并主要在肝臟中表達(dá)的分泌因子的血管生成素樣家族的一員(Koishi (小石),R.等人，(2002)Nat.Genet.(自然.遺傳學(xué))30(2):151-157)。ANGPTL3雙重抑制脂蛋白脂肪酶(LPL)的催化活性，其催化甘油三酸酯的水解以及內(nèi)皮脂肪酶(EL)的水解，該內(nèi)皮脂肪酶水解高密度脂蛋白(HDL)磷脂。在降低血脂的又肥胖的KK/Snk小鼠中，ANGPTL3表達(dá)的縮減通過促進甘油三酸酯的清除對高血脂癥和動脈粥樣硬化具有一個保護效應(yīng)(Ando (安藤)等人，(2003) J.LipidRes.(脂質(zhì)研究雜志)，44 =1216-1223)。人類的ANGPTL3血漿濃度與血漿HDL膽固醇和HDL磷脂水平正相關(guān)(Shimamura (島村)等人，(2007) Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.(動脈粥樣硬化、血栓和血管生物學(xué))，27 =366-372)。 [0005]脂質(zhì)代謝作用的失調(diào)會導(dǎo)致血脂例如甘油三酸酯和/或膽固醇的水平提高。提高的血脂與高血壓、心血管疾病、糖尿病以及其他病理學(xué)病癥高度相關(guān)。高甘油三酯血癥是脂質(zhì)代謝作用失調(diào)的一個實例，其特征為高血液水平的甘油三酸酯。它已經(jīng)與動脈粥樣硬化相關(guān)，甚至在沒有高膽固醇水平(高膽固醇血癥)的情況下。當(dāng)甘油三酸酯濃度過多時(即聞于1000mg/dl或12mmol/l),聞甘油二酷血癥還會導(dǎo)致膜腺炎。聞血脂癥是脂質(zhì)代謝作用失調(diào)的另一個實例，其特征為血液中脂質(zhì)和/或脂蛋白中的任一種或全部的水平提高。針對脂質(zhì)代謝作用失調(diào)的當(dāng)前治療包括節(jié)食、鍛煉和用他汀類藥物或其他藥物治療，這些不總是有效的。因此，本領(lǐng)域中存在對患有脂質(zhì)代謝作用失調(diào)的受試者的替代治療的需求。
[0006]發(fā)明概述
[0007]本發(fā)明提供iRNA組合物，該組合物影響RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)介導(dǎo)的ANGPTL3基因的RNA轉(zhuǎn)錄物的切割。ANGPTL3基因可以在一個細(xì)胞內(nèi)，例如在一個受試者例如一個人的體內(nèi)的一個細(xì)胞內(nèi)。本發(fā)明還提供使用本發(fā)明的iRNA組合物的方法，用于抑制ANGPTL3基因的表達(dá)和/或用于治療將受益于ANGPTL3基因表達(dá)抑制或減少的受試者，例如一個經(jīng)受或易于經(jīng)受脂質(zhì)代謝作用失調(diào)的受試者，例如一個經(jīng)受或易于經(jīng)受高血脂癥或高甘油三酯血癥的受試者。
[0008]因此，在一個方面，本發(fā)明提供用于抑制ANGPTL3基因的表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsRNA)。該dsRNA包括一個正義鏈和一個反義鏈，其中該正義鏈包括與SEQ ID NO:1的核苷酸序列區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)的核苷酸，并且該反義鏈包括與SEQIDNO:5的核苷酸序列區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)的核苷酸。
[0009]在另一個方面，本發(fā)明提供用于抑制ANGPTL3基因的表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsRNA)。該dsRNA包括一個正義鏈和一個反義鏈，該反義鏈包括一個互補性區(qū)域，該互補性區(qū)域包括與在表2、3、7、8、9和10中所列出的反義鏈序列中的任一個區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)的核苷酸。
[0010]在一個實施例中，該正義鏈和反義鏈包括選自下組的序列，該組由以下各項組成:表7和表8 的 AD-53063.1、AD_53001.1、AD_53015.1、AD_52986.1、AD_52981.1、AD_52953.1、AD-53024.UAD-53033.1、AD_53030.1、AD_53080.1、AD_53073.1、AD_53132.1、AD_52983.1、AD-52954.1、AD_52961.1、AD_52994.1、AD_52970.1、AD_53075.1、AD_53147.1、AD_53077.1。
[0011]在本發(fā)明的某些實施例中，該dsRNA包括至少一個修飾核苷酸。在一個實施例中，修飾的核苷酸的至少一個選自下組，該組由以下各項組成'2' -O-甲基修飾的核苷酸、包括5'-硫代磷酸酯基的核苷酸，和與膽留烯基衍生物或十二烷酸雙癸酰胺基連接的末端核苷酸。在另一個實施例中，修飾的核苷酸選自下組，該組由以下各項組成:2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖定核苷酸、非堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、磷酰胺酯，和包括非天然堿基的核苷酸。
[0012]該dsRNA的互補性區(qū)域可能是至少17個核苷酸的長度、19個和21個核苷酸之間的長度、或19個核苷酸的長度。
[0013]在一個實施例中，該dsRNA的每個鏈不多于30個核苷酸長度。
[0014]dsRNA的至少一個鏈包括至少I個核苷酸或至少2個核苷酸的的3’突出。
[0015]在某些實施例中，一個dsRNA進一步包括一個配體。在一個實施例中，該配體軛合至該dsRNA的正義鏈的3’末端。
[0016]在一些實施例中，該配體是通過二價或三價分支連接物而附接的一個或多個N-乙酰半乳胺糖(GalNAc)衍生物。在具體實施例中，該配體是
[0017]
【權(quán)利要求】
1.一種用于抑制ANGPTL3表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包括一個正義鏈和一個反義鏈，其中所述正義鏈包括與SEQ ID NO:1的核苷酸序列區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)的核苷酸，并且所述反義鏈包括與SEQ ID NO:5的核苷酸序列區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)的核苷酸。
2.一種用于抑制ANGPTL3表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包括一個正義鏈和一個反義鏈，該反義鏈包括一個互補性區(qū)域，所述互補性區(qū)域包括與表2、3、7、8、9和10中列出的反義序列中任一個區(qū)別在于不多于3個核苷酸的至少15個連續(xù)核苷酸。
3.如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該正義鏈和反義鏈包括選自下組的序列，該組由以下各項組成:表 7 和表 8 的 AD-5298L 1、AD-53063.1、AD-53001.1、AD-53015.1、AD-52986.1、AD_52953.UAD-53024.1、AD_53033.1、AD_53030.1、AD_53080.1、AD_53073.1、AD-53132.UAD-52983.1、AD_52954.1、AD_52961.1、AD_52994.1、AD_52970.1、AD_53075.1、AD-53147.UAD-53077.1。
4.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括至少一個修飾的核苷酸。
5.如權(quán)利要求4所述的dsRNA，其中所述修飾的核苷酸的至少一個選自下組，該組由以下各項組成:一種2' -O-甲基修飾的核苷酸、一種包括5'-硫代磷酸酯基的核苷酸、以及與一種膽留烯基衍生物或一種十二烷酸雙癸酰胺基連接的一種末端核苷酸。
6.如權(quán)利要求4所述的dsRNA，其中所述的經(jīng)修飾的核苷酸選自下組，該組由以下各項組成:一種W -脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、一種Y -脫氧修飾的核苷酸、一種鎖定的核苷酸、一種脫堿基核苷酸、一種2’ -氨基修飾的核苷酸、一種2’ -烷基修飾的核苷酸、一種嗎啉代核苷酸、一種氨基磷酸酯、以及一種包括非天然堿基的核苷酸。
7.如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補性區(qū)域是至少17個核苷酸長度。
8.如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補性區(qū)域是在19個和21個核苷酸長度之間。
9.如權(quán)利要求8所述的dsRNA，其中該互補性區(qū)域是19個核苷酸長度。
10.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中每個鏈不多于30個核苷酸長度。
11.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一個鏈包括至少I個核苷酸的3^突出端。
12.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一個鏈包括至少2個核苷酸的:V突出端。
13.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA,進一步包括一個配體。
14.如權(quán)利要求13所述的dsRNA，其中該配體軛合至該dsRNA的正義鏈的3’末端。
15.如權(quán)利要求13所述的dsRNA，其中該配體是一種N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。
16.如權(quán)利要求15所述的dsRNA，其中該配體是
17.如權(quán)利要求2所述的dsRNA，其中該互補性區(qū)域由表2、3、7、8、9和10的反義序列之一組成。
18.如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA，其中該dsRNA包括由選自表2、3、9和10的序列的一個正義序列組成的一個正義鏈和由選自表2、3、7、8、9和10的序列的一個反義序列組成的一個反義鏈。
19.一種細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA。
20.一種編碼dsRNA的至少一個鏈的載體，其中所述dsRNA包括與編碼ANGPTL3的mRNA的至少一部分互補的一個區(qū)域，其中所述dsRNA是30個或更少堿基對長度，并且其中所述dsRNA靶向所述mRNA用于切割。
21.如權(quán)利要求20所述的載體，其中該互補性區(qū)域是至少15個核苷酸長度。
22.如權(quán)利要求20所述的載體，其中該互補性區(qū)域是19個至21個核苷酸長度。
23.—種細(xì)胞，包含如權(quán)利要求20所述的載體。
24.—種用于抑制一種ANGPTL3基因表達(dá)的藥物組合物，包括如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求20所述的載體。
25.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，進一步包括一種脂質(zhì)配制品。
26.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中該脂質(zhì)配制品包括SNALP、或XTC。
27.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中該脂質(zhì)配制品包括一種MC3。
28.—種抑制細(xì)胞中ANGPTL3表達(dá)的方法，該方法包括: (a)用如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求20所述的載體接觸該細(xì)胞；以及 (b)維持步驟(a)中產(chǎn)生的細(xì)胞一段時間，該時間足以獲得ANGPTL3基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的降解，由此抑制該細(xì)胞中的ANGPTL3基因的表達(dá)。
29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述細(xì)胞是在一個受試者體內(nèi)。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中該受試者是一個人。
31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中該人類受試者患有一種脂質(zhì)代謝作用失調(diào)。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其中該脂質(zhì)代謝作用失調(diào)是高脂血癥或高甘油三酯血癥。
33.如權(quán)利要求28-32中任一項所述的方法，其中ANGPTL3表達(dá)被抑制至少約30%。
34.—種治療患有一種失調(diào)的受試者的方法,該受試者將受益于ANGPTL3表達(dá)的減少，該方法包括將一個治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求20所述的載體給予該受試者，由此治療所述受試者。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中該失調(diào)是一種脂質(zhì)代謝作用失調(diào)。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其中該脂質(zhì)代謝作用失調(diào)是高脂血癥或高甘油三酯血癥。
37.如權(quán)利要求34所述的方法，其中向該受試者給予該dsRNA造成一種或多種血脂的減少和/或ANGPTL3蛋白累積的降低。
38.如權(quán)利要求34所述的方法,其中將該dsRNA以約0.01mg/kg至約10mg/kg或約5mg/kg至約50mg/kg的劑量給予。
39.一種在一個受試者體內(nèi)抑制ANGPTL3表達(dá)的方法，該方法包括將一個治療有效量的如權(quán)利要求1或2所述的dsRNA或如權(quán)利要求20所述的載體給予所述受試者，由此抑制所述受試者體內(nèi)的ANGPTL3表達(dá)。
40.如權(quán)利要求39所述的方法,其中將該dsRNA以約0.01mg/kg至約10mg/kg或約5mg/kg至約50mg/kg的劑量給予 所述受試者。
【文檔編號】C07H21/04GK103890000SQ201280041047
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月21日
【發(fā)明者】B·貝藤考特, W·奎爾比斯, K·非茨杰拉德, M·弗蘭克-卡梅內(nèi)茨基, S·米爾斯坦, S·舒爾加-莫斯卡亞 申請人:阿爾尼拉姆醫(yī)藥品有限公司