抗人xcr1抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的一個目的是提供一種結合至人XCR1的單克隆抗體，其中該抗體結合至包含選自下組的至少三個氨基酸的線性或非連續(xù)表位，該組由SEQ?ID?NO：91的氨基酸序列中的第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個氨基酸組成。
【專利說明】抗人XCR1抗體
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及與人XCRl結合的抗體。
【背景技術】
[0002]趨化因子是對白細胞趨化性和白細胞活化具有影響的堿性肝素結合蛋白的集合術語。基于各種趨化因子的一級結構的比較，根據(jù)保留性半胱氨酸殘基的位置將趨化因子分類為CXC、CC、C、和CX3C亞家族。XCLl (也被稱為淋巴細胞趨化因子(Ltn)或淋巴細胞趨化因子α (Ltn-α ))和XCL2 (也被稱為淋巴細胞趨化因子β (Ltn-β ))是被分類為如上所述的亞家族C的趨化因子。XCRl (也被稱為GPR5、SCM-1 α、或ATAC)是一種G蛋白偶聯(lián)趨化因子受體，其特異性地結合至XCLl和CXL2。
[0003]已經(jīng)在mRNA水平檢測了 XCRl在各種人組織中的表達。報道了 XCRl在胎盤中的高表達，但是在胰臟和胸腺中的表達是低的(非專利文獻I)。此外，CXRl主要在樹突細胞中表達。CXRl在小鼠中尤其在⑶8 α +樹突細胞中高表達(非專利文獻2 ;和非專利文獻3)。⑶8 a +樹突細胞一般呈現(xiàn)在二級淋巴組織中，例如胰臟和淋巴結，并且已知進行“交叉呈遞”，其在抗感染和對腫瘤細胞的免疫應答的反應中起重要作用。還已知XCRl在人CD141+樹突細胞中高表達，這些樹突細胞被認為是小鼠⑶8 α +樹突細胞的同源物(非專利文獻4)。
[0004]從細胞外部吸收到抗原呈遞細胞中的抗原通常被降解為肽，呈現(xiàn)在II類主要組織相容性抗原(MHC II類)上，并且被CD4+T細胞識別。相反，存在著其中從細胞外部吸收的抗原通過不同于以上描述的常規(guī)路徑的一條路徑呈現(xiàn)在I類主要組織相容性抗原(MHCI類)的情況。這種抗原呈遞過程被稱為“交叉呈遞”。在這個過程中，呈現(xiàn)在MHC I類上的抗原被CD8+T細胞識別，然后被分化為起防御和消除宿主中的腫瘤細胞作用的細胞毒性T細胞(CTL)(非專利文獻5)。
[0005]各種免疫相關細胞的遷移發(fā)生在炎癥反應過程中。具體地說，樹突細胞遷移至局部炎癥部位發(fā)生抗原吞噬。趨化因子和趨化因子受體在引起樹突細胞的這種遷移中起重要作用。在遷移至局部炎癥部位之后，這些樹突細胞呈現(xiàn)針對T細胞的抗原，并且激活T細胞。隨后，該信息從T細胞傳輸?shù)礁嗟拿庖呦嚓P細胞，從而擴大了免疫反應(非專利文獻6)。
[0006]在抗原呈遞細胞中，這些樹突細胞具有特別優(yōu)異的抗原呈遞能力，并且在T細胞活化中起非常重要的作用。已經(jīng)表明，由于T細胞涉及各種免疫性疾病，包括自身免疫性疾病的發(fā)展和惡化，控制樹突細胞就是控制T細胞活化，這將會導致各種免疫性疾病的改善(非專利文獻6 ;和非專利文獻7)。
[0007]此外，已經(jīng)顯示來源于兔子的抗人XCRl多克隆抗體具有抑制正常口腔角質形成細胞和口腔癌細胞的XCL誘導的遷移的作用(非專利文獻8)。
[0008]引用清單
[0009]非專利文獻 [0010]非專利文獻1:Yoshida T, Imai T, Kakizaki M, Nishimura M, Takagi S，Yoshie0.“Identification of Single C Motif-l/lymphotactin receptor XCRl (單個C基序-1/淋巴細胞趨化因子受體XCRl的鑒定)，”J.Biol.Chem.(生物化學雜志)273:16551-16554(1998)
[0011]非專利文獻2:Crozat K，Guiton R，Contreras V, Feuillet V, Dutertre CA, VentreEj Vu Manh TPj Baranek T，Storset AKj Marvel Jj Boudinot P，Hosmalin A,Schwartz-CornilI，Dalod M “The XC chemokine receptorlis a conserved selective marker ofmammalian cells homologous to mouse CD8 a +dendritic cells (XC 趨化因子受體 I 是與小鼠CD8a +細胞同源的哺乳動物細胞的保守性選擇標記)，”J Exp Med (實驗醫(yī)學雜志)，207:1283-1292(2010)
[0012]非專利文獻3:Dorner BGj Dorner MB, Zhou X，Opitz C，Mora A, Guttler S，HutloffA，Mages HWj Ranke K，Schaefer M，Jack RS，Henn Vj Kroczek RA iiSelective expressionof the chemokine receptor XCRlon cross-presenting dendritic cells determinescooperation with CD8+T_cells (趨化因子受體XCRl在交叉呈遞樹突細胞上的選擇性表達決定了與 CD8+T 細胞的合作)，” Immunity (免疫)，31:823-833 (2009)<
[0013]非專利文獻4:Bachem A，Guttler S，Hartung E，Ebstein F，Schaefer Mj TannertA，Salama A,Movassaghi Kj Opitz C，Mages HWj Henn Vj Kloetzel PM，Gurka Sj KroczekRA， “Superior antigen cross-presentation and XCRlexpression define humanCDllc+CD141+cells as homologues of mouse CD8+dendritic cells (優(yōu)越的抗原交叉呈遞和XCRl表達將人⑶IIc+⑶141+細胞定義為小鼠⑶8+樹突細胞的同源物)，”實驗醫(yī)學雜志，207:1273-1281 (2 010) <
[0014]非專利文獻5:Kurts C，Robinson BWj Knolle PA，“Cross-priming in health anddisease (健康和疾病中的交叉引發(fā))，’"Nat Rev Immunol (自然免疫學評論)，10:403-414 (2010) <
[0015]非專利文獻6:Kurts C，Robinson BWj Knolle PA，“Cross-priming in healthand disease (健康和疾病中的交叉引發(fā))，”自然免疫學評論，10:403-414(2010)
[0016]非專利文獻7:Waldner H，“The role of innate immune response in autoimmunedisease development (天然免疫應答在自身免疫性疾病發(fā)展中的作用)，”Autoimmun, Rev (自身免疫評論)8:400-404 (2009)
[0017]非專利文獻8:Khurram SA, Whawell SA, Bingle L, Murdoch C，McCabe BM, FarthingPM, “Functional expression of the chemokine receptor XCRlon oral epithelialcells (趨化因子受體XCRl在口腔上皮細胞上的功能性表達)，”J Pathol (病理學雜志)，221:153-63(2010)
[0018]發(fā)明概述
[0019]技術問題
[0020]使用疾病動物模型已經(jīng)積累了很多關于樹突細胞涉及在免疫性疾病的發(fā)展、惡化等等的知識。然而，目前對于很多免疫性疾病既沒有有效的治療方法也沒有預防方法。此外，雖然已經(jīng)知道抗人XCRl抗體具有抑制細胞遷移作用(Khurram SA1Whawell SA1BingleL,Murdoch C，McCabe BM, Farthing PM, “Functional expression of the chemokinereceptor XCRlon oral epithelial cells (趨化因子受體XCRl在口腔上皮細胞上的功能性表達)，”病理學雜志221:153-63 (2010)),因為這樣一種抗體是來源于兔子的多克隆抗體，它不太可能直接作為一種臨床適用的藥品。另外，上述文獻沒有表明這樣的抗體抑制樹突細胞的細胞遷移，不可能還預測這樣的抗體在治療或預防免疫性疾病中是有效的。
[0021]本發(fā)明的一個目的是提供選擇性地結合至人XCRl的單克隆抗體；優(yōu)選地，選擇性地結合至人XCRl并且抑制細胞遷移的單克隆抗體；進一步優(yōu)選地，基于以上描述的作用，在治療或預防免疫性疾病尤其是皮膚免疫性疾病中有效的抗體。
[0022]問題的解決方案
[0023]諸位本發(fā)明人進行了大量研究，試圖解決以上問題。結果，他們開發(fā)了結合至人XCRl的抗體，并且發(fā)現(xiàn)這些抗體具有抑制細胞遷移的作用并且具有治療或預防免疫性疾病例如皮膚免疫性疾病的顯著作用，這與樹突細胞的遷移相關。
[0024]在下文的本說明書中，以上描述的抗體有時簡單地被稱為“抗體”、“本發(fā)明的抗體”、或“抗人XCRl抗體”。
[0025]本發(fā)明的有益效果
[0026]本發(fā)明的抗體結合至人XCRl。本發(fā)明的抗體包括抑制人XCRl和人XCLl之間的結合的抗體。這樣一種抗體具有作為添加至人XCRl-人XCLl結合抑制劑的活性成分的可能。
[0027]本發(fā)明的抗體還包括抑制細胞遷移尤其是樹突細胞遷移的抗體。這樣一種抗體具有作為添加至細胞遷移抑制劑尤其是樹突細胞遷移抑制劑中的活性成分的可能。此外，本發(fā)明的抗體還包括特異性地識別BDCA3 (也被稱為⑶141)陽性細胞的抗體。因此，包含本發(fā)明的抗體的藥物組合物具有作為用于治療與細胞遷移尤其是樹突細胞遷移相關的免疫性疾病的治療劑的可能。具體地說，該藥物組合物具有可能作為一種治療劑用于治療皮膚免疫性疾病，例如遲發(fā)型超敏反應、銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免`疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、系統(tǒng)性硬皮病、妊娠期皰疹、線性IGA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、和蕁麻疹。
[0028]除了這些皮膚免疫性疾病之外，本發(fā)明的抗體還具有可能作為治療劑用于治療免疫性疾病、例如I型糖尿病、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、多發(fā)性硬化、強直性脊柱炎、甲狀腺炎、移植物排斥、克羅恩病、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、前葡萄膜炎、韋格納肉芽腫病、或貝赫切特病。
[0029]附圖簡要說明
[0030]圖1顯示了小鼠抗人XCRl抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞的反應性的FACS分析結果。
[0031]圖2顯示了小鼠抗人XCRl抗體(2H6、5G7、和11H2)對人淋巴細胞趨化因子誘導的表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞的遷移的中和活性的趨化性試驗的分析結果。
[0032]圖3顯示了人源化抗人XCRl抗體(HK1L2和HK5L5)對表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞的反應性的FACS分析結果，與它們的親本小鼠抗人XCRl抗體(5G7)及其嵌合抗體的反應性平行。
[0033]圖4顯示了小鼠抗人XCRl抗體(5G7)和人源化抗人XCRl抗體(HK1L2和HK5L5)對人BDCA3+樹突細胞的反應性的FACS分析結果。
[0034]圖5顯示了人源化抗人XCRl抗體(HK1L2和HK5L5)對人淋巴細胞趨化因子誘導的表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞的遷移的中和活性的趨化性試驗的分析結果，與它們的親本小鼠抗人XCRl抗體(5G7)及其嵌合抗體的中和活性平行。
[0035]圖6顯示了人源化抗人XCRl抗體(HK1L2和HK5L5)和嵌合抗體對人淋巴細胞趨化因子誘導的人BDCA3+樹突細胞的遷移的中和活性的跨內(nèi)皮遷移試驗的分析結果，與同種型對照抗體平行(人IgG2，K)。
[0036]圖7顯示了本發(fā)明的抗體的重鏈⑶Rsl至3和輕鏈⑶Rsl至3的氨基酸序列的比較。 [0037]該圖還顯示了重鏈⑶Rsl至3和輕鏈⑶Rsl至3的普遍的氨基酸序列。
[0038]圖8顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(5G7)對遲發(fā)型接觸性皮炎(DTH)的小鼠模型的藥理效應。
[0039]圖8A和SB分別顯示了通過比較在本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(5G7)和對照抗體之間用DNFB誘導之后在24小時和48小時的耳腫脹的程度(mm)獲得的結果。
[0040]圖9顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(5G7)對各種人趨化因子受體的結合專一性。在該圖中，曲線圖的橫坐標軸顯示了藻紅蛋白(PE)的熒光強度。
[0041]圖10顯示了本發(fā)明的抗體結合的人XCRl的氨基酸序列。
[0042]圖11顯示了使用本發(fā)明的抗體的對于表達人XCRl的細胞的細胞毒性。
[0043]圖12顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(5G7)的細胞毒性T淋巴細胞試驗結果的分析。
[0044]圖13顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(2H6、5G7、和11H2 )對嵌合人/小鼠XCRl表達細胞的反應性。
[0045]圖14顯示了通過肽ELISA的小鼠抗人XCRl抗體(2H6，和5G7)結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0046]圖15顯示了通過使用丙氨酸突變體的抗人XCRl多克隆抗體結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0047]圖16顯示了使用丙氨酸突變體的小鼠抗人XCRl抗體(2H6)結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0048]圖17顯示了小鼠抗人XCRl抗體(5G7)結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0049]圖18顯示了使用丙氨酸突變體的小鼠抗人XCRl抗體(11H2)結合部位對人EXRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0050]圖19顯示了使用丙氨酸突變體的人源化抗人XCRl抗體(HK1L2)結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0051]圖20顯示了使用丙氨酸突變體的人源化抗人XCRl抗體(HK5L5)結合部位對人XCRl胞外結構域作圖的結果的分析。
[0052]圖21顯示了在結合至人XCRl表達細胞的小鼠抗人XCRl抗體(2H6、5G7、和11H2)之間競爭的結果的分析。
[0053]圖22顯示了小鼠抗人XCRl單克隆抗體(5G7)和商業(yè)山羊抗人XCRl多克隆抗體對各種人趨化因子受體的結合專一性。在該圖中，曲線圖的橫坐標軸顯示了藻紅蛋白(PE)的熒光強度。[0054]圖23顯示了小鼠抗人XCRl單克隆抗體(5G7)和人源化抗人XCRl單克隆抗體(HK1L2和HK5L5)對各種人趨化因子受體的結合專一性。在該圖中，曲線圖的橫坐標軸顯示了藻紅蛋白(PE)的熒光強度。
[0055]圖24顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl單克隆抗體(5G7)對由乳酪分枝桿菌誘導的遲發(fā)型接觸性皮炎(DTH)的小鼠模型的藥理效應。
[0056]圖25顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體(5G7)對通過實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)進行的多發(fā)性硬化(MS)的小鼠模型的藥理效應。
[0057]圖26顯示了本發(fā)明的小鼠抗人XCRl抗體的競爭性配體結合試驗的結果的分析。實施例說明
[0058]基于已知的文獻和類似物，用于實踐本發(fā)明的各種技術對于本領域的技術人員是容易和可靠地實現(xiàn)的，除了那些在此明確鑒定其來源的那些技術之外。例如，關于基因工程和分子生物技術，可以參考以下文獻:例如Sambrook and Russell (桑布魯克和拉塞爾)，“Molecular Cloning:A Laboratory Manual (分子克隆實驗指南)，”Cold SpringHarbor Laboratory Press (美國冷泉港實驗室出版社)，New York (紐約)，(2001);以及Ausubel, F M 等人，“Current Protocols in Molecular Biology (現(xiàn)代分子生物學實驗技術)，” John ffiley&Sons (約翰.威利父子出版公司)，紐約，NY。
[0059]此外，關于抗體工程技術，可以參考以下文獻:例如Kabat (卡巴特)等人，“Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學感興趣的蛋白質的序列)，’U.S.Department of Health and Human Services(美國衛(wèi)生和人類服務部)，(1983);以及 Konterman(孔特曼)和 Dubel(迪貝爾)，“Antibody Engineering(抗體工程)，”Springer(施普林格)。
`[0060]術語解釋
[0061]術語“核酸”包括，例如核糖核苷酸類、脫氧核糖核苷酸類、以及它們的修飾形式。核酸可以是單鏈或雙鏈的，也可以是多核苷酸或寡聚核苷酸。
[0062]術語“蛋白質”指的是其中兩種或更多種氨基酸通過肽鍵連接的化合物。
[0063]術語“單克隆抗體”指的是從基本上同質的抗體群獲得的抗體。換句話說，包括在這個群中的單獨的抗體是相同的，除了可能以少量存在的天然發(fā)生的突變之外。單克隆抗體是高度特異性的，并且針對單個抗原部位。此外，不同于包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制劑，每種單克隆抗體針對抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)勢還在于它們可以被合成而不被其他抗體污染。修飾語“單克隆”指的是從基本上同質的抗體群獲得的抗體特征，不應該被解釋為表示抗體必須通過任何特定方法制備。
[0064]例如，應當按照本發(fā)明使用的單克隆抗體可以通過雜交瘤方法制備，該方法首次被 Kohler G 和 Milstein C 描述，“Continuous cultures of fused cells secretingantibody of predefined specificity (分泌具有預定義特異性的抗體的融合細胞的連續(xù)培養(yǎng))，” Nature (自然)，256:495_7 (1975)，或者通過重組DNA方法制備(參見美國專利號4816567)。
[0065]此外，可以使用一種技術從噬菌體抗體庫中分離“單克隆抗體”，例如由ClacksonT>Hoogenboom HR、Griffiths AD 以及Winter G描述的技術，’^taking antibody fragmentsusing phage display libraries (使用卩遼菌體展示庫制備抗體片段)，” Nature (自然)，352:624-8 (1991);或 Marks JD、Hoogenboom HR、以及 Bonnert TP> McCafferty J、Griffiths AD、Winter G, “By-passing immunization:Human antibodies from V-genelibraries displayed on phage (旁路免疫:來自展示在卩遼菌體上的V-基因庫的人類抗體)，”分子生物學雜志，222:581-97 (1991)。
[0066]在氨基酸序列或核苷酸序列之間的“一致性”指的是在兩個或更多個可比較的氨基酸序列或核苷酸序列之間的相同氨基酸序列或核苷酸序列的程度。因此，當在兩個氨基酸序列或核苷酸序列之間的一致性高時，這些序列的一致性或相似性是高的。在氨基酸序列或核苷酸序列之間的一致性水平是例如使用FASTA確定的，F(xiàn)ASTA是一種基于默認參數(shù)的序列分析工具。
[0067]可替代地,可以使用Karlin (卡林)和Altschul (阿爾丘爾)BLAST算法來確定(Karlin S, Altschul SF,，，Methods for assessing the statistical significance ofmolecular sequence features by using general scoring schemes(通過使用一般評分方案評價分子序列特征的統(tǒng)計顯著性的方法)，"Proc Natl Acd Sci USA (美國國家科學院院干Ij), 87:2264-2268 (1990);以及 Karlin S, Altschul SF,，，Applications and statisticsfor multiple high-scoring segments in molecular sequences (分子序列中的多個高得分段的應用和統(tǒng)計學)，”美國國家科學院院刊，90:5873-7 (1993))。已經(jīng)開發(fā)了例如基于以上描述的 BLAST 算法的 BLASTN和 BLASTX 程序(Altschul SF, Gish ff, Miller W，MyersEff, Lipman DJ, “Basic local alignment search tool (基本局部比對搜索工具)，”分子生物學雜志，215:403-10 (1990))。例如，當分析核苷酸序列時可以使用BLASTN，通過設置例如分數(shù)至100以及字長至12作為參數(shù)。
[0068]另外，當分析氨基酸序列時可以使用BLASTX，通過設置例如分數(shù)至50和字長至3作為參數(shù)。
[0069]當使用BLAST和空位BLAST程序時，可以使用每個程序的默認參數(shù)。這些分析方法的特定技術是已知的?？谷薠CRl抗體
[0070]本發(fā)明的抗體是分離抗體。
[0071]本發(fā)明的抗體結合至人XCRl。人XCRl的氨基酸序列是由NCBI參考序列顯示的氨基酸序列:NP_001019815.1或NP_005274.1。本發(fā)明的第一個實施例中的特異性抗體是包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的抗體，該重鏈可變區(qū)包含
[0072]在以下(A)或(a)中描述的重鏈CDRl
[0073]在以下(B)或(b)中描述的重鏈⑶R2，和
[0074]在以下(C)或(C)中描述的重鏈⑶R3 ;以及
[0075]該輕鏈可變區(qū)包含
[0076]在以下(D)或(d)中描述的輕鏈⑶R1，
[0077]在以下(E)或(e)中描述的輕鏈⑶R2，和
[0078]在以下(F)或(f)中描述的輕鏈CDR3。
[0079](A)由SEQ ID NO: 53的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0080](B)由SEQ ID NO: 54的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，[0081](C)由SEQ ID NO:55的氨基酸序列組成的重鏈CDR3，
[0082](D)由SEQ ID NO: 56的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0083](E)由SEQ ID NO: 57的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和
[0084](F)由SEQ ID NO: 58的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
[0085](a)由SEQ ID N0:41的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0086](b)由SEQ ID NO:42的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0087](c)由SEQ ID NO:43的氨基酸序列組成的重鏈CDR3，
[0088]Cd)由SEQ ID NO:44的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0089]Ce)由SEQ ID NO:45的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和
[0090]Cf)由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。 [0091 ] 相對于本發(fā)明的抗體定義的術語“Q)R”是互補決定區(qū)(ComplementarityDetermining Region)的縮寫，也被稱為互補性決定區(qū)(complementarity determiningregion)。⑶R呈現(xiàn)在免疫球蛋白的可變區(qū)中，深入地涉及抗體到抗原的特異性結合。此外，“輕鏈⑶R”指的是呈現(xiàn)在免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)中的⑶R，“重鏈⑶R”指的是呈現(xiàn)在免疫球蛋白重鏈可變區(qū)中的CDR。
[0092]另外，“可變區(qū)”指的是包含以上描述的⑶Rl至⑶R3的一個區(qū)域(下文簡單地稱為“CDR1至3”)。雖然CDRl至3的排列順序沒有特別限定，優(yōu)選地，CDR1、CDR2和CDR3以順序方式為從N端到C端的順序或相反的順序排列或者通過其他稱作框架區(qū)(FRs)的其他氨基酸序列排列。此外，“重鏈可變區(qū)”是以上描述的重鏈CDRl至3所在的區(qū)域，“輕鏈可變區(qū)”是以上描述的輕鏈⑶Rl至3所在的區(qū)域。
[0093]如上所述，除了以上描述的在每個可變區(qū)中的CDRl至3以外的區(qū)域被稱為框架區(qū)(FR)。具體地說，在每個可變區(qū)中的N端和⑶Rl之間的區(qū)域被定義為FRl，在⑶Rl和⑶R2之間的區(qū)域被定義為FR2，在⑶R2和⑶R3之間的區(qū)域被定義為FR3，并且在每個可變區(qū)中的⑶R3和的C端之間的區(qū)域被定義為FR4。
[0094]FR還具有作為用于連接⑶Rl至3的連接序列的功能，這種連接序列作為抗原識別序列尤其重要。FR是促成形成整個可變區(qū)的三維結構的區(qū)域。
[0095]根據(jù)本發(fā)明的第一個實施例的優(yōu)選抗體是包含以下項的一種抗體:
[0096]重鏈可變區(qū),該重鏈可變區(qū)包含
[0097]以下(g)、以下(m)或以上(a)的重鏈CDR1，
[0098]以下(h)、以下(η)或以上(b)的重鏈CDR2，
[0099]以下(i)、以下(O)或以上(C)的重鏈⑶R3 ;以及
[0100]輕鏈可變區(qū),該輕鏈可變區(qū)包含
[0101]以下(j)、以下(P)或以上(d)的輕鏈CDR1，
[0102]以下(k)、以下(q)或以上(e)的輕鏈CDR2，
[0103]以下(I)、以下(r)或以上(f)的輕鏈CDR3。
[0104](g)由SEQ ID NO: 17的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0105](h)由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0106](i)由SEQ ID NO: 19的氨基酸序列組成的重鏈CDR3，
[0107](j)由SEQ ID NO: 20的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，[0108](k)由SEQ ID N0:21的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，
[0109](I)由SEQ ID NO:22的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ；
[0110](m)由SEQ ID NO: 29的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0111](η)由SEQ ID NO: 30的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0112](ο)由SEQ ID NO: 31的氨基酸序列組成的重鏈CDR3，
[0113](P)由SEQ ID NO: 32的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0114](q)由SEQ ID NO:33的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和
[0115]Cr)由SEQ ID NO: 34的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
[0116](i)中描述的重鏈⑶R3和在(O)中描述的重鏈⑶R3包含相同的氨基酸序列。
[0117]本發(fā)明的第二個實施例的抗體是包含以下項的一種抗體
[0118]包含以上(A)-(C)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，或
[0119]包含上面(a)-(c)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)；以及
[0120]包含上面(D)-(F)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)，或
[0121]包含上面(d)-(f)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)。
[0122]第二個實施例的更優(yōu)選的抗體是包含以下項的任何之一的一種抗體
[0123]包含上面(g)_⑴中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，
[0124]包含上面(m)-(o)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0125]包含上面(a)-(c)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)；以及
[0126]以下項的任何之一:包含上面(j)-(l)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)，
[0127]包含上面(p)-(r)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)，
[0128]包含上面(d)-(f)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)。
[0129]本發(fā)明的第三個實施例的抗體是包含以下項的一種抗體
[0130]包含上面(A)-(C)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0131]包含上面(D)-(F)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)，或
[0132]包含以下項的一種抗體
[0133]包含上面(a)-(c)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0134]包含上面(d)-(f)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)。
[0135]第三個實施例的更優(yōu)選的抗體是包含以下項的一種抗體
[0136]包含上面(g)_（i）中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0137]包含上面(j)-(l)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)；
[0138]包含以下項的一種抗體
[0139]包含上面(m)-(o)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0140]包含上面(p)-(r)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)；或
[0141]包含以下項的一種抗體
[0142]包含上面(a)-(c)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)，和
[0143]包含上面(d)-(f)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)。
[0144]本發(fā)明的抗體的分子結構不限于免疫球蛋白的分子結構，只要抗體具有以上描述的重鏈和輕鏈可變區(qū)。特異性結構的實例包括不包含F(xiàn)e區(qū)的F(ab’)2的分子結構；通過免疫球蛋白的木瓜蛋白酶消化形成的并且由CHl和CL結構域以及重鏈和輕鏈可變區(qū)組成的Fab ;不包含免疫球蛋白恒定區(qū)的Fv ;以及為單鏈Fv抗體的scFv。
[0145]本發(fā)明的抗體還可以是多價的，其中結合了以上分子結構。這樣一種多價抗體是通過積累scFv構建體的技術形成的，如通過結合Fe區(qū)和以上描述的scFv構建體形成的scFv-Fc構建體；以及被稱為微抗體的構建體，通過結合恒定區(qū)的CH3區(qū)域和以上描述的scFv構建體形成。術語“多價”指的是存在多個抗原結合部位。關于本發(fā)明的抗體，該術語是以與存在結合至人XCRl的多個部位相同的含義而被使用的。
[0146]本發(fā)明的抗體還具有人恒定區(qū)加上以上描述的重鏈和輕鏈可變區(qū)。
[0147]在免疫球蛋白中，重鏈的“恒定區(qū)”包含叫做CH1、CH2和CH3的區(qū)域；輕鏈的“恒定區(qū)”包含叫做CL的區(qū)域。
[0148]如上所述，當本發(fā)明的抗體具有恒定區(qū)時，優(yōu)選的是該重鏈可變區(qū)至少與CH1、CH2和CH3區(qū)域之一連接，并且輕鏈可變區(qū)與CL連接。此外，重鏈可變區(qū)優(yōu)選地與CHl直接連接。
[0149]本發(fā)明的抗體的恒定區(qū)是源自人免疫球蛋白的恒定區(qū)，優(yōu)選地，源自人免疫球蛋白IgG的恒定區(qū)。人免疫球蛋白IgG的亞型沒有被特別限制，并且可以適當選擇，例如，根據(jù)是否向抗體賦予ADCC活性、CDC活性、以及以下所描述的等等。
[0150]術語“ADCC活性”是抗體依賴性細胞的細胞毒性活性的縮寫。它是在細胞例如NK細胞中的一種活性，這些細胞表達對抗體Fe區(qū)特異的受體,這些受體結合至這些抗體并且破壞出現(xiàn)在這些抗體附近的細胞。另外，術語“CDC活性”是補體依賴性細胞毒性活性的縮寫。在人的情況下，具有高ADCC和/或⑶C活性的IgG亞型是IgGl，并且具有低ADCC和/或CDC活性的IgG亞型是IgG2或IgG4。
[0151]本發(fā)明的抗體的Fe區(qū)中的氨基酸殘基可以突變，以便誘導ADCC和/或CDC活性的改變。引入的突變沒有被特別限制，并且已知的突變可以被引入。例如，下面的突變可以被引入IgGl的恒定區(qū)中，目的是增強ADCC活性:S239D、I332E、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L，以及類似物(Lazar GA, Dang ff, Karki S，Vafa O, Peng JS, Hyun L,Chan C, Chung HS, Eivaz A, Yoder SC, Vielmetter J, Carminchael DF, Hayes RJ, DahiyatBI, “Engineered antibody Fe variants with enhanced effector function (具有提高的效應子功能的工程抗體Fe變體)”，美國國家科學院院刊，103:4005-10 (2006));以及 S298A，K334A, S298A/K334A, S298A/E333A/K334A 等等，(Shields RL, Namenuk AK, HongK, Meng YG, Rae J, Briggs J, Xie D, Lai J, Stadlen A, Li B, Fox JA, Presta LG, “Highresolution mapping of the binding site on human IgGlfor Fe gamma RI, Fe gammaRH,Fe gamma RI11, and FcRn and design of IgGlvariants with improved binding tothe Fe gamma R(對于Fe Y R1、Fc YRI1、Fc Y RII1、和FcRn在人IgGl上的結合部位的高分辨率作圖以及具有改善的與Fe Y R結合的IgGl變體的設計)，”生物化學雜志，276:6591-604(2001))。
[0152]增強CDC 活性的突變的實例包括 S267E、H268F、S324T、S267E/H268F、S267E/S324T、 H268F/S324T、 S267E/H268F/S324T(Moore GL,Chen H,Karki S，LazarGA, “Engineered Fe variant antibodies with enhanced ability to recruitcomplement and mediate effector functions”(具有添補補充和介導效應子功能的提高能力的工程Fe 變體抗體)MAbs, 2:181-9 (2010))。[0153]另外，為了降低ADCC活性，可以引入已知的突變；例如V234A/G237A (ColeMs,Anasetti C，Tso JY, “Human IgG2variants of chimeric anti_CD3are nonmitogenicto T cells (嵌合的抗⑶3的人IgG2變體對T細胞是非促有絲分裂的)”，免疫學雜志(JImmunol)，159:3613-21 (1997)) , H268Q/V309L/A330S/P331S (An Z, Forrest G, MooreR, Cukan M, Haytko P, Huang L, Vitelli S, Zhao JZ, Lu P, Hua J, Gibson CR, HarveyBR, Montgomery D, Zaller D, Wang F, Strohl W，“IgG2m4，an engineered antibody isotypewith reduced Fe function”，(IgG2m4,一種具有降低的Fe功能的工程抗體同種型)MAbs, 1:572-9 (2009))，等等
[0154]有待突變的以上描述的氨基酸的編號遵循Eu編號(參見免疫學感興趣的蛋白質的序列，NIH出版號91-3242)。
[0155]嵌合抗體
[0156]在本發(fā)明的抗體中，其中重鏈和輕鏈可變區(qū)包含來自非人類物種的氨基酸序列并且恒定區(qū)包含來自人類的氨基酸序列的抗體被定義為“嵌合抗體”。
[0157]本發(fā)明的嵌合抗體的第一個實施例是包含由SEQ ID NO: 13的氨基酸序列組成的重鏈和SEQ ID NO: 14的輕鏈的一種嵌合抗體。
[0158]如在表5中所示，SEQ ID NO: 13的氨基酸序列包含在重鏈可變區(qū)中在上述的重鏈CDRl至3中的SEQ ID NO: 17至19的重鏈CDRl至3。此外，如在表5中所示，SEQ ID NO: 14的氨基酸序列包含在輕 鏈可變區(qū)中在上述的輕鏈⑶Rl至3中的SEQ ID N0:20至22的輕鏈CDRl至3。
[0159]本發(fā)明的嵌合抗體包含由突變引起的變體，這些突變?yōu)橛蒘EQ ID NO: 13的氨基酸組成的重鏈中的突變和/或由SEQ ID NO: 14的氨基酸序列組成的輕鏈中的突變，只要這些突變不消除該嵌合抗體對人XCRl的結合能力。
[0160]優(yōu)選地通過將突變引入可變區(qū)的FRl至FR4 (下文簡單地稱為“FR1至4”)中至少之一或在SEQ ID NOs: 13和14的對應氨基酸序列的恒定區(qū)中的至少一個部位引入突變而獲得在重鏈和輕鏈中的變體。
[0161]引入到重鏈和輕鏈中的突變的具體數(shù)目沒有特別限制。通常引入突變來獲得與突變之前的氨基酸序列具有85%或更高一致性、優(yōu)選90%或更高一致性、更優(yōu)選95%或更高一致性、以及最優(yōu)選99%或更高一致性的變體。
[0162]在此使用的“突變”包括置換、缺失、插入，等等?？梢允褂脹]有特別限制的一種已知的方法作為一種特定的方法用于引入突變。例如，在置換的情況下，可以使用保守性置換。術語“保守性置換”指的是將一個氨基酸殘基用具有相似側鏈的另一個氨基酸殘基置換。
[0163]例如，在具有堿性側鏈的氨基酸殘基(例如賴氨酸、精氨酸、和組氨酸)之間的置換符合保守性置換。另外，在氨基酸殘基之間的下列置換也符合保守性置換:在具有酸性側鏈的氨基酸殘基例如天冬氨酸和谷氨酸之間的置換；在具有非帶電的極性側鏈的氨基酸殘基，例如甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、和半胱氨酸之間的置換；在具有非極性側鏈的氨基酸殘基例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、和色氨酸之間的置換；在具有分支的側鏈的氨基酸殘基例如蘇氨酸、纈氨酸、和異亮氨酸之間的置換；以及在具有芳香族側鏈的氨基酸殘基例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、和組氨酸之間的置換。
[0164]人源化抗體
[0165]在本發(fā)明的抗體中，在重鏈和輕鏈可變區(qū)中包含上述⑶Rl至3，其中FR1-4包含源自人類的氨基酸序列的抗體或其變體，被定義為“人源化抗體”。
[0166]包含一種源自人類的氨基酸序列的這些FR沒有被特別限制，并且可以基于已知的技術來確定。
[0167]這些FR的實例包含完全人框架區(qū)或亞區(qū)，其中源自人種系序列的FR是優(yōu)選的?？梢赃m當參考，例如NCBI網(wǎng)站，該網(wǎng)站顯示了一列目前已知的FR序列作為完全人框架區(qū)或亞區(qū)的實例。
[0168]人重鏈可變區(qū)序列的非限制實例包括VH1-18、VH1-2、VH1-24、VH1-3、VH1-45、VH1-46、VH1-58、VH1-69、VH1-8、VH2-26、VH2-5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3-15、VH3-16、VH3-20、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、VH3-7、VH3-72、VH3-73、VH3-74、VH3-9、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4-4、VH4-59、VH4-61、VH5-51、VH6-1、和 VH7-81。
[0169]人輕鏈可變區(qū)序列的非限制實例包括VL1-11、VL1-13、VL1-16、VL1-17、VL1-18、VL1-19、VL1-2、VL1-20、VL1-22、VL1-3、VL-4、VL1-5、VL1-7、VL1-9、VL2-1、VL2-11、VL2-13、VL2-14、VL2-15、VL2-17、VL2-19、VL2-6、VL2-7、VL-8、VL3-2、VL3-3、VL3-4、VL4-1、VL4-2、VL4-3、VL4-4、VL4-6、VL5-1、VL5-2、VL5-4、和 VL5-6。
[0170]完全人FR選自這些功能性的胚系基因。由于這些氨基酸的有限數(shù)目的修飾，通常這些FR中的每一個是不同的。這些FR可以與本說明書中描述的⑶R組合使用。用于與上述CDR組合使用的人FR的非限制`的其他實例包括KOL、NEWM、RE1、EU、TUR、TE1、LAY、和Ρ0Μ。關于這些人FR的實例，可以參考以下文獻:卡巴特等人，〃免疫學感興趣的蛋白質的序列〃，美國衛(wèi)生和人類服務部，NIH(1991)USA;Wu TT, Kabat EA, "An analysis of the sequencesof the variable regions of Bence Jones proteins and myeloma light chains andtheir implications for antibody complementarity (本周蛋白的可變區(qū)和骨髓瘤輕鏈的序列的分析以及它們對于抗體互補性的含義)，〃實驗醫(yī)學雜志，132:211-50 (1970);等
坐寸O
[0171]本發(fā)明的人源化抗體的第一個實施例是包括包含SEQ ID N0:60或SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)以及SEQ ID N0:68或SEQ ID NO: 72的輕鏈可變區(qū)的人源化抗體。
[0172]一個更優(yōu)選的實施例是包括包含SEQ ID N0:60的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID N0:68的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的人源化抗體，或者包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)的人源化抗體。
[0173]分別如在表11-1和12-1中所示，SEQ ID NO:60 SEQ ID NO:64的氨基酸序列包含在重鏈可變區(qū)中在上述重鏈⑶Rl至3中的SEQ ID NO: 17至19的重鏈⑶Rl至3。分別如在表13-1和14-1中所示，SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:72的氨基酸序列包含在輕鏈可變區(qū)中在上述輕鏈⑶Rl至3中的SEQ ID NO:20至22的輕鏈⑶Rl至3。
[0174]本發(fā)明的人源化抗體包括由包含SEQ ID NO:60或64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)中和/或包含SEQ ID N0:68或72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)中的突變引起的變體，只要這種突變不消除結合至人XCRl的能力。重鏈和輕鏈可變區(qū)中的這些變體優(yōu)選地是通過將突變引入至對應的FRl至4中獲得的。
[0175]引入至重鏈和輕鏈可變區(qū)中的突變的具體數(shù)目沒有特別限制。通常引入突變以獲得與突變之前的氨基酸序列具有85%或更高一致性、優(yōu)選90%或更高一致性、更優(yōu)選95%或更高一致性、并且最優(yōu)選99%或更高一致性的變體。
[0176]在此使用的術語“突變”包括置換、缺失、插入，等等。如同在以上描述的嵌合抗體的情況下，可以使用保守性置換以及類似物作為引入突變的具體方法。
[0177]本發(fā)明的人源化抗體的第二個實施例包括包含人恒定區(qū)的抗體。它們的實例包括包含SEQ ID NO: 59或63的氨基酸序列的重鏈以及包含SEQ ID NO:67或71的氨基酸序列的輕鏈的人源化抗體。
[0178]—個更優(yōu)選的實施例為包括包含SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈以及包含SEQID NO:67的氨基酸序列的輕鏈的人源化抗體，或者包括包含SEQ ID N0:63的氨基酸序列的重鏈以及包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的輕鏈的人源化抗體。
[0179]如在表11-1中所示，SEQ ID NO: 59的氨基酸序列包括相應于SEQ ID NO: 60的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列，并且因此包含在上述重鏈⑶Rl至3中的SEQ ID N0:17-19的重鏈CDRl至3。此外，如在表13-1中所示，SEQ ID NO: 67的氨基酸序列包含相應于SEQ ID NO: 68的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，并且因此包含在上述輕鏈⑶Rl至3中的SEQ ID N0:20-22的輕鏈CDRl至3。
[0180]上述重鏈和/或輕鏈包含由突變引起的變體，只要這些突變不消除結合至人XCRl的能力。在重鏈和輕鏈中的這樣的變體優(yōu)選地是通過將突變引入FRl至4或者至恒定區(qū)中而獲得的。
[0181]引入重鏈和輕鏈的突變的具體數(shù)目沒有特別限制。通常引入突變而獲得與突變之前的氨基酸序列具有85%或更高一致性、優(yōu)選90%或更高一致性、更優(yōu)選95%或更高一致性、并且最優(yōu)選99%或更高一致性的變體。
[0182]在此使用的術語“突變”包括置換、缺失、插入，等等。在上述嵌合抗體的情況下，可以使用保守性置換以及類似物作為引入突變的一種具體方法。
[0183]抗體的功能
[0184]本發(fā)明的抗體結合至人XCRl。在此使用的術語“結合”的含義至少涵蓋通過如在蛋白質類之間的相互作用的情況下所見的疏水鍵以及類似鍵的結合。換句話說，至少通過疏水結合而結合至人XCRl的抗體足以作為本發(fā)明的抗體。此外，本發(fā)明的抗體和人XCRl可以或不可以在結合之后解離。
[0185]本發(fā)明的抗體優(yōu)選地特異性結合至人XCR1。如在此使用的術語“特異性結合”指的是特異性結合至人XCRl，表示當人XCRl與除了人XCRl之外的分子(具體地說，具有類似于人XCRl結構的分子，例如人XCRl的同源物或人XCRl的直向同源物)同時存在時抗體優(yōu)先結合至人XCRl。
[0186]本發(fā)明的抗體特異性地結合至人XCRl不表示排除結合至上述人XCRl的同源物或直向同源物的能力。
[0187]可以通過反應速率常數(shù)，例如Kd、Koff、或Kon值來評價本發(fā)明的抗體結合至人XCRl的程度。通過用Koff值除以Kon值獲得Kd值。[0188]在本發(fā)明的抗體和人XCRl之間的反應速率常數(shù)沒有特別限制。
[0189]本發(fā)明的抗體結合至人XCRl的胞外結構域。具體而言，抗體結合至氨基酸區(qū)域I至31、90至103、168至190、以及251至267的一個或多個，相應于上述NCBI參考序列:NP_001019815.1或ΝΡ_005274.I的氨基酸序列(SEQ ID NO::91 ;圖10)的胞外結構域。
[0190]更優(yōu)選地，在SEQ ID Ν0:91的氨基酸序列中，抗體結合至選自下組的至少三個氨基酸，該組由以下各項組成:第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、以及第177個氨基酸。
[0191]所述“至少三個氨基酸”包括，例如，三個或更多個氨基酸、四個或更多個氨基酸、五個或更多個氨基酸、六個或更多個氨基酸、七個或更多個氨基酸、八個或更多個氨基酸、九個或更多個氨基酸、十個或更多個氨基酸、或者十一個氨基酸。
[0192]請注意本發(fā)明的“表位”還被稱為“抗原決定簇”，并且包括“線性表位”和“非連續(xù)表位”?！熬€性表位”是通過氨基酸序列的一級結構而不是通過其構象結構被抗體識別的表位?！胺沁B續(xù)表位” 是通過氨基酸序列的構象結構(基于較高級的結構)被抗體識別的表位。
[0193]請注意本領域的技術人員可以通過適當修改本發(fā)明的實例中描述的方法來確定本發(fā)明的抗體的表位。例如，可以使用一種已知的方法通過合成由落在人XCRl的氨基酸序列的胞外結構域內(nèi)的所希望的氨基酸序列組成的一種蛋白質或肽、并且通過一種已知的方法證實在所獲得的蛋白質或肽與抗體之間的結合來確定表位?？商娲兀梢酝ㄟ^一種已知的方法通過將一個適當?shù)乃Ｍ陌被嵬蛔円肴薠CRl的氨基酸序列中來制備一種突變體，并且證實在所制備的突變體和抗體之間的結合是否被減弱來確定表位。
[0194]如上所述，由于本發(fā)明的抗體結合至人XCR1，本發(fā)明的抗體也包括抑制人XCRl和人XCLl之間結合的抗體。人XCLl抗體還被稱為人淋巴細胞趨化因子(Ltn)或人淋巴細胞趨化因子a (Ltn-α )0這種抑制活性有時還被稱為由本發(fā)明的抗體誘導的“中和活性”。因為人XCRl在體內(nèi)作為一種受體蛋白質呈現(xiàn)在細胞表面，在人XCRl和人XCLl之間的結合被本發(fā)明的抗體的抑制優(yōu)選地是在細胞表面進行的。本發(fā)明的抗體是否具有對人XCRl和人XCL2之間的結合的抑制活性并不要緊，只要抗體具有至少抑制人XCRl和XCLl之間的結合的活性。因此，本發(fā)明的抗體還包括不僅抑制人XCRl和XCLl之間的結合，還抑制人XCRl和XCL2之間結合的抗體。
[0195]優(yōu)選的細胞的實例包括與通過激活人XCRl和人XCLl之間結合的免疫系統(tǒng)相關的細胞，特別優(yōu)選樹突細胞。具體地說，通過后面描述的實例所示，由于本發(fā)明的抗體特異性地識別BDCA3+樹突細胞，這些樹突細胞是表達大量的人XCRl蛋白的樹突細胞，優(yōu)選的是這些抗體具有抑制在BDCA3+樹突細胞上的人XCRl和人XCLl之間的結合的作用。
[0196]人XCRl和人XCLl之間的結合被本發(fā)明的抗體抑制。這樣的抑制形式的非限制性實例包括:
[0197](I)本發(fā)明的抗體在人XCLl最初應該結合的部位結合至XCRl，弓丨起結合至人XCLl的空間阻抑，并且導致在人XCRl和人XCLl之間的結合的抑制。
[0198](2)本發(fā)明的抗體結合至人XCR1，引起人XCRl的三維結構的改變，結果引起人XCLl應該結合至其上的人XCRl的結構的變化，因此導致人XCRl和人XCLl之間的結合的抑制。
[0199](3)本發(fā)明的抗體結合至XCR1，引起受體的內(nèi)化，這導致在人XCRl和人XCLl之間的結合的抑制。
[0200]本發(fā)明的抗體對人XCRl和人XCLl之間的結合的抑制活性是基于IC5tl或IC9tl值評價的。例如可以在本發(fā)明的抗體存在下使用表達人XCRl蛋白的那些細胞通過進行人XCLl結合至人XCRl的競爭性抑制實驗或類似實驗獲得這些值?？梢允褂靡环N已知的方法作為這種競爭性抑制實驗的一種具體方法。
[0201]本發(fā)明的抗體包括具有抑制細胞遷移作用的抗體。術語“細胞遷移”指的是由于給予細胞的外部刺激以及刺激誘導的細胞內(nèi)信號轉導機制的活化而造成細胞主動遷移的現(xiàn)象。由主動細胞遷移產(chǎn)生的作用依賴于細胞的功能而變化。例如，在樹突細胞的細胞遷移的情況下，這樣的細胞遷移是作為免疫系統(tǒng)機制之一的一種現(xiàn)象。在本發(fā)明中，對細胞遷移的抑制活性有時被稱為“中和活性”。 [0202]如上所述，由于本發(fā)明的抗體適當抑制在樹突細胞尤其是BDCA3+樹突細胞中的人XCRl和人XCLl之間的結合，抗體特別優(yōu)選地抑制樹突細胞尤其是BDCA3+樹突細胞的遷移。
[0203]人XCRl是七跨膜G蛋白偶聯(lián)受體。當人XCLl結合至人XCRl時，人XCRl的三維結構改變；并且，因此釋放偶聯(lián)至人XCRl的胞內(nèi)結構域的G蛋白，并且信號被轉導至細胞。
[0204]G蛋白被本發(fā)明的抗體根據(jù)上述形式(I)、(2)或類似形式抑制人XCRl和XCLl之間的結合而被阻止釋放。結果，沒有信號被轉導，由此抑制細胞遷移的現(xiàn)象。
[0205]可替代地，作為本發(fā)明的抗體與人XCRl的結合加強人XCRl與偶聯(lián)至人XCRl細胞內(nèi)區(qū)域的G蛋白之間的結合的機制的結果，細胞遷移的現(xiàn)象可以被抑制，結果沒有發(fā)生G蛋白的釋放，由此抑制細胞內(nèi)信號轉導。
[0206]本發(fā)明的抗體對人細胞的細胞遷移的抑制活性是基于IC5tl或IC9tl值而評價的。具體的值沒有特別限制。例如，IC5tl值通常為大約0.36nM或更低，優(yōu)選大約0.27nM或更低，并且更優(yōu)選大約0.16nM或更低。例如，IC9tl值通常為大約2.38nM或更低，優(yōu)選大約1.52nM或更低，并且更優(yōu)選大約0.86nM或更低。
[0207]本發(fā)明的抗體包括，作為一種實施例，具有降低細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活性的作用的抗體。降低CTL活性的機制為，例如，本發(fā)明的抗體抑制在樹突細胞中的人XCRl和人XCLl之間的相互作用。在這些樹突細胞中，上述BDCA3+樹突細胞是優(yōu)選的。
[0208]制備本發(fā)明的抗體的方法
[0209]可以通過包含以下三個步驟的方法制備本發(fā)明的抗體，雖然沒有限制于此。
[0210](i)步驟1，將載體引入到宿主以轉化該宿主，該載體包含含有編碼本發(fā)明抗體的核苷酸序列的核酸；
[0211](ii)步驟2，培養(yǎng)在步驟I中獲得的轉化宿主，收集含有結合至人XCRl的抗體的部分；以及
[0212](iii)步驟3，從步驟2中獲得的部分分離或純化以上抗體。
[0213]步驟I
[0214]在步驟I中所使用的核酸是編碼本發(fā)明的抗體的核酸?？梢允褂没诒景l(fā)明的抗體的氨基酸序列信息的計算機技術(in silico technique)來確定以上核酸的核苷酸序列。此時，優(yōu)選的是參考步驟2中使用的宿主中的密碼子頻率來確定核苷酸序列。核苷酸序列的具體實例包括具有SEQ ID N0:3、4、7、8、ll、12、15、16、61、62、65、66、69、70、73、或74的核苷酸序列；或其變體。
[0215]優(yōu)選地通過在抗體的FR或恒定區(qū)引入突變(缺失、置換、插入，等等)而產(chǎn)生以上變體。
[0216]引入到該變體的突變的具體數(shù)目沒有特別限制。通常引入突變而獲得與突變之前的氨基酸序列具有85%或更高一致性、優(yōu)選90%或更高一致性、更優(yōu)選95%或更高一致性、以及最優(yōu)選99%或更高一致性的變體。
[0217]此外，以上核酸可以包含編碼在5’ -端的分泌信號肽的核苷酸序列。編碼分泌信號肽的具體核苷酸序列優(yōu)選地是在步驟2中使用的在宿主細胞中作為分泌信號肽起作用的核苷酸序列。術語“分泌信號肽”指的是包含作為將宿主中產(chǎn)生的蛋白質或肽引入到蛋白質或肽向宿主外部分泌的途徑中的識別序列的氨基酸序列的一種肽。
[0218]編碼分泌信號肽的核苷酸序列的實例包括:
[0219]
[0220]ATGGGATTCAGCAGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTMCTACAGGTGTCCACTCC(SEQ ID NO:75)，
[0221]
[0222]ATGMGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGCTGTTCTGGTTTCCTGCTTCCMCACT(SEQ ID NO:76)，
[0223]
[0224]ATGGMTGGTCATGGGTCTTTCTGTTCTTTCTGAGTGTCACMCCGGGGTGCATAGC(SEQ ID NO:77)，
[0225]
[0226]ATGGMTGGTCTTGGGTCTTTCTGTTCTTTCTGTCCGTCACTACCGGGGTCCACTCT(SEQ ID NO:78)，
[0227]
[0228]ATGTCOGTGCCTACTCAGGTGCTGGGGCTGCTGCTGCTGTGGCTGACOGATGCTOGTTGC (SEQ ID NO: 79)，以及
[0229]
[0230]ATGTCOGTGCCTACTCAGGTGCTGGGGCTGCTGCTGCTGTGGCTGACOGATGCTOGTTGT(SEQ ID NO::80)。
[0231]在步驟I中在所使用的載體包含以上核酸的至少之一。
[0232]這種載體可以是以下載體之一:
[0233](I)包含這樣一種核酸的載體，該核酸含有編碼選自下組的至少一個成員的核苷酸序列，該組由重鏈、重鏈可變區(qū)、以及本發(fā)明的抗體的重鏈CDRl至3組成；
[0234](II)包含這樣一種核酸的載體，該核酸含有編碼選自下組中的至少一個成員的核苷酸序列，該組由輕鏈、輕鏈可變區(qū)、以及本發(fā)明的抗體的輕鏈CDRl至3組成；或
[0235](III)包含一種核酸和另一種核酸的載體，一種核酸含有編碼選自下組中的至少一個成員的核苷酸序列，該組由重鏈、重鏈可變區(qū)、和本發(fā)明的抗體的重鏈CDRl至3組成，另一種核酸含有編碼選自下組中的至少一個成員的核苷酸序列，該組由輕鏈、輕鏈可變區(qū)、和本發(fā)明的抗體的輕鏈⑶Rl至3組成。
[0236]以上載體可以是基因表達載體。“基因表達載體”是具有引起以上核酸的核苷酸序列表達的功能的載體。該基因表達載體可以包含一個啟動子序列、增強子序列、阻抑序列、隔離序列、以及類似 物，以便控制該核苷酸序列的表達。這些序列沒有特別限制，只要它們在上述宿主中起作用。
[0237]在步驟I中所使用的宿主沒有特別限制，只要以上基因被表達。它們的實例包括昆蟲細胞、真核細胞、和哺乳動物細胞。在這些細胞中，HEK細胞、CHO細胞、NSO細胞或SP2/0細胞，這些都是哺乳類動物細胞，在更有效表達編碼抗體的核苷酸序列方面是特別優(yōu)選的。
[0238]將以上載體引入步驟I中的宿主中的技術沒有特別限制?？梢允褂靡阎募夹g。以上(I)至(III)中所示的載體可以單一地或者以兩種或更多種組合地引入宿主中。
[0239]帶有以上載體的宿主可以通過這樣一種技術產(chǎn)生。該載體可以像這樣維持在宿主中或者以這樣的方式維持:包含編碼載體中的抗體的核苷酸序列的核酸被結合到宿主的基因組中。使用一種已知的技術維持所制備的宿主，如果需要的話，可以長時期保存。
[0240]步驟2
[0241]步驟2是培養(yǎng)在步驟I中獲得的上述宿主以及收集含有結合人XCRl的本發(fā)明的抗體的部分的步驟。培養(yǎng)維持上述載體的宿主允許該宿主基于載體中的核酸表達編碼本發(fā)明的抗體的核苷酸序列，導致本發(fā)明的抗體的產(chǎn)生。所產(chǎn)生的抗體被儲存在宿主中或在用于培養(yǎng)該宿主的介質中。
[0242]在步驟2中，可以使用一種已知的方法作為收集含有本發(fā)明的抗體的部分的技術。例如，為了從該宿主收集含有本發(fā)明的抗體的部分，通過物理或化學手段將該宿主破壞，通過破壞獲得的溶液經(jīng)受固液分離處理，由此獲得液體部分。所獲得的液體部分可以被用作含有本發(fā)明的抗體的部分。
[0243]另一方面，為了從用于培養(yǎng)該宿主的介質收集含有本發(fā)明的抗體的部分,該介質，也就是在步驟I中所獲得的宿主的培養(yǎng)液，經(jīng)受固液分離處理，由此獲得液體部分。所獲得的液體部分可以被用作含有本發(fā)明的抗體的部分。
[0244]鑒于簡化后續(xù)步驟3中的分離或純化步驟，優(yōu)選的是從宿主的培養(yǎng)液收集含有本發(fā)明的抗體的部分。
`[0245]在步驟2中用于培養(yǎng)的介質沒有特別限制，只要該媒介允許該宿主表達編碼本發(fā)明的抗體的核苷酸序列，由此產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。然而，當從如上所述的宿主的培養(yǎng)液收集含有本發(fā)明的抗體的部分時，為了盡可能地在后續(xù)步驟3中簡化分離或純化步驟，優(yōu)選使
用無血清培養(yǎng)基。
[0246]關于培養(yǎng)該宿主過程中使用的各種條件，例如容器、溫度、時間、在介質中的宿主濃度、以及培養(yǎng)條件，可以使用在已知方法中用于產(chǎn)生抗體所用的條件。
[0247]步驟3
[0248]步驟3是從步驟2中獲得的部分分離或純化結合至人XCRl的本發(fā)明的抗體的步驟。用于分離和純化本發(fā)明的抗體的方法沒有特別限制。通常所用的用于分離或純化蛋白質的方法是廣泛適用的。
[0249]本發(fā)明的抗體的藥用用途
[0250](I)作為用于免疫性疾病的治療劑的用途
[0251]如上所述，本發(fā)明的抗體具有抑制與免疫系統(tǒng)相關的樹突細胞的細胞遷移現(xiàn)象的作用。基于這種作用，本發(fā)明的抗體(尤其是人源化抗體)具有作為臨床上適用于人的藥物組合物的活性成分的可能。
[0252]本發(fā)明的抗體適用的疾病解釋如下。
[0253]適用的疾病(免疫性疾病)
[0254]XCRl在人的情況下在⑶141+樹突細胞中高度表達，在小鼠情況下在⑶8 α +樹突細胞中高度表達。這些樹突細胞使用被稱為交叉呈遞的上述抗原呈遞方法活化T 細胞(Bachem A, Giittler S，Hartung E, Ebstein F, Schaefer M, Tannert A, SalamaA, Movassaghi K, Opitz C, Mages HW, Henn V, Kloetzel PM, Gurka S, Kroczek RA, "Superiorantigen cross-presentation and XCRlexpression define human CDllc+CD141+cellsas homologues of mouse CD8+dendritic cells (優(yōu)越的抗原交叉呈遞和XCRl表達將人⑶Ilc+CDHl+細胞定義為小鼠⑶8+樹突細胞的同源物)，〃實驗醫(yī)學雜志，207:1273-1281(2010))。
[0255]另外，由于XCLl(是人XCRl的配體)產(chǎn)生的來源包含T細胞尤其是⑶8+T細胞，其中涉及XCL1-XCR1的趨化因子系統(tǒng)控制樹突細胞誘導的CD8+T細胞的活化(Crozat K, GuitonR, Contreras V, Feuillet V, Dutertre CA, Ventre E, Vu Manh TP, Baranek T, StorsetAK, Marvel J, Boudinot P, Hosmalin A, Schwartz-Cornil I, Dalod M, 〃The XC chemokinereceptorlis a conserved selective marker of mammalian cells homologous to mouse⑶8 a +dendritic cells(XC趨化因子受體I是與小鼠⑶8 a +樹突細胞同源的哺乳動物細胞的保守性選擇標記)，〃實驗醫(yī)學雜志，207:1283-1292 (2010);以及Dorner BG, DornerMB, Zhou X, Opitz C，Mora A, Giittler S, Hutloff A, Mages HW, Ranke K, Schaefer M, JackRS, Henn V, Kroczek RA, "Selective expression of the chemokine receptor XCRloncross-presenting dendritic cells determines cooperation with CD8+T_cells (趨化因子受體XCRl在交叉呈遞樹突細胞上的選擇性表達決定與CD8+T細胞的合作)，"Immunity(免疫)，31:823-833 (2009))。 [0256]如上所述,本發(fā)明的抗體包括,作為一個實施例，顯示出抑制在樹突細胞尤其是BDCA3+樹突細胞中的人XCLl和人XCRl之間結合的作用的一種抗體。因此，本發(fā)明的抗體具有作為治療免疫性疾病的治療劑的可能，其中涉及由樹突細胞的遷移所活化的T細胞。具體地說，這些抗體具有作為用于治療與控制⑶8+T細胞的活化相關的疾病的治療劑的可倉泛。
[0257]如上所述，本發(fā)明的抗體包括，作為一個實施例，顯示出降低CTL活性的作用的抗體。CTL具有通過攻擊細胞或組織來激活免疫系統(tǒng)的機制。已知各種免疫性系統(tǒng)疾病具有加速的CTL活性；因此，本發(fā)明的抗體具有作為通過降低CTL活性用于治療免疫性疾病的治療劑的可能。
[0258]這些疾病的非限制實例包括I型糖尿病、銀屑病、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、多發(fā)性硬化、強直性脊柱炎、甲狀腺炎、移植物排斥、遲發(fā)型超敏反應、克羅恩病、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、類風濕性關節(jié)炎、炎性腸病、前葡萄膜炎、韋格納肉芽腫病、移植物抗宿主病、以及貝赫切特病(Kurts C, Robinson Bff, Knolle PA, ^Cross-priming inhealth and disease (健康和疾病中的交叉引發(fā))，〃Nat Rev Immunol (自然免疫學評論)，10:403-414(2010);Kehren J, Desvignes C, Krasteva M, Ducluzeau MT, AssossouO, Horand F，Hahne Μ, Kiigi D, Kaiserlian D, Nicolas JF0 "Cytotoxicity is mandatoryfor CD8 (+) T cell-mediated contact hypersensitivity (細胞毒性對 CD8 ( + ) T 細胞介導的接觸過敏是必須的)，〃實驗醫(yī)學雜志.189:779-786(1999) ;Middel P, ThelenP,Blaschke S，Polzien F，Reich K, Blaschke V, Wrede A, Hummel KM,Gunawan B, RadzunHJ, "Expression of the T-cell chemoattractant chemokine lymphotactin in Crohn'sdisease (在克羅恩病中的T細胞化學吸引劑趨化因子淋巴細胞趨化因子的表達)，"Am JPathol(美國病理學雜志)，159:1751-1761 (2001) ; Sugihara T，Sekine C，Nakae Tj KohyamaK，Harigai MjIwakura Y，Matsumoto Y, Miyasaka N，Kohsaka H，〃A new murine model todefine the critical pathologic and therapeutic mediators of polymyositis (定義多肌炎的關鍵病理學和治療介質的一種新的鼠模型)，"Arthritis Rheum (類風濕性關節(jié)炎)，56:1304-1314(2007);Wang CR, Liu MFj Huang YHj Chen HC，"Up-regulation ofXCRlexpression in rheumatoid joints(類風濕關節(jié)中 XCRl 表達的上調(diào))，"Rheumatology(風濕病學)(Oxford) 43:569-573 (2004) ; Muroi Ej Ogawa F，Shimizu K, Komura K, HasegawaM，F(xiàn)ujimoto M，Sato S，"Elevation of serum lymphotactin levels in patients withsystemic sclerosis (患有系統(tǒng)性硬化病的患者中血清淋巴細胞趨化因子水平的升高)，〃J Rheumatol (風濕病學雜志)，35:834-838 (2008) ; Torrence AEj Brabb Tj Viney幾，Bielefeldt-Ohmann H，Treuting P，Seamons A, Drivdahl Rj Zeng W，Maggio-PriceLj"Serum biomarkers in a mouse model of bacterial-1nduced inflammatory boweldisease (細菌誘導的炎性腸病的小鼠模型中的血清生物標記)，〃Inflamm Bowel Dis (炎性腸病)，14480-490(2008) ; Yeh PT, Lin FAj Lin CPj Yang CM，Chen MS, Yang CH，"Expressionsof lymphotactin and its receptor, XCRj in Lewis rats with experimental autoimmuneanterior uveitis (在實驗性自身免疫前葡萄膜炎的路易鼠中的淋巴細胞趨化因子和其受體XCR的表達)，"Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol (格拉芙臨床與實驗眼科學文獻)，248:1737-1747 (2010) ; Blaschke S，Brandt P，Wessels JTj Miiller GA，"Expressionand function of the C-class chemokine lymphotactin (XCLl) in Wegener’sgranulomatosis (韋格納肉芽腫病中的C類趨化因子淋巴細胞趨化因子(XCL1)的表達和功能)，〃J Rheumatol (風濕病學雜志)，36:2491-2500 (2009) ; Asuoka H，Okazaki Y, KawakamiY，Hirakata Mj Inoko H，Ikeda Y, Kuwana M，"Autoreactive CD8+cytotoxic T lymphocytesto major histocompatibili ty complex class I chain-related gene A in patientswith Behiet1S disease (在患有貝赫切特病的患者中的針對主要組織相容性復合物I類鏈相關基因A的自身反應性⑶8+細胞毒性T淋巴細胞)，"Arthritis Rheum (類風濕性關節(jié)炎)，50:3658-3662(2004);Serody JSj Burkett SE,Panoskaltsis-Mortari A，Ng-CashinJ，McMahon E，Matsushima GKj Lira SA，Cook DNj Blazar BR, ^T-1ymphocyte productionof macrophage inflammatory protein—lalpha is critical to the recruitment ofCD8 (+)T cells to the liver, lung, and spleen during graft-versus-host disease(T淋巴細胞產(chǎn)生巨噬細胞炎性蛋白-1a對于移植物抗宿主病過程中向肝臟、肺、和脾臟募集 CD8 (+) T 細胞是關鍵的)，"Blood (血液)，96:2973-2980 (2000) ; Sugihara Tj SekineC，Nakae Tj Kohyama K，Harigai Mj Iwakura Y，Matsumoto Y, Miyasaka N，KohsakaH，〃A new murine model to define the clinical pathologic and therapeuticmediators of polymyositis，"(定義多肌炎的臨床病理學和治療介質的一種新的鼠模型)Arthri tis&Rheumat ism (關節(jié)炎與風濕病)。56:1304-1314(2007))；以及 DalakasMCj "Review:—An update on inflammatory and autoimmune myopathies, 〃(綜述:炎性肌病和自身免疫性肌病的更新)Neuropathol Appl Neurobiol (神經(jīng)病理學和應用神經(jīng)生物學)，37:226-242(2011)。
[0259]還揭示了本發(fā)明的抗體(抗人XCRl小鼠單克隆抗體(5G7))顯著抑制了后面描述的使用遲發(fā)型超敏反應的小鼠模型的實驗中的DTH反應(在下文有時被稱為“DTH”)。如上所述，遲發(fā)型超敏反應是已知為一種免疫性疾病的疾病，其中涉及被樹突細胞的遷移活化的CD8+T細胞。本發(fā)明的抗體在治療遲發(fā)型超敏反應中有效的事實提供了本發(fā)明的抗體具有抑制細胞遷移(尤其是樹突細胞遷移)的活性的證據(jù)，因為本發(fā)明的影響CD8+T細胞。
[0260]此外，除了遲發(fā)型超敏反應之外，特應性皮炎反應和接觸性皮炎也被稱為皮膚免疫性疾病，其中涉及 DTH 反應(Fabrizi G, Romano A, Vultaggio P, BellegrandiS，Paganelli R, Venuti A, "Heterogeneity of atopic dermatitis defined by theimmune response to inhalant and food allergy (通過對吸入劑和食物過敏的免疫應答定義的特應性皮炎的異質性)，〃Eur J Dermatol(歐洲皮膚病學雜志)，9:380-384(1999);以及 Fonacier LS, Dreskin SC, Leung DYM, "Allergic skin diseases (過敏性皮膚疾病)，〃JAllergy Clin Immunol (變態(tài)反應與臨床免疫學雜志)，125S138-149 (2010)。
[0261]基于上述內(nèi)容，本發(fā)明的抗體具有作為用于治療皮膚免疫性疾病例如特應性皮炎或接觸性皮炎的治療劑的可能。
[0262]已經(jīng)指出CD8+T細胞的活化還可以涉及DTH反應(Mody CH, Pain IIIR,Jackson C，Chen G-H, Toews GB, 〃CD8Cells play a critical role in delayed-typehypersensitivity to intact Cryptococcus neoformans (CD8 細胞在遲發(fā)型超敏反應中對未受損的新型隱球菌起關鍵作用)，〃J Immunol (免疫學雜志)，152:3970-3979 (1994)，等等。
[0263]在銀屑病中觀察到CD8+T細胞侵入到表皮中，銀屑病是一種影響很多病人的自身免疫皮膚疾病，尤其是慢性銀屑病損害。這些細胞被認為是主要的引起銀屑病損傷的效應細胞(Gudjonsson JE, Johnston A, Sigmundsdottir H, ValdimarssonH, ^Immunopathogenic mechanisms in psoriasis (銀屑病中的免疫致病機制)，"Clin ExpImmunol (臨床與實驗免疫學)，135:1-8 (2004))。
[0264]基于以上內(nèi)容，本發(fā)明的抗體具有作為用于治療其中涉及CD8+T細胞活化的皮膚免疫性疾病的治療劑的可能。
[0265]除了遲發(fā)型超敏反應、特應性皮炎、和接觸性皮炎之外，涉及CD8+T細胞的皮膚免疫性疾病的非限制性實例還包括皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、銀屑病、副銀屑病、自身免疫性大皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、和獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、以及混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、和蕁麻疹。
[0266]以下文，描述了本發(fā)明的抗體和各種免疫性疾病(多發(fā)性硬化、人類I型糖尿病、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、甲狀腺炎、移植物抗宿主病、皮肌炎、多肌炎、和包涵體肌炎)之間的關系。本發(fā)明的抗體對其有效的疾病并不限于以下具體的疾病。
[0267]多發(fā)性硬化
[0268]最近報道了在人類中除了⑶4+T細胞之外還有⑶8+T細胞侵入多發(fā)性硬化中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。此外，已經(jīng)報道，在使用小鼠的實驗中，通過源自中樞神經(jīng)中的髓鞘的抗原激活的CD8+T細胞的移植誘導了實驗性自身免疫性腦膜腦炎，這是人類多發(fā)性硬化的模型。與常規(guī)模型相比，上述模型更接近地模擬人類多發(fā)性硬化的病理學(反復的加劇和緩解、顯著的脫髓鞘、脫髓鞘損害部位中侵入許多CD8+T細胞和巨噬細胞/小膠質細胞)。如上所述，已經(jīng)表明CD8+T細胞在人類多發(fā)性硬化和其小鼠模型中起重要作用(FrieseMA, Fugger L, ^Authoreactive CD8+cells in multiple sclerosis:a new target fortherapy?(在多發(fā)性硬化中的自身反應性⑶8+細胞:一種新的治療祀點？)”Brain (腦)，128:1747-1763 (2005))。
[0269]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療多發(fā)性硬化的治療劑的可能。
[0270]人類I型糖尿病
[0271]代表人類I型糖尿病模型的非肥胖糖尿病(NOD)小鼠顯示，CD8+T細胞的消耗抑制糖尿病的發(fā)作(Wang B, Gonzales A, Benoist C，Mathis D, "The role CD8+T_cells in theinitiation of insulin-dependent diabetes mellitus (CD8+T 細胞在膜島素依賴型糖尿病起始中的作用)，〃Eur J Immunol (歐洲免疫學雜志)，26:1762-1769 (1996))。這表明⑶8+T細胞還涉及I型糖尿病的病理學的發(fā)展。
[0272]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療人類I型糖尿病的治療劑的可能。
[0273]腎小球腎炎
[0274]在腎小球腎炎小鼠模型中，已經(jīng)顯示出⑶8+T細胞涉及腎臟病變的形成過程(Heymann F, Meyer-Schwesinger C, Hamilton-ffilliams EE, Hammerich L, Panzer W，KadenS，Quaggin SE, Floege J, Grdne H-J，Kurts C，〃Kidney dendritic cell activationis required for progr ession of renal disease on a mouse model of glomerularinjury (在腎小球損傷小鼠模型上的腎臟疾病的進展需要腎臟樹突細胞活化)，〃J ClinInvest (臨床研究雜志)，119:1286-1297 (2009))。在重度自身免疫性狼瘡腎炎的患者中觀察到許多⑶8+T細胞侵入腎臟。已經(jīng)報道這些⑶8+T細胞的數(shù)目與腎臟活動指數(shù)(renalactivity score)以及血清肌酸酐水平的增加(指示腎功能的惡化)之間的關聯(lián)(CouziL, Merville P, Deminiere C，Moreau J-F, Combe C，Pellegrin J-L, Viallard J-F, BlancoP,"Predominance of CD8+T lymphocytes among periglomerular infiltrating cellsand link to the prognosis of class III and class IV lupus nephritis (在球旁浸潤細胞中⑶8+T淋巴細胞的優(yōu)勢以及與III類和IV類狼瘡腎炎預后的聯(lián)系)，"ArthritisRheum (類風濕性關節(jié)炎),56:2362-2370 (2007))。如上所述，CD8+T細胞被認為涉及在人和小鼠模型中的自身免疫性腎小球腎炎的發(fā)作或其病理學進展。
[0275]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療腎小球腎炎的治療劑的可能。
[0276]自身免疫性肝炎
[0277]已經(jīng)表明丙型肝炎病毒(HCV)感染涉及自身免疫性肝炎的發(fā)展進程。也已經(jīng)表明關于HCV誘導的CD8+CTL通過消除HCV和損傷感染的肝細胞而涉及自身免疫性肝炎的發(fā)展(Kammer AR, van der Burg SH，Grabscheid B, Hunziker IP,Kwappenberg KMCj ReichenJ，Melief CJMj Cerny A，"Molecular mimicity of human cytochrome P450by hepatitisC virus at the level of cytotoxic T cell recognition (在細胞毒性 T 淋巴細胞識別的水平經(jīng)由丙型肝炎病毒的人細胞色素P450的分子模擬)，〃實驗醫(yī)學雜志，190:169-175(1999))。
[0278]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療自身免疫性肝炎的治療劑的可能。
[0279]甲狀腺炎
[0280]已知⑶8+CTL涉及實驗性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)中，這是人甲狀腺炎的小鼠模型(例如橋本氏病)。已經(jīng)報道該模型中的小鼠顯示出與人甲狀腺炎相似的損傷(在外周血中發(fā)現(xiàn)抗甲狀腺球蛋白抗體，并且觀察到⑶8+T細胞和⑶4+T細胞侵入甲狀腺)。如上所述，已經(jīng)表明⑶8+T細胞涉及人和小鼠模型中的甲狀腺炎的發(fā)展(Brazillet M-P, BatteuxF，Abehsira-Amar 0，Nicoletti F，Charreire J，"Induction of experimentalautoimmune thyroiditis by heat-denatured porcine thyroglobulin:a Tcl—mediateddisease (通過熱變性的豬甲狀腺球蛋白誘導的實驗性自身免疫性甲狀腺炎:一種Tcl介導的疾病)，〃Eur J Immunol (歐洲免疫學雜志)，29:1342-1352 (1999))。
[0281]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療人甲狀腺炎的治療劑的可能。
[0282]類風濕性關節(jié)炎
[0283]如以下實例中所描述，本發(fā)明的抗體之一，5G7，在治療乳酪分支桿菌誘導的DTH實驗中的類風濕性關節(jié)炎中顯示出顯著效果。因此，本發(fā)明的抗體具有作為用于治療類風濕性關節(jié)炎的治療劑的可能。
[0284]移植物排斥
[0285]CD8+T細胞在人器`官移植之后的移植物排斥中起重要作用。移植物被在宿主中的識別表達在移植物的細胞中的MHC I類的⑶8+T細胞排斥。此外，已經(jīng)報道在經(jīng)歷排斥的腎臟移植患者中許多⑶8+T細胞侵入腎臟。如上所述，已經(jīng)表明⑶8+T細胞在人器官移植之后在移植物排斥中起重要作用(Bueno V, Pestana J0M, ^The role of CD8+T_cells duringallograft rejection(Q)8+T細胞在同種異體移植排斥過程中的作用)，"Braz J Med BiolRes,35:1247-1258 (2002))。
[0286]因此，控制CD8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療移植物抗宿主病的治療劑的可能。
[0287]皮肌炎、多肌炎、和包涵體肌炎
[0288]當侵入皮肌炎和多肌炎患者的損傷部位的淋巴細胞被建立為細胞系時，⑶8+T細胞系顯示出對他們自身的培養(yǎng)的肌細胞的細胞毒性。這表明患有以上描述的肌炎的患者中肌細胞損傷是由具有抗原特異性細胞毒性的⑶8+T細胞引起的(Hohlfeld R, EngelAG，"Coculture with autologous myotubes of cytotoxic T cells isolated frommuscle in inflammatory myopathies (與從炎性肌病中的肌肉分離的細胞毒性T細胞的自體肌管的共培養(yǎng))，〃Ann Neurol (神經(jīng)病學年鑒)，29:498-507 (1991))。此外，在患有包涵體肌炎的患者中已經(jīng)觀察到⑶8+T細胞侵入損傷部位(Dalakas MCj “Review:An updateon inflammatory and autoimmune myopathies (綜述:炎性肌病和自身免疫性肌病的更新)，〃神經(jīng)病理學和應用神經(jīng)生物學，37:226-242 (2011))。因此，控制⑶8+T細胞活化的本發(fā)明的抗體具有作為用于治療皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎的治療劑的可能。
[0289]如上所述，由于本發(fā)明的抗體具有潛力作為用于治療免疫性疾病尤其是皮膚免疫性疾病的治療劑，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的抗體的藥物組合物。
[0290]這種藥物組合物具有作為用于治療免疫性疾病的治療劑的可能，目的是治療免疫性疾病尤其是皮膚免疫性疾病。
[0291]在此使用的術語“治療”表示達到所希望的藥理學和/或生理學效果。這些效果包括部分或完全治愈疾病和/或由該疾病引起的不良作用(病狀和癥狀)的效果。以上效果還包括抑制或延遲疾病和/或由該疾病引起的不良作用的進展(病狀和癥狀)的效果；減輕病狀和癥狀的效果(即，改善疾病或癥狀，或引起癥狀進展的逆轉)；以及預防疾病復發(fā)的效果。以上效果還包括，在可能具有對疾病的傾向和/或由該疾病引起的不良作用(病狀和癥狀)但是沒有被診斷為具有該傾向的個體中，部分或完全預防該疾病和/或由該疾病引起的不良作用的發(fā)作(病狀和癥狀)的效果。因此，術語“治療”還表示“緩解”、“防止復發(fā)”、和“預防疾病”。
[0292]在本發(fā)明中，包含本發(fā)明的抗體的藥物組合物可以被恰當?shù)赜糜谥委熑祟惷庖咝约膊∮绕涫瞧つw免疫性疾病。應當理解的是，該藥物組合物能夠提供例如部分或完全治愈免疫性疾病的各種癥狀的效果；部分或完全抑制免疫性疾病的各種癥狀的效果(即，抑制或延遲進展)；減輕免疫性疾病的各種癥狀的效果(即，改善疾病或癥狀，或者引起癥狀進展的逆轉)；或者防止免疫性疾病的各種癥狀的復發(fā)的效果。
[0293]目標疾病的具體實例如上所述，其中皮膚免疫性疾病是優(yōu)選的。
[0294]在以上藥物組合物中的本發(fā)明的抗體的含量沒有特別限制，只要該藥物組合物包含有效量的本發(fā)明的抗體。該含量可以例如以以下方式被恰當?shù)卮_定:本發(fā)明的抗體包含在該藥物組合物中的量為相對于100wt%的該組合物的0.001至99.99wt%，考慮目標免疫性疾病的類型、劑型、給藥方法，等等。
[0295]在此使用的術語“有效量”指的是允許本發(fā)明的抗體顯示出抑制樹突細胞的細胞遷移的作用的量，或者允許這些抗體顯示出以上描述的所希望的藥理學和/或生理學效果(針對免疫性疾病的治療效果)的量。
[0296]藥學上可接受的載體或添加劑可以與本發(fā)明的抗體組合添加至該藥物組合物中。在此使用的術語“藥學上可接受的載體或添加劑”指的是任選的載體、稀釋劑、賦形劑、懸浮劑、潤滑劑、佐劑、媒介物、遞送系統(tǒng)、乳化劑、崩解劑、吸收劑、防腐劑、表面活性劑、著色劑、芳香劑、或甜味劑?？梢允褂靡阎妮d體或添加劑。
[0297]該藥物組合物的劑型的非限制實例包括片劑、糖漿、搽劑、注射劑、和輸液，優(yōu)選注射劑或輸液。這些注射劑和輸液可以是含水、非水、或懸浮液形式。另外地，該藥物組合物可以是在給藥之前即刻制備的劑型。
[0298]本發(fā)明的藥物組合物，具體而言，一種用于免疫性疾病的治療劑，在免疫性疾病的治療方法中具有可能，這些治療方法包括將該組合物給予患有免疫性疾病尤其是皮膚免疫性疾病的人類受試者的步驟。如上所述，該藥物組合物還在預防免疫性疾病的方法中具有可能，這些方法包括將該組合物給予還沒有產(chǎn)生免疫性疾病尤其是皮膚免疫性疾病的病狀或癥狀但是可能具有對該免疫性疾病的傾向的人類受試者。
[0299]根據(jù)免疫性疾病的類型、受試者的性別、人種、年齡、和一般狀況、疾病的嚴重程度等等，該藥物組合物(用于免疫性疾病的治療劑)的劑量和給藥方法可以恰當?shù)乇淮_定在0.001至100mg/kg/天的范圍內(nèi)。[0300]本發(fā)明的抗體可以按上述劑量一天給藥一次，或者每天以分開的劑量給藥幾次。此外，在這些抗體對上述疾病具有治療效果的范圍內(nèi)，給藥間隔可以是每天、每隔一天、每周、每隔一周、每2至3周、每月、或者每2至3個月。給藥方法的非限制實例包括口服、肌肉注射、靜脈注射、動脈內(nèi)給藥、硬膜內(nèi)給藥、真皮內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、鼻內(nèi)給藥、肺內(nèi)給藥、眼內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、宮頸管內(nèi)給藥、直腸內(nèi)給藥、以及皮下給藥。
[0301]作為免疫毒素的應用
[0302]本發(fā)明的抗體可以結合至細胞毒性的分子。由于這些抗體結合至人XCRl蛋白，該蛋白在與免疫系統(tǒng)相關的樹突細胞中大量表達，這些抗體可以被用作靶向樹突細胞的免疫毒素。
[0303]在此使用的術語“細胞毒性分子”指的是顯示例如細胞凋亡和/或壞死效應的分子，這些效應引起細胞死亡。
[0304]這樣的分子的實例包括皂草素、蓖麻蛋白、假單胞菌外毒素、白喉毒素、和化療劑?？梢酝ㄟ^用于制備常規(guī)免疫毒素的方法進行抗體和毒性物質之間的結合。
[0305](3)本發(fā)明的抗體的其他應用
[0306]由于本發(fā)明的抗體還包括,作為一個實施例，結合至在樹突細胞中大量表達的XCRl的抗體，這些抗體在用于檢測樹突細胞的方法中具有可能。在這種情況下，優(yōu)選的是針對該用途標記本發(fā)明的這些抗體。在此使用的術語“標記”指的是使這些抗體結合至標記的分子，例如突光分子、發(fā)光分子、生色分子和放射性同位素分子。
[0307]結合方式?jīng)]有限制，只要在檢測步驟中鍵沒有被解離?？梢允褂靡环N已知的方法作為一種具體的檢測方法。例如，可以使用流式細胞術技術。
[0308]此外，本發(fā)明的抗體還可以恰當?shù)剡m用于在檢測樹突細胞后之分離和/或移除樹突細胞的方法中。對于這些方法，還可以使用已知的方法。例如，已知的細胞分選設備可以恰當?shù)嘏c流式細胞術技術結合使用。
[0309]本發(fā)明涉及以上解釋的抗體，寬泛地包括以下描述的本發(fā)明的實施例。
[0310]條目I
[0311]結合至XCRl的抗體,其中該抗體結合至線性或非連續(xù)表位,這些表位包括選自下組的至少三個氨基酸，該組由以下各項組成:在SEQ ID N0:91的氨基酸序列中的第8、11、12、13、14、16、17、22、23、176、和 177 個氨基酸。
[0312]條目2
[0313]根據(jù)以上條目I所述的抗體，其中該抗體為:
[0314]包含含有以下(g)至(i)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(j)至(I)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0315]包含含有以下(m)至(O)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(P)至Cr)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0316]包含含有以下(a)至(C)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(d)至Cf)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0317]Ca)由SEQ ID N0:41的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0318](b)由SEQ ID NO:42的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0319](c)由SEQ ID NO:43的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；[0320](d)由SEQ ID NO:44的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0321](e)由SEQ ID NO:45的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2和
[0322](f)由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ；
[0323](g)由SEQ ID NO: 17的氨基酸序列組成的重鏈CDR1，
[0324](h)由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0325](i)由SEQ ID NO: 19的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ； [0326](j)由SEQ ID NO:20的氨基酸序列組成的輕鏈CDR1，<0
[0327](k)由SEQ ID N0:21的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，
[0328](I)由SEQ ID NO:22的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ；
[0329]Cm)由SEQ ID NO: 29的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0330](η)由SEQ ID NO: 30的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0331](ο)由SEQ ID Ν0:31的氨基酸序列組成的重鏈CDR3，
[0332](P)由SEQ ID NO: 32的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0333](q)由SEQ ID NO:33的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2和
[0334]Cr)由SEQ ID NO: 34的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
[0335]條目3
[0336]根據(jù)以上條目I或2所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQ ID NO:60或64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID N0:68或72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0337]條目4
[0338]根據(jù)以上條目I至3中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0339]條目5
[0340]根據(jù)以上條目I至3中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0341]條目6
[0342]根據(jù)以上條目I至5中任一項所述的抗體，其中該抗體包含人恒定區(qū)。
[0343]條目7
[0344]根據(jù)以上條目I至6中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQ ID NO: 59的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID N0:67的氨基酸序列的輕鏈。
[0345]條目8
[0346]根據(jù)以上條目I至6中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的輕鏈。
[0347]條目9
[0348]根據(jù)包含F(xiàn)e區(qū)的以上條目I至8中任一項所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以誘導ADCC活性的變化。
[0349]條目10
[0350]根據(jù)以上條目9所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以降低ADCC活性。
[0351]條目11
[0352]根據(jù)以上條目I至10中任一項所述的抗體，其中該抗體結合至細胞毒性分子。[0353]條目12
[0354]根據(jù)以上條目I至11中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人XCRl和人XCLl之間的相互作用。
[0355]條目13
[0356]根據(jù)以上條目I至12中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。
[0357]條目14
[0358]根據(jù)以上條目I至13中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制細胞毒性T淋巴細胞的活性。
[0359]條目15
[0360]一種包含根據(jù)以上條目I至14中任一項所述的抗體和藥學上可接受的載體或添加劑的藥物組合物。
[0361]條目16
[0362]根據(jù)以上條目15所述的藥物組合物，其中該藥物組合物是一種用于免疫性疾病的治療劑。
[0363]條目17`[0364]根據(jù)以上條目16所述的藥物組合物，其中該免疫性疾病是一種皮膚免疫性疾病。
[0365]條目18
[0366]根據(jù)以上條目17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
[0367]條目19
[0368]根據(jù)以上條目17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
[0369]條目20
[0370]根據(jù)以上條目17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病為特應性皮炎或接觸性皮炎。
[0371]條目21
[0372]根據(jù)以上條目16所述的藥物組合物，其中該免疫性疾病是甲狀腺炎、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、或多發(fā)性硬化。
[0373]條目22
[0374]一種包含編碼根據(jù)以上條目I至14中任一項所述的抗體的核苷酸序列的核酸。
[0375]條目23
[0376]一種治療免疫性疾病的方法，包括將有效量的根據(jù)以上條目I至14中任一項所述的抗體或根據(jù)以上條目15所述的藥物組合物給予患有免疫性疾病的人。
[0377]條目24[0378]根據(jù)以上條目23所述的方法，其中該免疫性疾病是皮膚免疫性疾病。
[0379]條目25
[0380]根據(jù)以上條目24所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
[0381]條目26
[0382]根據(jù)以上條目24所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
[0383]條目27
[0384]根據(jù)以上條目23所述的方法，其中該免疫性疾病是甲狀腺炎、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、或多發(fā)性硬化。
[0385]本發(fā)明還包括以下描述的實施例
[0386]條目1-A
[0387]包含含有以下 (g)至(i)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(j)至(I)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0388]包含含有以下(m)至(O)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(P)至Cr)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；或
[0389]包含含有以下(a)至(C)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(d)至Cf)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0390]Ca)由SEQ ID N0:41的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0391](b)由SEQ ID NO:42的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0392](c)由SEQ ID NO:43的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0393]Cd)由SEQ ID NO:44的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0394]Ce)由SEQ ID NO:45的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2和
[0395]Cf)由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ；
[0396](g)由SEQ ID NO: 17的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0397](h)由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0398](i)由SEQ ID NO: 19的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0399](j)由SEQ ID NO: 20的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0400](k)由SEQ ID N0:21的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，
[0401](I)由SEQ ID NO:22的氨基酸序列組成的輕鏈⑶R3 ；
[0402]Cm)由SEQ ID NO: 29的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0403](η)由SEQ ID NO: 30的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0404](ο)由SEQ ID Ν0:31的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0405](P)由SEQ ID NO: 32的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0406](q)由SEQ ID NO:33的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2和[0407](r)由SEQ ID NO:34的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
[0408]條目2-A
[0409]根據(jù)以上條目1-A所述的抗體，包含含有SEQ ID NO:60或64的氨基酸序列組成的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68或72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0410]條目3-A
[0411]根據(jù)以上條目1-A或2-A所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:60的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0412]條目4-A
[0413]根據(jù)以上條目1-A或2-A所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0414]條目5-A
[0415]根據(jù)以上條目1-A至4-A中任一項所述的抗體，包含人恒定區(qū)。
[0416]條目6-A
[0417]根據(jù)以上條目1-A至5-A中任一項所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:59的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID N0:67的氨基酸序列的輕鏈。
[0418]條目7-A
[0419]根據(jù)以上條目1-A至5-A中任一項所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:63的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的輕鏈。
[0420]條目8-A
[0421]根據(jù)包含F(xiàn)e區(qū)的以上條目1-A至7-A中任一項所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以誘導ADCC活性的改變。
[0422]條目9-A
[0423]根據(jù)以上條目8-A所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以降低ADCC活性。
[0424]條目IO-A
[0425]根據(jù)以上條目1-A至9-A中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人XCRl和人XCLl之間的相互作用。
[0426]條目Il-A
[0427]根據(jù)以上條目1-A至IO-A中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。
[0428]條目12-A
[0429]一種包含根據(jù)以上條目1-A至Il-A中任一項所述的抗體和藥學上可接受的載體或添加劑的藥物組合物。
[0430]條目13-A
[0431]根據(jù)以上條目12-A所述的藥物組合物，其中該藥物組合物是一種用于免疫性疾病的治療劑。
[0432]條目14-A
[0433]根據(jù)以上條目13-A的藥物組合物，其中該免疫性疾病是一種皮膚免疫性疾病。
[0434]條目15-A
[0435]根據(jù)以上條目14-A所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
[0436]條目16-A
[0437]根據(jù)以上條目14-A所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
[0438]條目17-A
[0439]根據(jù)以上條目14-A所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病為特應性皮炎或接觸性皮炎。
[0440]條目18-A
[0441]一種包含編碼根據(jù)以上條目1-A至Il-A中任一項所述的抗體的核苷酸序列的核酸。
[0442]條目19-A
[0443]—種免疫性疾病治療方法，包括將有效量的根據(jù)以上條目1-A至Il-A中任一項所述的抗體給予患有免疫性疾病的人的步驟。
[0444]本發(fā)明進一步包含`以下描述的實施例。
[0445]條目1-B
[0446]包含含有以下(g)至(i)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(j)至
(I)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0447]包含含有以下(m)至(O)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(P)至Cr)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0448]包含含有以下(a)至(C)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(d)至Cf)中描述的輕鏈⑶Rl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；
[0449]Ca)由SEQ ID N0:41的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
[0450](b)由SEQ ID NO:42的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0451](c)由SEQ ID NO:43的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0452]Cd)由SEQ ID NO:44的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0453]Ce)由SEQ ID NO:45的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和
[0454]Cf)由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的輕鏈⑶R3 ；
[0455](g)由SEQ ID NO: 17的氨基酸序列組成的重鏈⑶R1，
[0456](h)由SEQ ID NO: 18的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，
[0457](i)由SEQ ID NO: 19的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0458](j)由SEQ ID NO: 20的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0459](k)由SEQ ID N0:21的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，
[0460](I)由SEQ ID NO:22的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ；
[0461]Cm)由SEQ ID NO:29的氨基酸序列組成的重鏈⑶R1，
[0462](η)由SEQ ID NO: 30的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，[0463](ο)由SEQ ID N0:31的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ；
[0464](P)由SEQ ID NO: 32的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl，
[0465](q)由SEQ ID NO:33的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和
[0466](r)由SEQ ID NO: 34的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
[0467]條目2-B
[0468]根據(jù)條目1-B所述的抗體，包含含有SEQ ID NO:60或64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68或72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0469]條目3-B
[0470]根據(jù)以上條目1-B或2-B所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:60的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0471]條目4-B
[0472]根據(jù)以上條目1-B或2-B所述的抗體，包含含有SEQ ID N0:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
[0473]條目5-B
[0474]根據(jù)以上條目1-B或4-B中任一項所述的抗體，包含人恒定區(qū)。
[0475]條目6-B
[0476]根據(jù)以上條目1-B至5-B中任一項所述的抗體，包含含有SEQ ID NO: 59的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID N0:67的氨基酸序列的輕鏈。
[0477]條目7-B
[0478]根據(jù)以上條目1-B至5-B中任一項所述的抗體，包含含有SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的輕鏈。
[0479]條目8-B
[0480]根據(jù)包含F(xiàn)e區(qū)的以上條目1-B至7-B中任一項所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以誘導ADCC活性的改變。
[0481]條目9-B
[0482]根據(jù)以上條目8-B所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以降低ADCC活性。
[0483]條目IO-B
[0484]根據(jù)以上條目1-B至9-B中任一項所述的抗體，其中該抗體結合至細胞毒性分子。
[0485]條目Il-B
[0486]根據(jù)以上條目1-B至IO-B中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人XCRl和人XCLl之間的相互作用。
[0487]條目12-B
[0488]根據(jù)以上條目1-B至Il-B中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。
[0489]條目13-B
[0490]一種包含根據(jù)以上條目1-B至12-B中任一項所述的抗體和藥學上可接受的載體或添加劑的藥物組合物。
[0491]條目14-B
[0492]根據(jù)以上條目13-B所述的藥物組合物，其中該藥物組合物是一種用于免疫性疾病的治療劑。
[0493]條目15-B
[0494]根據(jù)以上條目14-B所述的藥物組合物，其中該免疫性疾病是一種皮膚免疫性疾病。
[0495]條目16-B
[0496]根據(jù)以上條目15-B所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
[0497]條目17-B
[0498]根據(jù)以上條目15-B所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
[0499]條目18-B
[0500]根據(jù)以上條目15-B所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是特應性皮炎或接觸性皮炎。
[0501]條目19-B`
[0502]一種包含編碼根據(jù)以上條目1-B至12-B中任一項所述的抗體的核苷酸序列的核酸。
[0503]條目20-B
[0504]一種治療免疫性疾病的方法，包括將有效量的根據(jù)以上條目1-B至12-B中任一項所述的抗體或根據(jù)以上條目13-B的藥物組合物給予患有免疫性疾病的人。
[0505]條目21-B
[0506]根據(jù)以上條目20-B所述的方法，其中該免疫性疾病是皮膚免疫性疾病。
[0507]條目22-B
[0508]根據(jù)以上條目21-B所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
[0509]條目23-B
[0510]根據(jù)以上條目21-B所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
[0511]條目24-B
[0512]根據(jù)以上條目21-B所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是特應性皮炎或接觸性皮炎。
[0513]實例[0514]在下文，基于實例更詳細地描述本發(fā)明。不用說，本發(fā)明并不限制于這些實例。
[0515]實例I
[0516]( I)制備小鼠抗人XCRl單克隆抗體
[0517]為了獲得抗人XCRl的單克隆抗體，用表達人XCRl的B300.19細胞的膜部分免疫XCRl敲除小鼠。該膜部分按照以下步驟制備:首先，用氮氣細胞破碎容器(Parr儀器公司)，將懸浮于Ho緩沖液(0.25M蔗糖，IOmM Hepes(pH7.4), ImM EGTA，0.5mM MgCl2, Ix Completemini無EDTA (羅氏應用科學部))中的表達人XCRl的B300.19細胞破碎(800psi持續(xù)30分鐘，在冰上)，然后離心(2，OOOg, 10分鐘)。收集上清液并再離心(100，OOOg, 30分鐘)。將沉淀懸浮在50mM Hepes (pH7.4)緩沖液中，并且將其指定為膜部分。
[0518]將160 μ g或260 μ g的這種膜部分與等體積的GERBU佐劑混合(GERBU BiotechnikGmbH),然后皮下注射到XCRl敲除的小鼠(Deltagen)的足墊中。然后給予五或六次另外的注射，隔周一次。在最后免疫之后的三或四天，將這些小鼠處死，使外周淋巴結細胞與P3U1骨髓瘤細胞以 2:1 或 5:1 比例在 GenomeONE-CF (Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd.(石原產(chǎn)業(yè)株式會社))的存在下融合。然后將融合的細胞在96孔的塑料板中培養(yǎng)。
[0519]為了初步篩選，進行FACS分析。將親本CHO細胞和表達人XCR1-EGFP的CHO細胞以1:1比率混合，懸浮于FACS緩沖液中(ImM EDTA,含有1%FBS的PBS—(西格瑪))。將細胞與來自每個雜交瘤的培養(yǎng)上清液在冰上孵育20分鐘。用FACS緩沖液將細胞洗滌三次，然后用PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體在冰上孵育20分鐘(杰克遜，#715-116-151，在FACS緩沖液中以1:100稀釋)。用FACS緩沖液將細胞洗滌三次，然后懸浮在FACS緩沖液中。使用FACSCanto II細胞分析儀測量熒光強度(BD Bioscience (BD生物科學公司))。結果，從三個孔收集的上清液顯示出對表達人XCR1-EGFP的CHO細胞的高反應性。
[0520]使用標準有限稀釋法從這三個陽性孔獲得克隆(2H6、5G7、和11H2)。通過上述FACS分析確定每個克隆的反應性。
[0521]隨后，進行體外趨化性試驗來評價這三個克隆對人淋巴細胞趨化因子誘導的表達人XCRl的BaF3細胞或B300.19細胞的遷移的中和活性。趨化性試驗在24孔轉孔培養(yǎng)載體(transwell culture support) (3μηι 孔,Costar (科斯塔)，#3399)或 96 孔轉孔培養(yǎng)皿(Multiscreen, 5 μ m 孔，Millipore (密理博)，#MAMIC5S10)中進行。
[0522]在24孔轉孔培養(yǎng)載體的情況下，將表達人XCRl的BaF3細胞(IxlO6細胞)懸浮于50 μ L 的趨化緩沖液(含有 0.5%BSA、0.5%FBS、和 20mM HEPES (ρΗ7.4)的 RPMI1640 培養(yǎng)基(Invitrogen(英杰公司))和50 μ L的每種培養(yǎng)上清液的混合物中，并且在室溫下孵育30分鐘。隨后，將溶解于濃度為I μ g/mL的趨化緩沖液中的重組人淋巴細胞趨化因子(Genzyme(基因酶公司)，#2695)以600μ L/孔加到較低的孔中，將孵育的細胞加到較高的孔中。在5%C02培養(yǎng)箱中在37°C下孵育4小時之后，將轉孔(transwell)在1，350rpm離心5分鐘，并且將遷移的細胞收集在較低的孔中。將收集的細胞用多聚甲醛固定(終濃度:1%)，將3(^1^的每個樣品施用于FACSCanto II細胞分析儀，從而計數(shù)細胞的數(shù)目。
[0523]在96孔轉孔培養(yǎng)載體的情況下，將表達人XCRl的B300.19細胞(2xl05細胞)懸浮于 25 μ L 的趨化緩沖液(含有 0.5%BSA、0.5%FBS、和 20mM HEPES (ρΗ7.4)、和 50 μ M 的 2-巰基乙醇的RPMI1640培養(yǎng)基(英杰公司))和50 μ L的每種培養(yǎng)上清液的混合物中，在室溫下孵育30分鐘。隨后，將溶解于濃度為I μ g/mL的趨化緩沖液中的重組人淋巴細胞趨化因子(基因酶公司，#2695)加到150 μ L/孔的較低的孔中，并且將孵育的細胞加到較高的孔中。在5%C02培養(yǎng)箱中在37°C下孵育4小時之后，將轉孔(transwell)在1，350rpm離心5分鐘，并且將遷移的細胞收集在較低的孔中。將30 μ L的每個樣品施用于FACSCanto II細胞分析儀，從而計數(shù)細胞的數(shù)目。
[0524]由三個雜交瘤克隆(2H6、5G7、和11H2)產(chǎn)生的培養(yǎng)上清液顯示出對人淋巴細胞趨化因子誘導的表達人XCRl的BaF3細胞B300.19的細胞的遷移的中和活性。
[0525](2)小鼠杭人XCRl杭體(2H6、5G7、和11H2)對表汰人XCRl的細朐的反應件
[0526]為了評價從這三個克隆純化的抗體的反應性和中和活性，將這些抗體用來自每個克隆的培養(yǎng)上清液的重組蛋白A (GE Healthcare (通用醫(yī)療集團)，#17-5080-01)純化。使用單克隆抗體同種型試劑盒(361'0丨60，#麗1'1)確定每個克隆的同種型。2冊和5G7為IgG2b、K，并且 11H2 為 IgG2a, κ。
[0527]通過FACS分析評價純化的抗體對人XCRl的反應性。將親本Β300.19細胞和表達人XCR1-EGFP的Β300.19細胞以1:1的比率混合，并且懸浮在FACS緩沖液中(含有1%FBS的PBS_ (西格瑪))。在冰上用含有100 μ g/mL的人免疫球蛋白的FACS緩沖液將細胞封閉10分鐘。然后在冰上用從O至10 μ g/mL不同濃度的純化的抗體(2H6、5G7和11H2)或用濃度為10 μ g/mL的小鼠同種型對照抗體IgG2a (eBioscience, #14-4724-82)或IgG2b(ebioscience, #14-4732-82)將細胞孵育20分鐘。用FACS緩沖液將細胞洗滌三次，然后在冰上用PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(杰克遜，#715-116-151，以1:50稀釋在FACS緩沖液中)孵育20分鐘。用FACS緩沖液將細胞洗滌三次，然后懸浮在FACS緩沖液中。用FACSCanto II細胞分析儀測量熒光強度。
[0528]這三種純化的抗體(2H6、5G7、和11H2)顯示出對表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞的反應性，但是對親本B300.19細胞則沒有(圖1)。相比之下，該小鼠同種型對照抗體既沒有與表達人XCR1-EGFP的B300.19細胞反應，也沒有與親本細胞反應(數(shù)據(jù)未顯示)。
[0529](3)小鼠杭人XCRl杭體(2H6、5G7、和11H2)對人淋巴細朐趨化閔子誘導的表汰人XCRl的細胞的遷移的中和活性
[0530]通過體外趨化性試驗評價來自這些克隆的純化的抗體的中和活性。使用96孔的轉孔培養(yǎng)皿(MultiScreen，5 μ m孔，密理博，#MAMIC5S10)進行趨化性試驗。將表達人XCRl的B300.19細胞(2xl05個細胞)懸浮于含有濃度從O至10 μ g/mL的每種純化的抗體(2H6、5G7、和 11H2)的 75 μ L 的趨化緩沖液中(含有 0.5%BSA、0.5%FBS、20mM HEPES (ρΗ7.4)和50 μ M2-巰基乙醇的RPMI1640培養(yǎng)基(英杰公司))中；然后在室溫下孵育30分鐘。此外，將重組人淋巴細胞趨化因子(R&D，#695-LT/CF)溶解于終濃度為I μ g/mL的趨化緩沖液中，其中純化的抗體被溶解為從O至10 μ g/mL的不同濃度。將淋巴細胞趨化因子和純化的抗體添加至150 μ L/孔的較低的孔，然后在室溫下孵育30分鐘。30分鐘之后，將孵育的細胞加到較高的孔，并且在5%C02培養(yǎng)箱中在37°C孵育4小時。隨后，將30 μ L的每個樣品施用于FACSCanto II細胞分析儀，從而計數(shù)細胞的數(shù)目。2H6、5G7、和llH2mAbs在大約3 μ g/mL濃度下完全抑制了細胞遷移。圖2顯示了濃度依賴性抑制的典型形式。從這三個獨立的實驗計算IC5tl和IC9tl值。表1以平均值土標準誤差顯示了這些值。
[0531][表 I]
[0532]誦討趨化件試駘的2H6、5G7、和11H2的IC=和IC^倌[0533]
【權利要求】
1.一種與人XCRl結合的抗體，其中該抗體結合至包含選自下組的至少三個氨基酸的線性或非連續(xù)表位，該組由SEQ ID NO:91的氨基酸序列中的第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個氨基酸組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的抗體，其中該抗體是: 包含含有以下(g)至(i)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(j)至(I)中描述的輕鏈CDRl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體； 包含含有以下(m)至(ο)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(P)至(r)中描述的輕鏈CDRl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體；或 包含含有以下(a)至(c)中描述的重鏈⑶Rl至3的重鏈可變區(qū)和含有以下(d)至(f)中描述的輕鏈CDRl至3的輕鏈可變區(qū)的抗體: Ca)由SEQ ID NO:41的氨基酸序列組成的重鏈CDRl，
(b)由SEQID NO:42的氨基酸序列組成的重鏈CDR2， (c)由SEQID NO:43的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ； Cd)由SEQ ID NO:44的氨基酸序列組成的輕鏈CDRl， Ce)由SEQ ID NO:45的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和 Cf)由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3 ； (g)由SEQID NO:17的氨基酸序列組成的重鏈⑶R1， (h)由SEQID NO:18的氨基酸序列組成的重鏈CDR2， (i)由SEQID NO:19的氨基酸序列組成的重鏈⑶R3 ； (j)由SEQ ID NO:20的氨基酸序列組成的輕鏈⑶R1， (k)由SEQ ID NO:21的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2， (I)由SEQ ID NO:22的氨基酸序列組成的輕鏈⑶R3 ； Cm)由SEQ ID NO:29的氨基酸序列組成的重鏈CDRl， (η)由SEQ ID NO:30的氨基酸序列組成的重鏈CDR2， (ο)由SEQ ID NO:31的氨基酸序列組成的重鏈CDR3 ； (P)由SEQ ID NO:32的氨基酸序列組成的輕鏈CDR1， (q)由SEQ ID NO:33的氨基酸序列組成的輕鏈⑶R2，和 Cr)由SEQ ID NO:34的氨基酸序列組成的輕鏈CDR3。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQID NO:60或64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68或72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
4.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQID N0:60的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:68的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
5.根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQID N0:64的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)、以及含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。
6.根據(jù)權利要求1至5中任一項所述的抗體，其中該抗體包含人恒定區(qū)。
7.根據(jù)權利要求1至6中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQID N0:59的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID NO:67的氨基酸序列的輕鏈。
8.根據(jù)權利要求1至6中任一項所述的抗體，其中該抗體包含含有SEQID N0:63的氨基酸序列的重鏈、以及含有SEQ ID N0:71的氨基酸序列的輕鏈。
9.根據(jù)權利要求1至8中任一項所述的包含F(xiàn)e區(qū)的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以誘導ADCC活性的改變。
10.根據(jù)權利要求9所述的抗體，其中該Fe區(qū)被突變以降低ADCC活性。
11.根據(jù)權利要求1至10中任一項所述的抗體，其中該抗體被結合至細胞毒性分子。
12.根據(jù)權利要求1至11中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人XCRl和人XCLl之間的相互作用。
13.根據(jù)權利要求1至12中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。
14.根據(jù)權利要求1至13中任一項所述的抗體，其中該抗體抑制細胞毒性T淋巴細胞的活性。
15.一種包含根據(jù)權利要求1至14中任一項所述的抗體和藥學上可接受的載體或添加劑的藥物組合物。
16.根據(jù)權利要求15所述的藥物組合物，其中該藥物組合物是一種用于免疫性疾病的治療劑。
17.根據(jù)權利要求16所述的藥物組合物，其中該免疫性疾病是一種皮膚免疫性疾病。
18.根據(jù)權利要求17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接 觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
19.根據(jù)權利要求17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
20.根據(jù)權利要求17所述的藥物組合物，其中該皮膚免疫性疾病是特應性皮炎或接觸性皮炎。
21.根據(jù)權利要求16所述的藥物組合物，其中該免疫性疾病是甲狀腺炎、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、或多發(fā)性硬化。
22.一種包含編碼根據(jù)權利要求1至14中任一項所述的抗體的核苷酸序列的核酸。
23.一種治療免疫性疾病的方法，包括將有效量的根據(jù)權利要求1至14中任一項所述的抗體或者根據(jù)權利要求15所述的藥物組合物給予患有一種免疫性疾病的人。
24.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中該免疫性疾病是一種皮膚免疫性疾病。
25.根據(jù)權利要求24所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、副銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性大皰性疾病(例如，天皰瘡、類天皰瘡、或獲得性大皰性表皮松解癥)、膿皰病、妊娠期皰疹、線性IgA大皰性皮膚病、斑禿、尋常型白癜風、與膠原性疾病相關的皮膚疾病(例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、或混合性結締組織病)、與阿狄森病相關的皮膚疾病、與移植物抗宿主病(GVHD)相關的皮膚疾病、濕疹、或蕁麻疹。
26.根據(jù)權利要求24所述的方法，其中該皮膚免疫性疾病是銀屑病、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多肌炎、或包涵體肌炎。
27.根據(jù)權利要求23所述的方法，其中該免疫性疾病是甲狀腺炎、類風濕性關節(jié)炎、I型糖尿病、或多發(fā)性硬 化。
【文檔編號】C07K16/28GK103764680SQ201280041366
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2012年8月30日 優(yōu)先權日:2011年9月1日
【發(fā)明者】坂本佳正, 西村美由希, 河野鐵, 澤幸久, 今井俊夫 申請人:衛(wèi)材R&D管理有限公司