介導(dǎo)刺猬蛋白信號通路的新化合物、其標(biāo)記的形式和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及具有下式(I)的新化合物；其作為藥物的用途，特別是用于治療與刺猬蛋白信號通路的超活化相關(guān)的腫瘤、用于治療神經(jīng)退行性疾病、用于治療與腦發(fā)育有關(guān)的疾病(前腦無裂畸形)、用于干細(xì)胞監(jiān)測、用于治療腦血管意外和心血管意外、用于治療涉及少突膠質(zhì)細(xì)胞的疾病和涉及神經(jīng)鞘細(xì)胞的疾病、用于應(yīng)用其在體外調(diào)節(jié)人或動物干細(xì)胞更新和用于治療糖尿病。本發(fā)明還涉及包含至少一種具有式(I)的化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及用于放射性標(biāo)記具有式(I)的化合物的方法、標(biāo)記的化合物以及所述化合物作為研究工具的用途。最后，本發(fā)明還涉及用于篩選和/或鑒定平滑受體(Smo)結(jié)合位點的配體、用于鑒定平滑受體的激動劑和拮抗劑的方法以及用于鑒定細(xì)胞的方法。
【專利說明】介導(dǎo)刺猬蛋白信號通路的新化合物、其標(biāo)記的形式和應(yīng)用
[0001] 本發(fā)明涉及新的式（I)化合物；其作為藥物的用途，特別是用于治療與刺猬蛋白 信號通路（Hedgehog protein signalling pathway)的超活化相關(guān)的腫瘤、用于治療神經(jīng) 退行性類型病癥、用于治療與腦發(fā)育相關(guān)的疾?。ㄇ澳X無裂畸形（holoprosenc印haly))、 用于控制干細(xì)胞、用于治療腦血管意外以及用于治療心血管意外、以及用于治療少突膠質(zhì) 細(xì)胞（oligodendrocytes)和許旺細(xì)胞（Schwann cells)的疾病、用于應(yīng)用其在體外調(diào)節(jié)人 或動物干細(xì)胞的更新以及用于治療糖尿病。本發(fā)明還涉及藥物組合物，該藥物組合物包含 作為活性成分的至少一種式（I)化合物。放射性標(biāo)記式（I)化合物的方法、標(biāo)記的化合物 以及其作為研究工具的用途也構(gòu)成本發(fā)明的一部分。最后，本發(fā)明還涉及篩選和/或鑒定 平滑受體（Smoothened receptor)的Smo結(jié)合位點的配體、鑒定平滑受體的激動劑和拮抗 劑的方法以及鑒定表達(dá)平滑受體的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞的方法。
[0002] 刺猬信號傳導(dǎo)分子（Hh)是分泌的自體溶解蛋白（autoproteolytic protein)， 其激活刺猬蛋白信號通路，刺猬蛋白信號通路是在諸多組織的形態(tài)發(fā)生（特別是內(nèi) 胚層和胚軸的形成、腦以及毛囊的發(fā)育）過程中以及在細(xì)胞增殖的過程中起根本 作用的信號通路，且被認(rèn)為參與成體中的組織維持和修復(fù)（Ingham et al.，Genes Dev. , 2001, 15, 3059-3087 ；Marti et al. , Trends Neurosci. , 2002, 25, 89-96 ；ffeschler et al. , Annu. Rev. Neurosci. , 2001, 24, 385-428) 〇
[0003] 最初在果蠅（Drosophila)中證實的刺猬蛋白和相關(guān)的轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在脊椎動物和無 脊椎動物中是保守的。Hh的一個同源物存在于果蠅中，而Hh的三個同源物：索尼克（Sonic， Shh)、印第安（Indian，Ihh)和沙漠（Desert，Dhh)存在于哺乳動物中。在這三個同源物 中，Shh由于在發(fā)育過程中顯示出擴展的表達(dá)譜而受到最多的研究。Shh參與神經(jīng)管的腹 部化（ventralization),指定沿著腹側(cè)中線的幾種神經(jīng)元類型（脊髓的運動神經(jīng)元、多巴 胺能神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元）的早期表型，并誘導(dǎo)少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞從腹側(cè)脊髓開始 生成。而且，Shh誘導(dǎo)GABA能（GABAergic)和多巴胺能神經(jīng)元的存活，確定含血清素的前 體細(xì)胞的未來方向，并阻止由毒素 MPP引起的多巴胺能神經(jīng)元的死亡。最后，其誘導(dǎo)出生后 早期小腦中的顆粒細(xì)胞前體增殖。至于刺猬家族的其它成員，它們分別參與骨組織的發(fā)育 (Ihh)、睪丸和周圍神經(jīng)的發(fā)育（Dhh)。而且用Shh得到的結(jié)果也適用于Dhh和Ihh。
[0004] 以前體形式經(jīng)過一系列翻譯后修飾合成Shh，在該翻譯后修飾期間蛋白質(zhì)被存在 于其C-端部分的酶活力裂解。這種自體溶解產(chǎn)生C-端片段（ShhC)和表示活性片段的N-端 片段（ShhN)。在該反應(yīng)期間，也觀察到膽固醇分子在ShhN的C-端部分中的加成，這促使 ShhN錨固至膜。最后，乙酰轉(zhuǎn)移酶允許棕櫚酸酯分子在N-末端附近的半胱氨酸殘基上加 成。這些事件產(chǎn)生生物活性Shh蛋白。該蛋白的分泌取決于派遣蛋白（Dispatched，Disp)， 該蛋白的兩種同種型Displ和2存在于哺乳a**(Heretschetal.，2010，Bioorg.Med. Chem. Lett. 18:6613-6624)。
[0005] 可溶性ShhN片段經(jīng)由含有兩種跨膜蛋白的復(fù)合物傳遞其作用，這兩種跨膜蛋白 為：碎片蛋白（Patched，Ptc)，一種具有12個跨膜域的蛋白質(zhì)，其具有轉(zhuǎn)運蛋白類型的結(jié) 構(gòu)；和平滑蛋白（Smoothened, Smo),-種與偶聯(lián)至蛋白G的受體（RCPG)的超家族的成員同 源的具有7個跨膜域的蛋白質(zhì)。在哺乳動物中，存在碎片蛋白的第二種形式：Ptc2。
[0006] 在不存在其配體Shh的情況下，Ptc抑制Smo。然后誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)級聯(lián)，該細(xì)胞內(nèi)級 聯(lián)涉及許多因子，包括蛋白質(zhì)融合蛋白的抑制因子（SuFu)和PKA蛋白。SuFu是Shh信號 通路的負(fù)調(diào)節(jié)劑，其可與Gli家族的三種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的激活。而且，Sufu的 缺失導(dǎo)致該通路的激活。然后Gli家族的轉(zhuǎn)錄因子被磷酸化、泛素化，然后被蛋白酶體裂解 成它們的負(fù)性形式（GliR)，GliR滲入到核中，并使轉(zhuǎn)錄失活。當(dāng)Shh與Ptc結(jié)合時，后者對 Smo施加的抑制隨著Gli轉(zhuǎn)錄因子（GliA)的活性形式的核轉(zhuǎn)位和祀基因如ptc和glil的 轉(zhuǎn)錄激活而出現(xiàn)。
[0007] 蛋白質(zhì)刺猬相互作用蛋白（Hedgehog interacting protein, Hip)能夠以與蛋 白質(zhì) Ptc 相當(dāng)?shù)挠H和力結(jié)合 Shh(TraifTort et al.，J. Neurochem.，2〇10, 113:576_59〇)。 Hip被認(rèn)為是該通路的負(fù)調(diào)節(jié)劑，因為通過結(jié)合Shh，其減少了可用于通過Ptc激活信 號通路的配體的量。Cdo和Boc屬于具有III型免疫球蛋白和纖連蛋白基序的細(xì)胞表 面蛋白家族。這些蛋白質(zhì)通過促進配體Shh向Ptc的提呈、通過增加靶細(xì)胞附近的形 態(tài)發(fā)生素的量以及可能通過影響Gli蛋白的活性而正調(diào)節(jié)Shh信號通路（Heretsch et al. , 2010, Bioorg. Med. Chem. Lettl8:6613-24:Scales and de Sauvage,2009,Trends Pharmacol. Sci. 30:303-312)〇
[0008] 已廣泛地研究了刺猬蛋白信號通路在胚胎發(fā)育過程中的調(diào)節(jié)作用：Hh已與正常 組織的維持和修復(fù)過程相關(guān)，與增殖和分化的時空調(diào)節(jié)相關(guān)，因而允許組織發(fā)育以達(dá)到它 們正確的尺寸以及適當(dāng)?shù)募?xì)胞類型和適度的血管化和神經(jīng)分布。特別是其參與了中樞神經(jīng) 系統(tǒng)的發(fā)育（Dessaud et al·，2008, Development, 135:2489-503)。Hh 信號傳導(dǎo)功能的本 質(zhì)作用通過人胎兒中該信號通路的缺陷的明顯后果來證明，如采用Shh突變體觀察到的前 腦無裂畸形（Traiffort et al.，J. Biol. Chem. ,2004, 279:42889-42997)。
[0009] 最近，Shh通路在成人腦中被鑒定出來，在成人腦中氨基末端活性形式的分子在成 熟神經(jīng)系統(tǒng)的很多區(qū)域中被表達(dá)，表明該通路的新作用。實際上，其明顯參與神經(jīng)發(fā)生微 環(huán)境（neurogenic niches)的建立和維持，并調(diào)節(jié)成人腦中神經(jīng)前體或神經(jīng)膠質(zhì)前體的增 殖（Traiffort et al·，2010, J. Neurochem.，113:576-590)。Shh 信號通路的調(diào)整因而代表 了開發(fā)神經(jīng)退行性疾病的治療方法的挑戰(zhàn)。多項研究已表明了通過Shh蛋白自身激活Shh 信號通路對減輕患有帕金森氏?。≒arkinson's disease)的大鼠的行為障礙（Tsuboi et al.，2002, Exp. Neurol. 173:95-104)或者對患有多發(fā)性硬化癥的大鼠的神經(jīng)元的再髓鞘形 成（Mastronardi et al· 2004, J. Immunol. 172:6418-26)的積極作用。而且，已表明通過 Smo激動劑激活Shh信號通路使得神經(jīng)前體細(xì)胞在成年大鼠的神經(jīng)發(fā)生區(qū)域的水平上的增 殖的增加 （Machold et al·，2003, Neuron.，39:937-950)。然而，Smo激動劑仍保持極少的 數(shù)量且對其的表征仍不充分。
[0010] Shh信號通路的功能障礙還與許多癌癥相關(guān)。實際上，使Ptc失活的突變與Gorlin 綜合征或基底細(xì)胞疲綜合征（basal cell nevus syndrome)相關(guān)，該綜合征是一種常染色 體顯性疾病，其特征在于顱面和腦畸形，但特別在于多種腫瘤的高發(fā)病率，更具體地說是 皮膚水平上的基底細(xì)胞癌和小腦水平上的成神經(jīng)管細(xì)胞瘤（medulloblastomas)的高發(fā)病 率。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性神經(jīng)外胚瘤、主要是成神經(jīng)管細(xì)胞瘤（30%的病例）中也觀察 到人基因 Ptc和Smo的突變，而且在散發(fā)形式的基底細(xì)胞癌中也觀察到（對于Ptc和Smo， 病例分別為40%和20%)。而且，Shh的突變還與基底細(xì)胞癌相關(guān)。其它類型的腫瘤與刺 猬信號通路的缺陷也相關(guān)，且這些腫瘤的定位與胚胎發(fā)育過程中通路的組成成分的表達(dá)位 點緊密相關(guān)（Scales and de Sauvage, 2009, Trends in Pharmacol. Sci·，30:303-312)。 作為非限制性實例可以提及：與Ptc的突變相關(guān)的乳腺癌和腦膜瘤（meningiomas);與 Gli的突變相關(guān)的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤（glioblastomas);胃腸癌，特別是胃和結(jié)腸的原發(fā)性 癌；前列腺癌和膀胱癌；卵巢的纖維瘤（fibromas)和皮樣囊腫（dermoid cysts);橫紋肌 肉瘤（rhabdomyosarcomas)、小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancers)、口腔鱗狀細(xì)胞癌 (squamous cell oral carcinomas)〇
[0011] 由于刺猬蛋白信號通路在眾多生理和病理過程中的關(guān)鍵性作用，該通路的組成成 分如平滑蛋白（Smol和Smo2)、卷曲（Frizzled)蛋白（Fzl至FzlO)、碎片蛋白（Ptcl和 Ptc2);派遣蛋白（Displ和Disp2)以及Hip蛋白代表用于開發(fā)能夠在體外和/或體內(nèi)在 胚胎或成體中調(diào)節(jié)（激活或抑制）該通路并因而正或負(fù)調(diào)節(jié)發(fā)育[增殖、分化、遷移、存活 (細(xì)胞凋亡）]和/或調(diào)節(jié)分化細(xì)胞和干細(xì)胞的活性的新分子的靶點。
[0012] 已證明這樣的分子可用于治療與刺猬通路的超活化相關(guān)的腫瘤（Scales and de Sauvage, 2009, Trends in Pharmacol. Sci.，30:303-312)。這樣的分子因而 可能用于治療多種腫瘤，如神經(jīng)組織腫瘤（成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、原發(fā)性神經(jīng)外胚層腫 瘤（primary neuroectodermal tumors)、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦膜瘤和少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤 (oligodendrogliomas))、皮膚腫瘤（基底細(xì)胞癌（basal cell carcinomas)、毛發(fā)上皮瘤 (trichoepitheliomas)))、肌肉和骨組織的腫瘤（橫紋肌肉瘤、骨肉瘤（osteosarcomas)、 黑素瘤（melanomas))和其它組織（腎、膀胱、前列腺、肺、胃、胰腺、乳房、肝）的腫瘤。
[0013] 這樣的分子也可用于治療需要阻斷刺猬通路的神經(jīng)退行性類型的病癥（帕金森 氏病、亨廷頓舞蹈?。℉untington，s chorea)、阿爾茨海默氏?。ˋlzheimer，s disease)、多 發(fā)性硬化癥（multiple sclerosis)、運動神經(jīng)元?。╩otor neuron disease))以及其中阻 斷刺猬?目號通路可能是有益的疾病，如糖尿?。╠iabetes)。
[0014] 這樣的分子也可用于眾多急性、亞急性或慢性的遺傳性或獲得性病癥（涉及與刺 猬通路的異常調(diào)節(jié)（deregulation)相關(guān)連的組織功能障礙）的藥物或外科治療（整形或 重建外科、組織或器官的移植），用于誘導(dǎo)組織的形成、再生、修復(fù)和/或活性增加，所述組 織如神經(jīng)組織[中樞神經(jīng)系統(tǒng)（腦）和周圍神經(jīng)系統(tǒng)（感覺神經(jīng)元、運動神經(jīng)元、交感神經(jīng) 元）]、骨、軟骨、睪丸、肝、脾、腸、胰臟、腎、平滑肌和骨骼肌、心、肺、皮膚和毛發(fā)、粘膜、血細(xì) 胞和免疫系統(tǒng)細(xì)胞。作為這些病癥的非限制性實例，可以特別提及神經(jīng)病（neuropathies) 和相關(guān)的神經(jīng)肌肉疾病、糖尿病、脫發(fā)（alopecia)、燒傷（burns)、潰瘍（ulcerations)(皮 膚和粘膜）和精子發(fā)生（spermatogenesis)障礙。
[0015] 已鑒定了多種能夠調(diào)節(jié)刺猬通路的活性的分子。
[0016] 首先，刺猬蛋白和衍生的多肽（片段、變體等），特別是刺猬蛋白的激動劑和拮抗 劑（國際申請PCT W001/98344, 申請人:為BI0GEN);由于它們的尺寸，這些蛋白質(zhì)和衍生的 多肽不能穿過血腦屏障并因而不能全身性給藥，特別是對于治療與刺猬蛋白信號通路的超 活化相關(guān)聯(lián)的腦腫瘤。而且，這樣的分子具有低穩(wěn)定性，并難以生產(chǎn)和純化。相反，存在抑 制Shh配體、robotnikinin和5E1單克隆抗體的作用的分子。
[0017] Hh信號通路也可以進一步在下游被調(diào)節(jié)。例如，可以調(diào)節(jié)Ptc對Smo的抑制作用。 其被他汀類增加以及被輕固醇類降低的機理尚未被準(zhǔn)確了解（Heretsch et al.，Bioorg. Med. Chem. Lett. ,2010, 18:6613-6624)。還已知天然產(chǎn)物（酸漿苦素 F(Physalin F))或合 成產(chǎn)物（GANT58、GANT61、HPI-1)可抑制Gli轉(zhuǎn)錄因子與核內(nèi)DNA的結(jié)合。
[0018] 然而，大多數(shù)研究集中于在平滑受體水平上起作用的調(diào)節(jié)劑的發(fā)現(xiàn)：
[0019] -抑制或激活Hh信號通路的雜環(huán)有機分子（SAG和衍生物）：國際申請PCT W001/74344, 申請人:為 CURIS ;Chen et al.，PNAS, 2002, 99, 14071-14076，
[0020] -purmorphamine, 一種激活 Hh 信號通路的小分子：Wu et al.，Chemistry&Biolog y,2004, 1229-1238,
[0021] -含氮雜環(huán)分子：國際申請PCT W001/19800、W001/26644和W002/30421， 申請人:為 CURIS；Kamenetsky et al. , J. Biol. , 2002, 1, 1-19,
[0022] -來源于藜蘆屬（Veratrum spp.)(介芬胺、環(huán)巴胺和3-葡萄糖基-11-去氧芥 芬胺（cycloposine))和來源于爺屬（Solanum spp.)(爺陡）的16、17或18位被胺或 胺衍生物取代的植物類固醇，和膽固醇：US專利6, 432, 970和國際申請PCT W099/52534 和 TO01/27135， 申請人:為 JOHNS HOPKINS UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE ;US 專 利6, 291，516 ;國際申請PCT TO00/41545, 申請人:為ONTOGENY INC.;國際申請PCT W002/30462, 申請人:為 CURIS ;Taipale et al·，Nature, 2000, 406, 1005-1009 ;Berman et al.，Science, 2002, 297, 1559-1561。然而，證明了 10 μΜ以上的環(huán)巴胺濃度經(jīng)證明對 細(xì)胞具有細(xì)胞毒性（Borzillo et al.，Curr.Top Med.Chem.，2005,5(2)，147-157)。而 且，環(huán)巴胺對腫瘤生長的體內(nèi)效應(yīng)已被質(zhì)疑，因為它們可能與腫瘤自身以外的活性相關(guān) 聯(lián)（Yauch et al.，2008，Nature，455:406-410)。環(huán)巴胺的衍生物（IPI-926)目前正處于 臨床 II 期（Mahindroo et al·，J. Med. Chem.，2009, 52, 3829 ;Tremblay et al·，J. Med. Chem.，2009, 52:14, 4400-4418)，
[0023] -米非司酮（mifepristone) (17 β -輕基 11 β-(4-二甲基氨基苯 基）17 α -(丙-1-炔基）雌留-4, 9-二烯-3-酮），也被稱為RU-486或RU-38486 (法國專 利FR2850022, 申請人:為CNRS)，已證明了其對刺猬蛋白信號通路活性的抑制性活性，
[0024] -具有類似于SAG (氯苯并噻吩型合成激活化合物）（CAS編號：364590-63-6)的結(jié) 構(gòu)的分子SANT74和SANT75,已知其也是有效控制激活因子Smo的構(gòu)象的穩(wěn)定抑制劑（Yang et al. , The Journal of Biological Chemistry, published Aprill4, 2009)〇
[0025]
【權(quán)利要求】
1. 一種化合物，其特征在于其對應(yīng)于下式（I):
其中： -Ri、馬和馬可以相同或不同，彼此獨立地表示氫或鹵素原子、羥基基團、烷基、全氟烷 基、燒氧基、燒硫基或臆基， -X表示0、S或NH， -R4和R7可以相同或不同，彼此獨立地表示氫或鹵素原子或烷基， -?表示選自以下的被至少一個Rfi基團取代的基團之一：
R6表不齒素原子或燒基、燒氧基、氣基燒基、硫代燒基或輕基。
2. 如權(quán)利要求1所述的式（I)化合物，其特征在于1^、1?2和1?3表示烷氧基基團，優(yōu)選甲 氧基基團。
3. 如權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的式（I)化合物，其特征在于X是NH。
4. 如權(quán)利要求1至3中的一項所述的式（I)化合物，其特征在于R4和R7表示氫或氯 原子、甲基、乙基或異丙基。
5. 如權(quán)利要求1至4中的一項所述的式（I)化合物，其特征在于R6表示鹵素原子或者 烷氧基或氨基烷基。
6. 如權(quán)利要求1至5中的一項所述的式（I)化合物，其特征在于所述化合物選自： -N- (N- (3- (4-苯甲?；郊柞０被?4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰胺 鹽酸鹽，其具有下式：
(化合物7a); -N- (N- (3- (4-苯甲?；郊柞０被?4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰胺 鹽酸鹽，其具有下式：
(化合物7b); -3, 4, 5-三甲氧基-N-(N-(4-甲基-3-(4-(3-苯基丙基）苯甲酰氨基）苯基）脒基） 苯甲酰胺，其具有下式：
(化合物7c); -3, 4, 5-三甲氧基-N-(N-(4-甲基-3-(4-苯乙基苯甲酰氨基）苯基）脒基）苯甲酰 胺，其具有下式：
(化合物7d); -(E) -N- (N- (3- (4-肉桂基苯甲酰氨基）-4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰 胺鹽酸鹽，其具有下式：
(化合物7e); -N- (N- (3- (4-芐基苯甲酰氨基）-4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰胺鹽酸 鹽，其具有下式：
(化合物7f); -N- (N- (3- (4-芐基苯甲酰氨基）-4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰胺，其 具有下式：
(化合物7g); -N-(N-(3-(4-(芐氧基）苯甲酰氨基）-4-甲基苯基）脒基）-3, 4, 5-三甲氧基苯甲酰 胺，其具有下式：
(化合物7h)。
7. 如權(quán)利要求1至6中的一項所述的式（I)化合物，其用作醫(yī)藥品。
8. 如權(quán)利要求7所述的式（I)化合物，其用作醫(yī)藥品，用于治療與刺猬蛋白信號通路的 超活化相關(guān)的腫瘤。
9. 如權(quán)利要求8所述的式（I)化合物，其特征在于所述與刺猬蛋白信號通路的超活化 相關(guān)的腫瘤是神經(jīng)組織腫瘤（成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、原發(fā)性神經(jīng)外胚層腫瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、腦 膜瘤和少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤）、皮膚腫瘤（基底細(xì)胞癌、毛發(fā)上皮癌）、肌肉和骨組織的腫瘤（橫 紋肌肉瘤、骨肉瘤）或其它組織（腎、膀胱、前列腺、肺、胃、胰腺）的腫瘤。
10. 如權(quán)利要求7所述的式（I)化合物，其用作醫(yī)藥品，用于治療神經(jīng)退行性類型的病 癥。
11. 如權(quán)利要求10所述的式（I)化合物，其特征在于所述神經(jīng)退行性類型的病癥是帕 金森氏病、亨廷頓氏舞蹈病、阿爾茨海默氏病、多發(fā)性硬化或運動神經(jīng)元病。
12. 如權(quán)利要求7所述的式（I)化合物，其用作醫(yī)藥品，用于治療與腦發(fā)育相關(guān)的疾病 (前腦無裂畸形），用于治療腦血管意外和心血管意外、以及用于治療少突膠質(zhì)細(xì)胞和許旺 細(xì)胞的疾病。
13. 如權(quán)利要求7所述的式（I)化合物，其用于體外調(diào)節(jié)人或動物干細(xì)胞的更新。
14. 如權(quán)利要求7所述的式（I)化合物，其用作醫(yī)藥品，用于治療糖尿病。
15. -種藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物包含作為活性成分的至少一種如權(quán) 利要求1至6中的一項所述的式（I)化合物，以及至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
16. 標(biāo)記的式（I)化合物作為研究工具的用途，尤其用于鑒定能夠與平滑受體或相關(guān) 受體相互作用的分子。
17. -種放射性標(biāo)記權(quán)利要求1至6中的一項所述的式（I)化合物的方法，其特征在于 所述方法包括在氚 3H氣氛下氚化式（I)化合物的步驟，當(dāng)所述式（I)化合物被不具有烯屬 雙鍵的R5基團取代時，所述方法包括鹵化的初始步驟。
18. 如權(quán)利要求1至6中的一項所述的式（I)化合物，其特征在于其至少一個氫原子被 氚原子3H替換，并且其可根據(jù)權(quán)利要求17的方法獲得。
19. 一種篩選和/或鑒定平滑受體的Smo結(jié)合位點的配體的方法，其特征在于，所述方 法包括以下步驟： a) 使平滑受體與至少一種式（I)化合物相接觸以獲得復(fù)合物[Smo-式（I)化合物]; b) 使平滑受體、所述式（I)化合物和測試分子相接觸； c) 通過對步驟b)中回收的平滑受體與復(fù)合物[Smo-式（I)化合物]進行比較來檢測 所述平滑受體和所述測試分子之間的相互作用；以及 d) 選擇測量到與平滑受體具有相互作用的所述測試分子。
20. 如權(quán)利要求19所述的篩選和/或鑒定的方法，其特征在于步驟a)在液相中進行， 以及所述方法包括以下步驟： a) 使平滑受體與至少一種式（I)化合物相接觸以獲得復(fù)合物[Smo-式（I)化合物]; b) 使平滑受體、所述式（I)化合物和測試分子相接觸； c) 回收任選地與一個或多個測試分子和/或與所述式（I)化合物鍵合的所述平滑受 體； d) 通過對步驟c)中回收的平滑受體與復(fù)合物[Smo-式（I)化合物]進行比較來檢測 所述平滑受體和所述測試分子之間的相互作用；以及 e) 選擇測量到相互作用的所述測試分子。
21. -種鑒定平滑受體的激動劑的方法，其特征在于所述方法包括權(quán)利要求19或20的 方法之一的步驟，以及以下額外的步驟： -使鑒定的配體與平滑受體激活之后能顯示細(xì)胞響應(yīng)的細(xì)胞相接觸， 以及 -選擇能夠誘導(dǎo)所述細(xì)胞的所述細(xì)胞響應(yīng)的激動劑分子。
22. -種鑒定為平滑受體的拮抗劑的分子的方法，其特征在于所述方法包括以下步 驟： a) 將平滑受體激活后能顯示細(xì)胞響應(yīng)的細(xì)胞與至少一種式（I)化合物一起培養(yǎng)以便 誘導(dǎo)所述細(xì)胞響應(yīng)； b) 使步驟a)結(jié)束時獲得的細(xì)胞與測試分子相接觸； c) 選擇誘導(dǎo)所述細(xì)胞的所述細(xì)胞響應(yīng)的抑制的分子。
23. -種鑒定表達(dá)平滑受體的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞的方法，其特征在于所述方法包括以下 步驟： a) 使待測細(xì)胞與標(biāo)記的式（I)化合物相接觸； b) 清洗細(xì)胞以除去未與待測細(xì)胞的任何受體相結(jié)合的所述標(biāo)記的式（I)化合物； c) 檢測標(biāo)記的細(xì)胞。
24. -種試劑盒，其特征在于所述試劑盒包含至少一種功能性平滑受體和至少一種權(quán) 利要求1至6中的一項所述的式（I)化合物。
【文檔編號】C07C279/22GK104159889SQ201280056403
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年9月21日 優(yōu)先權(quán)日:2011年9月23日
【發(fā)明者】M·路德, H·福勒, H·洛德特, L·赫馳, A·舍恩菲爾德, M·塔德爾, A·曼恩 申請人:國家科學(xué)研究中心, 斯特拉斯堡大學(xué)