專利名稱：毛木耳降血脂功能蛋白質提取物制備方法及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及毛木耳蛋白質提取物制備方法及其應用，特別涉及毛木耳降血脂功能蛋白質提取物制備方法及其應用。
背景技術：
隨著人們生活水平的不斷提高，高能高脂食物的大量攝入、飲酒量的增加以及運動量的減少致使高脂血癥的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，高血脂癥是誘發(fā)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)、動脈硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖癥等的重要因素。因此尋找高效無毒的降血脂藥物有重要的現(xiàn)實意義。近些年來，在治療高脂血癥方面，中醫(yī)采用天然藥食兩用藥材研制成的降脂中藥，因其具有降脂作用確切，毒副作用小，材料容易獲得且價格便宜等優(yōu)勢得到了較大的發(fā)展。到目前為止，研究表明，具有降脂作用的單味中藥大約有七十多種，但是食用菌來源的材料比較少。食用菌被認為是臨床效果較為確切的一類低毒而免疫活性強的生物類物質，具有豐富的營養(yǎng)和保健作用。毛木耳隸屬于擔子菌門、層菌綱、木耳目、木耳科、木耳屬。學名Auriculariapolytricha,又名構耳、粗木耳，又稱黃背木耳、白背木耳。據(jù)中國科學院成都生物所分析，毛木耳干品含氨基酸的總量為41.68%。有人體必需氨基酸7種，占總量的42.31%，有其它氨基酸9種，占總量的57.69%。從中醫(yī)角度上分析，毛木耳入藥有益氣強身、活血、止血、止痛之功效?？芍魏疂裥匝忍弁?、產(chǎn)后虛弱、抽筋麻木、外傷引起的疼痛、血脈不通、麻木不仁、手足抽搐、白帶過多、便血、痔瘡出血、子宮出血、反胃多痰、年老生瘡久不封口等病癥。毛木耳是一種食藥同源的真菌，具有潛在開發(fā)應用的前景。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的一個技術問題是提供毛木耳蛋白質提取物。本發(fā)明所提供的毛木耳蛋白質提取物，按照包括如下步驟的方法制備:1)將毛木耳子實體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質得到毛木耳水溶性提取物；2)對所述毛木耳水溶性提取物進行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質；對所述水溶性物質進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質提取物。上述步驟1)中，所述用水浸提可為在2_6°C用水浸提10-14小時。所述水可為去離子水。所述毛木耳子實體可粉碎至50-100目，如100目。所述毛木耳子實體和水的質量比可為1:40-60，如1:40，所述毛木耳子實體的質
量為干重。所述毛木耳子實體可為新鮮的子實體也可為干燥的子實體。所述干燥的子實體是將新鮮的毛木耳子實體在常溫(如20_25°C)下干燥得到的。上述步驟2)中，所述飽和度均為硫酸銨在4°C的飽和度。
上述步驟2)中，可采用離心收集所述水溶性物質。所述離心采用的離心力可為6000-15000g (如12000g)，離心時間可為10-20分鐘(如15分鐘)。也可采用離心收集所述沉淀。所述離心采用的離心力可為6000-15000g(如12000g)，離心時間可為10-20分鐘(如15分鐘)。上述方法中，所述透析采用的半透膜的截留分子量為3kDa。上述制備方法還包括將透析后的半透膜內的液體在7000_14000g (如8500g)，離心10-20分鐘(如15分鐘)，收集上清液，將該上清液進行冷凍干燥，制備成毛木耳蛋白質提取物干粉的步驟。制備上述毛木耳蛋白質提取物的方法也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明所要解決的另一個技術問題是提供上述毛木耳蛋白質提取物的用途。本發(fā)明所提供的上述毛木耳蛋白質提取物的用途，為下述A或B:A、一種降血脂的產(chǎn)品，其活性成分為上述毛木耳蛋白質提取物；B、上述毛木耳蛋白質提取物在制備降血脂產(chǎn)品(如藥物或食品)中的應用。其中，所述降血脂可為下述I) -3)中的至少一種:I)降低血清中總膽固醇含量；2)降低血清中甘油三酯含量；3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇含量。本發(fā)明的毛木耳蛋白質提取物在降低血脂中各項指標中，對總膽固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白膽固醇含量都有降低的作用，可以綜合緩解高血脂癥的情況，在降脂初期明顯降低三種指標在血液中的濃度，可以應用到降脂保健食品和藥物的研發(fā)領域。


圖1為毛木耳蛋白提取物降低血脂中各項指標圖。圖中，低表示低劑量降血脂藥物組，高表示高劑量降血脂藥物組。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中的毛木耳(Auriculariapolytricha (Mont.) Sacc.) 3 號(趙爽等.毛木耳菌絲體產(chǎn)多糖發(fā)酵條件的優(yōu)化.食品科技.2012年第37卷第4期)公眾可從北京市農(nóng)林科學院獲得該菌種，以重復本申請實驗。實施例1、毛木耳蛋白質提取物的制備1、制備毛木耳子實體將毛木耳(Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.)3號斜面菌種接種到一級種培養(yǎng)基中進行活化，25°C恒溫培養(yǎng)，待菌絲長滿試管后將其接種到二級種培養(yǎng)基中，25°C恒溫培養(yǎng)室培養(yǎng)至菌絲長滿，將二級種接種到裝有栽培培養(yǎng)基的栽培袋中25°C的條件下進行發(fā)菌，菌種長滿栽培袋后進行搔 菌并移入溫室大棚，出菇條件保持濕度在90%以上，溫度約為20-25°C,收集第一潮子實體，得到毛木耳(Auriculariapolytricha (Mont.) Sacc.) 3 號子實體。其中，該實驗所用的培養(yǎng)基如下:一級種培養(yǎng)基:200g馬鈴薯，20g葡萄糖，20g瓊脂粉，3g KH2PO4, IOmg維生素BI，5g蛋白胨，1.5g MgSO4, IOOOmL蒸懼水，經(jīng)121°C,30min高壓滅菌。二級種培養(yǎng)基:棉籽殼80%，麩皮18%，石膏1%，糖1%，料水比為1:1，經(jīng)121°C，30min高壓滅菌。栽培培養(yǎng)基:木屑50%，棉籽殼28%，麩皮20%，糖1%，石膏1%，料水比為1:1-1.2。經(jīng)121 °C, 30min高壓滅菌。2、制備毛木耳水溶性提取物I)收集毛木耳(Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.) 3 號子實體,在 20_25°C晾曬得到干品后，粉碎研磨制成100目的均一毛木耳粉；2)用40質量份的去離子水浸泡I質量份的毛木耳粉，浸泡12小時，12000g離心15min,收集上清液，該上清液即為毛木耳水溶性提取物。3、制備毛木耳蛋白質提取物對步驟2的毛木耳水溶性提取物首先在4°C進行飽和度為30%的硫酸銨沉淀(即向步驟2的毛木耳水溶性提取物中加入硫酸銨至硫酸銨的飽和度為30%)，沉淀4h后，12000g離心15min，收集上清液，對該上清液在4°C進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀(即向該上清液中加入硫酸銨至硫酸銨的飽和度為80%)，沉淀4h后，12000g離心15min，收集沉淀，對該沉淀進行透析。其中，透析采用的半透膜的截留分子量為3kDa，沉淀在半透膜中在流動的自來水中透析5h，再在去離子水中透析12h。將透析后的半透膜內的液體在8500g離心15min，收集上清液，將該上清液液氮冷凍后，進行冷凍干燥，制備成毛木耳蛋白質提取物干粉。實施例2、毛木耳蛋白質提取物降血脂實驗1、降血脂藥物的制備用去離子水溶解實施例1制備的毛木耳蛋白質提取物干粉，得到蛋白質含量為
6.67mg/ml毛木耳蛋白質提取物水溶液作為降血脂藥物。其中，毛木耳蛋白質提取物水溶液的蛋白質含量的測定方法如下:I)標準曲線的制作:利用標準樣品小牛血清蛋白(BSA)配置成不同濃度的蛋白溶液，采用BCA (北京博邁德科技公司)蛋白定量試劑盒制作標準曲線。2)采用BCA蛋白定量試劑盒測定毛木耳蛋白質提取物水溶液中蛋白質含量。2、高血脂模型的構建雄性SD大鼠共80只，隨機分為2組，第I組10只為正常組，喂以基礎飼料 ’第2組70只為高脂組，喂以高脂飼料。采取大鼠自由取食的方式，飲水不限，實驗前記錄大鼠體重。60天后，全部大鼠禁食12h，取血，采用血脂儀(7100全自動生化分析儀，日本日立公司)測定血脂各項生理指標:血清總膽固醇(TC)，血清甘油三酯(TG)，血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，并測量大鼠體重。試驗所有數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0 (SPSS Inc.，USA)統(tǒng)計軟件的獨立樣本t檢驗處理統(tǒng)計。結果如表I所示，表明高 脂組的血清總膽固醇含量、血清甘油三酯(TG)含量和血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量均顯著高于正常組(p < 0.05)，高脂組的血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量與正常組無顯著差異(p>0.05)。說明得到高血脂模型。表1、正常組和高脂組的血脂含量
權利要求
1.毛木耳蛋白質提取物的制備方法，包括: 1)將毛木耳子實體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質得到毛木耳水溶性提取物； 2)對所述毛木耳水溶性提取物進行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質；對所述水溶性物質進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質提取物。
2.權利要求1所述的制備方法制備的毛木耳蛋白質提取物。
3.—種降血脂的產(chǎn)品，其活性成分為權利要求2所述的毛木耳蛋白質提取物。
4.根據(jù)權利要求3所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述降血脂為下述1)-3)中的至少一種: 1)降低血清中總膽固醇含量； 2)降低血清中甘油三酯含量； 3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇含量。
5.權利要求2所述的毛木耳蛋白質提取物在制備降血脂產(chǎn)品中的應用。
6.根據(jù)權利要求5所述的應用，其特征在于:所述降血脂為下述1)-3)中的至少一種: 1)降低血清中總膽固醇含量； 2)降低血清中甘油三酯含量； 3)降低血清中低密度脂蛋白膽固醇 含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了毛木耳降血脂功能蛋白質提取物制備方法及其應用。該毛木耳降血脂功能蛋白質提取物的制備方法包括1)將毛木耳子實體粉碎后用水浸提，收集水溶性物質得到毛木耳水溶性提取物；2)對所述毛木耳水溶性提取物進行飽和度為30%的硫酸銨沉淀，收集水溶性物質；對所述水溶性物質進行飽和度為80%的硫酸銨沉淀，收集沉淀，對所述沉淀用去離子水透析后，得到所述毛木耳蛋白質提取物。本發(fā)明的毛木耳蛋白質提取物在降低血脂中各項指標中，對總膽固醇含量、甘油三酯含量和低密度脂蛋白膽固醇含量都有降低的作用，可以綜合緩解高血脂癥的情況，在降脂初期明顯降低三種指標在血液中的濃度，可以應用到降脂保健食品和藥物的研發(fā)領域。
文檔編號C07K1/30GK103214551SQ20131000703
公開日2013年7月24日 申請日期2013年1月8日 優(yōu)先權日2013年1月8日
發(fā)明者趙爽, 劉宇, 許峰, 王守現(xiàn), 王蘭青, 耿小麗, 殷貝貝, 陳杰, 孟莉莉 申請人:北京市農(nóng)林科學院