專(zhuān)利名稱(chēng)：紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用高效液相色譜儀、液質(zhì)聯(lián)用儀、核磁共振波譜儀鑒定決明子中紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷的方法。
背景技術(shù)：
紅鐮霉素龍膽二糖苷和異紅鐮霉素龍膽二糖苷均屬于萘并吡喃酮苷類(lèi)，紅鐮霉素龍膽二糖苷為線性的萘并吡喃酮苷，異紅鐮霉素龍膽二糖苷為非線性的萘并吡喃酮苷，二者互為同分異構(gòu)體。紅鐮霉素龍膽二糖苷能顯著提高機(jī)體內(nèi)谷胱甘肽的水平，是決明子中抗肝毒、保肝的主要藥效成分。異紅鐮霉素龍膽二糖苷能對(duì)抗黃曲霉素B1的突變作用，具有抗誘變的活性。目前在國(guó)內(nèi)外均未發(fā)現(xiàn)關(guān)于二者轉(zhuǎn)化的相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明在體外適宜的條件下，紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷二者能相互轉(zhuǎn)化，為中藥炮制、藥物制劑、藥理、藥物化學(xué)、藥物合成等相關(guān)領(lǐng)域提供重要依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，該方法操作簡(jiǎn)單，快速可控。采用的技術(shù)方案:
紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，包括下述工藝步驟:1、制備對(duì)照品溶液:
分別精密稱(chēng)取紅鐮霉素龍膽二糖苷、異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品適量，分別置于25mL圓底燒瓶中，加甲醇制成每ImL含紅鐮霉素龍膽二糖苷0.4040 mg和每Img含異紅鐮霉素龍膽二糖苷0.3928 mg的對(duì)照品溶液，備用。2、制備供試品溶液:
分別精密吸收步驟I制備成的紅鐮霉素龍膽二糖苷和異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1 mL，并分別置于25 mL圓底燒瓶中，用氮吹儀吹干溶劑，分別向瓶中加入IOmL水、
0.1%氨水、0.1%醋酸或0.1% 的鹽酸，在40°C ±1°C、60°C ±1°C、80°C ±1°C或 100°C ±1°C溫度下水浴加熱回流l_3h，用氮吹儀吹干溶劑，加甲醇溶解，混勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，即得紅鐮霉素龍膽二糖苷供試品溶液和異紅鐮霉素龍膽二糖苷供試品溶液。上述百分比為質(zhì)量百分比。3、轉(zhuǎn)化鑒定:
精密吸取上述供試品溶液和相應(yīng)對(duì)照品溶液各20 μ L，注入高效液相色譜儀中，在流動(dòng)相為乙腈一0.1%磷酸(20:80)，檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C的色譜條件下分析。(I)溶劑為水、溫度為80°C，加熱回流時(shí)間為4h 8h及溫度為100°C，加熱回流時(shí)間為Ih 8h，二者能相互轉(zhuǎn)化。
(2)溶劑為0.1%氨水、溫度為40 100°C，加熱回流時(shí)間為Ih 8h，兩者能相互轉(zhuǎn)化。4、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的確證
4.1轉(zhuǎn)化產(chǎn)物異紅鐮霉素龍膽二糖苷的確證(由紅鐮霉素龍膽二糖苷轉(zhuǎn)化為異紅鐮霉素龍膽二糖苷)
使用高效液相色譜儀(配備PDA檢測(cè)器)，于三個(gè)不同流動(dòng)相系統(tǒng)，對(duì)比供試品色譜圖中產(chǎn)物的保留時(shí)間和相應(yīng)對(duì)照品色譜圖的保留時(shí)間及相應(yīng)的在線光譜圖，得出產(chǎn)物和對(duì)照品的保留時(shí)間基本一致(RSD〈1.0),供試品中轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在249nm，279nm，370nm有特征吸收峰，與異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品以及文獻(xiàn)報(bào)道的相關(guān)數(shù)據(jù)一致。使用液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀，對(duì)供試品中的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品進(jìn)行分析，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的(+ ) ES1-MS m/z: 619 [M+Na] +、435 [M+H-Glu] +、273[M+H-2Glu]+，與異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品以及其文獻(xiàn)報(bào)道的相關(guān)數(shù)據(jù)一致。使用核磁共振波譜儀，對(duì)將由供試品中分離得到的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分析，得到其1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)圖(DMS0_d6，400MHz)，將其進(jìn)行歸屬分析得出，與異紅鐮霉素龍膽二糖苷的文獻(xiàn)報(bào)道核磁數(shù)據(jù)一致，結(jié)果見(jiàn)表I。
表1轉(zhuǎn)化產(chǎn)物異紅鐮霉素龍膽二糖苷的1H-NMR和13C-NMR_
權(quán)利要求
1.紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，其特征是包括下述工藝步驟: (1)制備對(duì)照品溶液: 分別精密稱(chēng)取紅鐮霉素龍膽二糖苷、異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品適量，分別置于25mL圓底燒瓶中，加甲醇制成每ImL含紅鐮霉素龍膽二糖苷0.4040 mg和每Img含異紅鐮霉素龍膽二糖苷0.3928 mg的對(duì)照品溶液，備用； (2)制備供試品溶液: 分別精密吸收步驟(I)制備成的紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1 mL，并分別置25mL圓底燒瓶中，用氮吹儀吹干溶劑，分別向瓶中加入IOmL水、0.1%氨水、0.1%醋酸或0.1%的鹽酸，在40°C ±1°C、60°C 土rC、80°C 土1°C或100°C ± 1°C溫度下水浴加熱回流l_3h，用氮吹儀吹干溶劑，加甲醇溶解，混勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，即得紅鐮霉素龍膽二糖苷供試品溶液和異紅鐮霉素龍膽二糖苷供試品溶液； 上述百分比為質(zhì)量百分比； (3)轉(zhuǎn)化鑒定: 精密吸取上述供試品溶液和相應(yīng)對(duì)照品溶液各20 μ L，注入高效液相色譜儀中，在流動(dòng)相為乙腈一0.1%磷酸=20:80，檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C的色譜條件下分析； ①溶劑為水、溫度為80°C，加熱回流時(shí)間為4h 8h及溫度為100°C，加熱回流時(shí)間為Ih 8h，二者能相互轉(zhuǎn)化； ②溶劑為0.1%氨水、溫度為40 100°C，加熱回流時(shí)間為Ih 8h，兩者能相互轉(zhuǎn)化。``
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，其特征在于包括下述工藝步驟: (1)制備供試品溶液，其制備方法如下:分別精密吸取紅鐮霉素龍膽二糖苷、異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1 mL于25 mL圓底燒瓶中，用氮吹儀吹干溶劑，分別向其中加入10 mL水，于100土TC水浴加熱回流2h，用氮吹儀吹干溶劑，加甲醇溶解，混勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，既得供試品溶液； (2)取上述供試品溶液以及相應(yīng)的對(duì)照品溶液各20μ L，注入液相中，在流動(dòng)相為乙腈:0.1%磷酸=20:80，檢測(cè)波長(zhǎng)為27811111，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C的色譜條件下分析，可鑒定出兩者相互轉(zhuǎn)化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，其特征在于包括下述工藝步驟: (1)制備供試品溶液:分別精密吸取紅鐮霉素龍膽二糖苷、異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1 mL于置25 mL圓底燒瓶中，用氮吹儀吹干溶劑，分別向其中加入10 mL 0.1%氨水，于100± I °C水浴加熱回流lh，用氮吹儀吹干溶劑，加甲醇溶解，混勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，既得供試品溶液； (2)取上述供試品溶液以及相應(yīng)的對(duì)照品溶液各20μ L，注入液相中，在流動(dòng)相為乙腈:0.1%磷酸=20:80，檢測(cè)波長(zhǎng)為27811111，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C的色譜條件下分析，鑒定出兩者相互轉(zhuǎn)化。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，其特征在于包括下述工藝步驟: (1)制備供試品溶液:分別精密吸取紅鐮霉素龍膽二糖苷、異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1 mL置于25 mL圓底燒瓶中，用氮吹儀吹干溶劑，分別向其中加入10 mL 0.1%氨水，于80± I°C下水浴加熱回流3h，用氮吹儀吹干溶劑，加甲醇溶解，混勻，用0.45 μ m微孔濾膜濾過(guò)，既得供試品溶液； (2)取上述供試品溶液以及相應(yīng)的對(duì)照品溶液各20μ L，注入液相中，在流動(dòng)相為乙腈:,0.1%磷酸=20:80，檢測(cè)波長(zhǎng)為27811111，流速為1.0ml/min，柱溫為30°C的色譜條件下分析，鑒定出兩 者相互轉(zhuǎn)化。
全文摘要
紅鐮霉素龍膽二糖苷與異紅鐮霉素龍膽二糖苷相互轉(zhuǎn)化的方法，包括制備對(duì)照品溶液制備供試品溶液和轉(zhuǎn)化鑒定。對(duì)照品溶液是在二個(gè)25mL瓶中分別加甲醇制成每1mL含紅鐮霉素龍膽二糖苷0.4040mg和含異紅鐮霉素龍膽二糖苷0.3928mg,即得。對(duì)照品溶液是分別取紅鐮霉素龍膽二糖苷和異紅鐮霉素龍膽二糖苷對(duì)照品溶液0.1mL置于25mL瓶中吹干溶劑，分別加入10mL水，過(guò)濾得二種供試品溶液。取上述對(duì)照品溶液各20mL，注入乙腈0.1%磷酸=2080的流動(dòng)相中，檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃的色譜下分析，鑒定出兩者能互相轉(zhuǎn)化。本方法操作簡(jiǎn)單，快速可控。
文檔編號(hào)C07H17/04GK103073604SQ20131000889
公開(kāi)日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者張振秋, 張 杰, 米寶麗, 李峰, 王飛, 鄧仕任, 許亮, 劉威, 王海波, 夏林波, 楊燕云 申請(qǐng)人:遼寧中醫(yī)藥大學(xué)