專利名稱：2,2'-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種合成方法，尤其涉及一種2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法。
背景技術(shù)：
自從Engvall和Perlman( 1971)首次報(bào)道建立酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays, ELISA)以來，由于ELISA具有快速、敏感、簡便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實(shí)際中應(yīng)用的步伐，但隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程方法制備包被抗原，采用針對某一抗原表位的單克隆抗體進(jìn)行阻斷ELISA試驗(yàn)，都大大提高了 ELISA的特異性，加之電腦化程度極高的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實(shí)用和標(biāo)準(zhǔn)化，從而使其成為最廣泛應(yīng)用的檢測方法之一。ABTS (2, 2’-azinobis[3-ethylbenzothiazoline-6_sulfonicacid]-diammonium salt)是一種水溶性HRP底物，在過氧化物酶的作用下產(chǎn)生綠色終產(chǎn)物。該綠色產(chǎn)物在410nm及650nm具有兩個(gè)主要吸收峰。在ELISA應(yīng)用中，ABTS的靈敏度比OPD和TMB稍差，它會(huì)被緩慢氧化并顯色(大約20分鐘)。相對于OPD或TMB底物高靈敏度造成的不可接受的高背景，該性質(zhì)是ABTS底物的優(yōu)勢，廣泛用于總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法)，即TotalAntioxidant Capacity Assay Kit with ABTS method,簡稱T-AOC Assay Kit,是一種米用
2,2’ -azino-bis (3-ethylbenzthiazoIine-6-sulfonic acid (ABTS)作為顯色劑，可以對血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液、或各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力進(jìn)行檢測的試劑盒。然而該物質(zhì)長期依賴進(jìn)口，而且價(jià)高昂貴。因此，低成本合成該物質(zhì)具有一定的市場前景。
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在現(xiàn)有的合成方法中，文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)鍵中間體的合成有兩種方法:1.2-巰基苯并噻唑?yàn)樵蟕
權(quán)利要求
1.一種2，2’ -聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，即ABTS的合成方法，其特征在于:本方法包括如下步驟: (1)N-乙基苯胺與濃鹽酸的混合物在攪拌下加入硫氰酸鹽，在50-120°C下攪拌反應(yīng)15-20小時(shí)，冷卻結(jié)晶，過濾，重結(jié)晶，得到N-乙基-N-苯胺硫脲； (2)攪拌下把溴素的有機(jī)溶液滴加到N-乙基-N-苯胺硫脲的有機(jī)溶液中，滴加完后，加熱回流10-20小時(shí)，冷卻后過濾干燥，得到N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽； (3)攪拌下把質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水合肼滴加到N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽的乙醇溶液中，升溫回流反應(yīng)5-20小時(shí)，冷卻、抽濾得到產(chǎn)品2，2’_聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑)； (4)攪拌下把2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑)加到質(zhì)量分?jǐn)?shù)30-99%濃硫酸溶液中，冷卻后抽濾干燥，得到2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)Π;所述的2，2’ -聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑)與濃硫酸溶液質(zhì)量比為1:1到10:1 ; (5)攪拌下往2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)的水溶液體系中不斷充入氨氣，冷卻后抽濾干燥，得到目標(biāo)化合物2，2’_聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽ΠΙ。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)中所述的硫氰酸鹽為硫氰酸鉀、硫氰酸鈉、硫氰酸氨中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)中所述的濃鹽酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%到38%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(I)中N-乙基苯胺與硫氰酸的摩爾比為1:1到1: 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(2)中所述的有機(jī)溶液為二氯甲烷、三氯甲烷中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(2)中溴素與N-乙基-N-苯胺硫脲的摩爾比為1:2到1:5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(3)中所述的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%的水合肼與N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽質(zhì)量比為1:1到1:2。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(3)中也可實(shí)施分步反應(yīng)，先利用水合肼與N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽反應(yīng)得到3-乙基-苯并噻唑酮腙，再與N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽反應(yīng)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(4)中反應(yīng)溫度為0-80°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的2，2’-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，其特征在于，步驟(5)中反應(yīng)溫度為20-80°C ；
全文摘要
本發(fā)明是2,2'-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽的合成方法，即ABTS的合成方法。包括如下步驟以N-乙基苯胺為原料，與硫氰酸鹽反應(yīng)合成N-乙基-N-苯胺硫脲，經(jīng)分離后與單質(zhì)溴反應(yīng)得到N-乙基-2亞胺基苯并噻唑氫溴酸鹽，接著與水合肼反應(yīng)獲得關(guān)鍵中間體2,2'-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑)，再利用濃硫酸磺化，最后用氨水中和反應(yīng)得到目標(biāo)化合物ABTS。本方法具有操作簡便、收率高、純度高等優(yōu)點(diǎn)。適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D277/82GK103073522SQ20131001244
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月14日
發(fā)明者陳軍民, 原唐軍, 張祎敏 申請人:江西師范大學(xué)