專利名稱：從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。
背景技術(shù)：
從60年代起，抗癌新藥的發(fā)現(xiàn)主要是從原始植物的代謝產(chǎn)物中尋找，就是目前正在使用的幾種抗癌化療試劑，也都是從高等植物中提取的化合物。比如從長春花中分離出的“長春花類生物堿”。從盾葉鬼白中分離得到的“表鬼白毒素”類衍生物。從喜樹中分離得到的“喜樹堿類衍生物”。以至到現(xiàn)在的從紅豆杉中分離得到的“紫杉二帖類”成份等。紫杉醇的分子式為=C47H51NO14是萜類環(huán)狀結(jié)構(gòu)的天然次生代謝物。主要由紫杉烷環(huán)和側(cè)鏈組成。紫杉醇是目前世界上發(fā)現(xiàn)的最有效的抗癌物質(zhì)之一，國外人工合成的紫杉醇價格是天然提取的數(shù)百倍。提取的原料紅豆杉屬植物在全世界共有十一種，目前我國共有四個種和一個變種，即云南紅豆杉、西藏紅豆杉、東北紅豆杉、中國紅豆杉和變種南方紅豆杉。當(dāng)前，獲得紫杉醇的方法主要有1.天然提取，2.人工合成，3.半人工合成，4.生物發(fā)酵。后三種方法大都停留在實驗室階段。例如(I)紫杉醇的生物合成研究其生物合成，對于人為定向的提高合成效率及克隆組合，形成關(guān)鍵的酶的基因，提高紫杉醇的產(chǎn)量意義重大。目前的關(guān)鍵是能否找到一兩個關(guān)鍵酶的發(fā)現(xiàn)，并使得其基因純化和基因克隆?？寺〖t豆杉基因能否突破還有待于觀察，不過人們已經(jīng)找到的假想途徑，目前這些技術(shù)還處在實驗室階段。(2)紫杉醇的化學(xué)合成根據(jù)研究及報道從紅豆杉植物中分離得到的10-去乙酰漿果赤霉素IIK巴卡亭III)，顯然活性低 于紫杉醇，但可以從紅豆杉針葉中提取。該物質(zhì)經(jīng)過四步化學(xué)過程可合成紫杉醇。提供了紫杉醇新來源途徑，具有重大意義。以NIC0LA0U博士為首的美國研究小組在1994年報道通過化學(xué)方法全合成紫杉醇的結(jié)果。但化學(xué)合成從實質(zhì)意義上說還沒有取得徹底的突破，目前還不具備應(yīng)用價值。(3)紫杉醇的微生物合成STTERLE等從短葉紅豆杉韌皮部分，分離得到一種寄生真菌taxo myces an dreanae)?？梢栽谔囟ǖ呐囵B(yǎng)基中產(chǎn)生紫杉醇及相關(guān)烴合物,但由于目前產(chǎn)量極低，所以還不能在生產(chǎn)中得到應(yīng)用。通過研究還發(fā)現(xiàn)根是除樹皮外紫杉醇含量最高的器官。人們利用發(fā)根農(nóng)桿菌(agrobac terium rhizogenes)浸然紅豆杉植物外植體誘導(dǎo)生根。這一辦法不需外援激素，發(fā)根生長迅速，遺傳性狀穩(wěn)定而受到重視。如能把尋找合成紫杉醇或其類似衍生物，從微生物合成途徑中，定向得到關(guān)鍵酶和克隆紅豆杉相關(guān)基因結(jié)合起來，可使這一方法得到突破。但目前在工業(yè)化生產(chǎn)中，國內(nèi)外主要從紅豆杉屬植物中提取來獲得紫杉醇。生產(chǎn)成本相對較低，產(chǎn)量也相對較大。目前現(xiàn)有的紅豆杉提取紫杉醇的方法是粉碎，溶劑浸提，浸出液濃縮得深綠色膏狀物，溶劑提取，硅膠柱層析后得到粗產(chǎn)品，再經(jīng)過重新結(jié)晶純化和柱層析分離獲得紫杉醇。但在天然提取的方法中，關(guān)鍵是提取分離方法，但由于紫杉醇在植物中化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，在植物中含量低，因此提取難度相當(dāng)大。
上述提取方法中，在柱層分離時，至少要經(jīng)過2-3個柱分離用梯度洗脫，梯度洗脫所用溶劑量大，但是樣品被分離成分含量低，分離麻煩，在柱分離的每個流分均要用薄層層析監(jiān)測成分后，待合并再分離。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供一種操作簡潔，粗產(chǎn)品的獲得率高的從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，步驟包括原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然后用重量比6 12倍量的水滲透浸泡；浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0. 8 1. 3) 1 ；然后以石灰水調(diào)pH值到7. 0 8. 0，沉淀過濾后；慮液用氯仿為溶劑萃取；萃取液減壓濃縮干燥得到紫杉醇干膏。優(yōu)選的，所述的原料粉碎后用6 8倍量的水浸泡，浸泡溫度28 38°C。優(yōu)選的，所述的浸膏`稀釋的用水體積比為水浸膏的=1 :1。優(yōu)選的，所述的萃取液減壓濃縮的壓力為-0.1 -0. 3MPa，溫度60 65°C ;濃縮到含水率20%以下。本發(fā)明的有益技術(shù)效果本發(fā)明的方法操作簡單，不使用復(fù)雜的儀器設(shè)備，通過在特定濃度和特定酸堿度條件下進行沉淀過濾可以除去絕大部分雜質(zhì)；方便了進一步提純或使用。干膏的純度高，經(jīng)本發(fā)明的方法處理得到的干膏純度達到70%以上。并且生產(chǎn)過程中除了氯仿沒有添加其它有機物質(zhì)；而所添加的氯仿沸點低，極易蒸餾除去。所以本發(fā)明的干膏可以直接作為原料使用。也可以進一步純化，滿足更苛刻的場合使用。
具體實施例方式為使本領(lǐng)域技術(shù)人員更加清楚本發(fā)明的技術(shù)方案和有益技術(shù)效果，下面提供本發(fā)明的優(yōu)選實施例，但本發(fā)明的技術(shù)并不僅限于以前實施例。實施例一云南紅豆杉樹皮Ikg用粉碎機粉碎,然后用重量比6倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度300C ;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 1 ;然后以石灰水調(diào)pH值到7.0，沉淀過濾后；慮液用體積比2倍量的氯仿為溶劑萃??；萃取液在-0. 2MPa壓力下減壓濃縮干燥得到含水率18%的紫杉醇干膏156g，HPLC分析純度達76%。實施例二云南紅豆杉樹皮0. 8kg、根皮0. 2kg用粉碎機粉碎，然后用重量比8倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度35°C ;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 1 ;然后以石灰水調(diào)PH值到7. 5，沉淀過濾后；慮液用體積比1. 5倍量的氯仿為溶劑萃?。惠腿∫涸?0.1MPa壓力下減壓濃縮干燥得到含水率19%的紫杉醇干膏191g，HPLC分析純度達73%。實施例三云南紅豆杉樹枝葉Ikg用粉碎機粉碎，然后用重量比8倍量的水滲透浸泡；浸泡溫度32°C;浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=1 I ;然后以石灰水調(diào)PH值到7. 5，沉淀過濾后；慮液用體積比2倍量的氯仿為溶劑萃?。惠腿∫涸?0. 2MPa壓 力下減壓濃縮干燥得到含水率15%的紫杉醇干膏132g，HPLC分析純度達71%。
權(quán)利要求
1.一種從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，步驟包括 原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然后用重量比6 12倍量的水滲透浸泡； 浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏； 浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0. 8 1. 3) :1 ; 然后以石灰水調(diào)pH值到7. 0 8. 0,沉淀過濾后； 慮液用氯仿為溶劑萃取； 萃取液減壓濃縮干燥得到紫杉醇干膏。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于所述的原料粉碎后用6 8倍量的水浸泡，浸泡溫度28 38°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于所述的浸膏稀釋的用水體積比為水浸膏的=1 :1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于所述萃取液減壓濃縮的壓力為-0.1 -0. 3MPa，溫度60 65°C ;濃縮到含水率20%以下。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。目的是提供一種操作簡潔，粗產(chǎn)品的獲得率高的從云南紅豆杉中提取紫杉醇的方法。步驟包括原料樹皮或根皮或枝葉粉碎，然后用重量比6～12倍量的水滲透浸泡；浸泡液減壓濃縮得到深綠色浸膏；浸膏用水稀釋，用水量按體積比為水浸膏=(0.8～1.3)1；然后以石灰水調(diào)pH值到7.0～8.0，沉淀過濾后；慮液用氯仿為溶劑萃取；萃取液減壓濃縮干燥得到紫杉醇干膏。本發(fā)明的方法操作簡單，不使用復(fù)雜的儀器設(shè)備，通過在特定濃度和特定酸堿度條件下進行沉淀過濾何以除去絕大部分雜質(zhì)。方便了進一步提純。干膏的純度高，經(jīng)本發(fā)明的方法處理得到的干膏純度達到70%以上。
文檔編號C07D305/14GK103058961SQ20131002964
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月28日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月28日
發(fā)明者孫健峰 申請人:普洱市紅寶生物科技有限公司