專利名稱：從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物枝葉中天然有機(jī)化合物的提取方法，具體是一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇是從紅豆杉植物上提取的一種化合物，主要適用于治療卵巢癌和乳腺癌，以及肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤等，是繼阿霉素后最有效的抗癌新藥之一，總有效率達(dá)75%以上。長(zhǎng)期以來(lái)，紫杉醇是從紅豆杉的樹(shù)皮中提取的，由于紅豆杉的樹(shù)皮為不可再生資源，導(dǎo)致紫杉醇的獲取原料非常有限；加之，紅豆杉是世界上公認(rèn)的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物，在自然條件下生長(zhǎng)速度緩慢，再生能力差，世界范圍內(nèi)還沒(méi)有形成大規(guī)摸的紅豆杉原料林基地，中國(guó)已將其列為一級(jí)珍稀瀕危保護(hù)植物，聯(lián)合國(guó)也明令禁止采伐，從而使得紫杉醇的獲取原料更為匱乏。曼地亞紅豆杉(Taxus madia)是紅豆杉中的一種,是原產(chǎn)于美國(guó)、加拿大的天然雜交品種，其不僅樹(shù)皮中含有紫杉醇，而且枝葉中所含的紫杉醇高達(dá)0.03%以上，4 5年生的曼地亞紅豆杉枝葉所含紫杉醇高于70 80年生的天然紅豆杉樹(shù)皮所含的紫杉醇含量。因而，曼地亞紅豆杉枝葉已成為相關(guān)企業(yè)獲取紫杉醇的重要原料。但是，由于紅豆杉枝葉中含有大量的色素、蠟質(zhì)油脂及相似物質(zhì)等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)使得紫杉醇的分離提取操作更為復(fù)雜，傳統(tǒng)從紅豆杉樹(shù)皮中提取紫杉醇的方法根本無(wú)法適用。為此，本領(lǐng)域的各大企業(yè)不惜花費(fèi)巨額資金組織科研人員進(jìn)行了大量、反復(fù)的研究，各種研究成果在公開(kāi)出版物上屢見(jiàn)報(bào)道，例如中國(guó)專利文獻(xiàn)公開(kāi)的“一種從紅豆杉植物枝葉中初分離紫杉醇的方法”(公開(kāi)號(hào):CN163108 4，
公開(kāi)日:2005年6月29日)、“從曼地亞紅豆杉枝葉中同時(shí)提取紫杉醇和10-DAB III的方法”(公開(kāi)號(hào):CN102212045，
公開(kāi)日:2011年10月12日)等，這些技術(shù)雖能從紅豆杉的枝葉中有效分離提取紫杉醇，但其純化效果非常不理想，無(wú)法直接達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)(中國(guó)藥典2010年 版)，需要進(jìn)行后續(xù)的純化操作，從而增加紫杉醇的提取成本，提取效率低，不能適宜規(guī)模批量化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于:針對(duì)上述紅豆杉枝葉中紫杉醇的提取現(xiàn)狀，及現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作容易、分離徹底、純化率高、能直接達(dá)到藥用標(biāo)準(zhǔn)的從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法。本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，采用的技術(shù)方案是，一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，包括下列步驟:
1).在室溫條件下，將粉碎的IOOOkg紅豆杉枝葉用5m3甲醇水浸泡IOh以上，甲醇水的濃度為70 90% ;將浸泡液過(guò)濾；
2).將步驟I)得到的濾液采用活性炭柱過(guò)濾脫色；
3).將步驟2)得到的脫色液進(jìn)行減壓濃縮；采用三氯甲烷或二氯甲烷將減壓濃縮得到的產(chǎn)品分4次進(jìn)行萃取，合并萃取液；
4).將步驟3)得到的萃取液在60 80°C的溫度條件下進(jìn)行常壓回收溶劑；在溶劑回收后的液體中加入適量石油醚，使液體脫脂脫蠟、結(jié)晶沉淀，過(guò)濾，真空干燥，得初品；
5).將步驟4)得到的初品經(jīng)三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為200 300kg ;采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二者混合體積之比為100:1 2 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮，并真空抽干減壓濃縮產(chǎn)品，得紫杉醇含量彡1.5%的粗品；
6).將步驟5)得到的粗品攪拌進(jìn)60 80kg的硅膠中，將攪拌好的硅膠裝柱；采用洗脫劑對(duì)硅膠柱進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、異丙醇和甲醇的混合液，三者混合體積之比為100:4 6:0.5 2 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮并烘干，得紫杉醇含量彡12%的半成品；
7).將步驟6)得到的半成品用5 10倍重量的丙酮溶解；在攪拌狀態(tài)下加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置5 10h，過(guò)濾，烘干，得紫杉醇含量> 30%的半成品；
8).將步驟7)得到的紫杉醇含量>30%半成品經(jīng)二氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為30 60kg ;采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇的混合液，三者混合體積之比為100:8 10:2 4 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮至干，得紫杉醇含量> 95%的半成品；
9).將步驟8)得到的紫杉醇含量>95%半成品用6 10倍重量的丙酮溶解，將溶解液真空過(guò)濾，在濾液中加入正己烷至晶體出現(xiàn)為止，室溫靜置IOh以上，真空抽濾，在溫度條件為56°C以下真空烘11 13h，得紫杉醇含量彡99%的成品。
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進(jìn)一步的,步驟I)的浸泡液過(guò)濾濾速為0.8 1.2m3/h,濾時(shí)為20 25h。進(jìn)一步的，步驟2)的活性炭柱直徑為700 900mm ;活性炭柱的活性炭重量為50 80kg。進(jìn)一步的，步驟5)中的溶解液在硅膠柱中的流速為230 280L/h ;洗脫劑在硅膠柱中的流速為230 280L/h。進(jìn)一步的，步驟6)中的洗脫劑在硅膠柱中的流速為200 250L/h。進(jìn)一步的，步驟8)中的溶解液在硅膠柱中的流速為自然流速；洗脫劑在硅膠柱中的流速為180 230L/h。進(jìn)一步的，所述減壓濃縮的溫度條件為70°C以下。進(jìn)一步的，所述紅豆杉為曼地亞紅豆杉。本發(fā)明的有益效果是:上述方法能將紅豆杉枝葉中的紫杉醇直接分離、純化至藥用標(biāo)準(zhǔn)，具有操作容易、分離徹底、純化率高、高效快捷、可靠實(shí)用等特點(diǎn)，獲取的紫杉醇性能穩(wěn)定，適宜規(guī)模批量化生產(chǎn)，有利于降低紫杉醇的提取成本。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明主要是以曼地亞紅豆杉枝葉作為提取對(duì)象，因而下述各實(shí)施例的紅豆杉均為曼地亞紅豆杉。本發(fā)明除了適用于曼地亞紅豆杉外，也適合用于其它枝葉中含有紫杉醇的紅豆杉，例如云南紅豆杉、東北紅豆杉、中國(guó)紅豆杉、南方紅豆杉等。 實(shí)施例一
本發(fā)明包括下列步驟:
1) 在室溫條件下，將粉碎的IOOOkg紅豆杉枝葉用5m3甲醇水浸泡IOh,甲醇水的濃度為80% ;將浸泡液過(guò)濾,濾速為lm3/h,濾時(shí)約為23h ；
2).將步驟I)得到的濾液采用活性炭柱過(guò)濾脫色，活性炭柱的直徑為790mm，活性炭柱的活性炭重量為80kg ；
3).將步驟2)得到的脫色液進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的溫度條件為70°C，體積濃縮至1.8m3，回收甲醇，回收的甲醇經(jīng)勾兌后可以重復(fù)使用；采用三氯甲烷將減壓濃縮得到的產(chǎn)品分4次進(jìn)行萃取，每次約400L，各次萃取得到的萃取液合并；
4).將步驟3)得到的萃取液在60°C的溫度條件下進(jìn)行常壓回收溶劑(即三氯甲烷等)；在溶劑回收后的液體中加入適量的石油醚，使液體脫脂脫蠟、結(jié)晶沉淀，過(guò)濾，真空干燥，得初品；
5).將步驟4)得到的初品經(jīng)三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為220kg，溶解液在硅膠柱中的流速為250L/h ;采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫(分為無(wú)成份段、雜質(zhì)段、合格段)，洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二氯甲烷和甲醇的混合體積之比為100:2，洗脫劑在硅膠柱中的流速為250L/h ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的溫度條件為70°C，回收溶劑(即三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇等，回收的溶劑經(jīng)勾兌后可以重復(fù)使用)，并高真空抽干減壓濃縮產(chǎn)品，得紫杉醇粗品，采用HPLC檢測(cè)粗品的紫杉醇含量，粗品的紫杉醇含量> 1.5% ;硅膠柱中的硅膠可再生重復(fù)使用；
6).將步驟5)得到的粗品攪拌進(jìn)65kg的硅膠中，將攪拌好的硅膠裝柱(除去相似物質(zhì))；采用洗脫劑對(duì)硅膠柱進(jìn)行梯度洗脫(分為無(wú)成份段、前雜段、前交段、合格段、后交段、后雜段)，洗脫劑為二氯甲烷、異丙醇和甲醇的混合液，二氯甲烷、異丙醇和甲醇的混合體積之比為100:5:1，洗脫劑在硅膠柱中的流速為220L/h ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮并烘干，減壓濃縮的溫度條件為70°C，回收溶劑(即二氯甲烷、異丙醇和甲醇等，回收的溶劑經(jīng)勾兌后可以重復(fù)使用)，得紫杉醇半成品，采用HPLC檢測(cè)半成品的紫杉醇含量，半成品的紫杉醇含量彡12%;硅膠柱中的硅膠可再生重復(fù)使用；
7).將步驟6)得到的半成品用9倍重量的丙酮溶解；在攪拌狀態(tài)下加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置8.5h，過(guò)濾，烘干，得紫杉醇半成品，采用HPLC檢測(cè)半成品的紫杉醇含量，半成品的紫杉醇含量> 30% (若檢測(cè)到的半成品紫杉醇含量< 30%，可重結(jié)晶一次，SP采用3倍重量的甲醇溶解紫杉醇半成品，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至有大量晶體析出為止，倒出，靜置結(jié)晶7h，過(guò)濾，烘干，得紫杉醇半成品，采用HPLC檢測(cè)半成品的紫杉醇含量，半成品的紫杉醇含量> 30%)；
8).將步驟7)得到的紫杉醇含量>30%半成品經(jīng)二氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜(除去相似物質(zhì))，硅膠柱的硅膠重量為50kg，溶解液在硅膠柱中的流速為自然流速；采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫(分為無(wú)成份段、前雜段、前交段、合格段、后交段、后雜段)，洗脫劑為二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇的混合液，二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇的混合體積之比為100:10:4，洗脫劑在硅膠柱中的流速為190L/h ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮至干，減壓濃縮的溫度條件為70°C，回收溶劑(即丙酮、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇等，回收的溶劑經(jīng)勾兌后可以重復(fù)使用)，得紫杉醇半成品，采用HPLC檢測(cè)半成品的紫杉醇含量，半成品的紫杉醇含量> 95%;硅膠柱中的硅膠可再生重復(fù)使用；
9).將步驟8)得到的紫杉醇含量> 95%半成品用7倍重量的丙酮溶解，將溶解液真空過(guò)濾，在濾液中加入正己烷至晶體出現(xiàn)為止，室溫靜置12h，真空抽濾，在溫度條件為56 °C真空烘12h，得紫杉醇成品，采用HPLC檢測(cè)成品的紫杉醇含量，成品的紫杉醇含量多99%;將成品包裝、稱重、檢測(cè)入庫(kù)。上述方法提取的成品采樣約50g,送至中國(guó)科學(xué)院成都分院分析測(cè)試中心進(jìn)行分析測(cè)試，檢測(cè)結(jié)果如表I所示。表I本發(fā)明提取得到的紫杉醇各項(xiàng)性能檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，包括下列步驟: 1).在室溫條件下，將粉碎的IOOOkg紅豆杉枝葉用5m3甲醇水浸泡IOh以上，甲醇水的濃度為70 90% ;將浸泡液過(guò)濾； 2).將步驟I)得到的濾液采用活性炭柱過(guò)濾脫色； 3).將步驟2)得到的脫色液進(jìn)行減壓濃縮；采用三氯甲烷或二氯甲烷將減壓濃縮得到的產(chǎn)品分4次進(jìn)行萃取，合并萃取液； 4).將步驟3)得到的萃取液在60 80°C的溫度條件下進(jìn)行常壓回收溶劑；在溶劑回收后的液體中加入石油醚，使液體脫脂脫蠟、結(jié)晶沉淀，過(guò)濾，真空干燥，得初品； 5).將步驟4)得到的初品經(jīng)三氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為200 300kg ;采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合液，二者混合體積之比為100:1 2 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮，并真空抽干減壓濃縮產(chǎn)品，得紫杉醇含量彡1.5%的粗品； 6).將步驟5)得到的粗品攪拌進(jìn)60 80kg的硅膠中，將攪拌好的硅膠裝柱；采用洗脫劑對(duì)硅膠柱進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、異丙醇和甲醇的混合液，三者混合體積之比為100:4 6:0.5 2 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮并烘干，得紫杉醇含量彡12%的半成品； 7).將步驟6)得到的半成品用5 10倍重量的丙酮溶解；在攪拌狀態(tài)下加入石油醚，直至有晶體析出為止，靜置5 10h，過(guò)濾，烘干，得紫杉醇含量> 30%的半成品； 8).將步驟7)得到的紫杉醇含量>30%半成品經(jīng)二氯甲烷溶解后加入硅膠柱中除雜，硅膠柱的硅膠重量為30 60kg ;采用洗脫劑對(duì)硅膠柱中的層析液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫劑為二氯甲烷、乙酸乙酯和異丙醇的混合液，三者混合體積之比為100:8 10:2 4 ;采用TLC及HPLC檢測(cè)洗脫流份中的紫杉醇，當(dāng)檢測(cè)到紫杉醇后，收集含有紫杉醇的洗脫流份；將含有紫杉醇的洗脫流份進(jìn)行減壓濃縮至干，得紫杉醇含量> 95%的半成品； 9).將步驟8)得到的紫杉醇含量>95%半成品用6 10倍重量的丙酮溶解，將溶解液真空過(guò)濾，在濾液中加入正己烷至晶體出現(xiàn)為止，室溫靜置IOh以上，真空抽濾，在溫度條件為56°C以下真空烘11 13h，得紫杉醇含量彡99%的成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:步驟I)的浸泡液過(guò)濾濾速為0.8 1.2m3/h,濾時(shí)為20 25h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:步驟2)的活性炭柱直徑為700 900mm ;活性炭柱的活性炭重量為50 80kg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:步驟5)中的溶解液在硅膠柱中的流速為230 280L/h ;洗脫劑在硅膠柱中的流速為230 280L/h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:步驟6)中的洗脫劑在硅膠柱中的流速為200 250L/h。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:步驟8)中的溶解液在硅膠柱中的流速為自然流速；洗脫劑在硅膠柱中的流速為180 230L/h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:所述減壓濃縮的溫度條件為70°C以下。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，其特征在于:所述紅豆杉為曼地亞紅豆杉。`
全文摘要
一種從紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法，包括1)將粉碎的1000kg紅豆杉枝葉用5m3甲醇水浸泡；過(guò)濾；2)將濾液脫色；3)將脫色液減壓濃縮；萃??；4)將萃取液脫脂脫蠟、結(jié)晶沉淀，過(guò)濾，干燥得初品；5)將初品在硅膠柱中除雜；梯度洗脫；收集含紫杉醇洗脫流份，減壓濃縮得粗品；6)將粗品攪拌進(jìn)硅膠中，裝柱；梯度洗脫；收集含紫杉醇洗脫流份，減壓濃縮得半成品；7)將半成品溶解；加入石油醚，靜置，過(guò)濾，烘干，得含量≥30%半成品；8)將步驟7)半成品在硅膠柱中除雜；梯度洗脫；收集含紫杉醇洗脫流份，減壓濃縮得含量≥95%半成品；9)將步驟8)半成品溶解，過(guò)濾，加入正己烷，靜置，抽濾，烘干，得含量≥99%成品。
文檔編號(hào)C07D305/14GK103172598SQ201310099519
公開(kāi)日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年3月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月26日
發(fā)明者趙家凡, 王昌全, 鄭萬(wàn)奎 申請(qǐng)人:四川祥光農(nóng)業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司