專利名稱：合成型轉(zhuǎn)錄因子VP64- Os01g63510的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于遺傳工程領(lǐng)域，具體地，涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的應(yīng)用及合成型轉(zhuǎn)錄因子VP64-0s01g63510的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
水稻(Oryza sativa L.)是我國和全世界重要的糧食作物，世界1/2以上人口以水稻為主食。糧食安全問題一直是全世界關(guān)注的問題，所以水稻的產(chǎn)量性狀一直以來都很受科學(xué)家們的關(guān)注，而水稻籽粒大小則是影響產(chǎn)量的主要因素之一。同時(shí)水稻作為農(nóng)作物的功能基因研究的模式植物，與其相關(guān)的遺傳學(xué)和分子生物學(xué)研究一直倍受研究者的重視，水稻籽粒的生長(zhǎng)發(fā)育是一個(gè)有次序的、選擇性的基因表達(dá)過程，轉(zhuǎn)錄因子在基因的精確調(diào)控中起到了關(guān)鍵性的作用。有關(guān)籽粒大小性狀的分子遺傳調(diào)控機(jī)制科學(xué)家們已經(jīng)有一些研究進(jìn)展，通過QTL已定位了一些籽粒大小相關(guān)基因，GS3編碼一個(gè)膜蛋白，是籽粒大小和器官大小的負(fù)調(diào)控因子。張啟發(fā)等研究發(fā)現(xiàn)GS5編碼一個(gè)調(diào)節(jié)籽粒大小的絲氨酸羧肽酶，是控制籽粒大小的正調(diào)節(jié)因子，過表達(dá)GS5可產(chǎn)生較大籽粒。 轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒大小方面起著非常重要的作用，0sffRKY78可以調(diào)節(jié)水稻莖的伸長(zhǎng)和種子的發(fā)育，0sffRKY78突變體可以使莖桿變矮化影響籽粒發(fā)育；螺旋_環(huán)-螺旋蛋白(bHLH)類轉(zhuǎn)錄因子能通過調(diào)控外稃和內(nèi)稃細(xì)胞的長(zhǎng)度影響谷粒的大小。PGLl (堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白(bHLH)異源二聚體作為結(jié)合DNA的bHLH的抑制子過表達(dá)后可增加籽粒長(zhǎng)度和重量。雖然以上很多轉(zhuǎn)錄因子家族參與了水稻籽粒大小調(diào)控，但是還沒有發(fā)現(xiàn)WUSCHEL家族轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒大小方面的研究。WUSCHEL-related homebox (WOX)基因是植物特有的轉(zhuǎn)錄因子，在被子植物和裸子植物分化之前人們從擬南芥中克隆并預(yù)測(cè)了起結(jié)構(gòu)后，其他物種的WOX基因相繼被克隆研究(Nardmann et al.，2009)。W0X5是第一個(gè)被確定WUSCHEL轉(zhuǎn)錄因子,在根莖頂端分生表達(dá)調(diào)控胚胎肝細(xì)胞的再生與分化(Mayer et al.，1998)。在胚胎發(fā)育早期W0X8、W0X9和TOX2以及其它相關(guān)元件都有動(dòng)態(tài)表達(dá)共同8細(xì)胞胚胎的極性分化區(qū)域形(Haecker etal.，2004)。在玉米中WUS相應(yīng)的同源基因也被發(fā)現(xiàn)，而且在開花植物中功能相對(duì)保守。WUX5可以明顯的影響頂端分生組織的分化導(dǎo)致不正常胚胎發(fā)育。此外還有相關(guān)研究表明WUS基因與葉片近軸端和遠(yuǎn)軸端的極性分化有關(guān)，WUS轉(zhuǎn)錄因子在中間層影響葉片的源輸出，主要有WUSl亞家族和PRESSED FLOWER (PRS) /W0X3亞家族，而且WOXl在葉片近軸遠(yuǎn)軸交接處表達(dá)量高(Matsumoto and Okada, 2001)。W0X4在原基形成層和新生組織干細(xì)胞調(diào)控干細(xì)胞再生，但是W0X4不能抑制木質(zhì)部的分化，而且在CLE/TDIF-PXY/TDR信號(hào)的下游還有其它的因子參與抑制細(xì)胞的分化(Hirakawa et al.，2010)。同時(shí)WOX基因在抗旱小麥中可以促進(jìn)根系統(tǒng)發(fā)育提高水分的吸收率使其在缺水的條件下很好的生長(zhǎng)(Wasson etal.，2012)。綜上所述，WUS家族轉(zhuǎn)錄因子在植物生長(zhǎng)發(fā)育的很多方面都起著很重要的作用，但是本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)水稻W(wǎng)US家族轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)控籽粒大小。本發(fā)明就是通過構(gòu)建組成型表達(dá)VP64-0s01g63510融合蛋白發(fā)現(xiàn)WOX基因可以調(diào)控籽粒大小。VP64是4個(gè)VP16功能域基序融合在一起組成的，是一類增強(qiáng)子。VP16最早在動(dòng)物病毒基因中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已被廣泛的應(yīng)用到植物中主要用于植物基因的轉(zhuǎn)錄控制的研究中，因轉(zhuǎn)錄因子在其體內(nèi)其作用大體上可以分成兩種:一種為轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，另一種為轉(zhuǎn)錄抑制子。當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子和VP16功能域基序融合之后，它就會(huì)增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的功能，在轉(zhuǎn)基因植株中就會(huì)出現(xiàn)更明顯的表型變化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的應(yīng)用以及合成型轉(zhuǎn)錄因子 VP64-0s01g63510 的應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供一種融合蛋白，該融合蛋白為(VP16)n-Linker-0s0lg63510 ;其中，n為彡I的整數(shù)；Linker由I 20個(gè)柔性氨基酸串聯(lián)而成,本發(fā)明 linker，其氨基酸序列為 INYPYDVPDYAGSYPYDVPDYAAQCSGTELTSLYKKAGF，其核苷酸序列如SEQ ID N0.3所不；VP16為來自單純皰疫病毒(Herpes simplex virus)的VP16蛋白；0s01g63510為水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510，其CDS核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)堿基形成的具有同等功能的基因序列；其氨基酸序列如 SEQID N0.2 所示。本發(fā)明提供了用于擴(kuò)增0s01g63510基因的引物，其包括正向引物Fl:5’ -CAAAAAAGCAGGCTTCATGGAGGCTCTTAGCGGG-3’ 和反向引物Rl:5’-CAAGAAAGCTGGGTCCTAGAGGCCGAAGCTGCA-3’。更優(yōu)選地，前述融合蛋白為(VP16 ) 4-Linker-0s01g63510。本發(fā)明還提供編碼所述融合蛋白的基因，以及在嚴(yán)格條件下，可與該基因的核苷酸序列雜交的核苷酸序列；其中，所述嚴(yán)格條件為65°C，在0.1 X SSPE或0.1XSSC、0.1%SDS的溶液中雜交并洗膜。本發(fā)明還提供含有編碼所述融合蛋白的基因的載體。所述載體為任一種可引導(dǎo)外源基因在宿主中表達(dá)的載體。優(yōu)選地，所述載體為植物雙元表達(dá)載體(例如，PCAMBIA1301)。在將本發(fā)明編碼所述融合蛋白的基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體中時(shí)，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前添加任一種強(qiáng)啟動(dòng)子(例如，玉米強(qiáng)啟動(dòng)子Ubiquitin)或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。此外，在將本發(fā)明編碼所述融合蛋白的基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體中時(shí)，還可以使用增強(qiáng)子，且這些增強(qiáng)子區(qū)域必須與編碼序列的閱讀框相同，以確保整條序列的翻譯。本發(fā)明還提供含有編碼所述融合蛋白的基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。本發(fā)明還提供含有編碼所述融合蛋白的基因的工程菌。本發(fā)明還提供編碼所述融合蛋白的基因在推遲水稻抽穗、延長(zhǎng)生育期中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的應(yīng)用，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的⑶S序列(完整翻譯區(qū))構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的上游，轉(zhuǎn)化植物，篩選并最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。所述CDS序列如SEQ ID N0.1所示。前述的應(yīng)用，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的CDS序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的上游，轉(zhuǎn)化水稻(例如，水稻品種‘kitaake’)，從而使轉(zhuǎn)基因水稻籽粒變寬變長(zhǎng)。其中，水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的⑶S序列如SEQ ID N0.1所示，4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的核苷酸序列如SEQ ID N0.4所示。
攜帶有編碼所述融合蛋白的基因的表達(dá)載體可通過使用Ti質(zhì)粒、植物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電穿孔等常規(guī)生物技術(shù)方法導(dǎo)入植物細(xì)胞中(Weissbach，1998，Method for Plant Molecular Biology VIII, Academy Press, New York,第 411-463 頁；Geiserson 和 Corey,1998, Plant Molecular Biology, 2nd Edition)。本發(fā)明首次利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64 (即4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因融合構(gòu)建得到合成型轉(zhuǎn)錄因子，并轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物，并使轉(zhuǎn)基因水稻種子明顯變長(zhǎng)、變寬、千粒重增加，具有較好的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中nVP64-hyg_asRED載體圖譜。圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中ubi:VP64-0s01g63510載體圖譜。圖3為本發(fā)明VP64-0s01g63510合成型轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)轉(zhuǎn)基因陽性株系的PCR鑒定,其中 WT 為野生型水稻 ‘kitaake’，UB1:2424-14,2424-22 為 VP64_0s01g63510 轉(zhuǎn)基因水 稻株系。圖4為本發(fā)明Western blot檢測(cè)VP64_0s01g63510轉(zhuǎn)基因陽性株系，其中WT為野生型水稻 ‘kitaake’，2424-14、2424-18、2424-22 為 VP64_0s01g63510 轉(zhuǎn)基因水稻株系。圖5為本發(fā)明VP64(4XVP16)激活0s01g63510改變籽粒性狀的表型，其中WT為野生型水稻‘kitaake’，2424為VP64_0s01g63510轉(zhuǎn)基因水稻株系，其中圖5a為WT水稻與轉(zhuǎn)基因水稻籽粒長(zhǎng)度的比較，圖5b為WT水稻與轉(zhuǎn)基因水稻籽粒寬度的比較，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因水稻的籽粒長(zhǎng)度和寬度都顯著大于WT。圖6為本發(fā)明VP64(4XVP16)激活0s01g63510改變籽粒長(zhǎng)度考種分析，其中WT為野生型水稻‘kitaake’，2424-14、2424-22為VP64_0s01g63510轉(zhuǎn)基因水稻株系。圖7為本發(fā)明VP64(4XVP16)激活0s01g63510改變籽粒寬度考種分析，其中WT為野生型水稻‘kitaake’，2424-14、244-22為VP64_0s01g63510轉(zhuǎn)基因水稻株系。圖8為本發(fā)明VP64(4XVP16)激活0s01g63510改變千粒重考種分析，其中WT為野生型水稻 ‘kitaake’，2424-14、244-22 為 VP64_0s01g63510 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的化學(xué)試劑均為常規(guī)市售試劑，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例10s01g63510基因的分離和植物表達(dá)載體構(gòu)建在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(http://planttfdb.cb1.edu.cn/index.php sp=0sj)中找到0s01g63510基因，根據(jù)其序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物(Fl:5’ -CAAAAAAGCAGGCTTCATGGAGGCTCTTAGCGGG-3’和反向引物Rl:5’ -CAAGAAAGCTGGGTC GAGGCCGAAGCTGCA-3’ )以野生日本晴水稻總 cDNA 為模板，進(jìn)行PCR獲得0s01g63510基因的CDS序列，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。按照PrimeSTAR聚合酶擴(kuò)增體系和反應(yīng)程序進(jìn)行PCR。此過程中包含兩輪PCR，第一輪PCR的引物用加部分adaptor attB接頭的基因引物(Fl和Rl),而第二輪的模板用第一輪的PCR產(chǎn)物，并且引物用完整的adaptor attB引物attB5’ adaptor:5’-GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3’，attB3’adaptor:5’ -GTGGGGACCACITTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3’ 。將 PCR 產(chǎn)物克隆至Ij連接pDONER克隆載體(購自Inv i too gen )上，經(jīng)測(cè)序鑒定得到與目的基因完全相同的序列。經(jīng)測(cè)序鑒定得到與目的基因完全相同的序列。通過LR反應(yīng)將0s01g63510構(gòu)建到cVP64-hyg-asRED (圖1，載體全序列如SEQ ID N0.5所示)上，獲得載體ub1:VP64-0s01g63510 (圖2，載體全序列如SEQ ID N0.6所示)。其中，植物表達(dá)載體cVP64-hyg-asRED的構(gòu)建過程為:以雙元表達(dá)載體pCAMBIA1300左右邊界包含的序列為骨架序列，通過體外重組，將ubi promoter-Gateway-VP64表達(dá)單兀、35S promoter-asRED表達(dá)單元和35S promoter-hyg表達(dá)單元與之融合構(gòu)建得到,載體cVP64-hyg-asRED的全序列如 SEQ ID N0.5 所示。實(shí)施例2轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得取水稻‘kitaake’成熟種子，人工或機(jī)械脫殼，挑選飽滿光潔無菌斑的種子經(jīng)消毒之后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基 上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。選擇外觀良好，生長(zhǎng)力好的水稻愈傷組織為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ubi:VP64-0s01g63510轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含有100 y M的乙酰丁香酮和0.D.值為0.7的農(nóng)桿菌的AAM轉(zhuǎn)化液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將轉(zhuǎn)化液浸泡過的愈傷組織置于共培養(yǎng)基上進(jìn)行共培養(yǎng)，25°C暗培養(yǎng)3d后置于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)約30d,每IOd繼代一次。然后將篩出的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化約20d，每IOd繼代一次。將分化出綠色小苗的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上生根，待約7d長(zhǎng)出發(fā)達(dá)根系后煉苗，并計(jì)算轉(zhuǎn)化所獲轉(zhuǎn)基因苗數(shù)。煉苗7d后轉(zhuǎn)移至大田生長(zhǎng)。其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為:N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2.5mg/L2, 4D+0.6g/L酸水解酪蛋白+2.878g/L脯氨酸+0.5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制，調(diào)pH至5.8 5.9后加入植物凝膠4g/L。共培養(yǎng)基配方為:N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+2.5mg/L2, 4D+0.5g/L谷氨酰胺+0.6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L鹿糖，以水配制,調(diào)pH至5.2后加入植物凝膠4g/L。滅菌后，50°C左右加入AS (乙酰丁香酮)100 200iig/mL。篩選培養(yǎng)基配方為:N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2.5mg/L2, 4D+0.6g/L酸水解酪蛋白+2.878g/L脯氨酸+0.5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制，調(diào)pH至5.8 5.9后加入植物凝膠4g/L。滅菌后加入35mg/L潮霉素(購自上海紐津生物技術(shù)有限公司)。 分化培養(yǎng)基配方為:MS無機(jī)+MS-B5微量+MS有機(jī)+鐵鹽+MS-銅鈷母液+0.05mg/L NAA+2.0mg/L Kinetin (激動(dòng)素)+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖，以水配制，調(diào)pH至5.8 5.9后加入植物凝膠4g/L。實(shí)施例3轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定為了檢測(cè)0s01g63510基因是否整合進(jìn)入水稻基因組DNA，提取了野生型(‘kitaake’)和本發(fā)明制備的轉(zhuǎn)基因水稻葉子DNA，從基因兩端的植物表達(dá)載體上設(shè)計(jì)一對(duì)引物(VP64-1F:5’ -ATGGACGCGCTGGACGAITT-3’，2424-R:5’ GAGGCCGAAGCTGCAAA3’ )按照PrimeSTAR聚合酶擴(kuò)增體系和反應(yīng)程序進(jìn)行PCR鑒定轉(zhuǎn)基因植株，通過PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因水稻均擴(kuò)增出目的條帶(867bp)，而野生型水稻中無此目的條帶，結(jié)果見圖3。初步確定0s01g63510基因已通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法插入到水稻基因組中，PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序結(jié)果分析是目的基因序列。為檢測(cè)ub1:VP64-0s01g63510基因在T2代轉(zhuǎn)基因水稻中的過表達(dá)情況，利用VP64抗體對(duì)其在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行鑒定，經(jīng)過SDS-PAGE蛋白電泳一免疫印記一免疫熒光反應(yīng)，Western Blot鑒定結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植株存在目的蛋白，而野生型未雜出條帶(圖4)。具體的Western Blot實(shí)驗(yàn)流程如下:將適量樣品放入液氮冰凍后研磨成粉末，加入適量上樣緩沖液混勻，12000rpm離心10分鐘;取5 ill上清加樣，以90V電壓SDS-PAGE電泳30分鐘后，120V電泳60-90分鐘，當(dāng)溴酚藍(lán)到達(dá)凝膠的底端即可停止電泳；電泳后采用半干轉(zhuǎn)移法轉(zhuǎn)膜，并用麗春紅染色液對(duì)膜進(jìn)行染色，觀察轉(zhuǎn)膜效果；轉(zhuǎn)膜完畢后，將膜放入含5%的脫脂奶粉的PBST溶液中封閉室溫封閉60分鐘或4°C過夜；室溫下一抗(VP64抗體)孵育I小時(shí)或4°C孵育過夜,然后用PBST洗滌3次，每次5分鐘；室溫下二抗(羊抗兔，購自Abmart，貨號(hào)M21002S)孵育I小時(shí)，然后用PBST洗滌3次，每次5分鐘；在膜上加入底物，進(jìn)行曝光。其中，VP64抗體是由艾比瑪特生物醫(yī)藥(上海)有限公司根據(jù)VP64的氨基酸序列合成多肽作為特異抗原而制備的兔源多抗。實(shí)施例4轉(zhuǎn)基因水稻表型分析和考種分析: 將本發(fā)明獲得的轉(zhuǎn)基因水稻種子和野生型(‘kitaake’ )水稻種子進(jìn)行比較，從表型上可以明顯的看出轉(zhuǎn)基因種子明顯的變長(zhǎng)、變寬、千粒重增加，見圖5a、5b、圖6、圖7、圖
8。通過考種的數(shù)據(jù)分析結(jié)果可以明顯的看出轉(zhuǎn)基因水稻種子性狀與野生型相比具有顯著的差異變化。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種融合蛋白，其特征在于，該融合蛋白為0s01g63510-Linker- (VP16)n或(VP16)n-Linker-OsOlg63510 ;其中，n為彡I的整數(shù)；Linker由I 50個(gè)柔性氨基酸串聯(lián)而成；VP16為來自單純皰疫病毒(Herpes simplex virus)的VP16蛋白；0s01g63510為水稻轉(zhuǎn)錄因子 0s01g63510。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，n為4。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，該融合蛋白S(VP16)4~Linker-0s01g63510。
4.編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述融合蛋白的基因。
5.含有權(quán)利要求4所述基因的載體。
6.含有權(quán)利要求4所述基因的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。
7.含有權(quán)利要求4所述基因的工程菌。
8.權(quán)利要求4所述的基因在推遲水稻抽穗、延長(zhǎng)生育期中的應(yīng)用。
9.水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的⑶S序列構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的上游，轉(zhuǎn)化植物，篩選并最終獲得轉(zhuǎn)基因植物，所述⑶S序列如SEQ ID N0.1所示。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s01g63510基因的⑶S序列通過Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的上游，轉(zhuǎn)化水稻，從而使轉(zhuǎn)基因水稻的籽粒變寬變長(zhǎng) 。
全文摘要
本發(fā)明提供了合成型轉(zhuǎn)錄因子VP64-Os01g63510的應(yīng)用。其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64(即4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水稻轉(zhuǎn)錄因子Os01g63510基因融合構(gòu)建得到合成型轉(zhuǎn)錄因子，并轉(zhuǎn)化到水稻中從而改善水稻籽粒性狀，使轉(zhuǎn)基因水稻種子明顯變長(zhǎng)、變寬、千粒重增加，具有較好的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07K19/00GK103224563SQ20131010660
公開日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月29日
發(fā)明者劉軍, 鄒小花, 李宏宇, 趙濤, 劉斌, 林辰濤 申請(qǐng)人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所