一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法。以虎杖根為原料，通過粉碎、酶解、用乙酸乙酯混合溶劑提取、濃縮、用乙醇分離粗品、氧化鋁、活性炭脫色、除雜、乙醇結(jié)晶得白藜蘆醇，其為含量98-99％。本工藝收率高、工藝成熟，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從植物中提取分離具有抗氧化生物活性物質(zhì)白藜蘆醇。具體涉及從中藥材虎杖根中提取分離白藜蘆醇。

【背景技術(shù)】
[0002]虎杖(Polygonum Cuspidatum Sied etzuce)是一味傳統(tǒng)中藥,用于治療皮炎、膿腫等。屬寥科多年生草本植物，在我國分布較廣。我國華東、中南、四川、云南、貴州等地均有野生。其作為提取原料的應用前景十分廣闊。
[0003]白藜蘆醇(反_3、4、5三羥基二苯乙烯,resveratrol)是一種活性多酹類物質(zhì)。具有顯著的抗氧化、清除自由基的作用，從而能有效預防動脈硬化、防止冠心??；降低血清和肝臟的脂質(zhì)、保護肝臟；對癌變過程中細胞和組織異變都有抑制作用。成為抑制和治療組織癌變和腫瘤發(fā)生的有前途的天然藥物之一。目前國內(nèi)外關(guān)于白藜蘆醇研究表明其在醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域中具有重要的應用價值。
[0004]目前從虎杖根中提取白藜蘆醇的發(fā)明專利較多，經(jīng)綜合分析有以下不足之點:酶解時間短，酶解不徹底，影響產(chǎn)品收率。同時水酶解單價過高增加了產(chǎn)品的成本。提取溶劑選擇性差，提取物含雜質(zhì)較多，增加了精制成本。單獨生產(chǎn)50%白藜蘆醇含大黃素偏高。為降低產(chǎn)品中的大黃素，多家企業(yè)使用氯仿，從而造成產(chǎn)品中殘留氯仿，影響了產(chǎn)品的使用。
[0005]本工藝生產(chǎn)過程中只用了酵母、阿米諾酶、乙酸乙酯、6號溶劑、乙醇和水，產(chǎn)品收率高，含大黃素低，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟效率高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是:提供一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法。采用該方法提取白藜蘆醇具有純度含量高，產(chǎn)品收率高，生產(chǎn)成本低，經(jīng)濟效率高的優(yōu)點。
[0007]為解決該技術(shù)問題:本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0008]一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法，步驟如下:
[0009](1)原料處理:將虎杖根原料去雜，粉碎成l_3mm的粗粉；
[0010](2)原料酶解:取酵母0.5-3kg，阿米諾酶0.5-3kg，加28°C _35°C的水配成1000L的酶解液，放置18-32小時備用；取粉碎好的虎杖根粗粉，加入55-60%的酶解液，充分拌勻，壓堆密封，酶解15-30天備用；
[0011](3)提取濃縮:取酶解好的原料，投入多功能提取罐中，第一次加4-8倍量的混合溶劑，回流提取3小時，收集提取液；第二次加4-8倍量的混合溶劑，回流提取2小時，收集提取液；第三次加入4-8倍量的混合溶劑，提取2小時，收集提取液；剩余殘渣回收混合溶劑；合并三次提取液，常壓濃縮混合溶劑；視該濃縮液出現(xiàn)渾濁時加水適量，減壓濃縮至無味，使其成水相，有沉淀析出，將PH值調(diào)為2.0~4.0，放至過濾，沉淀含白藜蘆醇，離心得沉淀物，離心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物與沉淀物合并；
[0012](4)粗品分離:取沉淀物加7-9倍量的70%乙醇，加熱至70°C溶解，攪拌15_40分鐘,放至冷卻、過濾,收集溶解液,回收乙醇成水相,將PH值調(diào)為2.0~4.0，有沉淀物析出，離心水相用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物與沉淀物合并；
[0013](5)過氧化鋁柱:將沉淀物粗品加熱溶于4-8倍量的70%乙醇中，放置冷卻至50°C左右，用2BV/h的速度通過，收集過柱液，回收乙醇至無醇味，冷卻有白藜蘆醇沉淀析出；
[0014](6)脫色、結(jié)晶:將通過氧化鋁獲得的白藜蘆醇濕品用8倍量60%乙醇加熱溶解，加入粗品量的10%的活性炭，攪拌，加熱至沸30分鐘，然后過板框脫炭、收集脫炭醇溶液，向其中加蒸餾水至醇含量在25%左右，放置、結(jié)晶。
[0015]步驟⑵取酵母2kg，阿米諾酶2kg，加30°C的水配成1000L的酶解液，放置24小時備用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入58%的酶解液，充分拌勻，壓堆密封，酶解20天備用。
[0016]步驟⑶中所述的混合溶劑是乙酸乙酯和6號溶劑，其比例為乙酸乙酯:6號溶劑=85: 15。
[0017]步驟(3)中所述的混合溶劑第一次加6倍量，第二次加5倍量，第三次加5倍量。
[0018]步驟(3)中所述的PH值為3.0。步驟(4)中所述的PH值為3.0。
[0019]本發(fā)明的有益效果是:
[0020]從虎杖中提取的白藜蘆醇含量高，收率高，且已用于工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實施方式】
[0021](I)原料處理:將虎杖根原料去雜，粉碎成1-3_的粗粉。加入配置好的含酵母、阿米諾酶各0.2%的酶解液，使粗粉含酶解液55%。充分拌勻，壓堆密封，自然酶解15-30天備用，待酶解后產(chǎn)生濃厚的醇香即可；
[0022](2)提取:將相當于干粉500KG酶解好的虎杖原料，投入多功能提取罐中，第一次加6倍量的乙酸乙酯混合溶劑，回流提取3小時，收集提取液；第二次加5倍量的乙酸乙酯混合溶劑，回流提取2小時，收集提取液。第三次加入5倍量乙酸乙酯混合溶劑，提取2小時，收集提取液，合并三次提取液。
[0023](3)濃縮:將提取液置于濃縮器中常壓濃縮乙酸乙酯混合溶劑，待該濃縮液出現(xiàn)渾濁時加水適量，減壓濃縮至無味，使?jié)饪s液成水相約250-300L，放出冷卻，調(diào)節(jié)PH，有沉淀析出。收集沉淀，離心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物與沉淀物合并。此沉淀干粉為含有白藜蘆醇25-30%之間的粗品；
[0024](4)粗品分離:取沉淀物(濕品)加8倍量70 %乙醇，加熱至70°C溶解，攪拌30分鐘，放至冷卻、過濾。不溶物為大黃素等。收集溶解液，回收乙醇，減壓濃縮至無醇味約100L，調(diào)PH值放置，有白藜蘆醇析出。離心水相，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物與沉淀物合并，此沉淀物含白藜蘆醇58.5% (HPLC)，干燥得7.9KG ；
[0025](5)過氧化鋁柱:將粗品分離后的產(chǎn)品加熱溶于4倍量的70%乙醇中，放置冷卻至50°C左右，用2BV/H的速度通過4倍量粗頻率的氧化鋁柱，過后用1.5倍氧化鋁量的60%乙醇洗柱，收集過柱液，回收乙醇至無醇味。冷卻有白藜蘆醇沉淀析出，含量在80-90%之間；
[0026](6)脫色、結(jié)晶:將通過氧化鋁獲得的白藜蘆醇濕品(粗品)用8倍量60%乙醇加熱溶解，加入粗品量的10%的活性炭，攪拌，加熱至沸30分鐘，然后過板框脫炭、收集脫炭醇溶液，向其中加蒸餾水至醇含量在25%左右，放置、結(jié)晶。收集結(jié)晶，用40%的乙醇淋洗一次，干燥，得3.1KG產(chǎn)品， 其含量在99%以上(HPLC)。
【權(quán)利要求】
1.一種從虎杖根中提取分離白藜蘆醇的方法，步驟如下: (1)原料處理:將虎杖根原料去雜，粉碎成l-3mm的粗粉； (2)原料酶解:取酵母0.5-3kg，阿米諾酶0.5-3kg，加28°C _35°C的水配成100L的酶解液，放置18-32小時備用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入55-60%的酶解液，充分拌勻，壓堆密封，酶解15-30天備用； (3)提取濃縮:取酶解好的原料，投入多功能提取罐中，第一次加4-8倍量的混合溶劑，回流提取3小時，收集提取液；第二次加4-8倍量的混合溶劑，回流提取2小時，收集提取液；第三次加入4-8倍量的混合溶劑，提取2小時，收集提取液；剩余殘渣回收混合溶劑；合并三次提取液，常壓濃縮混合溶劑；視該濃縮液出現(xiàn)渾濁時加水適量，減壓濃縮至無味，使其成水相，有沉淀析出，將PH值調(diào)為2.0~4.0，放至過濾，沉淀含白藜蘆醇，離心得沉淀物，離心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物與沉淀物合并； (4)粗品分離:取沉淀物加7-9倍量的70%乙醇，加熱至70°C溶解，攪拌15-40分鐘，放至冷卻、過濾,收集溶解液,回收乙醇成水相,將PH值調(diào)為2.0~4.0，有沉淀物析出，離心水相用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物與沉淀物合并； (5)過氧化鋁柱:將沉淀物粗品加熱溶于4-8倍量的70%乙醇中，放置冷卻至50°C左右，用2BV/h的速度通過，收集過柱液，回收乙醇至無醇味，冷卻有白藜蘆醇沉淀析出； (6)脫色、結(jié)晶:將通過氧化鋁獲得的白藜蘆醇濕品用8倍量60%乙醇加熱溶解，加入粗品量的10%的活性炭，攪拌，加熱至沸30分鐘，然后過板框脫炭、收集脫炭醇溶液，向其中加蒸餾水至醇含量在25%左右，放置、結(jié)晶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖根中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:步驟(2)取酵母2kg，阿米諾酶2kg，加30°C的水配成1000L的酶解液，放置24小時備用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入58%的酶解液，充分拌勻，壓堆密封，酶解20天備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖根中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:步驟(3)中所述的混合溶劑是乙酸乙酯和6號溶劑，其比例為乙酸乙酯:6號溶劑=85: 15。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖根中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:步驟(3)中所述的混合溶劑第一次加6倍量，第二次加5倍量，第三次加5倍量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖根中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:步驟(3)中所述的PH值為3.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從虎杖根中提取白藜蘆醇的方法，其特征在于:步驟(4)中所述的PH值為3.0。
【文檔編號】C07C39/21GK104045523SQ201310108226
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2013年3月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月16日
【發(fā)明者】竇家琨, 盤斌 申請人:永州一東生物技術(shù)有限責任公司