專利名稱：一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于含羞草素提取技術領域，尤其涉及一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法。
背景技術：
1936年，首次報道了含羞草植物中存在含羞草素。銀合歡植物富含多酚氧化物、葉綠素、多糖、蛋白質等，其種子中粗蛋白質含量為30% 32%、含羞草素3% 5%，葉片中粗蛋白質含量為22% 29%、含羞草素3% 6%。銀合歡為世界著名的高蛋白飼料植物，由于葉片富含羞草素，導致禽畜(尤其是非反芻動物)食用銀合歡后常發(fā)生脫毛、白內障、生長緩慢及生殖障礙等癥狀，限制了銀合歡在畜牧業(yè)上的廣泛應用。但另一方面，含羞草素具有多方面的生理活性，它的某些生理活性已被開發(fā)利用，如:工業(yè)上用作脫毛劑等。目前，市面上試劑級含羞草素的價格約為每100毫克565元。含羞草素最初是1936年J.Renz從含羞草中提取得到的，從銀合歡種子提取則始于R.Y oshida (1944)。1951年,Matsumoto等人建立了測定含羞草素的快速比色法。1965年，James等人首次測定不同銀合歡種質葉片和種子中的含羞草素含量。1978年,Megarrity建立了銀合歡葉片含羞草素測定的自動比色法。我國陳秀蘭等人利用氯化鐵法，測定了新銀合歡和肯寧漢姆銀合歡枝和葉片中的含羞草素含量。伍顏貞等人通過對銀合歡種子提取高純度含羞草素的研究，建立了銀合歡種子中含羞草素的提取和純方法。銀合歡葉片與種子的組成成分有很大差異，其含羞草素提取和純化方法也不相同。從銀合歡葉片中提取和純化含羞草素的方法還沒有報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明實施例的目的在于提供一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，且具有高提取率、高純度特點。針對上述問題，本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，該方法包括以下步驟:第一步:采集銀合歡健康枝條上的第I至3蓬全展葉片，取樣1.0kg ；第二步:將葉片于39°C 40°C烘干至恒重，用粉碎機粉碎過篩后用于含羞草素提??；第三步:稱取經(jīng)粉碎過篩的樣品100g，放入IOOOmL帶塞瓶中，加蒸餾水500mL ；第四步:在帶有可搖擺的恒溫水浴中保溫，先搖擺，再靜置保溫浸提16 17h ；第五步:離心，收集上清液；第六步:用鹽酸將上清液調至pH5，加入乙醇，混均并在4°C條件下放置2d ；第七步:離心收集上清液，并用真空泵減壓濃縮至20mL，濃縮液在4°C條件下，靜置3d;第八步:離心收集結晶物，用蒸餾水洗滌，分別離心收集結晶物，室溫條件下真空干燥至恒重；第九步:取結晶物2g放入500mL燒杯中，加入200mL蒸餾水，加熱直完全溶解。趁熱時，將溶解液轉入裝有粉狀活性炭的過濾柱過濾，并收集濾液；第十步:將濾液減壓濃縮至IOOmL,并4°C條件下，靜置3d ；第十一步:離心收集結晶物，用蒸餾水洗滌，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。進一步，將葉片于39°C 40°C烘干至恒重，用粉碎機粉碎過20目篩后用于含羞草素提取。進一步，稱取經(jīng)粉碎過篩的樣品100g，放入IOOOmL帶塞三角瓶中，加蒸餾水500mLo進一步，在帶有可搖擺的59°C 60°C恒溫水浴中保溫，先搖擺30min，再靜置保溫浸提16 17h。進一步，6000r/min條件下,離心IOmin,收集上清液。進一步，用2mol/L的鹽酸將上清液調至pH5，加入等體積的90%乙醇，混均并在4°C條件下放置2d。進一步，離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，分別離心收集結晶物，室溫條件下真空干燥至恒重。進一步，離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。本發(fā)明通過分·光光度計選取550納米波長分析，所提取的含羞草素純度達到99%。每IOOg銀合歡葉片中可提取含羞草素2.1 2.4g，按銀合歡葉片含羞草素含量3 % 6 %計算，該方法的提取率為40 % 70 %。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明實施例提供了一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，該方法包括以下步驟，具體詳述如下:一、試驗材料植物材料熱研I號銀合歡葉片(2 3月齡)。化學試劑蒸餾水、2mol/L鹽酸、90%乙醇、粉狀活性炭柱。二、儀器設備粉碎機、帶塞三角瓶、可搖擺的恒溫水浴、離心機、真空泵、分光光度計。三、銀合歡葉片含羞草素提取和純化技術方案第一步:采集銀合歡健康枝條上的第I至3蓬全展葉片，取樣約1.0kgo第二步:將葉片于39°C 40°C烘干至恒重，用粉碎機粉碎過篩(20目)后用于含
羞草素提取。
第三步:稱取經(jīng)粉碎過篩的樣品100g，放入IOOOmL帶塞三角瓶中，加蒸餾水500mLo第四步:在帶有可搖擺的恒溫水浴中保溫(59°C 60°C)，先搖擺30min，再靜置保溫浸提16 17h。第五步:6000r/min條件下,離心IOmin,收集上清液。第六步:用2mol/L的鹽酸將上清液調至pH5，加入等體積的90%乙醇，混均并在4°C條件下放置2d。第七步:離心收集上清液，并用真空泵減壓濃縮至20mL，濃縮液在4°C條件下，靜置3d。第八步:離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，分別離心收集結晶物，室溫條件下真空干燥至恒重。第九步:取結晶物2g放入500mL燒杯中，加入200mL蒸餾水，加熱直完全溶解。趁熱時，將溶解液轉入裝有粉狀活性炭的過濾柱過濾，并收集濾液。第十步:將濾液減壓濃縮至IOOmL,并4°C條件下，靜置3d。第十一步:離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。以上所 述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟: 第一步:采集銀合歡健康枝條上的第I至3蓬全展葉片，取樣1.0kg ； 第二步:將葉片于39°C 40°C烘干至恒重，用粉碎機粉碎過篩后用于含羞草素提?。? 第三步:稱取經(jīng)粉碎過篩的樣品100g，放入IOOOmL帶塞瓶中，加蒸餾水500mL ； 第四步:在帶有可搖擺的恒溫水浴中保溫，先搖擺，再靜置保溫浸提16 17h ； 第五步:離心，收集上清液； 第六步:用鹽酸將上清液調至PH5，加入乙醇，混均并在4°C條件下放置2d ； 第七步:離心收集上清液，并用真空泵減壓濃縮至20mL，濃縮液在4°C條件下，靜置3d ； 第八步:離心收集結晶物，用蒸餾水洗滌，分別離心收集結晶物，室溫條件下真空干燥至恒重； 第九步:取結晶物2g放入500mL燒杯中，加入200mL蒸餾水，加熱直完全溶解；趁熱時，將溶解液轉入裝有粉狀活性炭的過濾柱過濾，并收集濾液； 第十步:將濾液減壓濃縮至IOOmL，并4°C條件下，靜置3d ； 第十一步:離心收集結晶物，用蒸餾水洗滌，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。
2.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，將葉片于39°C 40°C烘干至恒重，用粉碎機粉碎過20目篩后用于含羞草素提取。
3.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，稱取經(jīng)粉碎過篩的樣品100g，放入IOOOmL帶塞三角瓶中，加蒸餾水500mL。
4.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，在帶有可搖擺的59°C 60°C恒溫水浴中保溫，先搖擺30min，再靜置保溫浸提16 17h。
5.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，6000r/min條件下,離心IOmin,收集上清液。
6.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，用2mol/L的鹽酸將上清液調至PH5，加入等體積的90%乙醇，混均并在4°C條件下放置2d。
7.如權利要求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，分別離心收集結晶物，室溫條件下真空干燥至恒重。
8.如權利要 求1所述的提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，其特征在于，離心收集結晶物，用4°C蒸餾水洗滌3次，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法，采集全展葉片；將葉片烘干至恒重，粉碎機粉碎過篩；稱取樣品放入帶塞瓶中，加蒸餾水；保溫，搖擺，再靜置保溫浸提；離心，收集上清液；用鹽酸將上清液調至pH5，加入乙醇，混均放置；離心收集上清液，并用真空泵減壓濃縮，靜置3d；離心收集結晶物，用蒸餾水洗滌，干燥；取結晶物放入燒杯中，加入蒸餾水，加熱直完全溶解；將溶解液過濾，并收集濾液；將濾液減壓濃縮，并4℃條件下靜置3d；離心收集，用蒸餾水洗滌，室溫真空干燥到恒重，獲得白色晶體。本發(fā)明通過分光光度計選取550納米波長分析，所提取的含羞草素純度達到99％，每100g銀合歡葉片中可提取含羞草素2.1～2.4g，提取率為40％～70％。
文檔編號C07D213/69GK103242224SQ20131013448
公開日2013年8月14日 申請日期2013年4月18日 優(yōu)先權日2013年4月18日
發(fā)明者鄒冬梅, 蔣昌順, 吳成貢 申請人:中國熱帶農業(yè)科學院分析測試中心