專利名稱：一種利用堿化硅膠分離紫堇達明生物堿的工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及化工領域，具體涉及一種利用堿化硅膠層析分離紫堇達明生物堿的工藝。
背景技術：
紫堇達明是一種芐基異喹啉類生物堿，是具有良好鎮(zhèn)痛活性的天然微量活性成分，具有高效快速鎮(zhèn)痛的特點，但其自然來源十分有限，限制了其在制藥領域的應用。申請?zhí)枮?01110125328的專利公開了一種高效生產(chǎn)紫堇達明的生物轉(zhuǎn)化發(fā)酵工藝，轉(zhuǎn)化發(fā)酵生產(chǎn)紫堇達明的產(chǎn)率達到50%以上。目前生物堿類化合物的分離方法很多，比如溶劑萃取法、蒸餾法、沉淀法、鹽析法、結(jié)晶法等，也有較為先進的分離方法如硅膠柱色譜、氧化鋁柱色譜、凝膠柱色譜、離子交換樹脂、高速逆流色譜法等，要得到較高純度的生物堿，往往要幾種方法同時使用。硅膠柱色譜分離法是較為常用的柱色譜分離方法，適用范圍廣，既能用于非極性生物堿也能用于極性生物堿，且成本低，操作方便，是常見的生物堿的分離方法。申請?zhí)枮?01110125327的專利公開了一種紫堇達明的硅膠層析方法。但其須在7°C的條件下分離存在較大的局限性。且由于紫堇達明易在硅膠柱上形成死吸附，造成樣品的嚴重損失，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。目前高速逆流色譜法也常用于生物堿的分離純化，相對傳統(tǒng)的方法大大提高了效率，解決了生物堿在分離介質(zhì)上死吸附的問題，但由于其載樣量小，很難擴大應用，經(jīng)濟效益不高，而且儀器設備昂貴，所以高速逆流法分離紫堇達明生物堿對于工業(yè)化有一定的局限。對硅膠進行堿化處理，可大大降低紫堇達明生物堿在柱上的死吸附，提高紫堇達明的回收率，且該方法操作簡單，在常溫下即可實現(xiàn)紫堇達明的有效分離，更適用于規(guī)模化
工業(yè)生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開了一種利用堿化硅膠層析分離紫堇達明生物堿的工藝，該工藝無需特殊填料，操作簡單，樣品損失少，在常溫下即可實現(xiàn)紫堇達明的有效分離純化，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。上述目的通過以下技術方案實現(xiàn):1、含有紫堇達明生物堿的粗浸膏用適量二氯甲烷和甲醇的混合溶液溶解，以堿化硅膠拌樣或液體上樣于堿化硅膠層析柱，用石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、氨水的一種或兩種以上的混合溶劑等度洗脫或者梯度洗脫，用薄層層析檢測流份，合并含有紫堇達明的流份。含有紫堇達明的流份減壓回收溶劑，以甲醇、二氯甲烷、氯仿、水的一種或兩種以上混合溶劑溶解并重結(jié)晶后，可得純度大于98%的紫堇達明生物堿純品，紫堇達明生物堿回收率達到60%以上。含有紫堇達明生物堿的粗浸膏優(yōu)選下列方法制備:將含紫堇達明的提取液或轉(zhuǎn)化發(fā)酵液用氨水調(diào)節(jié)PH至7.5至9，優(yōu)選pH8。以1_3倍體積有機溶劑萃取3次，有機溶劑優(yōu)選乙酸乙酯或二氯甲烷，合并萃取液，減壓回收溶劑后，得樣品粗浸膏。堿化硅膠的制備方法為:將不同濃度的氫氧化鈉甲醇溶液加入層析硅膠，充分攪拌混勻，通風櫥內(nèi)揮干甲醇，然后于105 110°C下活化6 8h。拌樣硅膠粒徑優(yōu)選100 200目層析硅膠，其中含有氫氧化鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.01 1%。柱層析硅膠粒徑為100 500目，優(yōu)選200 300目，其中含有氫氧化鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.01 1%。柱層析采用等度或梯度洗脫，洗脫溶劑為石油醚、丙酮、二氯甲烷、氨水、水的一種或幾種的混合溶劑。層析優(yōu)選梯度洗脫，洗脫溶劑優(yōu)選石油醚和丙酮的混合溶劑中，石油醚和丙酮的體積比優(yōu)選為7:1 9:1。氨水-石油醚-丙酮混合溶劑洗脫時，優(yōu)選洗脫劑中氨水含量為0.01% 0.50%，洗脫速度優(yōu)選I 2.5BV/h。拌樣硅膠的重量優(yōu)選為含紫堇達明生物堿粗浸膏重量的I 5倍。柱層析硅膠的重量優(yōu)選為含紫堇達明粗浸膏重量的10 40倍。層析柱的徑高比優(yōu)選1: 5 1: 20。重結(jié)晶溶劑優(yōu)選甲醇和水的混合溶劑本發(fā)明的有益效果是:目前采用堿化硅膠層析分離紫堇達明生物堿尚屬首次研究，由于硅膠價格經(jīng)濟，堿化硅膠制備簡單便利，對紫堇達明生物堿分離效果好，紫堇達明回收率達到60%以上，經(jīng)重結(jié)晶可以獲得純度達98%以上的單體化合物。并且本發(fā)明工藝操作簡單，樣品損失少，提高了分離效率，降低了生產(chǎn)成本?？梢詫崿F(xiàn)從實驗室小量制備到擴大的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面通過實施例進一步說明本發(fā)明。應該理解的是，本發(fā)明實施例的制備方法僅僅用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明利用堿化硅膠分離紫堇達明生物堿的工藝的構(gòu)思前提下，類似的制備方法都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。實施例1:取含有紫堇達明生物堿的提取液2L，以氨水調(diào)節(jié)pH至8，用2倍體積乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑后得粗浸膏。取粗浸膏0.75g，以少量二氯甲烷和甲醇的混合溶液溶解后，加入1.5g拌樣娃膠拌樣,揮干溶劑后上樣。取含氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)為1%的堿化硅膠15g，用石油醚濕法裝于直徑為1.6cm的柱子中，得到24.5cm高的柱層，以石油醚-丙酮系統(tǒng)梯度洗脫:先用石油醚-丙酮(9: I)沖洗IOBV (柱體積)，再用石油醚-丙酮(85: 15)沖洗15BV，流速lBV/h。用薄層色譜法檢驗流份，合并含有紫堇達明的部分，回收溶劑后以甲醇-水重結(jié)晶后，得純度為98.5%的紫堇達明，紫堇達明生物堿回收率為62%。實施例2取含有紫堇達明生 物堿的粗浸膏0.5g，以少量甲醇溶解后，加入1.0g拌樣硅膠拌樣，揮干溶劑后上樣。取氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)為0.5%的柱硅膠15g，用石油醚濕法裝于直徑為1.6cm的柱子中，得到24.5cm高的柱層，再用石油醚-丙酮系統(tǒng)進行加壓梯度洗脫:先用石油醚-丙酮(7: I)沖洗10BV，再用石油醚-丙酮(85: 15)沖洗10BV，流速1.5BV/h。用薄層色譜法檢驗流份，合并含有紫堇達明的部分，回收溶劑后以甲醇-水重結(jié)晶后，得純度為98.1%的紫堇達明，紫堇達明生物堿回收率為65%。實施例3取含紫堇達明生物堿的粗浸膏0.38g，以少量二氯甲烷溶解后，加入1.0g拌樣硅膠拌樣，揮干溶劑后上樣。取氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)為0.1 %的柱硅膠15g，用石油醚濕法裝于直徑為1.6cm的柱子中，得到24.5cm高的柱層，再用石油醚-丙酮(9: I)等度沖洗30BV，流速2.5BV/h。用薄層方法檢驗流份，合并含有紫堇達明的部分，回收溶劑后以甲醇-水重結(jié)晶后，得純度為98.0 %的紫堇達明，紫堇達明生物堿回收率為62%。實施例4
取含有紫堇達明生物堿的轉(zhuǎn)化發(fā)酵液2L，以氨水調(diào)節(jié)pH至8，用2倍體積乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑后得粗浸膏。取粗浸膏0.75g，以少量二氯甲烷和甲醇的混合溶液溶解后，加入1.5g拌樣硅膠拌樣，揮干溶劑后上樣。取氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)為I %的柱硅膠15g，用石油醚濕法裝于直徑為2.8cm的柱子中，得到7cm高的柱層，再用石油醚-丙酮系統(tǒng)進行加壓梯度洗脫:先用石油醚-丙酮(7: I)沖洗10BV，再用石油醚-丙酮(85: 15)沖洗10BV，流速2.5BV/h。用薄層方法檢驗流份，合并含有紫堇達明的部分，回收溶劑后以甲醇-水重結(jié)晶后，得純度為99.5%的紫堇達明。紫堇達明生物堿回收率 為60%。
權(quán)利要求
1.一種分離紫堇達明生物堿的工藝，包括:含有紫堇達明生物堿的粗浸膏用適量二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯中的一種或兩種及以上有機溶劑溶液溶解，以堿化硅膠拌樣后上堿化硅膠柱，用石油醚、丙酮、二氯甲烷、氨水中的一種或兩種及以上的混合溶劑等度洗脫或者梯度洗脫，用薄層層析檢測流份，合并含有紫堇達明的流份，樣品減壓回收溶劑，經(jīng)甲醇、水、二氯甲烷、石油醚中的一種或兩種及以上混合溶劑重結(jié)晶后，可得純度大于98%的紫堇達明生物堿純品。
2.權(quán)利要求1的方法，其中堿化硅膠的制備方法為:不同濃度的NaOH甲醇溶液加入層析硅膠中，充分攪拌混勻后揮去甲醇，105 110°C下活化。
3.權(quán)利要求1的方法，其中拌樣硅膠粒徑為100 400目，優(yōu)選100 200目，所含氫氧化鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.01 1%。
4.權(quán)利要求1的方法，其中柱硅膠粒徑為200 300目，氫氧化鈉的質(zhì)量分數(shù)為0.01 1%。
5.權(quán)利要求1的方法，其中流動相為石油醚、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、氨水中的一種或至少其中兩種的混合溶劑，等度洗脫，或者梯度洗脫，淋洗速度為0.2 2.5BV/h。
6.權(quán)利要求1的方法，其中拌樣娃膠的重量為粗浸膏重量的I 5倍。
7.權(quán)利要求1的方法，其中柱層析硅膠的重量為粗浸膏重量的10 40倍。
8.權(quán)利要求1的方法，其中硅膠柱的徑高比為1: 5 1: 20。
9.權(quán)利要求1 的方法，其中重結(jié)晶溶劑為甲醇和水的混合溶劑。
全文摘要
一種利用堿化硅膠分離紫堇達明生物堿的工藝，本發(fā)明涉及化工領域，具體涉及一種利用堿化硅膠層析分離紫堇達明生物堿的工藝。其特征是含有紫堇達明生物堿的粗浸膏用適量二氯甲烷和/或甲醇的溶解，以堿化硅膠拌樣后以堿化硅膠柱層析分離，用石油醚、丙酮、二氯甲烷、水、氨水的一種或幾種混合溶劑洗脫，用薄層色譜法檢測流份，合并含有紫堇達明的流份?；厥樟鞣轀p壓回收溶劑，經(jīng)重結(jié)晶后可得純度大于98％的紫堇達明生物堿。本發(fā)明無需使用特殊填料，操作簡單，樣品損失少，工藝穩(wěn)定，成本低廉，可以實現(xiàn)從實驗室小量制備到擴大的工業(yè)化生產(chǎn)，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號C07D455/03GK103214477SQ20131016565
公開日2013年7月24日 申請日期2013年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月8日
發(fā)明者劉吉華, 余伯陽, 王嚴 申請人:中國藥科大學