專利名稱：一種穆薩樹(shù)甙Ⅱ的提純方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種穆薩樹(shù)甙II的提純方法。
背景技術(shù)：
穆薩樹(shù)甙II (Butrom),又名紫礦春，分子式為C27H32O15,分子量為596.54，mp.19CTC。穆薩樹(shù)式II是從豆科植物紫鉚及/iea monospeerma (Lam.) Kuntze的花中分離得到的一種黃酮苷類化合物。穆薩樹(shù)的樹(shù)皮提取物穆薩樹(shù)甙II和異穆薩樹(shù)甙II在印度多用于治療肝病。麥軍利通過(guò)在氯仿和半乳糖胺引起的肝細(xì)胞損害的實(shí)驗(yàn)表明，穆薩樹(shù)的樹(shù)皮提取物顯示有護(hù)肝作用，并證實(shí)可增強(qiáng)小鼠干細(xì)胞核的RNA合成，從而提高部分肝切除小鼠干細(xì)胞的再生率。麥軍利分離穆薩樹(shù)甙II是通過(guò)溶劑層析、TLC和HPLC分離，該方法制備量小，成本高，僅 適用于實(shí)驗(yàn)室化學(xué)成分分析少量制備。經(jīng)檢索，尚未發(fā)現(xiàn)適宜于大量制備穆薩樹(shù)甙II的工業(yè)化方法的專利或文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種穆薩樹(shù)甙II的提純方法，成品穆薩樹(shù)甙II含量高、生產(chǎn)成本低，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
(1)以穆薩樹(shù)的樹(shù)皮為原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率為2_8kw，收集提取液；
(2)將提取液通過(guò)超濾膜系統(tǒng)，得透過(guò)液；
(3)將透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用50-65%的乙醇水溶液洗脫，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；
(4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將上述得到的粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，即得到高純度的穆薩樹(shù)甙II。步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質(zhì)為聚醚砜，截留分子量為2000-3000道爾頓。步驟(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的體積比為(4-7):(2-4): (6-11)。本發(fā)明的有益效果是:采用微波提取，提取率高，耗時(shí)短，且避免目標(biāo)產(chǎn)品的損失，是一種低耗能環(huán)保的提取方法；聚酰胺樹(shù)脂吸附洗脫，提高了產(chǎn)品的純度；采用高速逆流色譜法進(jìn)行穆薩樹(shù)甙II的分離純化，與以往技術(shù)手段相比，具有分離能力強(qiáng)、分離時(shí)間短、樣品損失小、廣品質(zhì)量聞等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施方式
:
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1:
取200g穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)20目篩，加入8倍量70%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率為4kw，合并提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用6BV50%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:6混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為950rpm,將流動(dòng)相以2.5ml/min的流速泵入,將150mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為98.2%。實(shí)施例2:
取Ikg穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)40目篩，加入9倍量60%乙醇微波提取30min，提取2次，微波功率為2kw，合并提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用5BV50%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:10混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為900rpm,將流動(dòng)相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為
98.6%。實(shí)施例3:
取2kg穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)20目篩，加入10倍量65%乙醇微波提取15min，提取3次，微波功率為5kw，合并提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰`胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用4BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例7:3:11混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm,將流動(dòng)相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為
99.2 %。實(shí)施例4:
取2kg穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)60目篩，加入12倍量50%乙醇微波提取20min，提取3次，微波功率為5.5kw，合并提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用5BV55%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:4:7混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為IOOOrpm,將流動(dòng)相以3ml/min的流速泵入，將200mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為98.1%。實(shí)施例5:
取IOkg穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)40目篩，加入10倍量50%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率為8kw，合并提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用4BV55%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例6:3:8混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為900rpm,將流動(dòng)相以3.5ml/min的流速泵入,將150mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器 收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為98.2%。實(shí)施例6:
取20kg穆薩樹(shù)的樹(shù)皮粉碎過(guò)20目篩，加入9倍量65%乙醇微波提取25min，提取2次，微波功率為2kw，合并提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過(guò)濾，透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用6BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標(biāo)成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:3:9混合，靜置分層，兩相分別微波脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動(dòng)高速逆流色譜主機(jī),調(diào)節(jié)分離柱轉(zhuǎn)速為850rpm,將流動(dòng)相以3ml/min的流速泵入,將200mg穆薩樹(shù)式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達(dá)到平衡，將樣品溶液注入進(jìn)樣閥中，使用分步收集器收集流出組分，根據(jù)色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到穆薩樹(shù)甙II，經(jīng)HPLC檢測(cè)、核磁共振進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，穆薩樹(shù)甙II的含量為98.0%。
權(quán)利要求
1.一種穆薩樹(shù)甙II的提純方法，其特征在于包括以下步驟: (1)以穆薩樹(shù)的樹(shù)皮為原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率為2-8kw，收集提取液； (2)將提取液通過(guò)超濾膜系統(tǒng)，得透過(guò)液； (3)將透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，先用水洗脫，再用50-65%的乙醇水溶液洗脫，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物； (4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將上述得到的粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，即得到高純度的穆薩樹(shù)甙II。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質(zhì)為聚醚砜，截留分子量為2000-3000道爾頓。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的體積比為 (4-7): (2-4): (6-11)。
全文摘要
本方法提供一種穆薩樹(shù)甙Ⅱ的提純方法，其特征在于包含以下步驟(1)以穆薩樹(shù)的樹(shù)皮為原料，加8-12倍量50~70%乙醇水溶液微波提取2-3次，收集提取液；(2)將提取液通過(guò)超濾膜系統(tǒng)，得透過(guò)液；(3)將透過(guò)液減壓濃縮至無(wú)醇，加水分散，加入聚酰胺樹(shù)脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統(tǒng)，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將上述得到的粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行分離純化，即得到高純度的穆薩樹(shù)甙Ⅱ。
文檔編號(hào)C07H1/08GK103242389SQ20131018870
公開(kāi)日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬(wàn)冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司