專利名稱：一種裸地膽草素的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種裸地膽草素的提取純化方法。
背景技術(shù)：
裸地膽草素(Nudaphantin)分子式為C21H26O7,分子量為390.43,是從菊科植物裸地膽草nudatus Grey全植物中提取分離得到的一種倍半職內(nèi)酯類化合物。藥理研究表明，裸地膽草素對KB細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性，其ED5tl為0.31 μ g/mL。徐峰對裸地膽草分別采用己烷、氯仿和甲醇提取，發(fā)現(xiàn)氯仿提取物所得產(chǎn)物為深綠色糖漿，具有極強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，再經(jīng)硅膠柱層析和制備TLC分離得到Nudaphantin，并視其為新細(xì)胞毒成分。目前，國內(nèi)尚未見裸地膽草素的亞臨界萃取方法方面的專利報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷，提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的裸地膽草素的提取純化方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征是:以裸地膽草為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為7-9MPa，萃取溫度為42-55 °C，通入丙烷，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取30-60min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含裸地膽草素的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，結(jié)晶干燥即得裸地膽草素。所述丙烷的流量為5-7.5g/min。所述高壓硅膠柱的柱壓為2.5-3.1MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為200-300目，石油醚-丙酮體積比為100:9-28。所述甲醇水溶液的體積百分比濃度為70%。本發(fā)明的有益效果是:
1、本發(fā)明方法通過亞臨界流體萃取、柱層析及制備型液相色譜分離、結(jié)晶等步驟制備裸地膽草素，耗時(shí)短，得率高，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。2、使用特制高壓柱層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高。3、本發(fā)明為裸地膽草素的進(jìn)一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實(shí)踐支持。本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實(shí)施例作進(jìn)一步的闡述，但并不限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施方式
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實(shí)施例1:
取干燥裸地膽草粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為7.5g/min,萃取壓力為8MPa，萃取溫度為48°C，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取60min，溶于丙烷的裸地膽草素在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓 為2.5MPa，柱內(nèi)徑為150mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:10、100:15、100:20、100:28洗脫，分段收集各流分，將含裸地膽草素流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為15ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集高純度裸地膽草素流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得裸地膽草素，HPLC檢測，含量為95.7%。實(shí)施例2:
取干燥裸地膽草粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為7g/min，萃取壓力為7MPa，萃取溫度為55°C，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取30min，溶于丙烷的裸地膽草素在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3.1MPa，柱內(nèi)徑為200mm，層析柱徑高比為1:12，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:9、100:15、100:20、100:27洗脫，分段收集各流分，將含裸地膽草素流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為25ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集高純度裸地膽草素流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得裸地膽草素，HPLC檢測，含量為96.4%。實(shí)施例3:
取干燥裸地膽草粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為5g/min，萃取壓力為7MPa，萃取溫度為42°C，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取50min，溶于丙烷的裸地膽草素在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2.8MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為1:20，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:9、100:12、100:18、100:28洗脫，分段收集各流分，將含裸地膽草素流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為20ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集高純度裸地膽草素流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得裸地膽草素，HPLC檢測，含量為95.2%。實(shí)施例4:取干燥裸地膽草粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為6g/min，萃取壓力為9MPa，萃取溫度為45°C，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取60min，溶于丙烷的裸地膽草素在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2.5MPa，柱內(nèi)徑為180mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:9、100:17、100:21、100:28洗脫，分段收集各流分，將含裸地膽草素流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為25ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集高純度裸地膽草素流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，干燥即得裸地膽草素，HPLC檢測，含量為96.1%。
權(quán)利要求
1.一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征是:以裸地膽草為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為7-9MPa，萃取溫度為42-55°C，通入丙烷，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取30-60min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含裸地膽草素的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，結(jié)晶干燥即得裸地膽草素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征在于所述丙烷的流量為 5-7.5g/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征在于所述高壓硅膠柱的柱壓為2.5-3.1MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為200-300目，石油醚-丙酮體積比為100:9-28。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征在于所述甲醇水溶液的體積百分比濃度 為70%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種裸地膽草素的提取純化方法，其特征是以裸地膽草為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為7-9MPa，萃取溫度為42-55℃，通入丙烷，靜態(tài)萃取22min后動態(tài)萃取30-60min，所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含裸地膽草素的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，結(jié)晶干燥即得裸地膽草素。本發(fā)明生產(chǎn)周期短，制備量大、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D493/18GK103242334SQ20131018871
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司