專利名稱：一種制備蒼毛金發(fā)蘚素a的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種制備蒼毛金發(fā)蘚素A的方法。
背景技術(shù)：
蒼毛金發(fā)蘚素A (Pallidisetin A)，分子式為C23H18O3，分子量為342.39，為無色片狀結(jié)晶，mp.233°C。主要存在于金發(fā)蘚科(Polytrichaceae)簽毛金發(fā)橫■ Po Iytr i chumpalIidiseturn Funoh.中。藥理學(xué)研究表明，蒼毛金發(fā)蘚素A具有細(xì)胞毒活性。對(duì)人黑色素癌細(xì)胞RPM1-7951和多形惡性膠質(zhì)瘤U-251MG的ED50皆為1.0 μ g/mL。目前對(duì)蒼毛金發(fā)蘚素A的研究較少，因此提供一種蒼毛金發(fā)蘚素A的制備方法對(duì)含有蒼毛金發(fā)蘚素A的蒼毛金發(fā)蘚藥材資源開發(fā)及藥理研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)單、制備量大、純度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)的制備蒼毛金發(fā)蘚素A的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種制備蒼毛金發(fā)蘚素A·的方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)提取:取富含蒼毛金發(fā)蘚素A的蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，加入乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，控制粒徑為60目，乙醇濃度為75-95%，固液體積比為1:10-1:18，壓力為400MPa，保壓3-5min，重復(fù)2_3次，合并提取液，濃縮成浸膏；
(2)萃取:將上述提取液浸膏用正丁醇萃取，萃取液進(jìn)行濃縮得浸膏；
(3)柱層析:將上述浸膏用中性氧化鎂拌樣上柱，石油醚-丙酮按體積比20:1-3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液；
(4)制備液相純化:將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮干燥，用制備液相色譜分離純化，流速為20-50ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)。所述步驟(3)中，氧化鎂目數(shù)為100-200目，氧化鎂柱為中低壓柱，柱壓為5-7.5bar，柱徑高比為 1:7-12。本發(fā)明的有益效果是:采用本發(fā)明方法，操作簡(jiǎn)單、制備量大、得率高、產(chǎn)品純度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施方式
:
實(shí)施例1:
取蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，控制粒徑為60目，稱取500g，以固液體積比為1:10加入85%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為3.5min,重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮得提取浸膏，用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮得萃取浸膏，將浸膏用少量中性氧化鎂混合拌樣，低溫烘干，上樣至100目的中性氧化鎂低壓柱(柱壓為6bar,柱徑高比為1:7)，用石油醚-丙酮按體積比20:1-3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液，將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮、干燥，得粗品。將粗品用制備高效液相色譜分離純化，流速為20ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒼毛金發(fā)蘚素A的流分溶液，減壓回收試劑得蒼毛金發(fā)蘚素A，含量為96.7%。實(shí)施例2:
取蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，控制粒徑為60目，稱取500g，以固液體積比為1:18加入85%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為5min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，濃縮得萃取浸膏，將浸膏用少量中性氧化鎂混合拌樣，低溫烘干，上樣至200目的中性氧化鎂低壓柱(柱壓為5bar,柱徑高比為1:12)，用石油醚-丙酮按體積比20:1_3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液，將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮、干燥，得粗品。將粗品用制備高效液相色譜分離純化，流速為40ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒼毛金發(fā)蘚素A的流分溶液，減壓回收試劑得蒼毛金發(fā)蘚素A，含量為95.5%。實(shí)施例3:
取蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，控制粒徑為60目，稱取500g，以固液體積比為1:15加入95%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為3 min，重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮得提取浸膏，用正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，濃縮得萃取浸膏，將浸膏用少量中性氧化鎂混合拌樣，低溫烘干，上樣至200目的中性氧化鎂低壓柱(柱壓為
7.5bar,柱徑高比為1:10)，用石油醚-丙酮按體積比20:1_3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液，將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮、干燥，得粗品。將粗品用制備高效液相色譜分離純化，流速為50ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒼毛金發(fā)蘚素A的流分溶液，減壓回收試劑得蒼毛金發(fā)蘚素A，含量為96.2%。實(shí)施例4:
取蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，控制粒徑為60目，稱取800g，以固液體積比為1:15加入75%乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，提取壓力為400MPa，保壓時(shí)間為4min，重復(fù)2次，合并提取液，減壓濃縮得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，濃縮得萃取浸膏，將浸膏用少量中性氧化鎂混合拌樣，低溫烘干，上樣至200目的中性氧化鎂低壓柱(柱壓為7bar，柱徑高比為1:8)，用石油醚-丙酮按體積比20:1-3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液，將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮、干燥，得粗品。將粗品用制備高效液相色譜分離純化，流速為30ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，針對(duì)性收集蒼毛金發(fā)蘚素A的流分溶液，減壓 回收試劑得蒼毛金發(fā)蘚素A，含量為95.8%。
權(quán)利要求
1.一種制備蒼毛金發(fā)蘚素A的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)提取取富含蒼毛金發(fā)蘚素A的蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，加入乙醇溶液，采用超高壓法進(jìn)行提取，控制粒徑為60目，乙醇濃度為75-95%，固液體積比為1:10-1:18，壓力為400MPa，保壓3-5min，重復(fù)2_3次，合并提取液，濃縮成浸膏； (2)萃取將上述提取液浸膏用正丁醇萃取，萃取液進(jìn)行濃縮得浸膏； (3)柱層析將上述浸膏用中性氧化鎂拌樣上柱，石油醚-丙酮按體積比20:1-3:1進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液； (4)制備液相純化將石油醚-丙酮(3:1)洗脫液濃縮干燥，用制備液相色譜分離純化，流速為20-50ml/min，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-水(20:35:45)。
2.如權(quán)利要求I所述的一種制備蒼毛金發(fā)蘚素A的方法，其特征在于所述步驟(3)中，氧化鎂目數(shù)為100-200目，氧化鎂柱為中低壓柱,柱壓為5-7. 5bar,柱徑高比為1:7-12。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備蒼毛金發(fā)蘚素A的方法，該方法的步驟是將蒼毛金發(fā)蘚藥材粉碎，用乙醇溶液進(jìn)行超高壓提取，合并提取液，濃縮后用正丁醇萃取，萃取液上氧化鎂柱，石油醚-丙酮混合溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮后采用制備高效液相色譜進(jìn)一步純化，獲得蒼毛金發(fā)蘚素A。該方法操作簡(jiǎn)單、制備量大、得率高、產(chǎn)品純度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D307/79GK103254162SQ20131018894
公開日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月21日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司