專利名稱：一種高純度毛蘭素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種高純度毛蘭素的制備方法。
毛蘭素(Erianin)，中文系統(tǒng)名:3_羥基_4，3’，4’，5’ -四甲氧基聯(lián)芐；分子式:
毛蘭素為聯(lián)芐類化合物，易溶于乙醇、氯仿、丙酮、甲醇等有機(jī)溶劑，極微溶于水。 通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)毛蘭素能明顯抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖，表現(xiàn)為濃度依賴性，48小時(shí)IC5tl 為0.056 yg / ml，研究發(fā)現(xiàn)，毛蘭素可以快速抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901的端粒酶活性，8小時(shí)就可見端粒酶活性抑制，48小時(shí)就可以抑制端粒酶活性的80%。
二十世紀(jì)九十年代我國學(xué)者從石斛中分離提取出毛蘭素，其提取方法是用氯仿或苯為提取溶媒并用超聲處理30分鐘進(jìn)行提取，提取物再經(jīng)硅膠柱柱層析分離得白色不定形的毛蘭素結(jié)晶粉末。中國專利申請(03115752.1)公開了從石斛中提取毛蘭素的方法，包括應(yīng)用超臨界CO2萃取和柱層析法以無水乙醇、甲醇、丙酮等為夾帶劑，以CO2等位提取介質(zhì)從蘭科植物石斛中提取抗腫瘤成分毛蘭素，對所得的粗提物再以石油醚:醋酸乙酯溶液為洗脫劑進(jìn)行硅膠柱柱層析分離及重結(jié)晶等步驟獲得精提物。傳統(tǒng)硅膠柱制備高純度毛蘭素，分離步驟復(fù)雜，溶劑用量大，分離過程樣品得率低，污染嚴(yán)重，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，提供一種高效，簡便的高純度毛蘭素的制備方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種高純度毛蘭素的制備方法，其特征在于:取鼓槌石斛原料粉碎，加入5 10倍量 7(Γ100%甲醇溶液超聲提取2-3次，提取液濃縮后用氯仿溶液萃取，收集萃取液回收試劑， 濃縮液再用高速逆流色譜儀分離，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集流分減壓干燥即得。
所述的高速逆流色譜儀分離條件為:取氯仿、甲醇、水，按5 10:2 4:3、混合，取上相做固定相、下相為流動相，主機(jī)轉(zhuǎn)速70(Tl000rpm,流速為l 4ml/min。
本發(fā)明的積極效果是:采用高速逆流色譜法分離，制備周期短，操作簡單，制備量大，而且樣品不損失，對環(huán)境友好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
背景技術(shù)：
C18H22O5 ;分子結(jié)構(gòu) 式如下
下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施方式
:實(shí)施例1:鼓槌石斛原料粉碎，稱3kg，每次用15L80%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取3次，提取液減壓濃縮至500ml，加等體積氯仿萃取3次，合并萃取液回收氯仿得萃取物。取氯仿、甲醇、水，按5:2:3混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜管做固定相，開轉(zhuǎn)主機(jī)，轉(zhuǎn)速 800rpm,同時(shí)泵入下相做流定相，建立動態(tài)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，用流動相溶解萃取物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，流分回收試劑，得白色粉末毛蘭素4.2g，經(jīng)HPLC檢測，含量98.8%，經(jīng)UV、IR、MS、2HNMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
實(shí)施例2:鼓槌石斛原料粉碎，稱3kg，每次用30L90%甲醇溶液超聲提取30分鐘，提取2次，提取液減壓濃縮至800ml，加等體積氯仿萃取2次，合并萃取液回收氯仿得萃取物。取氯仿、甲醇、水，按10:4:7混合，充分分層后，取上相注滿高速逆流色譜管做固定相，開轉(zhuǎn)主機(jī)，轉(zhuǎn)速 900rpm,同時(shí)泵入下相做流定相，建立動態(tài)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，用流動相溶解萃取物，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，流分回收試劑，得白色粉末毛蘭素4.8g，經(jīng)HPLC檢測，含量98.1%，經(jīng)UV、IR、MS、2H NMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有技術(shù)相一致。
權(quán)利要求
1.一種高純度毛蘭素的制備方法，其特征在于取鼓槌石斛原料粉碎，加入5^10倍量 7^100%甲醇溶液超聲提取2 3次，提取液濃縮后用氯仿溶液萃取，收集萃取液回收試劑，濃縮液再用高速逆流色譜儀分離，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集流分減壓干燥即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的高純度毛蘭素的制備方法，其特征在于所述的高速逆流色譜儀分離條件為取氯仿、甲醇、水，按5 10:2 4:3、混合，取上相做固定相、下相為流動相， 主機(jī)轉(zhuǎn)速700 IOOOrpm,流速為I 4ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種操作簡便、污染小的高純度毛蘭素的制備方法，工藝步驟為取鼓槌石斛原料粉碎，加入5~10倍量70~100%甲醇溶液超聲提取2~3次，提取液濃縮后用氯仿溶液萃取，收集萃取液回收試劑，濃縮液再用高速逆流色譜儀分離，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集流分減壓干燥即得。采用本發(fā)明制備毛蘭素，產(chǎn)品純度高，易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大。
文檔編號C07C41/34GK103254045SQ20131019436
公開日2013年8月21日 申請日期2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月23日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司