一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法。該方法以普羅帕酮鹽酸鹽為拆分對象，先將普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體，用L-酒石酸酯類和硼酸作為拆分試劑，L-酒石酸酯類添加到有機相中，硼酸添加到水相中，采用高速逆流色譜法得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：采用本方法拆分手性藥物普羅帕酮可以達到較高的分離度，并且該方法適用于各種型號的制備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮的單體。
【專利說明】一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法
(-)【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法。
(二)【背景技術】
[0002]手性藥物在生物體內(nèi)的代謝過程、藥理活性及毒性都可能存在顯著的差異，因此尋找高效、便捷的拆分方法顯得尤為重要。普羅帕酮為廣譜高效的膜抑制類抗心律失常藥，臨床主要用于預防和治療室性或室上的性異位搏動，以及室性或室上的性心動過速、電復律后室顫發(fā)作和預激綜合征等，其中右旋普羅帕酮有較強的β_受體阻斷作用，而左旋普羅帕酮沒有，并且左旋普羅帕酮的存在增強了右旋普羅帕酮的β_受體阻斷作用。目前，拆分普羅帕酮對映體的方法主要有高效液相色譜法、毛細管電泳法、離子對色譜法、薄層色譜法等。
[0003]從20世紀90年代，越來越多的國家開始制定出手性藥物開發(fā)的政策和指導原則。1992年，美國食品和藥品管理局(FDA)發(fā)布的關于手性藥物的指導原則中，就明確要求在向FDA提交的有關新藥的申請報告必須包含手性藥物的化學、藥理學、毒理學以及臨床作用的所有信息。因此，進行手性藥物的拆分并獲得單一的手性藥物，已成為分離科學領域的一個重要分支。
[0004]高速逆流色譜技術(high-speedcountercurrent chromatography, HSCCC)是 20世紀80年代發(fā)展起來的一種不用固態(tài)支撐體或載體的液液分配技術，有著許多其他色譜分離技術不可替代的優(yōu)點，如因為逆流色譜不采用任何固相載體，在分析分離過程中可以完全排除因固相載體對樣品的不可逆吸附導致樣品的損失、失活以及污染變性等影響，從而實現(xiàn)回收率高、純凈度高、重現(xiàn)性高的較好結(jié)果，也能用于大制備量物質(zhì)的分離純化。近年來，國際上每年都不斷有新的HSCCC技術和應用成果報道出來，國內(nèi)也有越來越多的專家學者加入其研究隊伍。
(三)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種采用高速逆流色譜技術拆分普羅帕酮藥物對映體的方法。
[0006]本發(fā)明采用的技術方案是:
[0007]一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法，所述方法包括:
[0008](I)將含有L-酒石酸酯的有機溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機相和水相，備用；所述有機溶劑中L-酒石酸酯的濃度為 0.02 ~0.5mol/L ；
[0009]所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在2.0~5.0，其中硼酸的濃度為0.01 ~0.30mol/L ；
[0010]所述的有機溶劑為Cl~C8的鹵代烷烴、Cl~C8的烷烴、C2~C8的醚或C6~C12的取代芳烴，所述取代芳烴的取代基為一個或多個，所述取代基各自獨立選自鹵素或Cl~C4的烷基；
[0011]所述的L-酒石酸酯為下列之一:L_酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸異丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯；
[0012](2)將普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體，并用步驟(1)所得水相溶解，制成
0.1~15mg/ml的樣品，作為進樣液備用；
[0013](3)采用高速逆流色譜法拆分普羅帕酮:分別以步驟(1)得到的有機相和水相為固定相和流動相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5~30°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為500~2000rpm，以0.2~3.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后(當流動相從色譜柱出口處流出時就認為達到平衡)，步驟(2)進樣液由進樣閥進樣，以波長190~400nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；
[0014](4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮的單體。
[0015]本發(fā)明以普羅帕酮鹽酸鹽為拆分對象，先將普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體，用L-酒石酸酯類和硼酸作為拆分試劑，L-酒石酸酯類添加到有機相中，硼酸添加到水相中，采用高速逆流色譜法得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮。
[0016]優(yōu)選的，所述有機溶劑為下列之一或其中兩種以上的混合物:氯仿、二氯甲烷、甲苯、氯苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚，更優(yōu)選為氯仿或二氯甲烷，最優(yōu)選為氯仿。
[0017]所述L-酒石酸酯優(yōu)選為L-酒石酸正己酯或L-酒石酸正丁酯，更優(yōu)選為L-酒石酸正丁酯。
[0018]本發(fā)明優(yōu)選所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH=2~4，其中硼酸濃度優(yōu)選為0.1~0.2mol/L ;最優(yōu)選所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH=3.4，其中硼酸濃度為0.lmol/L。
[0019]本發(fā)明優(yōu)選所述的有機溶劑中L-酒石酸酯的濃度為0.1~0.2mol/L，最優(yōu)選為
0.lmol/L。
[0020]本發(fā)明所述的步驟(2)中，可通過如下方法將普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體:取普羅帕酮鹽酸鹽加入到I~2mol/L氫氧化鈉溶液中，加熱至40~50°C攪拌2~3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有機相用超純水洗滌至中性、用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到普羅帕酮游離體。[0021 ] 本發(fā)明步驟(3 )中，經(jīng)高速逆流色譜法拆分之后，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測，兩個單體洗脫液的純度均可大于90%。在拆分過程中，優(yōu)選逆流色譜分離柱的柱溫為5~15°C ;優(yōu)選以0.5~2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)。
[0022]本發(fā)明步驟(4)中，可通過如下方法分別從前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮的單體:將前峰洗脫液或后峰洗脫液堿化至pH為9~14，析出大量白色粉末后直接用二氯甲烷萃取，二氯甲烷層用飽和食鹽水洗滌至中性、無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶即可獲得純化的左旋普羅帕酮單體或右旋普羅帕酮單體。其中前峰洗脫液或后峰洗脫液可用氫氧化鈉溶液堿化，氫氧化鈉溶液濃度可以是I~2mol/L。[0023]優(yōu)選的，所述方法如下:
[0024](1)將含有L-酒石酸正丁酯的氯仿和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機相和水相，備用；所述氯仿中L-酒石酸酯的濃度為0.1~0.2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在2.0~4.0，其中硼酸的濃度為0.1~0.2mol/L ；
[0025](2)取普羅帕酮鹽酸鹽加入到I~2mol/L的氫氧化鈉溶液中，加熱至40~50°C攪拌2~3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有機相用超純水洗滌至中性、用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到普羅帕酮游離體，用步驟(1)所得水相溶解，制成0.1~15mg/ml的樣品，作為進樣液備用；
[0026](3)采用高速逆流色譜法拆分普羅帕酮:分別以步驟(1)得到的有機相和水相為固定相和流動相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5~15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1500~2000rpm，以0.5~2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，步驟(2)進樣液由進樣閥進樣，以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液；
[0027](4)將前峰和后峰洗脫液分別用lmol/L氫氧化鈉溶液堿化至pHll，析出白色粉末后直接用二氯甲烷多次萃取，合并二氯甲烷層，用飽和食鹽水洗滌二氯甲烷層至中性，用無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即分別得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮粗品，分別用二氯甲烷溶解粗品后加入正己烷重結(jié)晶，分別得到純化的左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮。
[0028]本發(fā)明可采用分析型和半制備型逆流色譜儀(分析型分離柱柱體積為20ml，半制備型分離柱柱體積為300ml)，逆流色譜儀由恒流泵、主機(分離柱)、紫外檢測器、記錄儀等組成。
[0029]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在:采用本方法拆分手性藥物普羅帕酮可以達到較高的分離度，并且該方法適用于各種型號的制備型逆流色譜儀，可以分離得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮的單體。
(四)【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為實施例1實驗條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0031]圖2為實施例4實驗條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0032]圖3為實施例5實驗條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0033]圖4為實施例8實驗條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0034]圖5為實施例9實驗條件下的分析型高速逆流色譜圖；
[0035]圖6為實施例10實驗條件下的半制備型高速逆流色譜圖；
[0036]圖7為圖6中前部分(260min~386min)洗脫液的高效液相色譜檢測譜圖，即S型普羅帕酮；
[0037]圖8為圖6中后部分(398min~554min)洗脫液的高效液相色譜檢測譜圖，即R型
普羅帕酮。
(五)【具體實施方式】
[0038]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此:
[0039]實施例1:
[0040]普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體:取160mg普羅帕酮鹽酸鹽，加入到4mLlmol/L的氫氧化鈉溶液中，加熱至50°C攪拌2~3min,然后轉(zhuǎn)移至分液漏斗中用20mL二氯甲烷萃取4次，合并有機相并用超純水洗滌至中性，無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即得普羅帕酮游離體粗品，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到無色針狀晶體121mg，即為游離的普羅帕酮。
[0041]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液，pH=3.4，并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0042]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.79。
[0043]分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖1)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件為=ChiralcelOD-R column (4.6X250mm);柱溫:25°C ;流動相:0.2mol/L KPF6:乙腈(60:40, v/v)等度洗脫；流速0.6ml/min ;檢測波長254nm ;進樣量:10μ I。
[0044]實施例2:
[0045]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正己酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液，pH=3.4，并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0046]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.65。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0047]實施例3:
[0048]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的二氯甲烷，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液ρΗ=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0049]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.67。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0050]實施例4:
[0051]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0052]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.85。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖2)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0053]實施例5:
[0054]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0055]采用分析型高速逆 流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.30ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.52。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖3)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0056]實施例6:
[0057]將氯仿:水(有機相為含0.2mol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0058]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.82。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0059]實施例7:
[0060]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0061]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1500rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.73。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0062]實施例8:
[0063]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.2mol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0064]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相， 柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.74。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖4)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0065]實施例9:
[0066]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=4.35并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的7.5mg普羅帕酮對映體用5ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0067]采用分析型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為20ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1800rpm，以0.50ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，計算分離度為0.63。分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液，將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖5)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0068]實施例10:
[0069]將有機相:水相(有機相為含0.lmol/L L-酒石酸正丁酯的氯仿，水相為0.05mol/L的醋酸/三乙胺緩沖溶液pH=3.4并含有0.lmol/L硼酸)按照1:1的體積比配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上下相分開，有機相作為固定相，水相作為流動相。稱取實施例1中得到的91.6mg普羅帕酮對映體用15ml流動相溶解，溶解后制成樣品溶液待用。
[0070]采用半制備型高速逆流色譜儀拆分普羅帕酮對映體，分離柱體積為300ml。進樣前，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為800rpm，以
2.0Oml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，樣品溶液由進樣閥進樣。然后以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，接收前峰洗脫液和后峰洗脫液，計算分離度為0.83。將收集得到的洗脫液進行高效液相檢測(結(jié)果見圖6~8)，兩個單體洗脫液的純度均大于90%。高效液相色譜的檢測條件同實施例1。
[0071]從洗脫液中回收樣品:將前峰和后峰洗脫液分別用lmol/L氫氧化鈉溶液堿化至PHlI左右，析出大量白色粉末后直接用70~SOmL 二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷層，用飽和食鹽水洗滌二氯甲烷層至中性，用無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即得左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮，最后用二氯甲烷溶解粗品后加入幾滴正己烷重結(jié)晶，分別獲得純化的20mg~25mg左旋普羅帕酮和20mg~25mg右旋普羅帕酮。
【權利要求】
1.一種普羅帕酮藥物對映體拆分方法，所述方法包括: (1)將含有L-酒石酸酯的有機溶劑和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機相和水相，備用；所述有機溶劑中L-酒石酸酯的濃度為0.02~0.5mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在2.0~5.0，其中硼酸的濃度為0.01~0.30mol/L ;所述的有機溶劑為Cl~C8的鹵代烷烴、Cl~C8的烷烴、C2~C8的醚或C6~C12的取代芳烴，所述取代芳烴的取代基為一個或多個，所述取代基各自獨立選自鹵素或Cl~C4的烷基；所述的L-酒石酸酯為下列之一:L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸異丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯； (2)將普羅帕酮鹽酸鹽轉(zhuǎn)化為普羅帕酮游離體，并用步驟(1)所得水相溶解，制成0.1~15mg/ml的樣品，作為進樣液備用； (3)采用高速逆流色譜法拆分普羅帕酮:分別以步驟(1)得到的有機相和水相為固定相和流動相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5~30°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為500~2000rpm，以0.2~3.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，步驟(2)進樣液由進樣閥進樣，以波長190~400nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液； (4)分別從步驟(3)中收集得到的前峰洗脫液和后峰洗脫液中回收得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮的單體。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述有機溶劑為下列之一或其中兩種以上的混合物:氯仿、二氯甲烷、甲苯、氯苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、環(huán)己烷、石油醚、乙醚、甲基叔丁基醚。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述L-酒石酸酯為L-酒石酸正己酯或L-酒石酸正丁酯。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下: (O將含有L-酒石酸正丁酯的氯仿和含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液按照體積比1:1混合均勻，靜置分層，分離得到有機相和水相，備用；所述氯仿中L-酒石酸酯的濃度為0.1~0.2mol/L ;所述含有硼酸的醋酸/三乙胺緩沖液的pH在2.0~4.0,其中硼酸的濃度為 0.1 ~0.2mol/L ； (2)取普羅帕酮鹽酸鹽加入到I~2mol/L的氫氧化鈉溶液中，加熱至40~50°C攪拌2~3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有機相用超純水洗滌至中性、用無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液蒸除溶劑即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解加入幾滴正己烷重結(jié)晶，得到普羅帕酮游離體，用步驟(1)所得水相溶解，制成0.1~15mg/ml的樣品，作為進樣液備用； (3)采用高速逆流色譜法拆分普羅帕酮:分別以步驟(1)得到的有機相和水相為固定相和流動相，將逆流色譜分離柱填滿固定相，柱溫為5~15°C，開啟速度控制器，轉(zhuǎn)速為1500~2000rpm，以0.5~2.0ml/min的流速將流動相泵入柱內(nèi)，待兩相溶劑體系達到流體動力學平衡后，步驟(2)進樣液由進樣閥進樣，以波長254nm的紫外檢測器檢測，根據(jù)紫外檢測譜圖，分別收集前峰洗脫液和后峰洗脫液； (4)將前峰和后峰洗脫液分別用lmol/L氫氧化鈉溶液堿化至pHll，析出白色粉末后直接用二氯甲烷多次萃取，合并二氯甲烷層，用飽和食鹽水洗滌二氯甲烷層至中性，用無水硫酸鈉干燥，過濾后蒸除溶劑即分別得到左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮粗品，分別用二氯甲烷溶解粗品后加入正己烷重結(jié)晶， 分別得到純化的左旋普羅帕酮和右旋普羅帕酮。
【文檔編號】C07C213/10GK103570564SQ201310316865
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年7月24日 優(yōu)先權日:2013年7月24日
【發(fā)明者】童勝強, 顏繼忠, 沈芒芒 申請人:浙江工業(yè)大學