新一代宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一類新的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白，所述蛋白選自下述中的一種或多種聯(lián)用：apoAI、apoE、ATIII、CLU、VIL1、mTOR。本發(fā)明公開的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白以及聯(lián)用對(duì)宮頸癌的早期預(yù)警具有較高的特異性、靈敏度、準(zhǔn)確度，是宮頸癌腫瘤早期預(yù)警和早期診斷的優(yōu)異指標(biāo)。
【專利說明】新一代宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及某種疾病的幾種特異預(yù)警血漿蛋白及其應(yīng)用，屬于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]宮頸癌是婦科惡性腫瘤，在發(fā)展中國家婦女最為常見，且致死率高。我國宮頸癌的平均發(fā)病水平在全球雖處于低發(fā)狀態(tài)，但在局部地區(qū)發(fā)病率和死亡率卻一直居高不下。由于我國人口眾多，每年新發(fā)病例約13萬，占世界發(fā)病人數(shù)的28%，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的身心健康。由于宮頸癌的患者主要以農(nóng)牧民為主，約80.0%~90.0%的病例在中晚期被診斷，在住院時(shí)，多數(shù)患者已失去治療良機(jī)。早期診斷是有效治療宮頸癌或癌前病變的重要前提，可以大大降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率，宮頸癌的診斷方式是否快速、準(zhǔn)確就成為很重要的瓶頸問題。目前，宮頸癌的診斷方式包括傳統(tǒng)的宮頸細(xì)胞涂片、陰道鏡檢查和液基細(xì)胞學(xué)檢查。由于宮頸癌發(fā)生具有多中心性，采用陰道鏡指導(dǎo)下的多點(diǎn)活檢，依然可能造成宮頸癌的漏診。
[0003]與上述方法相比,腫瘤生物標(biāo)志物(tumor biomarker)是一類生物活性物質(zhì),不僅直接來自腫瘤組織或細(xì)胞，也可以由腫瘤形成相關(guān)的宿主體內(nèi)新生物反應(yīng)而產(chǎn)生，可能融入血液或其他體液循環(huán)，其含量與正常參考值存在顯著差異，表現(xiàn)為血漿蛋白質(zhì)或代謝標(biāo)志物，對(duì)腫瘤診治具有重大意義。
[0004]血漿蛋白質(zhì)標(biāo)志物是癌蛋白質(zhì)組學(xué)(oncoproteomics)研究的重要內(nèi)容和切入點(diǎn)，與腫瘤組織特異性標(biāo)志物一起，形成腫瘤標(biāo)志物體系，用于腫瘤診斷的鱗狀上皮癌相關(guān)抗原(squamous cell carcinoma associated antigern, SCC-Ag)在宮頸癌的輔助診斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷手段中發(fā)揮重要作用，應(yīng)用越來越廣泛，但是已有的標(biāo)志物在診斷宮頸癌病情上靈敏度和特異性并不高。因此，本領(lǐng)域尚需開展宮頸癌的基礎(chǔ)和臨床治療研究，利用蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)等高通量分析手段系統(tǒng)篩查腫瘤標(biāo)志物，建立特異、靈敏的早期診斷方法，是宮頸癌防治水平的關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本申請(qǐng)發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)研究，采用二維液相色譜系統(tǒng)以等電聚焦作為樣品的預(yù)分離模式，通過在線的二維反相色譜分離進(jìn)行偶聯(lián)，實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)雜血清樣品的分離，從而建立宮頸病變各組患者之間的血漿蛋白質(zhì)組差異表達(dá)譜，篩選出差異表達(dá)組分；平行地運(yùn)用二維凝膠熒光電泳進(jìn)行分離，得到差異蛋白位點(diǎn)，通過高分辨質(zhì)譜技術(shù)鑒定其差異蛋白組分或者差異蛋白位點(diǎn)的蛋白成分，得到差異蛋白質(zhì)名單，運(yùn)用在線生物信息學(xué)軟件IPAO (Ingenuity Pathway Analysis)系統(tǒng)和MetaCore?對(duì)差異蛋白進(jìn)行功能注釋與富集、調(diào)控網(wǎng)絡(luò)分析、生物功能分析以及生物標(biāo)志物篩查，驗(yàn)證分析確定了宮頸癌特異性血漿差異表達(dá)蛋白，對(duì)于提高宮頸癌的早期檢測(cè)、病情檢測(cè)、防治水平具有重要意義。
[0006]一種宮頸癌特異預(yù) 警血漿蛋白，所述蛋白選白下述蛋白中的一種或多種的聯(lián)用:apoA I (載脂蛋白A-1)、apoE (載脂蛋白E)、AT III (抗凝血酶III蛋白)、CLU(人凝聚素族集蛋白)、VILl (續(xù)毛蛋白I)、mTOR (雷帕霉素革巴蛋白)。
[0007] 申請(qǐng)人:對(duì)宮頸癌患者及癌前病變患者血漿，通過蛋白質(zhì)組學(xué)分離與鑒定技術(shù)和生物信息學(xué)方法分析以及單一候選蛋白的驗(yàn)證，得到了上述在宮頸癌患者血漿中具有特異性表達(dá)的血漿蛋白，對(duì)宮頸癌的診斷和檢測(cè)具有指標(biāo)性價(jià)值。
[0008]為了更好的確診宮頸癌病情，本申請(qǐng)發(fā)明人還研究了將上述表達(dá)蛋白聯(lián)合使用用來檢測(cè)宮頸癌，優(yōu)選的，下述幾個(gè)組合具有較好的靈敏度、準(zhǔn)確度、特異度，所述蛋白選白mTOR 和 ATIII 組合，或 apoA Ι+mTOR 組合，或 mT0R、ATII1、apoAI 組合，或 ATIII+apoA I 組合，最優(yōu)選的，所述蛋白選白mTOR和ATIII組合。[0009] 申請(qǐng)人:進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)顯示上述的血漿蛋白可以用來早期診斷和預(yù)警宮頸癌的發(fā)生，并且評(píng)估宮頸癌的發(fā)展進(jìn)程，對(duì)宮頸癌的治療療效也有輔助評(píng)估作用。因此，相應(yīng)的本發(fā)明提供了上述宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白作為宮頸癌早期預(yù)警標(biāo)記物的應(yīng)用。
[0010]相應(yīng)的，基于上述應(yīng)用，本發(fā)明還公開了一種用于評(píng)估患者是否患有宮頸癌的方法，包括下述步驟:(I)檢測(cè)患者樣本中宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的表達(dá)水平；(2)檢測(cè)正常對(duì)照組中宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的表達(dá)水平；其中所用的標(biāo)記物選白下述蛋白:apoA
1、apoE、AT II1、CLU、VILUmTOR中的一種或多種的組合；在患者和正常對(duì)照組之間標(biāo)記物蛋白表達(dá)水平的差異表明患者患有宮頸癌的危險(xiǎn)性。
[0011]由于上述的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白在宮頸癌患者中特異表達(dá)，因此通過檢測(cè)患者與正常對(duì)照組的預(yù)警血漿蛋白表達(dá)水平差異或者聯(lián)合檢測(cè)水平即可評(píng)估患者是否患有宮頸癌或者患有宮頸癌的危險(xiǎn)性。
[0012]由于宮頸癌的發(fā)生發(fā)展和病情演化進(jìn)程會(huì)影響上述血漿蛋白的表達(dá)水平，因此通過檢測(cè)同一患者中這些血漿蛋白的表達(dá)水平變化或者聯(lián)合水平變化即可確定宮頸病變的進(jìn)程和宮頸癌發(fā)生的危險(xiǎn)性。
[0013]在本發(fā)明中，宮頸癌進(jìn)程是指宮頸癌從早期的宮頸炎到宮頸上皮內(nèi)瘤變I1-1II級(jí)到宮頸癌早期到宮頸癌晚期的整個(gè)病情的變化過程。
[0014]具體的，包括下述步驟:(1)在第一時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)患者樣本中宮頸癌標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平；(2)在隨后的時(shí)間點(diǎn)重復(fù)步驟(1) ；(3)比較步驟(1)和(2)中所檢測(cè)的宮頸癌早期預(yù)警標(biāo)記物蛋白表達(dá)水平；其中apoA KATIII蛋白含量降低，或apoE、CLU、VILl、mT0R含量增高提示患者宮頸病變惡化、患有宮頸癌的危險(xiǎn)性增加或者已經(jīng)患有宮頸癌。
[0015] 申請(qǐng)人:通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了上述宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白與宮頸病變進(jìn)程的相關(guān)性，因此可通過檢測(cè)不同時(shí)間的差異蛋白表達(dá)水平對(duì)宮頸癌的發(fā)生起到預(yù)警作用。
[0016]為了實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確檢測(cè)，所述宮頸癌標(biāo)記物蛋白檢測(cè)白外周血血漿標(biāo)本。
[0017]進(jìn)一步的，在上述基礎(chǔ)上，本發(fā)明提供了用于篩選得到宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的方法，包括下述步驟:
[0018](I)分為三組，構(gòu)建宮頸癌患者、CIN II / III患者與慢性宮頸炎患者的血漿蛋白樣品;
[0019](2)將血漿蛋白樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)二維液相色譜分離與分析，得到宮頸癌患者的差異蛋白組分；
[0020](3)將差異蛋白組分經(jīng)胰蛋白酶處理后進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜分析得到候選分子標(biāo)志物差異蛋白；
[0021](4)同時(shí)將血漿蛋白樣品運(yùn)用差異熒光電泳聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)，篩選出差異表達(dá)蛋白；
[0022](5)將候選分子標(biāo)志物差異蛋白進(jìn)行IPA生物信息學(xué)分析，生成候選生物標(biāo)記物列表；
[0023](6)結(jié)合步驟(3)、(4)和(5)的結(jié)果，確定核心差異蛋白，將核心差異蛋白名單采用MetaCore數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，得到宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白。
[0024]為了進(jìn)一步確證所篩選出的表達(dá)蛋白的活性，所述方法進(jìn)一步還包括將所宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白進(jìn)行ELISA法檢測(cè)確定含量變化。
[0025]本專利以宮頸癌高發(fā)人群新疆維吾爾族婦女宮頸病變患者血漿為對(duì)象，聯(lián)合運(yùn)用多種蛋白質(zhì)組學(xué)篩查技術(shù)和策略(2D-HPLC和2D DIGE)，旨在建立蛋白質(zhì)組差異表達(dá)譜基礎(chǔ)上，篩選出宮頸癌及癌前病變特異性的血漿蛋白指標(biāo)，豐富宮頸癌早期篩查與預(yù)警體系。利用系統(tǒng)生物學(xué)分支學(xué)科——生物信息學(xué)方法(IPA、MetaCore?)，針對(duì)血漿蛋白指標(biāo)進(jìn)行功能注釋與富集，構(gòu)建功能網(wǎng)絡(luò)，尋找主要調(diào)控通路或途徑，進(jìn)一步揭示宮頸病變的發(fā)生與發(fā)展的生物學(xué)本質(zhì)，預(yù)測(cè)出一系列腫瘤及癌前病變特異性血漿蛋白標(biāo)志物，從而最終得到能夠?qū)m頸癌具有指標(biāo)性意義的特異血漿預(yù)警蛋白，為宮頸癌的預(yù)防和早期診療提供科學(xué)依據(jù)。
[0026] 申請(qǐng)人:進(jìn)行的臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明所公開的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的表達(dá)水平與宮頸病變具有極好的相關(guān)性，用來檢測(cè)宮頸病變，尤其是宮頸癌的發(fā)生發(fā)展、病情程度具有很好的靈敏度、 特異度和準(zhǔn)確度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0027]圖1-圖6顯示了 apoA I蛋白表達(dá)含量、apoE蛋白表達(dá)含量、CLU蛋白表達(dá)含量、AT III蛋白表達(dá)含量、VILl蛋白表達(dá)含量、mTOR蛋白表達(dá)含量與宮頸病變進(jìn)程之間的關(guān)系;
[0028]圖7-圖12顯示了 apoA I蛋白、apoE蛋白、CLU蛋白、AT III蛋白、VILl蛋白、mTOR蛋白的ROC曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029]在下述實(shí)施例中， 申請(qǐng)人:提供了本發(fā)明篩選過程的詳細(xì)操作，僅用于說明本發(fā)明技術(shù)方案如何更好地實(shí)現(xiàn)和得到本發(fā)明所屬宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的研究過程，并非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，不采用下述方式而采用其它研究方法得到本發(fā)明的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白依舊屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可顯而易見地得到的技術(shù)方案的簡(jiǎn)單變化或等效替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0030]以下是本發(fā)明宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的篩選過程:
[0031]1.血漿蛋白組樣品的構(gòu)建
[0032]取每一個(gè)患者血漿樣品取70 μ 1，將同一組患者血漿等體積混合，構(gòu)建代表一組患者群體的血漿樣品，經(jīng)三組患者群體的3次重復(fù)，制備9份樣品。[0033]1.1基于蛋白質(zhì)富集柱技術(shù)制備低豐度蛋白組樣品
[0034]利用低豐度蛋白富集試劑盒(ProteoMiner Protein Enrichment Kit),運(yùn)用六肽配體親和層析柱，特異性吸附，并制備血衆(zhòng)低豐度蛋白組(low abundant proteome)待測(cè)樣品。通過使用低豐度蛋白富集試劑盒，低豐度蛋白質(zhì)相對(duì)得到了富集與濃縮。
[0035]1.2蛋白質(zhì)富集柱子的預(yù)處理
[0036]富集層析柱裝在一個(gè)層析管中，有一個(gè)頂蓋和底蓋，在隨后的實(shí)驗(yàn)過程中，這些蓋子被反復(fù)使用，不可棄去，其中底蓋倒置時(shí)，可以當(dāng)塞子用，旋轉(zhuǎn)后，固定在層析柱的底部。首先，卸掉層析柱的頂蓋和底蓋，將層析柱置于一個(gè)無蓋的收集管，離心(1000rcf，2min,室溫)，棄去層析柱內(nèi)的液體(保護(hù)液)。再加上底蓋，往柱子內(nèi)加入Iml去離子水，加上頂蓋；將層析柱上下顛倒混勻5min。卸掉底蓋，置于一個(gè)無蓋的收集管中，離心(同上)棄去液體。然后，以Iml washbuffer代替去離子水，重復(fù)以上洗滌步驟。最后，經(jīng)離心(同上)排除層析柱內(nèi)的殘留wash buffer0加上底蓋后，可以用蛋白質(zhì)樣品的預(yù)處理。
[0037]1.3層析柱與血漿蛋白質(zhì)樣品的結(jié)合
[0038]血漿樣品中存在各種殘留物(細(xì)胞殘留或沉積物)，經(jīng)離心(20000rpm，4°C，15min)棄去沉淀,將Iml血衆(zhòng)樣品加入至層析柱,在室溫條件下,動(dòng)態(tài)混勻柱子2h。
[0039]1.4層析柱子(含血漿蛋白質(zhì))的洗滌處理
[0040]混勻后，卸掉底蓋，將層析柱(含血漿蛋白)置于一個(gè)無蓋的收集管，離心(1000rcf,2min,室溫)棄去離心后的液體,重復(fù)該離心步驟,棄去殘留液體。加上底蓋厚，加入Iml wash buffer,在加上頂蓋,上下顛倒混勻柱子5min。卸掉底蓋,經(jīng)離心(同上)棄去收集液，以同樣的操作流程，反復(fù)使用wash buffer洗滌層析柱子(含血漿蛋白)兩次。
[0041]1.5血漿低豐度蛋白質(zhì)組分的洗脫(制備)
[0042]采用wash buffer 一樣的步驟,使用Iml去離子水洗漆層析柱子(含血衆(zhòng)蛋白)，再離心一次,排除液體殘留。然后,加入100 μ I水化洗脫液(rehydrated elution reagent,加上頂蓋，并輕輕旋轉(zhuǎn)混勻5sec，在室溫下孵育15min，期間輕輕旋轉(zhuǎn)幾次。層析柱子(含血漿蛋白)置于戴蓋的收集管上，標(biāo)記樣品名稱或編號(hào)，經(jīng)離心(同上)保留被洗脫下來的血漿蛋白質(zhì)樣品。重復(fù)以上樣品洗脫步驟兩次，每一次使用100 μ I水化洗脫液，共收集約300 μ I血漿蛋白質(zhì)樣品，即低豐度蛋白質(zhì)組樣品，可以在-20°c保存，或長期保存在-80°c，以備檢測(cè)。
[0043]1.6蛋白質(zhì)濃度測(cè)定
[0044]采用BCA(Bicinchoninic acid, 二喹啉甲酸)蛋白質(zhì)定量方法(Novagen),采用2500次微型測(cè)定(25 μ I蛋白樣品加上200 μ I反應(yīng)試劑，可以在96孔板中進(jìn)行高通量定量)。試劑盒包括:BCA反應(yīng)液(0.1MNaOH緩沖的二喹啉甲酸，碳酸鈉，酒石酸鈉，碳酸氫鈉，pHll.25) 500ml>4% Cupric Sulfate (硫酸銅)15ml 和 2mg / ml 的 BSA (牛血清白蛋白)標(biāo)準(zhǔn)品3Xlml。此方法的原理基于雙縮脲反應(yīng)，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能和Cu2+結(jié)合形成絡(luò)合物，同時(shí)將Cu2+還原成為Cu++。而BCA試劑可特異地與Cu+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫色復(fù)合物，在562nm處有高的光吸收值。吸光度值與蛋白質(zhì)的濃度成正比，可根據(jù)吸光度值的大小來計(jì)算總蛋白含量，并求得三次測(cè)定的平均值。Novagen的BCA試劑盒具體步驟如下:
[0045](1)BSA濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:[0046]下表是制備各稀釋梯度的BSA標(biāo)準(zhǔn)液的方法。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液都需要使用一個(gè)新的試管，采用與蛋白樣品一樣的緩沖液來稀釋、配制BSA標(biāo)準(zhǔn)液。如果緩沖液中有干擾BCA法的成分，用去離子水替代樣品的緩沖液，用以配制BSA濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)液做標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體方法見下表:
[0047]附表1BCA蛋白質(zhì)定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度及試劑配制
【權(quán)利要求】
1.新一類宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白，其特征在于所述蛋白選自下述蛋白中的一種或多種聯(lián)用:apoA 1、apoE、AT II1、CLU、VILl、mTOR。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白，其特征在于所述蛋白選自mTOR和ATIII 組合，或 apoA I+mTOR 組合，或 mTOR、ATII1、apoA I 組合，或 ATIII+apoA I 組合。
3.權(quán)利要求1所述的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白作為宮頸癌早期預(yù)警標(biāo)記物的應(yīng)用。
4.一種用于評(píng)估患者是否患有宮頸癌或者患有宮頸癌危險(xiǎn)性的方法，其特征在于包括下述步驟:(I)檢測(cè)患者樣本中宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的表達(dá)水平；(2)檢測(cè)正常對(duì)照組中宮頸癌特異預(yù)警血衆(zhòng)蛋白的表達(dá)水平；其中所用的標(biāo)記物選自下述蛋白:apoA 1、apoE、AT II1、CLU、VIL1、mTOR中的一種或多種的組合；在患者和正常對(duì)照組之間標(biāo)記物蛋白表達(dá)水平的差異表明患者患有宮頸癌或者患有宮頸癌的危險(xiǎn)性。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述宮頸癌早期預(yù)警標(biāo)記物蛋白檢測(cè)自外周血血漿標(biāo)本。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于包括下述步驟:(I)在第一時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)患者樣本中宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的表達(dá)水平；(2)在隨后的時(shí)間點(diǎn)重復(fù)步驟(1) ；(3)比較步驟(1)和(2)中所檢測(cè)的宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白表達(dá)水平；其中apoA 1、ATIII蛋白含量降低，或apoE、CLU、VILU mTOR含量增高提示患有宮頸癌的危險(xiǎn)性增高或者代表宮頸癌患者病變進(jìn)程加速、病情惡化。
7.用于篩選宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白的方法，其特征在于包括下述步驟:(I)分為三組，構(gòu)建宮頸癌患者、CIN II/III患者與慢性宮頸炎患者的血漿蛋白樣品；(2)將血漿蛋白樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)二維液相色譜分離與分析，得到宮頸癌患者的差異蛋白組分；(3)將差異蛋白組分經(jīng)胰蛋白酶處理后進(jìn)行 液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜分析得到候選分子標(biāo)志物差異蛋白；(4)同時(shí)將血漿蛋白樣品運(yùn)用差異熒光電泳聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)，篩選出差異表達(dá)蛋白；(5)將候選分子標(biāo)志物差異蛋白進(jìn)行IPA生物信息學(xué)分析，生成候選生物標(biāo)記物列表；(6)結(jié)合步驟(3)、(4)和(5)的結(jié)果，確定核心差異蛋白，將核心差異蛋白名單采用MetaCore?數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，得到宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于進(jìn)一步還包括將所得宮頸癌特異預(yù)警血漿蛋白進(jìn)行ELISA法檢測(cè)確定含量變化，進(jìn)行驗(yàn)證。
【文檔編號(hào)】C07K14/47GK103570826SQ201310389347
【公開日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月30日
【發(fā)明者】郭霞, 阿布力孜·阿布杜拉, 郝軼, 劉開江, 伊力努爾·沙比提, 瑪依拉·卡米力江, 阿娜古麗·阿巴白克里, 古扎麗努爾·阿不力孜, 迪麗米娜·伊拉木, 阿仙姑·哈斯木, 武貴臻, 希爾扎提江·蘇來曼, 熱孜宛古麗·約麥爾, 穆耶賽爾·伊敏, 吾尼且木·吐拉克 申請(qǐng)人:新疆醫(yī)科大學(xué)