一種從野艾蒿中制備咖啡?？崴岬姆椒?br> 【專利摘要】本發(fā)明公開了野艾蒿作為制備咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)原料的應(yīng)用及從野艾蒿中制備咖啡酰奎尼酸的方法。該方法是將野艾蒿的葉或全草研磨后，經(jīng)提取劑浸提，固液分離后得到含咖啡?？崴岬奶崛∫海俳?jīng)純化得到高純度的咖啡酰奎尼酸類產(chǎn)品。本發(fā)明得到總咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)量達5.8%，其中單咖啡?？崴幔ㄖ饕?-O-咖啡?？崴幔┖繛?.1%，二咖啡?？崴岷?.7%，其中主要是1,5-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴帷?,5-二咖啡?？崴?。本發(fā)明提供了制備咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)的新原料來源，為野艾蒿的利用提供了新途徑。
【專利說明】一種從野艾蒿中制備咖啡?？崴岬姆椒?br> 【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從植物中提取有效成分的方法，具體涉及一種從野艾蒿中制備咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)是一類由奎尼酸和不同數(shù)目的咖啡酸通過酯化反應(yīng)縮合形成的酚酸類天然化合物，包括單咖啡?？崴帷⒍Х弱？崴帷⑷Х弱？崴嵋约岸嗫Х弱？崴帷?br> [0003]單咖啡?？崴嵊梢环肿拥目Х人岷涂崴嵘?包括3-咖啡酰奎尼酸，4-咖啡?？崴幔?-咖啡?？崴?，具有廣泛的生物活性，如抗菌、抗病毒、保肝利膽、降血壓、降血脂、清除自由基、抗腫瘤等作用(黃林，唐菊利，黃靜，等.綠原酸提取與應(yīng)用研究進展[J].高效實驗室工作研究，2012，3:114~117)。二咖啡?？崴崾怯啥肿涌Х人岷涂崴嵘傻目s酚酸，根據(jù)咖啡酸取代位置的不同，分別為1，3- 二咖啡?？崴帷?，4- 二咖啡?？崴?、1，5-二咖啡?？崴帷?，4-二咖啡?？崴?、3，5-二咖啡?？崴帷?，5-二咖啡?？崴帷
[0004]咖啡?？崴嵩诒＝∑?、藥物等領(lǐng)域的應(yīng)用非常廣泛(CN100353938C ；CN100341500C)，特別是二咖啡?？崴釕?yīng)用更引人注目(魏振滿，丁晉彪，胡琳，等.二咖啡?？崴崞】等梭w安全性及耐受性研究[J].中國新藥雜志，2010，19(2): 106~108)。Kimura等發(fā)現(xiàn)3，5- 二咖啡?？崴帷?，5- 二咖啡酰奎尼酸以及3，4- 二咖啡酰奎尼酸抑制人外周多形核白細(xì)胞中鈣離子A23187誘導(dǎo)的白三烯B4產(chǎn)生，并且3，4- 二咖啡?？崴崮艽龠M前列腺素E2的形成(Kimura Y, Okuda H, Okuda T, et al.Studies onthe activities of tannins and related compounds, X:Effects of caffeetanninsand related compounds on arachidonate met abolism in human polymorphonuclearleukocytes [J].Nat Prod, 1987, 50 (3): 392)。Soh 等發(fā)現(xiàn) 4, 5_ 二咖啡?？崴犷A(yù)處理 C6細(xì)胞后，可消弱THP引起的谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、過氧化氫酶和SOD的改變，并且減少丙二醒的釋放(Soh Y, Kim J A, Sohn N W，et al.Protective effects of quinic acidderivatives on tetrahydropapaveroline-1nduced cell death in C6glioma cells[J].Biol Pharm Bull, 2003，26(6):803 ~806)。
[0005]野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia D C.)和艾蒿(Artemisia argyi Levi, etVant)均為菊科蒿屬草本植物，具有芳香氣味，生長于路旁、草地、荒野等處，也有栽培者。我國大部分地區(qū)，如江蘇、安徽、浙江、河南等地多有出產(chǎn)。
[0006]蒿屬植物常見的成分有揮發(fā)油、黃酮類、三萜類等，如桉油素、β_石竹烯、α-萜品烯醇等，具有抗菌、消炎、抗氧化、抗過敏等多種生物活性(王錦軍，黃兆文，李瑤瑤.艾葉化學(xué)成分的研究[J].藥學(xué)服務(wù)與研究，2008，8 (6):465~466)。有文獻報道艾蒿葉中的3，5- 二咖啡酰奎尼酸及其衍生物可以有效抑制梨形鞭毛蟲的亮氨酰tRNA合成酶的氨?；钚?，3，5-diCQA是在艾蒿葉的乙醇提取物中檢測得到，但含量非常低，不足0.01%(Yan-Hong Zhang，Me1-Qin Xuej Yuan-Chao Baij et al.3,5-dicaffeoylquinic acidisolated from Artemisia argyi and its ester derivatives exert ant1-leucyl-tRNAsynthetase of Giardia lamblia (G/LeuRS)and potential ant1-giardial effects[J].Fitoterapiaj2012，83:1281 ~1285)。
[0007]劉益紅等測定了不同月份艾蒿(A.argyi Levi, et Vant)中的綠原酸含量,發(fā)現(xiàn)艾蒿(采自陜西)其綠原酸含量最高為1.18%，但未對二咖啡?？崴岷窟M行測定(劉益紅，周建軍，王晶.HPLC測定不同月份艾葉中綠原酸含量[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，(1):82~84)。與傳統(tǒng)的綠原酸工業(yè)化生產(chǎn)原料金銀花(綠原酸含量2.40~9.23%)(向增旭，郭巧生.不同產(chǎn)地金銀花的綠原酸含量比較[J].中藥材，2007, 30(12):1497~1499)和杜仲葉(綠原酸含量1.0~5.5%)(蘭小艷，張學(xué)俊，龔桂珍.杜仲葉綠原酸的研究進展[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009, 25(21): 86~89)相比，艾蒿的工業(yè)應(yīng)用價值較小。
[0008]野艾蒿(A.lavandulaefolia DC)與艾蒿(A.argyi Levi, et Vant)是不同種(同屬)的植物，在江蘇地區(qū)野艾蒿的資源量比艾蒿多，而關(guān)于野艾蒿中的咖啡?？崴岬暮旷r有報道。因此，本發(fā)明對其進行了詳細(xì)的研究，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)野艾蒿中總咖啡?？崴岷亢芨?5.8%)，其中僅二咖啡?？崴岷窟_3.7%，單咖啡酰奎尼酸量達2.1%，高于艾蒿中的單咖啡?？崴岷?1.18%)，因而野艾蒿中的高咖啡酰奎尼酸特別是高的二咖啡?？崴岷渴蛊涑蔀闃O具潛力的咖啡?？崴岙a(chǎn)品生產(chǎn)新原料來源。
[0009]目前傳統(tǒng)的咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)生產(chǎn)原料(杜仲、金銀花等)或因是國家保護植物(杜仲)或因生物量小(僅為金銀花植物的花)的原因而導(dǎo)致資源量不高，而野艾蒿在我們國家分布廣，生物量大(全草)，其中的咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)含量豐富，因而原料成本和生產(chǎn)成本與傳統(tǒng)原料相比有很大的優(yōu)勢，應(yīng)用前景廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明公開了一種野艾蒿的新用途，并提供了一種制備咖啡?？崴岬男路椒ǎ瑸榫C合利用野艾蒿提供了新途徑。
[0011]野艾蒿作為制備咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)的原料的應(yīng)用。所述野艾蒿是菊科蒿屬多年生植物野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia DC.)的葉或全草。
[0012]本發(fā)明還公開了一種制備咖啡?？崴岬姆椒ǎ菍⒁鞍锏娜~或全草經(jīng)提取劑浸提，固液分離后得到含咖啡?？崴岬奶崛∫海俳?jīng)純化得到高純度的咖啡?？崴?。所用提取劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、正戊醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯的一種或多種不同比例的混合液。提取劑的pH為1.0~10.0，原料與提取劑的料液比為1:10 ~ l:50(w/w),提取時間0.5~10h。所用的提取方式是水浴提取法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、超高壓技術(shù)提取法、超臨界流體萃取法的一種或多種形式的組合。
[0013]經(jīng)浸提獲得的提取液中單咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)為3-0-咖啡?？崴帷?-0-咖啡?？崴帷?-0-咖啡?？崴嶂械囊环N或多種成分。二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)為3，4-二咖啡?？崴?、3，5-二咖啡酰奎尼酸、4，5-二咖啡酰奎尼酸、1，3-二咖啡酰奎尼酸、1，4-二咖啡?？崴帷?，5- 二咖啡?？崴嶂械囊环N或多種成分。
[0014]純化所用材料是大孔樹脂、聚酰胺、Sephadex LH20、制備性液相色譜、高效逆流色譜或離子交換色譜的一種或多種。[0015]野艾蒿作為制備咖啡酰奎尼酸原料的優(yōu)點在于:
[0016]1.野艾蒿中咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)含量高(5.8%)。
[0017]2.野艾蒿中咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)種類多，特別是1，5- 二咖啡?？崴?艾蒿中未檢測到)，占總咖啡酰奎尼酸量的21% ;與目前已在臨床試驗的抗艾滋病毒和保肝應(yīng)用的藥物(化學(xué)合成)比較，從野艾蒿和旋覆花等天然來源的1，5-二咖啡?？崴嵊兄黠@的優(yōu)勢。
[0018]3.野艾蒿資源豐富，因而在原料成本與分離成本方面都有著極大的優(yōu)勢。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1野艾蒿浸提液HPLC圖。
[0020]圖2單咖啡?？崴酘PLC圖。
[0021]圖3 二咖啡?？崴酘PLC圖。
【具體實施方式】
[0022]下面將結(jié)合【具體實施方式】進一步說明本發(fā)明，舉例是為說明本發(fā)明的過程而非僅限于實施例。
[0023]實施例1
[0024]稱取野艾蒿100g，按固液比1:10 (w/w)加入pH=3.0體積濃度60%的乙醇溶液，超聲作用下浸提lh，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫?，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.lg，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)3.7g。經(jīng)聚酰胺純化后，得純度為55.6%單咖啡酰奎尼酸，純度為67.8% 二咖啡?？崴帷Ｔ俳?jīng)有機溶劑萃取，可分別得到純度90%~95%的單咖啡酰奎尼酸1.3g和二咖啡?？崴?.lg。
[0025]其中野艾蒿浸提液液相圖、單咖啡?？崴嵋合鄨D、二咖啡酰奎尼酸液相圖見圖1、圖2、圖3所示。
[0026]實施例2
[0027]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=5.0體積濃度70%的乙醇溶液，微波作用下浸提20min，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫海渲袉慰Х弱？崴犷愇镔|(zhì)1.8g, 二咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)2.5g。經(jīng)大孔樹脂純化后，得純度為49.8%單咖啡?？崴?，純度為56.5% 二咖啡?？崴帷Ｔ俳?jīng)聚酰胺純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡?？崴?.1g和二咖啡?？崴?.7g。
[0028]實施例3
[0029]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=6.0體積濃度50%的乙酸乙酯溶液，微波作用浸提30min，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.5g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)3.lg。經(jīng)大孔樹脂純化后，得純度為45.7%單咖啡酰奎尼酸，純度為53.2% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)有機溶劑萃取，可分別得到純度80%~85%的單咖啡酰奎尼酸0.9g和二咖啡?？崴?.8g。
[0030]實施例4
[0031]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=3.0體積濃度70%的乙酸丁酯溶液，超聲作用下浸提3h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫?，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.2g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.4g。經(jīng)大孔樹脂純化后，得純度為43.9%單咖啡?？崴?，純度為59.7% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)S印hadex LH20純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡酰奎尼酸0.7g和二咖啡?？崴?.4g。
[0032]實施例5
[0033]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入pH=4.0體積濃度60%的正丁醇溶液，超高壓提取lh，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫?，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.6g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.8g。經(jīng)乙酸乙酯萃取后，得純度為33.2%單咖啡酰奎尼酸，純度為41.6% 二咖啡酰奎尼酸。再經(jīng)制備性液相色譜純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡?？崴?.7g和二咖啡?？崴?.4g。
[0034]實施例6
[0035]稱取野艾蒿100g，按固液比1:30 (w/w)加入pH=7.0體積濃度40%的甲醇溶液，50°C恒溫水浴下浸提5h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫?，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.0g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.9g。經(jīng)乙酸乙酯純化后，得純度為33.9%單咖啡?？崴?，純度為39.7% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)S印hadex LH20純化，可分別得到純度80%~85%的單咖啡酰奎尼酸0.7g和二咖啡?？崴?.lg。
[0036]實施例7
[0037]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入pH=3.0體積濃度60%的甲醇溶液，超臨界流體萃取30min，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.5g，二咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)2.9g。經(jīng)制備性液相色譜純化后，得純度為67.5%單咖啡酰奎尼酸，純度為78.6% 二咖啡酰奎尼酸。再經(jīng)有機溶劑萃取，可分別得到純度90%~95%的單咖啡酰奎尼酸0.6g和二咖啡?？崴?.8g。
[0038]實施例8
[0039]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=6.0體積濃度30%的正戊醇溶液，50°C恒溫水浴下浸提3h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡?？崴岬奶崛∫海渲袉慰Х弱？崴犷愇镔|(zhì)1.8g, 二咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)2.4g。經(jīng)S印hadex LH20純化后，得純度為60.9%單咖啡酰奎尼酸，純度為72.3% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)有機溶劑萃取，可分別得到純度85%~90%的單咖啡酰奎尼酸1.1g和二咖啡?？崴?.0g。
[0040]實施例9
[0041]稱取野艾蒿100g，按固液比1:40 (w/w)加入pH=5.0體積濃度50%的丙酮溶液，微波作用下浸提40min，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)1.7g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.3g。經(jīng)聚酰胺純化后，得純度為59.7%單咖啡?？崴?，純度為65.6% 二咖啡酰奎尼酸。再經(jīng)S印hadex LH20純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡?？崴?.9g和二咖啡?？崴?.7g。
[0042]實施例10
[0043]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=3.0體積濃度20%丙酮溶液，超聲作用下浸提8h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)
1.5g，二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.4g。經(jīng)大孔樹脂純化后，得純度為48.5%單咖啡酰奎尼酸，純度為53.1% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)制備性液相色譜純化，可分別得到純度85%~90%的單咖啡?？崴?.8g和二咖啡酰奎尼酸1.3g。[0044]實施例11
[0045]稱取野艾蒿100g，按固液比1:20 (w/w)加入pH=4.0,乙醇:丙酮=5:1的提取液，超聲作用下浸提2h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)1.1g, 二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.6g。經(jīng)聚酰胺純化后，得純度為55.3%單咖啡?？崴?，純度為66.2% 二咖啡酰奎尼酸。再經(jīng)制備性液相色譜純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡?？崴?.0g和二咖啡?？崴?.7g。
[0046]實施例12
[0047]稱取野艾蒿100g，按固液比1:50 (w/w)加入ρΗ=6.0,甲醇:丙酮=4:1的提取液，超聲作用下浸提2h，經(jīng)固液分離后，得到含咖啡酰奎尼酸的提取液，其中單咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)1.3g, 二咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)2.5g。經(jīng)S印hadex LH20純化后，得純度為61.6%單咖啡?？崴?，純度為78.7% 二咖啡?？崴?。再經(jīng)制備性液相色譜純化，可分別得到純度90%~95%的單咖啡酰奎尼酸0.6g和二咖啡?？崴?.9g。
【權(quán)利要求】
1.野艾蒿作為制備咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)原料的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述野艾蒿是菊科蒿屬多年生植物野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia DC.)的葉或全草。
3.一種制備咖啡?？崴岬姆椒ǎ涮卣髟谟趯⒁鞍锏娜~或全草研磨后，經(jīng)提取劑浸提，固液分離后得到含咖啡?？崴岬奶崛∫海俳?jīng)純化得到高純度的咖啡?？崴犷?br> 口廣BH ο
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于所述提取劑為水、甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇、正戊醇、乙酸乙酯或乙酸丁酯中的一種或多種不同比例的混合液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于所述提取劑的pH為1.0~10.0，原料與提取劑的料液比為1:10~1:50 (w/w)，提取時間0.1~IOho
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于所述的提取方式可以是水浴提取、超聲輔助提取、微波輔助提取、超高壓技術(shù)提取或超臨界流體萃取中的一種或多種方法的組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于提取液中的單咖啡?？崴犷愇镔|(zhì)為3-0-咖啡?？崴?、4-0-咖啡?？崴帷?-0-咖啡?？崴嶂械囊环N或多種成分。二咖啡酰奎尼酸類物質(zhì)為3，4- 二咖啡酰奎尼酸、3，5- 二咖啡酰奎尼酸、4，5- 二咖啡?？崴帷, 3- 二咖啡?？崴帷?，4- 二咖啡?？崴帷?，5- 二咖啡酰奎尼酸中的一種或多種成分。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于純化所用材料是大孔樹脂、聚酰胺、SephadexLH20、制備性液相色譜、高效 逆流色譜或離子交換色譜的一種或多種。
【文檔編號】C07C67/48GK103570545SQ201310424422
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月17日
【發(fā)明者】陳育如, 錢媛媛, 柯小紅, 閆莽 申請人:南京師范大學(xué)