一種羅米地辛的分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羅米地辛的分離純化方法，其包含下列步驟：a.將含有羅米地辛的紫色色桿菌（Chromobacterium violaceum）的發(fā)酵液與大孔吸附樹脂混合，攪拌至吸附完全；b.將吸附羅米地辛的大孔吸附樹脂從發(fā)酵液中分離出來，上柱，清洗后洗脫，得洗脫液1濃縮，得濃縮液1；c.將所述的濃縮液1上樣至大孔吸附樹脂，上柱，洗滌后洗脫，洗脫過程中用HPLC進(jìn)行檢測，收集含有羅米地辛組分的洗脫液2，濃縮，得濃縮液2；d.將所述的濃縮液2萃取，得有機(jī)層，濃縮，得粗品；e.將所述的粗品精制，即得。本發(fā)明的分離純化方法提取純度較高，收率高，純化工藝簡單，成本較低。
【專利說明】-種羅米地辛的分離純化方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種羅米地辛的分離純化方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 羅米地辛，英文名稱為Romidepsin,是從紫色色桿菌（化romobacterium violaceum)的發(fā)酵培養(yǎng)液中分離得到的一種天然多聚膚，其分子式為C24H36N4化S2,分子量為 540。
[0003] 羅米地辛是一種新型的組蛋白去己醜化酶（HDAC)抑制劑，HDAC是一類鋒離子醜 胺酶，在催化組蛋白脫己醜基時(shí)，鋒離子跟己醜基上氧的水合物馨合形成過渡態(tài)，HDAC的過 度或異常調(diào)控使組蛋白過度去己醜化，染色體凝聚使轉(zhuǎn)錄受到抑制，引起相應(yīng)基因表達(dá)下 降，導(dǎo)致腫瘤病癥發(fā)生。羅米地辛抗腫瘤機(jī)理為羅米地辛進(jìn)入細(xì)胞后，由還原性谷脫甘膚 (GSH)將其二硫鍵還原為琉基，琉基可競爭性結(jié)合HDAC上的化 2+，使HDAC失效，從而達(dá)到抗 腫瘤的目的。
[0004]

【權(quán)利要求】
1. 一種羅米地辛的分離純化方法，其特征在于，其包含下列步驟： a?將含有羅米地辛的紫色色桿菌（Chromobacterium violaceum)的發(fā)酵液與大孔吸附 樹脂混合，攪拌至吸附完全；所述的大孔吸附樹脂為非極性、弱極性和中等極性大孔樹脂中 的一種或多種； b. 將吸附羅米地辛的大孔吸附樹脂從發(fā)酵液中分離出來，上柱，清洗后洗脫，收集含有 羅米地辛組分的洗脫液1，濃縮，得濃縮液1 ;所述的清洗的溶劑為水；所述洗脫的溶劑為有 機(jī)溶劑，或有機(jī)溶劑與水的混合溶劑1 ;在所述的混合溶劑1中，所述的有機(jī)溶劑與水的體 積比為3. 5:6. 5?6:4 ;所述的有機(jī)溶劑為酮類溶劑、醇類溶劑或腈類溶劑； c. 將所述的濃縮液1上樣至大孔吸附樹脂，上柱，洗滌后洗脫，洗脫過程中用HPLC進(jìn)行 檢測，收集含有羅米地辛組分的洗脫液2,濃縮，得濃縮液2 ;所述洗滌的溶劑為有機(jī)溶劑與 水的混合溶劑2 ;在所述的混合溶劑2中，所述的有機(jī)溶劑與水的體積比為1:9?5:5 ;所述 洗脫的溶劑為有機(jī)溶劑與水的混合溶劑3 ;在所述的混合溶劑3中，所述的有機(jī)溶劑與水的 體積比為3. 5:6. 5?7:3 ;所述的有機(jī)溶劑為酮類溶劑、醇類溶劑或腈類溶劑； d. 將所述的濃縮液2萃取，得有機(jī)層，濃縮，得粗品； e. 將所述的粗品精制，即得。
2. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟a中，所述的大孔吸附樹脂與 所述的發(fā)酵液的質(zhì)量體積比為0. Olg/mL?0. 06g/mL ;所述的攪拌的時(shí)間為20?60min ;所 述的吸附完全為發(fā)酵液顏色變淺。
3. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟a和/或c中，所述的大孔 吸附樹脂分別獨(dú)立的為 X-5、XAD-2、XAD-7、ADS-17、SP825、Diaion HP50、D101、HPD-100、 HPD-300、AB-8、DA-201 和 HPD-400 中的一種或多種。
4. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟b中，在所述的混合溶劑1中， 所述的有機(jī)溶劑與水的體積比為4:6?5:5 ;所述的濃縮液1的顏色為棕黑色。
5. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟b和/或c中，所述的酮類溶 劑為丙酮；所述的醇類溶劑為碳鏈長度為Q?C3的烷基醇；所述的腈類溶劑為乙腈。
6. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟c中，所述的混合溶劑2中， 所述的有機(jī)溶劑與水的體積比為2:8?3. 5:6. 5 ;所述的混合溶劑3中，所述的有機(jī)溶劑與 水的體積比為4:6?5:5 ;所述的大孔吸附樹脂與所述的濃縮液2的質(zhì)量體積比為0. 03g/ mL?0. lg/mL ;所述的濃縮液2的顏色為淺棕色。
7. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟d中，所述的萃取的溶劑為酯 類溶劑和/或齒代烴類溶劑；所述的萃取的次數(shù)為兩次。
8. 如權(quán)利要求7所述的分離純化方法，其特征在于，所述的酯類溶劑為乙酸乙酯；所述 的鹵代烴類溶劑為二氯甲烷和/或三氯甲烷。
9. 如權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，步驟e中，所述的精制的方法為析 晶或重結(jié)晶；所述的析晶包括以下步驟：將步驟d得到的粗品，加入醚類溶劑，析出固體，即 可；所述的重結(jié)晶包括以下步驟：將步驟d得到的粗品，溶解在酮類溶劑、酮類溶劑與水的 混合溶劑4、醇類溶劑、醇類溶劑與水的混合溶劑5、腈類溶劑或腈類溶劑與水的混合溶劑6 中，再加入水至結(jié)晶析出，即可。
10. 如權(quán)利要求9所述的分離純化方法，其特征在于，所述的醚類溶劑為乙醚；所述的 混合溶劑4中，所述的酮類溶劑與水的體積比為6:4?9:1 ;所述的混合溶劑5中，所述的 醇類溶劑與水的體積比為6:4?9:1 ;所述的混合溶劑6中，所述的腈類溶劑與水的體積比 為 6:4 ?9:1。
【文檔編號(hào)】C07K1/22GK104447950SQ201310430063
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】胡海峰, 熊磊 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院