從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，包括豬總膽汁酸酯化、醇提取、重結晶、水解反應等步驟。本發(fā)明以豬膽汁作為提取原料，豬膽汁原料廣泛易得，降低了制備成本。本發(fā)明提取工藝中選取甲醇為溶劑及酯化試劑，確定豬去氧膽酸甲酯水解及精制的條件，確定采用氫氧化鈉作為堿催化劑，原料與其投料比為1:2.5，經(jīng)該工藝流程，豬去氧膽酸的總收率達到40%以上。
【專利說明】從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術領域】，涉及豬去氧膽酸的制備方法，具體涉及一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法。
【背景技術】
[0002]膽汁是人體或脊椎動物肝細胞連續(xù)分泌的產(chǎn)物，是一種具有苦味的粘滯性有色堿性液體，其成分除水以外，主要有膽汁酸、膽鹽和膽色素，此外還有少量的膽固醇、脂肪酸、卵磷脂、電解質和蛋白質等?，F(xiàn)今較常見的動物膽汁一般為禽類膽汁、豬膽汁、牛膽汁、熊膽汁以及蛇膽汁等等。膽汁酸是膽汁的主要成分，約占膽汁總量的50%~70%，膽汁的生理作用主要就是由膽汁酸來發(fā)揮，在作為藥物時，膽汁酸可以用來解熱、鎮(zhèn)痙鎮(zhèn)咳、調(diào)節(jié)血壓、強心利膽、抑菌抗炎以及調(diào)節(jié)免疫等，且活性較強、副作用又小、價格低廉，因此受到廣大用藥者的歡迎。
[0003]在各種動物膽汁中，豬膽汁是最常見且產(chǎn)量最大的，自古代開始就被廣泛應用于臨床，如用豬膽汁治療急性黃疸型傳染性肝炎、百日咳、急性腸炎以及胃潰瘍等，均能收到良好的治療效果。豬膽汁中主要含膽汁酸類、膽色素、粘蛋白、脂類及無機物等，膽汁酸則主要包含豬去氧膽酸、豬膽酸、鵝去氧膽酸、3 α -羥基-6-氧-5 α -膽烷酸以及膽石酸等。其中豬去氧膽酸約占40%，鵝去氧膽酸約占25%。
[0004]豬去氧膽酸，又名異去氧膽酸，化學名為3 α，6 α - 二羥基_5 β _膽烷酸，分子式為C24H40O4,分子量392.578，為白色或略帶微黃色粉末，味苦，微腥臭，略溶于甲醇、乙醇，丙酮中微溶，乙醚、氯仿中極微溶，幾乎不溶于水，熔點為200~201°C。
[0005]豬去氧膽酸能夠抑制膽酸的形成及溶解脂肪，降低血中膽固醇和甘油三酯，適用于I a或I b型高血脂癥、動脈粥樣硬化癥；對百日咳桿菌、白喉桿菌、金黃色葡萄球菌等有一定的抑菌作用，可用作消炎藥，治療慢性支氣管炎、小兒病毒性上呼吸道炎癥等；本品能刺激膽汁分泌，使膽汁變稀而不增加固體量，適用于膽道炎、膽囊炎、膽石癥和其它非阻塞性膽汁郁積，亦可加速膽囊造影劑排出肝臟以及有助于顯影；尚能促進腸道脂肪分解和脂溶性維生素吸收，可用于肝膽疾患引起的消化不良。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種以豬膽汁為原料分離豬去氧膽酸的方法，該方法提取工藝簡單，無需特殊設備，原料來源廣泛易得，提取過程中對環(huán)境的污染小，制得的產(chǎn)品純度高，產(chǎn)品回收率高。
[0007]為解決上述技術問題，本發(fā)明釆取的技術方案如下:
[0008]一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
[0009](1)取提完膽紅素的豬膽汁下腳料，經(jīng)皂化、水解、脫色及干燥后得到棕褐色的豬總膽汁Ife粗品；
[0010](2)取豬總膽汁酸粗品，加入酯化試劑，在催化劑作用下進行酯化反應生成豬總膽汁酸酯；
[0011](3)在堿性條件下以醇提取豬總膽汁酸酯；
[0012](4)對豬總膽汁酸酯進行重結晶，得到豬總膽汁酸酯的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重；
[0013](5)取上述(4)制得的豬總膽汁酸酯，對豬總膽汁酸酯在堿性條件下進行水解反應，將重結晶得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重，即可制得豬去氧膽酸。
[0014]作為本發(fā)明的改進，上述步驟(2)的酯化試劑為甲醇、乙醇和異丙醇的一種。
[0015]作為本發(fā)明進一步的的改進，上述步驟(2)的酯化試劑為無水甲醇，其用量為5~10ml/g。
[0016]作為本發(fā)明的改進，上述步驟(2)的催化劑為98%濃硫酸，其與原料的摩爾比為
0.1:1。
[0017]作為本發(fā)明的改進，上述步驟(3)的堿為NaOH，其與豬總膽汁酸酯的摩爾比為
2.5:I ο
[0018]作為本發(fā)明的改進，上述步驟(4)使用的重結晶試劑為苯或甲苯。
[0019]作為本發(fā)明的改進，上述步驟(5)使用的重結晶試劑為乙酸乙酯。
[0020]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為:
[0021]本發(fā)明以豬膽汁作為提取原料，豬膽汁原料廣泛易得，降低了制備成本。本發(fā)明提取工藝中選取甲醇為溶劑及酯化試劑，確定豬去氧膽酸甲酯水解及精制的條件，確定采用氫氧化鈉作為堿催化劑，原料與其投料比為1:2.5，經(jīng)該工藝流程，豬去氧膽酸的總收率達到40%以上。
【具體實施方式】
[0022]為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實施例如下。本領域技術人員應該明了，所述實施例僅僅用于幫助理解本發(fā)明，不應視為對本發(fā)明的具體限制。
[0023]下列實施例中，所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域技術熟練人員所熟悉的意義相同。
[0024]一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，包括如下步驟:
[0025](I)取提完膽紅素的豬膽汁下腳料，經(jīng)皂化、水解、脫色及干燥后得到棕褐色的豬總膽汁Ife粗品；
[0026](2)取豬總膽汁酸粗品，加入酯化試劑，在催化劑作用下進行酯化反應生成豬總膽汁酸酯；
[0027](3)在堿性條件下以醇提取豬總膽汁酸酯；
[0028](4)對豬總膽汁酸酯進行重結晶，得到豬總膽汁酸酯的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重；
[0029](5)取上述(4)制得的豬總膽汁酸酯，對豬總膽汁酸酯在堿性條件下進行水解反應，將重結晶得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重，即可制得豬去氧膽酸。
[0030]實施例1
[0031]取250ml圓底燒瓶，加入豬總膽汁酸粗品10g，無水甲醇50ml，98%濃硫酸0.7ml,于常溫下攪拌反應24h，經(jīng)TLC檢測反應完畢，無原料殘留后停止反應，向體系中加入無水NaHCO3固體調(diào)pH至中性，濾去無機鹽，濾餅用甲醇洗滌，合并濾液及洗液，減壓回收甲醇，得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的無機鹽，再以乙醚分次提取有機物(50ml，30ml，20ml)，合并有機相，分別以飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌I次，無水Na2SO4干燥2h，過濾，減壓蒸除乙醚，得到棕色粘稠狀物11.4g，向燒瓶中加入苯30ml，于油浴鍋80°C下溶解完全后停止加熱，待自然冷卻至室溫后放入冰箱約16h，析出固體，過濾，濾餅以苯洗滌3次，得到類白色固體4.9g，再用苯進行重結晶，得到的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重，為4.5g，即豬總膽汁酸甲酯；
[0032]取100ml圓底燒瓶，依次加入豬去氧膽酸甲酯(4.5g)，NaOH固體(L Ig),乙醇30ml，水Iml，于80°C下攪拌回流反應20h，TLC監(jiān)測反應完畢后，減壓回收溶劑至干，得淡黃色固體，加水30ml，在劇烈攪拌下加10%稀鹽酸調(diào)pH至1.5，析出大量固體，繼續(xù)在常溫下攪拌0.5h，過濾，濾餅用10%稀鹽酸洗滌3次，水洗3次，得到塊狀白色固體，于50°C下減壓干燥8h,為4.5g。以乙酸乙酯重結晶,得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重后為4g, mp為200~201 °C，即豬去氧膽酸，總收率45%。
[0033]實施例2
[0034]取250ml圓底燒瓶，加入豬總膽汁酸粗品10g，無水甲醇100ml，98%濃硫酸0.7ml,于常溫下攪拌反應36h，經(jīng)TLC檢測反應完畢，無原料殘留后停止反應，向體系中加入無水NaHCO3固體調(diào)pH至中性，濾去無機鹽，濾餅用甲醇洗滌，合并濾液及洗液，減壓回收甲醇，得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的無機鹽，再以乙醚分次提取有機物(50ml，30ml，20ml)，合并有機相，分別以飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌I次，無水Na2SO4干燥2h，過濾，減壓蒸除乙醚，得到棕色粘稠狀物llg，向燒瓶中加入苯30ml，于油浴鍋80°C下溶解完全后停止加熱，待自然冷卻至室溫后放入冰箱約16h，析出固體，過濾，濾餅以苯洗滌3次，得到類白色固體4.7g，再用苯進行重結晶，得到的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重，為4.4g，即豬總膽汁酸甲酯；
[0035]取100ml圓底燒瓶，依次加入豬去氧膽酸甲酯(4.4g)，NaOH固體(L Ig),乙醇30ml，水Iml，于80°C下攪拌回流反應20h，TLC監(jiān)測反應完畢后，減壓回收溶劑至干，得淡黃色固體，加水30ml，在劇烈攪拌下加10%稀鹽酸調(diào)pH至1.5，析出大量固體，繼續(xù)在常溫下攪拌0.5h，過濾，濾餅用10%稀鹽酸洗滌3次，水洗3次，得到塊狀白色固體，于50°C下減壓干燥8h，為4.0g。以乙酸乙酯重結晶，得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重后為4g，mp為200~201 °C，即豬去氧膽酸，總收率40%。
[0036]實施例3
[0037]取250ml圓底燒瓶，加入豬總膽汁酸粗品10g，無水甲醇80ml，98%濃硫酸0.7ml,于常溫下攪拌反應36h，經(jīng)TLC檢測反應完畢，無原料殘留后停止反應，向體系中加入無水NaHCO3固體調(diào)pH至中性，濾去無機鹽，濾餅用甲醇洗滌，合并濾液及洗液，減壓回收甲醇，得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的無機鹽，再以乙醚分次提取有機物(50ml，30ml，20ml)，合并有機相，分別以飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌I次，無水Na2SO4干燥2h，過濾，減壓蒸除乙醚，得到棕色粘稠狀物11.2g，向燒瓶中加入苯30ml，于油浴鍋80°C下溶解完全后停止加熱，待自然冷卻至室溫后放入冰箱約16h，析出固體，過濾，濾餅以甲苯洗滌3次，得到類白色固體4.6g，再用甲苯進行重結晶，得到的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重，為4.4g，即豬總膽汁酸甲酯；[0038]取100ml圓底燒瓶，依次加入豬去氧膽酸甲酯(4.4g)，NaOH固體(1.1g),乙醇30ml，水Iml，于80°C下攪拌回流反應20h，TLC監(jiān)測反應完畢后，減壓回收溶劑至干，得淡黃色固體，加水30ml，在劇烈攪拌下加10%稀鹽酸調(diào)pH至I~2，析出大量固體，繼續(xù)在常溫下攪拌0.5h，過濾，濾餅用10%稀鹽酸洗滌3次，水洗3次，得到塊狀白色固體，于50°C下減壓干燥6~8h，為4.2g。以乙酸乙酯重結晶，得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重后為
4.2g，mp為200~201°C，即豬去氧膽酸，總收率42%。
[0039]實施例4
[0040]取250ml圓底燒瓶，加入豬總膽汁酸粗品10g，無水甲醇100ml，98%濃硫酸0.7ml，于常溫下攪拌反應36h，經(jīng)TLC檢測反應完畢，無原料殘留后停止反應，向體系中加入無水NaHCO3固體調(diào)pH至中性，濾去無機鹽，濾餅用甲醇洗滌，合并濾液及洗液，減壓回收甲醇，得棕褐色粘稠物，加水50ml以溶解其中剩余的無機鹽，再以乙醚分次提取有機物(50ml，30ml，20ml)，合并有機相，分別以飽和NaHCO3溶液及飽和食鹽水洗滌I次，無水Na2SO4干燥2h，過濾，減壓蒸除乙醚，得到棕色粘稠狀物11.2g，向燒瓶中加入苯30ml，于油浴鍋80°C下溶解完全后停止加熱，待自然冷卻至室溫后放入冰箱約16h，析出固體，過濾，濾餅以甲苯洗滌3次，得到類白色固體4.4g，再用甲苯進行重結晶，得到的白色粉末于紅外燈下干燥至恒重，為4.3g，即豬總膽汁酸甲酯；
[0041]取100ml 圓底燒瓶，依次加入豬去氧膽酸甲酯(4.3g)，NaOH固體(1.1g),乙醇30ml，水Iml，于80°C下攪拌回流反應20h，TLC監(jiān)測反應完畢后，減壓回收溶劑至干，得淡黃色固體，加水30ml，在劇烈攪拌下加10%稀鹽酸調(diào)pH至1.5，析出大量固體，繼續(xù)在常溫下攪拌0.5h，過濾，濾餅用10%稀鹽酸洗滌3次，水洗3次，得到塊狀白色固體，于50°C下減壓干燥8h，為4.2g。以乙酸乙酯重結晶，得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重后為4g，mp為200~201°C，即豬去氧膽酸，總收率40%。
[0042] 申請人:聲明，所屬【技術領域】的技術人員在上述實施例的基礎上，將上述實施例某組分的具體含量點值，與
【發(fā)明內(nèi)容】
部分的技術方案相組合，從而產(chǎn)生的新的數(shù)值范圍，也是本發(fā)明的記載范圍之一，本申請為使說明書簡明，不再羅列這些數(shù)值范圍。
【權利要求】
1.一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)取提完膽紅素的豬膽汁下腳料，經(jīng)皂化、水解、脫色及干燥后得到棕褐色的豬總膽汁酸粗品； (2)取豬總膽汁酸粗品，加入酯化試劑，在催化劑作用下進行酯化反應生成豬總膽汁酸酷； (3)在堿性條件下以醇提取豬總膽汁酸酯； (4)對豬總膽汁酸酯進行重結晶，得到豬總膽汁酸酯的白色粉末，于紅外燈下干燥至恒重； (5)取上述(4)制得的豬總膽汁酸酯，對豬總膽汁酸酯在堿性條件下進行水解反應，將重結晶得到的白色晶體在紅外燈下干燥至恒重，即可制得豬去氧膽酸。
2.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)的酯化試劑為甲醇、乙醇和異丙醇的一種。
3.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)的酯化試劑為無水甲醇，其用量為5~10ml/g。
4.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(2)的催化劑為98%濃硫酸，其與原料的摩爾比為0.1:1。
5.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(3)的堿為NaOH，其與豬總膽汁酸酯的摩爾比為2.5:1。
6.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(4)使用的重結晶試劑為苯或甲苯。
7.如權利要求1所述的一種從去除膽紅素的豬膽汁下腳料中提取豬去氧膽酸的方法，其特征在于:所述步驟(5)使用的重結晶試劑為乙酸乙酯。
【文檔編號】C07J9/00GK103539828SQ201310449477
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年9月27日 優(yōu)先權日:2013年9月27日
【發(fā)明者】黃長樂 申請人:安徽華印機電股份有限公司