一種金雀花堿的提取分離方法
【專利摘要】本發(fā)明提供的一種金雀花堿的提取分離方法，包括以下步驟：提取：將牧馬豆種子粉碎，加4-10倍質(zhì)量的有機溶劑水溶液，回流提取1-4h，提取液濃縮至質(zhì)量濃度為0.5～1.5g/ml，得到濃縮液；大孔樹脂聯(lián)用分離：采用孔徑在130-300A°、比表面積在480-600m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂一次分離；采用孔徑在50-80A°、比表面積在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂二次分離；重結(jié)晶即得。該方法工藝簡單、操作簡便、原料來源方法、成本低廉，分離使用的材料再生簡單、無毒無污染，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
【專利說明】一種金雀花堿的提取分離方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥化學領(lǐng)域，特別涉及一種生物堿的提取分離方法，具體涉及一種金雀花堿的提取分離方法。
【背景技術(shù)】
[0002]金雀花堿，其分子式為C11H14ON2，分子量為190.24。金雀花堿具有顯著的生物活性，臨床用金雀花堿0.15%的水溶液靜脈注射，搶救因手術(shù)和各種創(chuàng)傷引起的反射性呼吸暫停、休克和新生兒窒息。近期研究表明，金雀花堿還具有抗心律失常、抗微生物感染、抗?jié)円约拜^強的抗癌活性。
[0003]現(xiàn)有對金雀花堿提取純化工藝多是傳統(tǒng)工藝。中國專利201010182690.9公開了一種金雀花堿的提取方法，包括CO2超臨界提取后通過大孔樹脂層析分離、丙酮重結(jié)晶、有機溶劑提取、酸化萃取、氧化鋁柱或硅膠柱層析、丙酮結(jié)晶等工序，工藝復雜，操作繁瑣。中國專利201110225551.4公開了披針葉黃華總生物堿和幾種高純度藥用物質(zhì)的分離方法，該發(fā)明以披針葉黃華為原料，通過酸水提取、離子樹脂吸附、大孔樹脂富集得到總生物堿，用高速逆流色譜法和制備液相色譜對總生物堿進行分離純化，得到高純度的金雀花堿、黃華堿、鷹爪豆堿和N-甲基金雀花堿，僅能進行實驗室小試，難以擴大應用。中國專利201210315804.1公開了一種牧馬豆中提取金雀花堿的方法，該發(fā)明以牧馬豆為提取原料，用有機溶劑脫脂后提取，再用硅膠層析分離，最后重結(jié)晶得金雀花堿；然而硅膠層析可能帶來二次污染，且純度并不高。中國專利200910023485.5公開了一種從披針葉黃華種籽中提取金雀花堿和黃華堿的方法，該發(fā)明以披針葉黃華種籽為提取原料，將披針葉黃華種籽粉碎、提取、濃縮得浸膏，再用有機溶劑萃取浸膏，酸水溶液反萃取、凈化萃取溶劑，同時得到含黃華堿的酸水溶液，此酸水溶液加入堿性試劑堿化，析晶，重結(jié)晶，可得到黃華堿產(chǎn)品；萃取過的浸膏堿化后用有機溶液萃取，濃縮，結(jié)晶，重結(jié)晶，可得到純度98%以上的金雀花堿產(chǎn)品；該方法工藝復雜，收·率不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決現(xiàn)有技術(shù)提取分離金雀花堿純度低、成本高、污染重、周期長的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、純度高、適于工業(yè)應用的金雀花堿的提取分離方法。
[0005]技術(shù)方案:本發(fā)明提供的一種金雀花堿的提取分離方法，包括以下步驟:
[0006](I)提取:將牧馬豆種子粉碎，加4-10倍質(zhì)量的有機溶劑水溶液，回流提取l_4h，提取液濃縮至質(zhì)量濃度為0.5~1.5g/ml，得到濃縮液；
[0007]( 2 )大孔樹脂聯(lián)用分離:
[0008]采用孔徑在130-300A。、比表面積在480_600m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂一次分離:將濃縮液調(diào)PH至8-9，加至大孔樹脂柱上靜置吸附；依次用5-10倍柱體積的純化水、5-10倍柱體積的10%-40%的乙醇水溶液洗脫，乙醇洗脫液濃縮至質(zhì)量濃度為0.5-1.5g/ml,得一次分離濃縮液；
[0009]采用孔徑在50-80A。、比表面積在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂二次分離:將一次分離濃縮液調(diào)PH至8-9，加至大孔樹脂柱上靜置吸附；依次用4-6倍量柱體積的純化水、4-6倍量柱體積的10%乙醇、5-10倍量柱體積的15-25%乙醇洗脫，收集15-25%乙醇洗脫液，濃縮、干燥，得固體；
[0010](3)重結(jié)晶:將步驟(2)得到的固體在溶劑中重結(jié)晶，即得。
[0011]其中，步驟(1)中，牧馬豆種子粉碎至10-60目；所述有機溶劑為乙醇或甲醇，有機溶劑水溶液的質(zhì)量百分比濃度為35%-95%。
[0012]其中，步驟(2)中，一次分離所使用的聚苯乙烯型非極性樹脂為X-5型大孔樹脂或AB-8型大孔樹脂。
[0013]其中，步驟(2)中，大孔樹脂在使用前還需要進行預處理，方法為:用高于樹脂層10-20厘米的乙醇浸泡3-4小時后放凈乙醇洗滌液，用相同方法反復洗滌至乙醇洗滌液在試管中加3倍量水不顯渾濁，再用清水洗滌至無乙醇味。
[0014]其中，步驟(2)中，一次分離條件:上樣量為0.01-0.2倍柱體積，靜置吸附時間為10-50分鐘，洗脫速度為l_5mL/min。
[0015]其中，步驟(2)中，二次分離所使用的聚苯乙烯型非極性樹脂為DM18型大孔樹脂或DM2型大孔樹脂。
[0016]其中，步驟(2)中，二次分離條件:上樣量為0.01-0.2倍柱體積，靜置吸附時間為20-40分鐘，洗脫速度為l_3mL/min。
[0017]其中，步驟(3)中，溶劑為甲醇、乙醇、乙醚或丙酮；固體與溶劑的用量比為Ig:(l-10)ml。
[0018]有益效果:本發(fā)明提供的金雀花堿的提取分離方法工藝簡單、操作簡便、原料來源方法、成本低廉，分離使用的材料再生簡單、無毒無污染，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0019]具體而言，本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有以下突出的優(yōu)勢:
[0020]1.本發(fā)明利用不同孔徑大孔樹脂對物質(zhì)的吸附能力不同，結(jié)合大孔樹脂的比表面積，經(jīng)過大量試驗篩選，最終選擇了兩種孔徑和比表面積不同的大孔樹脂聯(lián)用；應用特定的洗脫溶劑體系和特定的洗脫方法，通過柱分離實現(xiàn)高純度金雀花堿的富集和提取。
[0021 ] 2.本方法操作簡單，成本低廉，轉(zhuǎn)化率高，大孔樹脂可以反復利用，適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0022]3.本方法無毒無污染，完全做到了當今社會所提倡的綠色化學的概念，最終可得到含量在98%以上的金雀花堿。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1為本發(fā)明實施例1產(chǎn)物液相圖譜。
[0024]圖2為本發(fā)明實施例2產(chǎn)物液相圖譜。
[0025]圖3為本發(fā)明實施例3產(chǎn)物液相圖譜。
【具體實施方式】
[0026]根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。實施例1
[0027]取牧馬豆原料IOOkg進行粉碎，將上述處理所得的原料過10目篩，用8倍質(zhì)量的濃度為95%的乙醇回流提取I小時，得提取液。濃縮提取液至質(zhì)量濃度為1.0g/mL，調(diào)pH至
8.0，上預處理過的X-5型大孔樹脂柱(315 X 1500mm)，上樣量為0.1倍柱體積，靜置30min，依次用8倍柱體積的純水、8倍柱體積的10%的乙醇水溶液洗脫，洗脫速度為1.0mL/min,收集10%乙醇洗脫液，再濃縮至質(zhì)量濃度為1.0g/mL,調(diào)pH至9.0，上預處理好的DM18型大孔樹脂柱(315 X 1500mm)，上樣量為0.1倍柱體積，靜置30min，依次用5倍柱體積的純水、5倍柱體積的10%乙醇水溶液、8倍柱體積的20%乙醇水溶液洗脫，洗脫速度為1.0mL/min,收集20%乙醇洗脫液濃縮干燥得固體，用無水乙醇溶解，固體與無水乙醇的用量比為Ig:5ml，也可以用其他醇代替乙醇，例如甲醇，濃縮至金雀花堿結(jié)晶完全，得金雀花堿1.02kg,含量為99.658%，轉(zhuǎn)移率為 60.0%。
[0028]該實施例使用的X-5型大孔樹脂性能參數(shù)如下:
[0029]材料:交聯(lián)聚苯乙烯；
[0030]極性:非極性；
[0031]平均孔徑A:290-300A° ；
[0032]孔容:1.20-1.24mL/g ;
[0033]粒徑范圍:0.315-1.25mm ；
[0034]含水量:45-60%；
[0035]表觀密度:0.44-0.487g/mL ；
[0036]骨架密度1.03-1.078g/mL ；
[0037]比表面積:500_600m2/g。
[0038]該實施例使用的DM18型大孔樹脂性能參數(shù)如下:
[0039]材料:苯乙烯共聚體；
[0040]極性:非極性；
[0041]平均孔徑A:50-60A° ；
[0042]粒徑范圍:0.25-0.84mm ；
[0043]含水量:55-75%；
[0044]比表面積:1000-1100m2/g。
[0045]產(chǎn)品采用HPLC檢測純度，結(jié)果見圖1和表1。
[0046]表1實施例1的產(chǎn)品純度
【權(quán)利要求】
1.一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)提取:將牧馬豆種子粉碎，加4-10倍質(zhì)量的有機溶劑水溶液，回流提取l_4h，提取液濃縮至質(zhì)量濃度為0.5~1.5g/ml，得到濃縮液； (2)大孔樹脂聯(lián)用分離: 采用孔徑在130-300A。、比表面積在480-600m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂一次分離:將濃縮液調(diào)PH至8-9，加至大孔樹脂柱上靜置吸附；依次用5-10倍柱體積的純化水、5-10倍柱體積的10%-40%的乙醇水溶液洗脫，乙醇洗脫液濃縮至質(zhì)量濃度為0.5-1.5g/ml，得一次分離濃縮液； 采用孔徑在50-80A。、比表面積在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非極性樹脂二次分離:將一次分離濃縮液調(diào)PH至8-9，加至大孔樹脂柱上靜置吸附；依次用4-6倍量柱體積的純化水、4-6倍量柱體積的10%乙醇、5-10倍量柱體積的15-25%乙醇洗脫，收集15-25%乙醇洗脫液，濃縮、干燥，得固體； (3)重結(jié)晶:將步驟(2)得到的固體在溶劑中重結(jié)晶，即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(1)中，牧馬豆種子粉碎至10-60目；所述有機溶劑為乙醇或甲醇，有機溶劑水溶液的質(zhì)量百分比濃度為 35%-95%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(2)中，一次分離所使用的聚苯乙烯型非極性樹脂為X-5型大孔樹脂或AB-8型大孔樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(2)中，一次分離條件:上樣量為0.01·-0.2倍柱體積，靜置吸附時間為10-50分鐘，洗脫速度為1 -5mT ,/mi n n
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(2)中，二次分離所使用的聚苯乙烯型非極性樹脂為DM18型大孔樹脂或DM2型大孔樹脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(2)中，二次分離條件:上樣量為0.01-0.2倍柱體積，靜置吸附時間為20-40分鐘，洗脫速度為l-3mL/min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金雀花堿的提取分離方法，其特征在于:步驟(3)中，溶劑為甲醇、乙醇、乙醚或丙酮；固體與溶劑的用量比為Ig: (1-10) ml。
【文檔編號】C07D471/18GK103588773SQ201310549873
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月7日
【發(fā)明者】廖志新, 葉潤, 紀蘭菊, 孫洪發(fā), 胥廉謙, 施天一 申請人:東南大學