一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用。本發(fā)明涉及一種MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用，所述肽段選自下述氨基酸序列：SEQ?ID?NO：1，肽段的氨基酸序列為：CALPDTPSTLTPRSVR。含有該肽段的疫苗或藥物組合物，含該肽段和生理學(xué)上可接受的載體組合物、非特異性免疫反應(yīng)增強(qiáng)劑或上述肽段的變體，所述肽段“變體”是與所述肽段區(qū)別僅在于保守性替代和／或修飾、而仍保留了肽段的抗原性和／或免疫原性特性的肽段，肽段變體與已鑒定的肽段優(yōu)選有大于70％同一性。用含有該肽段作為疫苗或藥物組合物可以誘導(dǎo)出特異性的中和抗體對(duì)中東呼吸窘迫癥冠狀病毒(MERS-CoV)進(jìn)行中和，從而保護(hù)機(jī)體抵御MERS-CoV的感染，該MERS-CoV多肽可能成為理想的MERS-CoV預(yù)防／治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。
【專利說(shuō)明】—種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】本發(fā)明涉及一種具有中和活性的MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用，該疫苗可進(jìn)行免疫和疫苗接種，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]【背景技術(shù)】目前已知的能感染人的冠狀病毒共有六種，分別為20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒 HCoV-229E和 HCoV-0C43，2003 年新出現(xiàn)的 SARS (Severe acute respiratorysyndrome)冠狀病毒SARS_CoV，2004年發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒HCoV_NL63，2005年新發(fā)現(xiàn)的人冠狀病毒HCoV-HKUI以及2012年7月在中東地區(qū)出現(xiàn)的新型人冠狀病毒:中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒(MERS-CoV，曾稱 HCoV-EMC)[1]。
[0003]MERS-CoV是2012年在中東地區(qū)從一個(gè)患有急性呼吸道疾病的病人中發(fā)現(xiàn)的一種新SARS樣冠狀病毒，病人的臨床表現(xiàn)為急性呼吸道感染和腎功能衰竭。英國(guó)科學(xué)家通過(guò)對(duì)該病毒基因組測(cè)序及系統(tǒng)發(fā)生分析，發(fā)現(xiàn)該病毒為一種新的人冠狀病毒(GenBank:JX869059) [1]。該病毒基因組全長(zhǎng)30118bp，基因組結(jié)構(gòu)從5’端到3’端依次為:5’ -UTR-ORFlab-S-0RF3-0RF4a-0RF4b-0RF5-E-M-N-3’UTR，從系統(tǒng)發(fā)生學(xué)分析認(rèn)為該病毒屬于β類冠狀病毒的2c亞群，而與SARS基因組相似性為54.9% [2]。美國(guó)CDC的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，MERS-CoV病毒具有較高的致死率，從2012年4月至今全球已確診的114例患者中已死亡54例,死亡率達(dá)54% [3]?？梢?jiàn)該病毒具有極高的危險(xiǎn)性，很可能像SARS-CoV —樣造成嚴(yán)重的呼吸感染疫情暴發(fā)。對(duì)于該病毒的疫苗和治療藥物的研發(fā)儲(chǔ)備不容忽視。
[0004]在機(jī)體限制病毒進(jìn)入和傳播的適應(yīng)性免疫防御中，中和抗體發(fā)揮著十分關(guān)鍵的保護(hù)作用。研究顯示，冠狀病毒的S蛋白不僅是其親嗜性的主要決定因素，同時(shí)也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要抗原靶標(biāo)，因此冠狀病毒疫苗的研發(fā)通常以S蛋白作為主要免疫原。然而到目前為止，尚缺乏對(duì) 于新發(fā)MERS-CoV病毒S蛋白的免疫原性以及中和抗原表位的詳細(xì)資料。
[0005]我們通過(guò)生物信息學(xué)分析分析了 MERS-CoV病毒S蛋白可能B細(xì)胞表位，從中篩選了部分得分較高的合成肽進(jìn)行動(dòng)物免疫后發(fā)現(xiàn)，采用MERS-CoV病毒S蛋白的抗原結(jié)合區(qū)(RBD，aa367-606)以及736-761位氨基酸多肽(aa736_761)免疫的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中均能檢測(cè)到有效的MERS-CoV中和抗體。其中RBD為傳統(tǒng)的受體結(jié)合區(qū)域，已有數(shù)個(gè)研究小組的研究證明和提示其能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體[4_8]。而aa736-761的中和抗體誘導(dǎo)能力此前未見(jiàn)報(bào)道，為本研究小組最新發(fā)現(xiàn)和證明的MERS-CoV特異性中和抗體誘導(dǎo)抗原，同時(shí)也說(shuō)明其為MERS-CoV侵入細(xì)胞的潛在受體結(jié)合相關(guān)位點(diǎn)。
[0006]這一發(fā)現(xiàn)具有重要的意義，不僅可以幫助理解該新發(fā)病毒感染的過(guò)程和機(jī)制，也能為阻斷MERS-CoV感染提供新的疫苗設(shè)計(jì)思路。有望成為研發(fā)理想的MERS-CoV預(yù)防/治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]本發(fā)明解決的問(wèn)題在于提供一種MERS-CoV合成肽疫苗及其應(yīng)用，將MERS-CoV合成肽免疫動(dòng)物可以誘導(dǎo)出特異性的中和抗體。
[0008]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):[0009]—種中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽，其氨基酸殘基序列如SEQ.1D.N0.1所示。
[0010]所述的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽在制備針對(duì)中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的預(yù)防性/治療性疫苗的應(yīng)用。
[0011]所述的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽在制備抗中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的藥物的應(yīng)用。
[0012]所述的藥物為誘發(fā)針對(duì)中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒中和抗體的體液免疫應(yīng)答的藥物。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果:
[0014]本發(fā)明提供的中東呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒的合成肽，為全新的抗原表位區(qū)段，單獨(dú)免疫即能誘導(dǎo)產(chǎn)生病毒特異的中和抗體，表現(xiàn)出良好的免疫原性和免疫效果。因此，該MERS-CoV合成肽疫苗可能成為MERS-CoV預(yù)防/治療性候選疫苗的關(guān)鍵組分。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1:MERS_CoVS蛋白結(jié)構(gòu)及所用抗原所在位置示意圖。
[0016]圖2:免疫血清中抗原特異性IgG的滴度測(cè)定。
[0017]圖3:所誘導(dǎo)抗體血清對(duì)體外抗原的特異性識(shí)別。
[0018]圖4:不同合成肽所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體中和能力比較。
圖5:RBD和SP3(aa736-761)均能誘導(dǎo)產(chǎn)生MERS-CoV特異性中和抗體。
[0019]下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，所述是對(duì)本發(fā)明的解釋而不是限定。以下實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》(第三版，科學(xué)出版社，2005)等本領(lǐng)域常用工具書(shū)中所述的條件，或按試劑生產(chǎn)廠家所建議的條件進(jìn)行。
[0020]在MERS-CoV的表位中篩選部分合成肽作為疫苗進(jìn)行免疫，以達(dá)到針對(duì)MERS-CoV的免疫效果，從而達(dá)到預(yù)防/治療中東呼吸系統(tǒng)綜合癥的目的，該免疫效果主要為誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)MERS-CoV特異的中和抗體。
[0021]實(shí)施例1:鑒于上述目的，首先進(jìn)行表位肽的篩選與合成:
[0022]具體的MERS-CoV S蛋白表位肽選擇依據(jù)生物信息學(xué)軟件分析進(jìn)行優(yōu)選，如下表所示
[0023]
【權(quán)利要求】
1.一種中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的合成肽疫苗，其特征在于，其氨基酸殘基序列如SEQ.1D.N0.1 所示。
2.權(quán)利要求1所述的中東呼吸窘迫癥冠狀病毒合成肽在制備針對(duì)中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的預(yù)防性/治療性疫苗的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的中東呼吸窘迫癥冠狀病毒合成肽在制備抗中東呼吸窘迫癥冠狀病毒的藥物的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為誘發(fā)針對(duì)丙型肝炎病毒中和抗體 的體液免疫應(yīng)答的藥物。
【文檔編號(hào)】C07K14/165GK103724406SQ201310581981
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】譚文杰, 文波, 鄧瑤, 楊揚(yáng), 耿合員, 孟昕, 王惠娟 申請(qǐng)人:中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所