從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法
【專利摘要】一種從假葉樹中提取魯斯可皂苷元的方法，該從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法包括以下步驟：1）將假葉樹原料進(jìn)行水解，得到水解混合物；2）將步驟1）所得水解混合物進(jìn)行過濾并收集沉淀物；3）將步驟2）所得到的沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的1-10倍量有機(jī)溶劑提取，收集提取液；有機(jī)溶劑是乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、丙酮以及石油醚的一種或任意組合；4）將步驟3）所得提取液采用膜濃縮設(shè)備進(jìn)行濃縮同時(shí)收集濃縮液；5）將步驟4）所得濃縮液放入冰箱過夜，得粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶進(jìn)行重結(jié)晶，得到魯斯可皂苷元的白色粉末。本發(fā)明提供了一種有機(jī)溶劑使用量少、時(shí)間縮短以及節(jié)約成本的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法。
【專利說明】從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于皂苷元提取分離領(lǐng)域，涉及一種提取魯斯可皂苷元的方法，尤其涉及一種從假葉樹中提取魯斯可皂苷元的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]假葉樹(Ruscus aculeatus), 一種灌木，屬于天門冬科假葉樹屬植物，喜溫暖濕潤和陽光充足的環(huán)境，耐半陰，怕烈日暴曬，不耐寒。原產(chǎn)于歐亞，西歐和地中海沿岸地區(qū)。 假葉樹枝葉濃綠，常作為觀葉植物栽培，布置居室、廳堂等處，素雅大方，枝葉干燥后還可染色，作為裝飾品使用。另有醫(yī)學(xué)研究證明，假葉樹提取物可刺激血管內(nèi)皮生長因子的產(chǎn)生， 用于治療毛發(fā)病癥，特別是簇狀脫發(fā)和男性脫發(fā)。此外，假葉樹提取物也可與其它外用藥物合用誘導(dǎo)VEGF的產(chǎn)生來防止皮膚衰老。多項(xiàng)對(duì)照研究證實(shí)，假葉樹提取物的血管舒縮作用和靜脈張力增強(qiáng)作用，比金縷梅和歐洲七葉樹強(qiáng)烈得多。
[0003]魯斯可皂苷元(ruscogenin)，別名螺可吉寧，從百合科沿階草屬植物麥冬的塊根中提取而得。具有顯著的抗炎、降低毛細(xì)血管通透性、調(diào)節(jié)前列腺功能失調(diào)、抑制G+菌和抗彈性蛋白酶等作用。
[0004]現(xiàn)有文獻(xiàn)針對(duì)于魯斯可皂苷元提取分離的很少，專利200910233989.X “一種高效制備魯斯可單糖苷的方法”，采用25 (R/S)魯斯可為底物，利用菌株，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-7 天，發(fā)酵液采用有機(jī)溶劑萃取，硅膠柱層析分離，可得到魯斯可單糖苷。該方法耗時(shí)長，操作條件苛刻，而且有效成分回收率較低。
[0005]專利201110420165.0 “一種魯斯考皂苷元單體的分離純化方法”，采用甲醇提取， 加入濃硫酸水解，乙酸乙酯萃取，制備型高效液相色譜分離魯斯考皂苷元單體產(chǎn)品。該方法采用制備型高效液相色譜儀分離，操作復(fù)雜，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0006]專利00808244.8“通過酶水解制備假葉樹留類糖苷衍生物的方法”，將假葉樹糖苷加入黑曲霉提取的水解酶的酶粗品制備物進(jìn)行酶解的，去除葡萄糖和鼠李糖，轉(zhuǎn)化生成假葉樹素。該方法同樣采用酶水解糖苷，存在收率低，生產(chǎn)周期長等缺陷?！?br/>【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決【背景技術(shù)】中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種有機(jī)溶劑使用量少、時(shí)間縮短以及節(jié)約成本的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法。
[0008]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:本發(fā)明提供了一種從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特殊之處在于:所述從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法包括以下步驟:
[0009]I)將假葉樹原料進(jìn)行水解，得到水解混合物；
[0010]2)將步驟I)所得水解混合物進(jìn)行過濾并收集沉淀物；
[0011]3)將步驟2)所得到的沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的1-10倍量有機(jī)溶劑提取，收集提取液；所述有機(jī)溶劑是乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、丙酮以及石油醚的一種或任意組合；
[0012]4)將步驟3)所得提取液采用膜濃縮設(shè)備進(jìn)行濃縮同時(shí)收集濃縮液；[0013] 5)將步驟4)所得濃縮液放入冰箱過夜，得粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶進(jìn)行重結(jié)晶，得到魯斯可皂苷元的白色粉末。
[0014]上述步驟I)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:
[0015]1.1)將假葉樹原料加入原料質(zhì)量的0.5倍量的水中同時(shí)對(duì)其進(jìn)行粉碎得粉碎物；
[0016]1.2)在步驟1.1)所得到的粉碎物中加入原料質(zhì)量0.05-0.5倍量的吸附劑；
[0017]1.3)在經(jīng)過步驟1.2)后所得混合體系中加入原料2.5倍量的水?dāng)嚢杈鶆颍?br> [0018]1.4)在步驟1.3)所形成的反應(yīng)體系中加入酸性試劑，使酸性試劑的質(zhì)量濃度為 5%-30%，攪拌水解，水解時(shí)間為1-5小時(shí)，水解溫度為30°C _100°C，得到水解混合物。
[0019]上述吸附劑是氧化鋁、硅藻土以及硅膠中的一種或任意組合；所述酸性試劑是鹽酸、硫酸、冰醋酸以及甲酸中的任一種。
[0020]上述步驟1.2)中是在步驟1.1)所得到的粉碎物中加入原料質(zhì)量0.2倍量的吸附劑進(jìn)行吸附，所述酸性試劑的質(zhì)量濃度為15% ;所述水解溫度是90°C ;所述水解時(shí)間2h ;所述酸性試劑是硫酸；所述吸附劑是氧化鋁與硅藻土按重量比是3:2進(jìn)行的混合。
[0021]上述步驟2)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:
[0022]將步驟I)所得水解混合物進(jìn)行過濾，沉淀采用水洗至pH=2_7，水洗液棄去，得到并收集沉淀物；沉淀采用水洗至優(yōu)選pH=5。
[0023]上述步驟3)是將步驟2)所得到的沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的7倍量有機(jī)溶劑提??； 所述提取的溫度是30°C -80°C，優(yōu)選60°C ;所述有機(jī)溶劑是氯仿。
[0024]上述步驟4)所采用的膜濃縮設(shè)備中膜的截留分子量是100-2000，膜截留分子量優(yōu)選是200-400 ;所述濃縮是濃縮至原體積的1/10-1/2,優(yōu)選1/3。
[0025]上述步驟5)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:
[0026]5.1)將步驟4)所得濃縮液放入冰箱過夜，得到白色結(jié)晶；
[0027]5.2)將步驟5.1)所得到的白色結(jié)晶采用3-10倍量的有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解；所述有機(jī)溶劑是乙酸乙酯、氯仿以及乙醇其中一種溶劑進(jìn)行溶解；
[0028]5.3)在步驟5.2)所形成的反應(yīng)體系中加入結(jié)晶質(zhì)量1%_10%的活性炭加熱脫色， 加熱溫度是30°C -60°C，脫色I(xiàn)小時(shí)，過濾，濃縮至原體積的1/8-1/2，冰浴放置結(jié)晶，抽濾， 真空干燥，得魯斯可皂苷元白色粉末。
[0029]上述步驟5.2)是將步驟5.1)所得到的白色結(jié)晶采用4倍量的有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解； 所述有機(jī)溶劑是90%乙醇。
[0030]上述步驟5.3)中加熱的溫度是50°C;所述活性炭加入量為5% ;所述活性炭加熱脫色后濃縮至原體積的1/4。
[0031]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
[0032]本發(fā)明提高了一種從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，該方法采用假葉樹作為提取魯斯可皂苷元的原料，假葉樹原料含量高于傳統(tǒng)的麥冬原料，便于后續(xù)提取純化。 該發(fā)明選擇先水解再提取的實(shí)驗(yàn)方案，可避免酶解存在的收率低、轉(zhuǎn)化慢的不足，同先提取再水解相比后續(xù)有機(jī)溶劑使用量少，且時(shí)間縮短，節(jié)約成本。原料加水打漿，有利于水解完全，還可以縮短水解時(shí)間。吸附劑的加入不僅起到助濾的作用還可以將雜質(zhì)進(jìn)行吸附，達(dá)到初步分離的效果。沉淀加水洗至弱軟酸性，再采用有機(jī)溶劑提取，對(duì)有效成分的酚羥基有保護(hù)作用。氯仿對(duì)魯斯可皂苷元的選擇性好，雜質(zhì)引入較少。采用膜濃縮設(shè)備對(duì)提取液濃縮，不用加熱，溶劑消耗少，成本節(jié)約。而且通過選擇合適的分子截留量的膜，可以在濃縮的同時(shí)將小分子雜質(zhì)與目標(biāo)產(chǎn)物有效分離，不需柱層析，即可放置結(jié)晶。有效地節(jié)省了時(shí)間，同時(shí)提高了有效成分回收率。本發(fā)明從假葉樹中提取魯斯可皂苷元，該原料含量較麥冬高，便于魯斯可皂苷元的分離純化。本發(fā)明所提供的從假葉樹原料中提取魯斯可皂苷元的方法， 優(yōu)化提取步驟，降低生產(chǎn)成本，依據(jù)該方法所得的魯斯可皂苷元含量大于98%，有效成分回收率大于85%。
【具體實(shí)施方式】
[0033]本發(fā)明提供了一種從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，該方法包括以下步驟:
[0034]I)水解
[0035]假葉樹原料加入原料質(zhì)量的0.5倍量的水進(jìn)行粉碎得粉碎物，于上述粉碎物中加入原料質(zhì)量0.05-0.5倍量的吸附劑，再加入原料2.5倍量的水?dāng)嚢杈鶆?，于上述體系中加入酸性試劑，使得酸性試劑的質(zhì)量濃度為5%-30%，攪拌水解，水解時(shí)間為1-5小時(shí)，溫度為 300C _100°C，得到水解混合物；吸附材料為氧化鋁、硅藻土、硅膠中的一種或任意組合；酸性試劑為鹽酸、硫酸、冰醋酸、甲酸中的一種。
[0036]最佳提取條件為:加入原料質(zhì)量0.2倍量的吸附材料，酸性試劑的質(zhì)量濃度為 15%，水解溫度90°C，水解時(shí)間2h。
[0037]最佳酸性試劑為硫酸，最佳吸附材料為氧化鋁:硅藻土 =3:2。
[0038]采用酸水浸泡可以將原料中魯斯可皂苷的糖基水解。將原料加水打漿，可提高酸解的效率，加入吸附劑除了助濾作用外還可以初步除雜。
[0039]2)過濾
[0040]將步驟I)所得水解混合物進(jìn)行過濾，沉淀采用水洗至pH=2_7，水洗液棄去，得到沉淀物。水洗最佳PH=5。水洗至弱酸性，對(duì)有效成分有保護(hù)作用。
·[0041]3)提取
[0042]將步驟2)所得沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的1-10倍量有機(jī)溶劑提取，提取溫度 30°C-80°C，過濾得提取液，濾渣棄去。有機(jī)溶劑為乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、丙酮、石油醚的一種或任意組合。最佳倍量為7倍量，提取溫度為60°C。最佳有機(jī)溶劑為氯仿。
[0043]4)膜濃縮
[0044]將步驟3)所得提取液采用膜濃縮設(shè)備進(jìn)行濃縮，膜的截留分子量為100-2000，濃縮至原體積的1/10-1/2，得濃縮液。最佳膜截留分子量為200-400，濃縮至原體積的1/3。 采用膜濃縮可進(jìn)一步除雜。
[0045]5)重結(jié)晶
[0046]將步驟4)所得濃縮液放入冰箱過夜，得到白色結(jié)晶，將結(jié)晶采用3-10倍量乙酸乙酯、氯仿、乙醇其中一種溶解，加入結(jié)晶質(zhì)量1%_10%的活性炭加熱脫色，溫度30°C -60°C，脫色I(xiàn)小時(shí)，過濾，濃縮至原體積的1/8-1/2，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得白色粉末，該白色粉末為魯斯可皂苷元產(chǎn)品，含量98%，有效成分回收率均達(dá)到85%。最佳溶劑為90%乙醇，最佳倍量為4倍量，溫度為50°C，活性炭加入量為5%，濃縮至1/4。
[0047]實(shí)施例一:[0048]取IOOkg假葉樹原料，加入50kg水粉碎，粉碎后加入40kg硅藻土和250kg水?dāng)嚢杈鶆颍谏鲜龌旌衔矬w系中加入60kg冰醋酸(使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%)，90°C攪拌水解I小時(shí)， 過濾，沉淀水洗至pH=7。沉淀物中加入10倍量丙酮于70°C提取兩個(gè)小時(shí)，過濾。過濾液采用膜濃縮設(shè)備濃縮，選擇的膜截留分子量為200-400，濃縮至原體積量的1/10停止?jié)饪s。將濃縮液放入冰箱過夜，得白色結(jié)晶。將白色結(jié)晶加入8倍量乙酸乙酯溶解，加入8%活性炭， 60°C加熱I小時(shí)，過濾，濃縮至1/3，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得魯斯可皂苷元白色粉末。魯斯可皂苷元含量為92.7%，回收率為90%。
[0049]實(shí)施例二[0050]取IOOkg假葉樹原料，加入50kg水粉碎，粉碎后加入12kg氧化鋁、8kg硅藻土和 250kg水?dāng)嚢杈鶆?，于上述混合物體系中加入45kg硫酸(使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%)，90°C攪拌水解2小時(shí)，過濾，沉淀水洗至pH=5。沉淀物中加入7倍量氯仿于60°C提取兩個(gè)小時(shí)，過濾。 過濾液采用膜濃縮設(shè)備濃縮，選擇的膜截留分子量為200-400，濃縮至原體積量的1/3停止?jié)饪s。將濃縮液放入冰箱過夜，得白色結(jié)晶。將白色結(jié)晶加入4倍量90%甲醇溶解，加入5% 活性炭，50°C加熱I小時(shí)，過濾，濃縮至1/4，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得魯斯可皂苷元白色粉末。魯斯可皂苷元含量為98.9%，回收率為87%。
[0051]實(shí)施例三
[0052]取IOOkg假葉樹原料，加入50kg水粉碎，粉碎后加入5kg硅膠、5kg氧化鋁和250kg 水?dāng)嚢杈鶆?，于上述混合物體系中加入15kg甲酸(使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%)，50°C攪拌水解5小時(shí)，過濾，沉淀水洗至pH=4。沉淀物中加入5倍量乙醇于80°C提取兩個(gè)小時(shí)，過濾。過濾液采用膜濃縮設(shè)備濃縮，選擇的膜截留分子量為400-600，濃縮至原體積量的1/6停止?jié)饪s。 將濃縮液放入冰箱過夜，得白色結(jié)晶。將白色結(jié)晶加入5倍量氯仿溶解，加入5%活性炭， 40°C加熱I小時(shí)，過濾，濃縮至1/3，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得魯斯可皂苷元白色粉末。魯斯可皂苷元含量為92.1%，回收率為70%。
【權(quán)利要求】
1.一種從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法包括以下步驟:1)將假葉樹原料進(jìn)行水解，得到水解混合物；2)將步驟I)所得水解混合物進(jìn)行過濾并收集沉淀物；3)將步驟2)所得到的沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的1-10倍量有機(jī)溶劑提取，收集提取液； 所述有機(jī)溶劑是乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿、丙 酮以及石油醚的一種或任意組合；4)將步驟3)所得提取液采用膜濃縮設(shè)備進(jìn)行濃縮同時(shí)收集濃縮液；5)將步驟4)所得濃縮液放入冰箱過夜，得粗結(jié)晶，將粗結(jié)晶進(jìn)行重結(jié)晶，得到魯斯可皂苷兀的白色粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟I)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:1.1)將假葉樹原料加入原料質(zhì)量的0.5倍量的水中同時(shí)對(duì)其進(jìn)行粉碎得粉碎物；1.2)在步驟1.1)所得到的粉碎物中加入原料質(zhì)量0.05-0.5倍量的吸附劑；1.3)在經(jīng)過步驟1.2)后得到的混合體系中加入原料2.5倍量的水?dāng)嚢杈鶆颍?.4)在步驟1.3)所形成的反應(yīng)體系中加入酸性試劑，使酸性試劑的質(zhì)量濃度為 5%-30%，攪拌水解，水解時(shí)間為1-5小時(shí)，水解溫度為30°C _100°C，得到水解混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述吸附劑是氧化鋁、硅藻土以及硅膠中的一種或任意組合；所述酸性試劑是鹽酸、硫酸、冰醋酸以及甲酸中的任一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟1.2)中是在步驟1.1)所得到的粉碎物中加入原料質(zhì)量0.2倍量的吸附劑進(jìn)行吸附， 所述酸性試劑的質(zhì)量濃度為15% ;所述水解溫度是90°C;所述水解時(shí)間2h ;所述酸性試劑是硫酸；所述吸附劑是氧化鋁與硅藻土按重量比是3:2進(jìn)行的混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟2)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:將步驟I)所得水解混合物進(jìn)行過濾，沉淀采用水洗至pH=2-7，水洗液棄去，得到并收集沉淀物；沉淀采用水洗至優(yōu)選pH=5。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟3)是將步驟2)所得到的沉淀物采用沉淀物質(zhì)量的7倍量有機(jī)溶劑提??；所述提取的溫度是30°C -80°C，優(yōu)選60°C ;所述有機(jī)溶劑是氯仿。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于: 所述步驟4)所采用的膜濃縮設(shè)備中膜的截留分子量是100-2000，膜截留分子量優(yōu)選是 200-400 ;所述濃縮是濃縮至原體積的1/10-1/2，優(yōu)選1/3。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟5)的具體實(shí)現(xiàn)方式是:.5.1)將步驟4)所得濃縮液放入冰箱過夜，得到白色結(jié)晶；.5.2)將步驟5.1)所得到的白色結(jié)晶采用3-10倍量的有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解；所述有機(jī)溶劑是乙酸乙酯、氯仿以及乙醇其中一種溶劑進(jìn)行溶解；.5.3)在步驟5.2)所形成的反應(yīng)體系中加入結(jié)晶質(zhì)量1%_10%的活性炭加熱脫色，加熱溫度是30°C -60°C，脫色I(xiàn)小時(shí)，過濾，濃縮至原體積的1/8-1/2，冰浴放置結(jié)晶，抽濾，真空干燥，得魯斯可皂苷元白色粉末。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟5.2)是將步驟5.1)所得到的白色結(jié)晶采用4倍量的有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解；所述有機(jī)溶劑是90%乙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的從假葉樹中提取分離魯斯可皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟5.3)中加熱的溫度是50°C;所述活性炭加入量為5% ;所述活性炭加熱脫色后濃縮至 原體積的1/4。
【文檔編號(hào)】C07J71/00GK103588852SQ201310618689
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】王曉瑩, 肖紅, 張瑜, 王春德 申請(qǐng)人:陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司