從常春藤葉中分離常春藤苷c及苷元的方法
【專利摘要】一種從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法，該方法包括：1）將干燥的常春藤葉子粉碎，加入5-8倍量的含水的有機溶劑進行提取，收集提取液并減壓濃縮成浸膏；2）將浸膏加少量水分散，使用有機溶劑進行萃取，減壓濃縮回收試劑并形成萃取后的浸膏；3）將萃取后的浸膏溶于甲醇或乙醇中，緩慢加入5-10倍混合溶液，直到不再產(chǎn)生沉淀為止，過濾并收集沉淀；所述混合溶液是正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇以及丙酮中的任意兩種或三種混合；4）將沉淀熱溶解后重結(jié)晶，加入吸附劑吸附除雜，冰浴冷卻，反復(fù)結(jié)晶得到常春藤苷C。本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性好、成本低廉以及操作方法簡單的從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法。
【專利說明】從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離純化【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種常春藤苷C及苷元的分離方法，尤其涉及一種從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]常春藤，又名洋常春藤、長春藤、鉆天蜈蚣(四川樂山地區(qū))、土常春藤等，五加科常春藤屬植物。具有祛風(fēng)、利濕、平肝、解毒之功效。能有效的抵制尼古丁中的致癌物質(zhì)，吸收甲醛等有毒物質(zhì)。其葉提取物中的常春藤苷C具有優(yōu)秀的祛痰，解痙等作用，在臨床上已經(jīng)用于治療呼吸道疾病。
[0003]主要品種:中華常春藤、日本常春藤、彩葉常春藤、金心常春藤、銀邊常春藤等。莖中含鞣質(zhì)(12.01%)、樹脂等；葉含常春藤苷、肌醇、胡蘿卜素、糖類，除此之外含鞣質(zhì)29.4%。歐洲藥典規(guī)定葉中常春藤苷C含量約3%。查閱相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)其葉中的含量約為莖桿的3-4倍。
[0004]目前，關(guān)于從常春藤中提取常春藤苷C及其苷元方面報道的文獻(xiàn)較少，其中:“童星，中華常春藤中皂苷類成分和揮發(fā)油分離分析研究”，碩士學(xué)位論文中報道了中華常春藤總皂甙的提取及其分離，比較了溶劑提取、微波提取及生物酶等提取方法，再經(jīng)過不同大孔樹脂純化，制備型反相高效液相色譜分離等手段得到純度87%的常春藤皂甙C。該工藝使用制備型色譜純化技術(shù)分離苷C，成本高，技術(shù)復(fù)雜，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]有關(guān)文獻(xiàn)中也提到了不同原料中常春藤皂苷元的研究，如:“婁方明，周旭美，張茂生.超聲提取山銀花中常春藤皂苷元的工藝研究.遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2011，34(5) =480-483"及“盧永翎，于艙，朱婷婷.七葉蓮中特征成分常春藤皂苷元及齊墩果酸的測定研究.藥物分析雜志，2012，32 (11):1945-1949"等文獻(xiàn)中也提到了常春藤皂苷元的提取，但主要是集中在其液相含量的檢測方法上，并未對其單體含量的富集做出相關(guān)報道。
[0006]除此之外，有關(guān)常春藤苷C的專利的報道主要如下:
[0007]1、一種從常春藤中提取制備單體常春藤苷C的方法在專利CN101235068A中有所報道。將常春藤莖干燥粉碎，乙醇水提取，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，正丁醇相經(jīng)乙醇溶解，乙酸乙酯沉淀，硅膠柱分離純化得到含量大于98%的常春藤苷C單體。該發(fā)明雖然可以得到高純度的苷C單體，但是工藝復(fù)雜，成本高，而且使用了石油醚、氯仿等高危險性試劑，對健康有害。
[0008]2、有關(guān)常春藤苷C及總皂苷的提取分離在專利CN102188465A中也有所提及。常春藤屬植物乙醇水提取后，經(jīng)大孔吸附樹脂純化得到含量不低于30%的總皂苷。
[0009]3、中國專利CN1767842A中僅涉及了一種將常春藤苷C轉(zhuǎn)化為α-常春藤素的方法。將干燥的常春藤葉子粉碎后進行發(fā)酵，再加入高醇進行欲膨脹，最后經(jīng)醇水滲濾可使常春藤苷C完全轉(zhuǎn)化成α-常春藤素。
[0010]4、中國專利CN1856317A中公開了常春藤葉提取物的制備方法以及用這種方法制備的提取物，該專利主要是發(fā)明了一種富含4% α -常春藤素和6.5%常春藤苷C混合制備的高效提取物。其中未明確報道常春藤苷C和α-常春藤素的提取方法，且含量均較低，與目前市場上要求的規(guī)格有一定的差距。
[0011]5、專利CN102633857A中涉及到了提取常春藤皂苷元的方法，以續(xù)斷為原料，酸醇水解，乙醇提取，再經(jīng)超濾膜過濾即可得到常春藤皂苷元單體。該專利涉及到超濾膜過濾，生產(chǎn)成本較高。
[0012]6、專利CN101125880A中提及了從維藥瘤果黑種草籽中直接提取常春藤皂苷元的方法，原料脫脂后醇提、萃取、大孔吸附樹脂分離、硅膠柱進一步純化、氯仿甲醇重結(jié)晶得到常春藤皂苷元。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]為了解決【背景技術(shù)】中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定性好、成本低廉以及操作方法簡單的從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法。
[0014]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:本發(fā)明提供了一種從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法，其特殊之處在于:所述從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法包括以下步驟:
[0015]I)將干燥的常春藤葉子粉碎，加入5-8倍量的含水的有機溶劑進行提取，收集提取液并減壓濃縮成浸膏；
[0016]2)將步驟I)所得到的浸膏加少量水分散，使用有機溶劑進行萃取，減壓濃縮回收試劑并形成萃取后的浸膏；
[0017]3)將步驟2)所得的萃取后的浸膏溶于甲醇或乙醇中，緩慢加入5-10倍混合溶液，直到不再產(chǎn)生沉淀為止，過濾并收集沉淀；所述混合溶液是正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇以及丙酮中的任意兩種或三種混合；
[0018]4)將步驟3)所得到的沉淀熱溶解后重結(jié)晶，加入吸附劑吸附除雜，冰浴冷卻，反復(fù)結(jié)晶得到常春藤苷C。
[0019]上述步驟I)中提取的條件是:溫度是50-90°C;提取1-3次，每次提取時間不低于
1.5h;所述提取所用的有機溶劑是甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮以及正丁醇中的一種或任意混合。
[0020]上述提取所用的有機溶劑是70%乙醇溶液；所述有機溶劑的使用量是常春藤葉子重量的6倍量；所述提取的次數(shù)是3次，提取的溫度是80°C。
[0021]上述步驟2)中所用的有機溶劑是正己烷、氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇中的一種或任意混合，優(yōu)選水飽和的正丁醇溶液。
[0022]上述步驟3)中所用的混合溶液是乙酸乙酯-丙酮溶液；所述乙酸乙酯-丙酮溶液是按百分比3:7進行混合的；所述混合溶液的使用量是步驟2)所得的萃取后的浸膏的7倍量。
[0023]上述步驟4)是將步驟3)所得到的沉淀經(jīng)甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中的任意兩種或任意三種的混合溶劑經(jīng)過熱溶解后重結(jié)晶；所述吸附劑是活性硅藻土、活性氧化鎂或活性炭。
[0024]上述步驟4)中所用的混合溶劑是氯仿-乙醇溶液，所述氯仿-乙醇的比例是按體積比1:4進行混合的；所述吸附劑是活性炭；所述活性炭的用量是所溶解沉淀質(zhì)量的10%。[0025]—種從常春藤葉中分離常春藤皂苷元的方法，其特殊之處在于:所述方法包括:
[0026]I)根據(jù)如上所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法得到常春藤苷C ；
[0027]2)將步驟I)所得到的常春藤苷C進行皂苷元水解。
[0028]上述步驟2)的具體實現(xiàn)方式是:
[0029]將步驟I)中所得到常春藤苷C中加入有機溶劑溶解后進行酸水解，所述酸水解的溫度是50-90°C，水解時間是2-5h ;水解結(jié)束后放置冷卻，加入1-3倍蒸餾水稀釋，回收有機溶劑，過濾沉淀并水洗至中性，乙醇結(jié)晶得到常春藤皂苷元；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮以及正丁醇中的一種；所述水解所用的酸是甲酸、乙酸、檸檬酸、鹽酸或硫酸；所述有機溶液中酸的濃度為3-10% ；
[0030]上述步驟2)中進行酸水解所用的有機溶劑是乙醇，所述酸水解所用的酸是無機濃鹽酸，所述乙醇溶液中酸的濃度為5%，所述酸水解溫度是70°C，所述酸水解的時間是3h。
[0031]本發(fā)明的優(yōu)點是:
[0032]本發(fā)明提供了一種從常春藤葉中分離常春藤苷C及常春藤皂苷元的方法，該方法以干燥常春藤葉為原料，采用乙醇水體系進行提取，濃縮，正丁醇萃取除去水溶性雜質(zhì)，再經(jīng)混合溶劑沉淀、重結(jié)晶等工藝分離出含量大于98%的常春藤苷C，再經(jīng)酸醇水解得到常春藤皂苷元單體。摒棄常規(guī)大孔吸附樹脂及硅膠柱純化等手段，將常春藤苷C富集至一定含量后再水解得到單體皂苷元，與原料直接水解相比給出了高含量苷C的富集方法，更能滿足對常春藤苷C及皂苷元不同規(guī)格的多方面要求，并且操作方法簡單，成本低，收率穩(wěn)定，生產(chǎn)實用性高，解決了現(xiàn)有技術(shù)中常春藤苷C及苷元提取純化方面的不足的問題。具體而言，本發(fā)明通過簡單的浸提、萃取、精致及水解等簡單工藝即可得到含量大于98%的常春藤苷C及其皂苷元單體；采用混合溶劑代替大孔吸附樹脂或硅膠樹脂對常春藤苷C進行分離純化，顯著降低了生產(chǎn)成本，且穩(wěn)定性好、易操作，適用于工業(yè)化生產(chǎn)；本發(fā)明既提出了單體常春藤苷C的富集，并且給出了每個步驟中常春藤苷C的含量，實現(xiàn)了目前市場上有關(guān)常春藤苷C任何規(guī)格的生產(chǎn)要求；同時也分離出了單體皂苷元，可滿足對原料活性成分的多方面要求。
【具體實施方式】
[0033]本發(fā)明提供了一種從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法，該從常春藤葉中分離常春藤苷C及苷元的方法包括以下步驟:
[0034]I)將干燥的常春藤葉子粉碎，加入5-8倍量的含水的有機溶劑進行提取，收集提取液并減壓濃縮成浸膏；
[0035]提取的條件是:溫度是50_90°C ;提取1-3次，每次提取時間不低于1.5h ;提取所用的有機溶劑是甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮以及正丁醇中的一種或任意混合。提取所用的有機溶劑是70%乙醇溶液；有機溶劑的使用量是常春藤葉子重量的6倍量；提取的次數(shù)是3次，提取的溫度是80°C。
[0036]2)將步驟I)所得到的浸膏加少量水分散，使用有機溶劑進行萃取，減壓濃縮回收試劑并形成萃取后的浸膏；
[0037]所用的有機溶劑是正己烷、氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇中的一種或任意混合，優(yōu)選水飽和的正丁醇溶液。[0038]3)將步驟2)所得的萃取后的浸膏溶于甲醇或乙醇中，緩慢加入5-10倍混合溶液，直到不再產(chǎn)生沉淀為止，過濾并收集沉淀；混合溶液是正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇以及丙酮中的任意兩種或三種混合；
[0039]所用的混合溶液是乙酸乙酯-丙酮溶液；乙酸乙酯-丙酮溶液是按百分比3:7進行混合的；混合溶液的使用量是步驟2)所得的萃取后的浸膏的7倍量。
[0040]4)將步驟3)所得到的沉淀經(jīng)甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中的任意兩種或任意三種的混合溶劑經(jīng)過熱溶解后重結(jié)晶，加入吸附劑吸附除雜，冰浴冷卻，反復(fù)結(jié)晶得到常春藤苷C ;吸附劑是活性硅藻土、活性氧化鎂或活性炭?；旌先軇﹥?yōu)選是氯仿-乙醇溶液，氯仿-乙醇的比例是按體積比1:4進行混合的；吸附劑是活性炭；活性炭的用量是所溶解沉淀質(zhì)量的10%。 [0041]同時，本發(fā)明還提供了一種從常春藤葉中分離常春藤皂苷元的方法，該方法包括:
[0042]I)根據(jù)如上的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法得到常春藤苷C ；
[0043]2)將步驟I)所得到的常春藤苷C進行皂苷元水解。
[0044]步驟2)的具體實現(xiàn)方式是:
[0045]將步驟I)中所得到常春藤苷C中加入有機溶劑溶解后進行酸水解，酸水解的溫度是50-90°C，水解時間是2-5h ;水解結(jié)束后放置冷卻，加入1-3倍蒸餾水稀釋，回收有機溶劑，過濾沉淀并水洗至中性，乙醇結(jié)晶得到常春藤皂苷元；有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮以及正丁醇中的一種；水解所用的酸是甲酸、乙酸、檸檬酸、鹽酸或硫酸；有機溶液中酸的濃度為 3-10% ；
[0046]步驟2)中進行酸水解所用的有機溶劑是乙醇，酸水解所用的酸是無機濃鹽酸，乙醇溶液中酸的濃度為5%，酸水解溫度是70°C，酸水解的時間是3h。
[0047]發(fā)明人采用如下兩個實施例對本發(fā)明進行詳細(xì)說明:
[0048]實施例1:
[0049]取5kg已粉碎的常春藤干燥葉子，加入6倍量70%乙醇80°C提取1.5h，過濾，濾渣以同樣方式處理兩次，合并提取液，減壓濃縮至浸膏。
[0050]加入少量水進行分散，加入等倍量水飽和的正丁醇進行萃取，萃取3-4次，至萃取液顏色明顯變淺為止，收集正丁醇相，減壓濃縮回收試劑得總皂甙。以少量甲醇溶解，加入液體量7倍的乙酸乙酯-丙酮(3:7)混合液，靜置至不再產(chǎn)生沉淀為止，過濾不溶物，反復(fù)操作兩次，合并兩次得到的沉淀。
[0051]向上述得到的沉淀中加入一定量的氯仿-乙醇(1:4)加熱溶解，過濾，向該濾液中加入10%活性炭脫色30min，過濾，靜置，反復(fù)操作得白色粉末狀物質(zhì)173g，經(jīng)液相色譜檢測為常春藤苷C，其含量為98.1%。
[0052]取100g上述得到的常春藤苷C，加入70%乙醇溶解，加入定量的鹽酸，使其乙醇溶液中酸的濃度為5%，70°C條件下水解3h，放置冷卻，加入3倍蒸餾水稀釋，減壓回收乙醇，抽濾沉淀并水洗至中性，乙醇結(jié)晶得白色結(jié)晶粉末35g，液相色譜檢測為常春藤皂苷元，含量為 99.2%ο
[0053]實施例2:
[0054]取IOkg粉碎的常春藤干燥葉子，8倍量60%乙醇80°C提取，提取三次，每次1.5h，過濾，合并提取液，減壓濃縮至浸膏。
[0055] 水分散后，加入等倍量水飽和的正丁醇進行萃取，萃取3-4次，收集正丁醇相，減壓濃縮得總皂甙。以少量乙醇溶解，加入液體量10倍的乙酸乙酯-丙酮(3:7)混合液，使皂甙完全沉淀，過濾，反復(fù)操作兩次，將過濾得到的沉淀合并。
[0056]加入適量氯仿-乙醇(1:4)加熱溶解，過濾，向該濾液中加入5%活性炭脫色30min,過濾，靜置，反復(fù)操作得白色粉末狀物質(zhì)360g，經(jīng)液相色譜檢測為常春藤苷C，其含量為97.4%ο
[0057]取上述得到的常春藤苷C300g，加入80%乙醇溶解，加入定量的鹽酸，使其乙醇溶液中酸的濃度為3%，70°C條件下水解3h，放置冷卻，加入等倍量蒸餾水稀釋，減壓濃縮回收乙醇，抽濾沉淀并水洗至中性，乙醇結(jié)晶得白色結(jié)晶粉末112g，液相色譜檢測為常春藤皂苷元，含量為98.5%。
【權(quán)利要求】
1.一種從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法包括以下步驟: 1)將干燥的常春藤葉子粉碎，加入5-8倍量的含水的有機溶劑進行提取，收集提取液并減壓濃縮成浸膏； 2)將步驟I)所得到的浸膏加少量水分散，使用有機溶劑進行萃取，減壓濃縮回收試劑并形成萃取后的浸膏； 3)將步驟2)所得的萃取后的浸膏溶于甲醇或乙醇中，緩慢加入5-10倍混合溶液，直到不再產(chǎn)生沉淀為止，過濾并收集沉淀；所述混合溶液是正己烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇以及丙酮中的任意兩種或三種混合； 4)將步驟3)所得到的沉淀熱溶解后重結(jié)晶，加入吸附劑吸附除雜，冰浴冷卻，反復(fù)結(jié)晶得到常春藤苷C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述步驟I)中提取的條件是:溫度是50-90°C ;提取1-3次，每次提取時間不低于1.5h ;所述提取所用的有機溶劑是甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮以及正丁醇中的一種或任意混合。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述提取所用的有機溶劑是70%乙醇溶液；所述有機溶劑的使用量是常春藤葉子重量的6倍量；所述提取的次數(shù)是3次，提取的溫度是80°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述步驟2)中所用的有機溶劑是正己烷、氯仿、乙酸乙酯以及正丁醇中的一種或任意混合，優(yōu)選水飽和的正丁醇溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述步驟3)中所用的混合溶液是乙酸乙酯-丙酮溶液；所述乙酸乙酯-丙酮溶液是按百分比3:7進行混合的；所述混合溶液的使用量是步驟2)所得的萃取后的浸膏的7倍量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述步驟4)是將步驟3)所得到的沉淀經(jīng)甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇中的任意兩種或任意三種的混合溶劑經(jīng)過熱溶解后重結(jié)晶；所述吸附劑是活性硅藻土、活性氧化鎂或活性炭。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法，其特征在于:所述步驟4)中所用的混合溶劑是氯仿-乙醇溶液，所述氯仿-乙醇的比例是按體積比1:4進行混合的；所述吸附劑是活性炭；所述活性炭的用量是所溶解沉淀質(zhì)量的10%。
8.一種從常春藤葉中分離常春藤皂苷元的方法，其特征在于:所述方法包括: 1)根據(jù)權(quán)利要求1-7任一權(quán)利要求所述的從常春藤葉中分離常春藤苷C的方法得到常春藤苷C ; 2)將步驟I)所得到的常春藤苷C進行皂苷元水解。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的從常春藤葉中分離常春藤皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟2)的具體實現(xiàn)方式是: 將步驟I)中所得到常春藤苷C中加入有機溶劑溶解后進行酸水解，所述酸水解的溫度是50-90°C，水解時間是2-5h ;水解結(jié)束后放置冷卻，加入1-3倍蒸餾水稀釋，回收有機溶劑，過濾沉淀并水洗至中性，乙醇結(jié)晶得到常春藤皂苷元；所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮以及正丁醇中的一種；所述水解所用的酸是甲酸、乙酸、檸檬酸、鹽酸或硫酸；所述有機溶液中酸的濃度為3-10%。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的從常春藤葉中分離常春藤皂苷元的方法，其特征在于:所述步驟2)中進行酸水解所用的有機溶劑是乙醇，所述酸水解所用的酸是無機濃鹽酸，所述乙醇溶液中酸的濃度為5%，所述酸·水解溫度是70°C，所述酸水解的時間是3h。
【文檔編號】C07H1/08GK103588832SQ201310618958
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】張瑜, 肖紅, 王曉瑩, 王春德 申請人:陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司