一種高含量egcg的提純方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高含量EGCG的提純方法，包括將含有目標(biāo)成分的液體或浸膏進(jìn)行結(jié)晶的步驟，其中：在結(jié)晶步驟中，結(jié)晶時(shí)的溫度控制在4～8℃，整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，攪拌速率為100～300rpm。本發(fā)明通過在特定溫度下采用100～300rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌結(jié)晶的方式，在不需要加入晶種的條件下，使晶體慢慢均勻析出，所得晶體顆粒較粗且顆粒均勻，更容易實(shí)現(xiàn)晶體的分離及雜質(zhì)的去除，且獲得的晶體EGCG含量高，晶體的回收率高。
【專利說明】一種高含量EGCG的提純方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種高含量EGCG的提純方法。
【背景技術(shù)】
[0002]EGCG，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯，是從綠茶中提取的一種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，占綠茶毛重的9%~13% ;EGCG是綠茶茶多酚的主要組成成分，也是綠茶兒茶素類的主要成分，它占綠茶兒茶素類總量的10~15%。因?yàn)榫哂刑厥獾牧Ⅲw化學(xué)結(jié)構(gòu)，EGCG是綠茶中最有效的抗氧化多酚，具有抗氧化、抗癌、抗突變等活性，抗氧化活性至少是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害，這種損害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有關(guān)，EGCG的這些功效歸結(jié)于它們對(duì)氧自由基的清除(抗氧化)能力。
[0003]現(xiàn)有的對(duì)EGCG的提取純化方法主要有溶劑提取法、離子沉淀法、超臨界萃取法、高速逆流層和膜分離技術(shù)結(jié)合凝膠柱分離制備方法?，F(xiàn)有的含有結(jié)晶步驟的提純方法中，在將含有目標(biāo)成分的液體或浸膏進(jìn)行結(jié)晶時(shí)，結(jié)晶都在靜置條件下進(jìn)行，但靜置結(jié)晶的方式不容易析出晶體。采用在靜置結(jié)晶過程中加入少量高含量EGCG晶體作為晶種的方法，雖然可以達(dá)到更快速地結(jié)出晶體的目的，但是，在加入晶種后，析出的晶體容易包埋雜質(zhì)，這在一定程度上會(huì)降低晶體中EGCG的含量，特別是當(dāng)?shù)秃縀GCG茶多酚經(jīng)大孔樹脂柱純化后所得的洗脫液，或者是 由該所得洗脫液經(jīng)濃縮后得到的浸膏直接進(jìn)行結(jié)晶時(shí)，所得晶體中EGCG的含量較低，通常在90%左右，達(dá)不到95%的含量要求；另一方面，采用在靜置結(jié)晶過程中加入晶種的結(jié)晶方式所獲得的晶體在較細(xì)，在分離晶體時(shí)容易出現(xiàn)堵塞現(xiàn)象，晶體的洗滌也不便。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種高含量EGCG的提純方法。該方法通過改變結(jié)晶條件，在不需要加入晶種的條件下可以獲得高EGCG含量的晶體，且晶體的回收率高。
[0005]本發(fā)明所述的高含量EGCG的提純方法，包括將含有目標(biāo)成分的液體或浸膏進(jìn)行結(jié)晶的步驟，與現(xiàn)有技術(shù)不同的是:在結(jié)晶步驟中，結(jié)晶時(shí)的溫度控制在4~8°C，整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，攪拌速率為100~300rpm。通過在特定溫度下采用100~300rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌結(jié)晶的方式，在不需要加入晶種的條件下，使晶體慢慢均勻析出，晶體較粗且顆粒均勻，更容易實(shí)現(xiàn)晶體的分離及雜質(zhì)的去除，且獲得的晶體EGCG含量高，晶體的回收率也高。
[0006]上述技術(shù)方案中，當(dāng)結(jié)晶時(shí)的溫度控制在4~6°C，攪拌速率控制在150~250rpm時(shí)，可以使獲得的晶體中EGCG的含量及收率更高。
[0007]上述技術(shù)方案中，整個(gè)結(jié)晶過程的時(shí)間為10~30h，當(dāng)整個(gè)結(jié)晶時(shí)間在10~24h范圍內(nèi)時(shí)，隨著時(shí)間的延長，析出的晶體增加明顯，當(dāng)結(jié)晶時(shí)間超過24h后，析出晶體的增多不明顯。[0008]上述技術(shù)方案中，所述的含有目標(biāo)成分的液體或浸膏可以是通過現(xiàn)有常規(guī)的對(duì)EGCG的提取純化方法中獲得的含有EGCG目標(biāo)成分的液體或浸膏，但當(dāng)含有目標(biāo)成分的液體或浸膏是指由低含量EGCG茶多酚經(jīng)大孔樹脂柱純化后所得的洗脫液，或者是由該所得洗脫液經(jīng)濃縮后得到的浸膏時(shí)，采用本發(fā)明所述方法的效果最為顯著，可使獲得的晶體EGCG含量達(dá)95%以上(HPLC法)；與其它條件相同而采用添加晶種的靜置析晶方式相比，晶體的回收率高提高15%以上。這里所指的大孔樹脂是指現(xiàn)有技術(shù)中用于分離EGCG的常規(guī)大孔吸附樹脂，通常為大孔吸附樹脂的型號(hào)可以是0101、0102、0103、即-20、即0-600、48-8、HP20SS、SP20SS、或S-8等。當(dāng)含有目標(biāo)成分的液體或浸膏上大孔樹脂柱層析后，用于洗脫的溶劑與現(xiàn)有技術(shù)相同，通常以20~30%(v/v)乙醇作為洗脫劑，洗脫過程中用薄層層析跟蹤檢測(cè)以收集含目標(biāo)成分的洗脫液。這里所指的低含量EGCG茶多酚通常是指EGCG含量為5~40wt%的茶多酚，可以直接從市場(chǎng)上購買，也可采用現(xiàn)有常規(guī)方法自行制備。當(dāng)以EGCG含量為10~20wt%的茶多酚為原料時(shí)采用本發(fā)明所述方法的效果相對(duì)來說更顯著。
[0009]為了獲得更高的收率，上述技術(shù)方案優(yōu)選還包括重結(jié)晶步驟，在重結(jié)晶步驟中，重結(jié)晶的溫度控制在4~8°C，整個(gè)重結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，攪拌速率為100~300rpm。這里用于重結(jié)晶的溶劑與現(xiàn)有技術(shù)相同，通常為20~95%(v/v)的乙醇。重結(jié)晶步驟中，重結(jié)晶的溫度優(yōu)選控制在4~6°C，攪拌速率優(yōu)選為150~250rpm。
[0010]本發(fā)明所述方法的具體步驟包括:
[0011]I)以低含量EGCG茶多酚為原料，加水溶解；
[0012]2)所得溶解液上大孔樹脂柱，先用水洗樹脂柱至流出液無色，再用20~30%(v/v)乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，收集醇洗脫液；
[0013]3)將收集的醇洗脫液濃縮至浸膏(40~60%的固形物)，將浸膏送入結(jié)晶罐中(也可以將收集的醇洗脫液直接送入結(jié)晶罐中進(jìn)行結(jié)晶)，控制結(jié)晶罐內(nèi)溫度為4~8°C，開啟攪拌，使整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，控制攪拌速率為100~300rpm ；
`[0014]4)將結(jié)晶物抽濾，晶體水洗，干燥，即得到高含量EGCG。
[0015]當(dāng)本發(fā)明所述方法還包括重結(jié)晶步驟時(shí)，只要將上述獲得的高含量EGCG用重結(jié)晶溶劑溶解，再送入結(jié)晶罐中進(jìn)行重結(jié)晶即可，在重結(jié)晶過程中，控制結(jié)晶罐內(nèi)溫度為4~8°C，使整個(gè)重結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，控制攪拌速率為100~300rpm。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的特點(diǎn)在于:
[0017]1、通過在特定溫度下采用100~300rpm的轉(zhuǎn)速進(jìn)行攪拌結(jié)晶的方式，在不需要加入晶種的條件下，使晶體慢慢均勻析出，所得晶體顆粒較粗且顆粒均勻，更容易實(shí)現(xiàn)晶體的分離及雜質(zhì)的去除，且獲得的晶體EGCG含量高，晶體的回收率高。
[0018]2、當(dāng)含有目標(biāo)成分的液體或浸膏限定為是由低含量EGCG茶多酚經(jīng)大孔樹脂柱純化后所得的洗脫液，或者是由該所得洗脫液經(jīng)濃縮后得到的浸膏時(shí)，采用本發(fā)明所述方法的效果最為顯著，可使獲得的晶體EGCG達(dá)95%以上(HPLUi);與其它條件相同而采用添加晶種的靜置析晶方式相比，晶體的回收率高提高15%以上。當(dāng)在結(jié)晶之后再進(jìn)行重結(jié)晶的步驟時(shí)，晶體的回收率與其它條件相同而采用添加晶種的靜置析晶方式相比可提高20%以上。
【具體實(shí)施方式】[0019]下面以具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0020]實(shí)施例1
[0021]I)取EGCG含量為10wt%的茶多酚(桂林萊茵生物科技股份有限公司生產(chǎn))200g置于400ml純凈水中超聲溶解30min ；
[0022]2)所得溶解液上DlOl大孔樹脂柱，先用水洗樹脂柱至流出液無色，再用20%(v/v)乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測(cè)，收集醇洗脫液；
[0023]3)將收集的醇洗脫液減壓濃縮至浸膏(50%的固形物)，將浸膏送入結(jié)晶罐中，用冷卻循環(huán)水降溫，控制結(jié)晶罐內(nèi)溫度為4°C，開啟攪拌進(jìn)行攪拌結(jié)晶24h，使整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，控制攪拌速率為IOOrpm;
[0024]4)將結(jié)晶物抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物10.68g。HPLC檢測(cè)EGCG 含量 95.33%。
[0025]對(duì)比例I
[0026]I)取EGCG含量為10wt%的茶多酚(桂林萊茵生物科技股份有限公司生產(chǎn))200g置于400ml純凈水中超聲溶解30min ；
[0027]2)所得溶解液上DlOl大孔樹脂柱，先用水洗樹脂柱至流出液無色，再用20%(v/v)乙醇洗脫，薄層層析跟蹤 檢測(cè)，收集醇洗脫液；
[0028]3)將收集的醇洗脫液減壓濃縮至浸膏(50%的固形物)，將浸膏送入結(jié)晶罐中，向結(jié)晶罐中加入0.2g的高含量EGCG(98.5%)，促進(jìn)結(jié)晶，用冷卻循環(huán)水降溫，控制結(jié)晶罐內(nèi)溫度為4°C，放置24h ；
[0029]4)將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物9.20g。HPLC檢測(cè)EGCG 含量 90.83%。
[0030]對(duì)比例2
[0031]重復(fù)對(duì)比例1，不同的是，整個(gè)結(jié)晶過程在常溫下進(jìn)行。
[0032]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物8.12g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 86.31%。
[0033]對(duì)比例3
[0034]重復(fù)實(shí)施例1,不同的是,結(jié)晶過程中攪拌的速率為350rpm。
[0035]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物8.62g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 91.35%。
[0036]對(duì)比例4
[0037]重復(fù)實(shí)施例1，不同的是，整個(gè)結(jié)晶過程在2°C進(jìn)行。
[0038]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物11.25g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 92.69%ο
[0039]實(shí)施例2
[0040]重復(fù)實(shí)施例1,不同的是,結(jié)晶過程中攪拌的速率為200rpm。
[0041]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物11.38g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 96.53%。
[0042]實(shí)施例3
[0043]重復(fù)實(shí)施例1,不同的是,結(jié)晶過程中攪拌的速率為300rpm。[0044]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物10.24g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 95.87%。
[0045]實(shí)施例4
[0046]重復(fù)實(shí)施例1，不同的是，以EGCG含量為20被％的茶多酚(無錫太陽綠寶科技有限公司生產(chǎn))100g為原料，結(jié)晶過程中結(jié)晶罐內(nèi)的溫度為8°C，攪拌結(jié)晶的時(shí)間為12h，攪拌的速率為200rpm。
[0047]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物10.21g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 96.11%。
[0048]實(shí)施例5
[0049]重復(fù)實(shí)施例1，不同的是，以EGCG含量為30wt%的茶多酚67g (桂林興達(dá)制藥廠生產(chǎn))，結(jié)晶過程中結(jié)晶罐內(nèi)的溫度為6°C，攪拌結(jié)晶的時(shí)間為20h，攪拌的速率為250rpm。
[0050]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物10.54g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 95.98%ο
[0051]實(shí)施例6
[0052]重復(fù)實(shí)施例1，不同的是，以EGCG含量為40wt%的茶多酚50g (長沙三福生物科技有限公司生產(chǎn))，結(jié)晶過程中結(jié)晶罐內(nèi)的溫度為6°C，攪拌結(jié)晶的時(shí)間為30h，攪拌的速率為150rpmo
[0053]將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物10.66g。HPLC檢測(cè)EGCG含量 95.96%ο
`[0054]實(shí)施例7
[0055]I)、2)、3)步驟同實(shí)施例1 ；
[0056]4)將晶體抽濾，用水沖洗，收集晶體再送入結(jié)晶罐中，加入晶體重量5倍的20%(v/v)乙醇加熱溶解，然后用冷卻循環(huán)水降溫，控制結(jié)晶罐內(nèi)溫度為4°C，開啟攪拌進(jìn)行攪拌結(jié)晶24h，使整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，控制攪拌速率為IOOrpm ；
[0057]5)將晶體抽濾，用水沖洗，冷凍干燥，得到白色粉末狀結(jié)晶物8.95g。HPLC檢測(cè)EGCG 含量 97.80%ο
[0058]由上述各實(shí)施例對(duì)比例可知，只有當(dāng)溫度控制在4~8°C、攪拌速率為100~300rpm的條件下進(jìn)行攪拌結(jié)晶，才能獲得高含量及高收率的晶體。
【權(quán)利要求】
1.一種高含量EGCG的提純方法，包括將含有目標(biāo)成分的液體或浸膏進(jìn)行結(jié)晶的步驟，其特征在于:在結(jié)晶步驟中，結(jié)晶時(shí)的溫度控制在4~8°C，整個(gè)結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，攪拌速率為100~300rpm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述攪拌速率為150 ~250rpm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述結(jié)晶時(shí)的溫度控制在4~6°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:整個(gè)結(jié)晶過程的時(shí)間為10~30h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述的含有目標(biāo)成分的液體或浸膏是指:由低含量EGCG茶多酚經(jīng)大孔樹脂柱純化后所得的洗脫液，或者是由該所得洗脫液經(jīng)濃縮后得到的浸膏。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述的低含量EGCG茶多酚是指EGCG含量為5~40wt%的茶多酚。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~6中任一項(xiàng)所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:還包括重結(jié)晶步驟，在重結(jié)晶步驟中，重結(jié)晶的溫度控制在4~8°C，整個(gè)重結(jié)晶過程在攪拌條件下進(jìn)行，攪拌速率為100~300rpm。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述攪拌速率為150 ~250rpm。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的高含量EGCG的提純方法，其特征在于:所述重結(jié)晶的溫度控制在4~6°C。
【文檔編號(hào)】C07D311/62GK103613575SQ201310626320
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】宋云飛, 梁遠(yuǎn)盛, 李元元, 李 杰, 蔣治舟 申請(qǐng)人:桂林萊茵生物科技股份有限公司