葎草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取葎草葉蛋白和總黃酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種葎草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取葎草葉蛋白和總黃酮的方法，先取葎草莖葉，洗凈晾干后，測(cè)定含水量和濕重，并將其切成片段；再加入蒸餾水后進(jìn)行勻漿，勻漿后壓濾得到葎草漿汁和濾餅；葎草漿汁經(jīng)過加熱、堿沉淀、離心得上清液和沉淀，沉淀經(jīng)冷凍干燥即得葎草葉蛋白；然后將濾餅和上清液混合，在堿性條件下提取、進(jìn)行酸沉，離心，將所得沉淀經(jīng)水洗、乙醇溶解、抽濾后，將濾液濃縮、冷凍干燥即得葎草總黃酮。本發(fā)明在一次工藝流程中同時(shí)分級(jí)提取葎草葉蛋白和葎草總黃酮，操作方便、提取工藝條件準(zhǔn)確可靠、得率和純度高，使葎草中的葉蛋白和黃酮這兩種重要的有效成分能同時(shí)得以開發(fā)利用，提升了葎草資源的開發(fā)利用價(jià)值。
【專利說明】蘀草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取蘀草葉蛋白和總黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物有效成分提取工藝的方法，具體涉及一種潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]_草[Humulus scandens (Lour.)Merr.]又名拉拉藤、拉拉秧、五爪龍、大葉五爪龍、割人藤等，為?？茲Р輰俨荼局参?，分布于我國(guó)除新疆、青海以外的所有省份，資源十分豐富。潷草營(yíng)養(yǎng)成分較為全面，據(jù)分析，潷草鮮草粗脂肪、粗纖維的含量分別為0.6%、2.1%。潷草干物質(zhì)中含有粗蛋白12.8%~20.46%，總黃酮含量約為2.03%，粗纖維15.4%~23.2%，無氮浸出物33.4%~41.8%,灰分7.1%~9.8%,鈣0.84%~1.46%,磷0.26%~0.32%,以及Fe、Mn、Cu、Zn、VC、VE、葉綠素、胡蘿卜素等多種微量元素及維生素。此外，潷草還含有木犀草素、葡萄糖甙、膽堿、揮發(fā)油、樹脂等物質(zhì)及潷草酮、蛇麻酮、牡荊素、B-潷草烯、石竹烯等多種化學(xué)活性物質(zhì)。從而具有清熱解毒、利尿消腫、消炎除濕、健胃化食等多種藥理功效。因此，潷草具有很好的開發(fā)利用價(jià)值。
[0003]目前有關(guān)潷草葉蛋白提取的工藝只有王桃云等進(jìn)行了研究(王桃云等，潷草葉蛋白提取工藝的優(yōu)化，蘇州科技學(xué)院學(xué)報(bào)一自然科學(xué)版，2005，22-1:59~64)，但其提取工藝只試驗(yàn)了單因素對(duì)葉蛋白得率的影響，未能進(jìn)行多因素綜合試驗(yàn)，致使工藝的穩(wěn)定性和重復(fù)性較差，另外潷草葉蛋白的得率也較低。
[0004]潷草黃酮的提取工藝研究有很多，但多是采用乙醇溶液提取。目前，提取潷草葉蛋白和黃酮的方法各自分開，都是以提取單項(xiàng)物質(zhì)為目的，這樣導(dǎo)致這些工藝存在重復(fù)處理、費(fèi)時(shí)，無法對(duì)潷草資源進(jìn)行深度利用，浪費(fèi)潷草資源等問題。對(duì)于從潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取葉蛋白和總黃酮的工藝尚無先例，而潷草莖葉中富含蛋白質(zhì)(干物質(zhì)百分含量達(dá)12.8%~20.46%)和總黃酮(干物質(zhì)百分含量約為2.03%)。因此，研發(fā)出一種從潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取葉蛋白和總黃酮的方法，對(duì)于提高潷草鮮嫩莖葉加工的效益，深度開發(fā)和利用潷草資源具有十分重要的意`義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，使得潷草中的葉蛋白和黃酮這兩種重要的有效成分能同時(shí)得以開發(fā)利用，所得葉蛋白和總黃酮得率、純度較高，葉蛋白提取率在85%以上、純度在60%以上，總黃酮提取率在85%以上、純度在60%以上，工藝條件準(zhǔn)確可靠、適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
[0006]潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，包括以下步驟:
[0007]步驟1，取潷草莖葉，洗凈晾干后，測(cè)定含水量和濕重，然后將其切成片段；
[0008]步驟2，將步驟I所得潷草莖葉加入9~11倍重量的水中，勻漿4~6min，然后壓濾得到潷草漿汁和濾餅；
[0009]步驟3，將步驟2所得潷草漿汁先在pH9~11、65~75°C條件下進(jìn)行加熱和堿性沉降，然后離心得上清液和沉淀，沉淀物經(jīng)冷凍干燥即得潷草葉蛋白；
[0010]步驟4，將步驟2所得潷草漿汁和步驟3所得上清液混合，在PH9~11、70~90°C條件下提取30~90min，然后滴加酸液調(diào)節(jié)pH2~4，離心，所得沉淀經(jīng)水洗、乙醇溶解、抽濾后，將濾液濃縮、冷凍干燥即得潷草葉總黃酮。
[0011]作為上述發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選，所述步驟2中勻漿時(shí)間為5.5min。
[0012]作為上述發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選，所述步驟3中堿性沉降pH為10，沉降溫度為71°C。
[0013]作為上述發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選，所述步驟4中提取條件為pHl1、溫度90°C，提取時(shí)間為30min,滴加酸液后混合液pH為3。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點(diǎn)在于:第一，本發(fā)明在一次工藝工程中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和潷草總黃酮，使得潷草中的葉蛋白和黃酮這兩種重要的有效成分能同時(shí)得以開發(fā)利用，提升了潷草資源的開發(fā)利用價(jià)值；第二，本發(fā)明克服了以往潷草總黃酮制備工藝中采用比色法定量導(dǎo)致測(cè)定總黃酮含量偏高且不能直接獲取總黃酮的缺點(diǎn)，利用優(yōu)化的堿提酸沉法獲得較高純度的潷草總黃酮；第三，所得葉蛋白和總黃酮得率、純度較高，葉蛋白提取率在85%以上、純度在60%以上，總黃酮提取率在85%以上、純度在60%以上；第四，采用響應(yīng)面和正交設(shè)計(jì)方法優(yōu)化潷草葉蛋白和潷草總黃酮的提取工藝，確保了提取工藝條件準(zhǔn)確可靠，具有安全、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，適用于大規(guī)模生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為提取潷草葉蛋白和潷草總黃酮的工藝流程圖；圖2為潷草葉蛋白沉降溫度與打漿時(shí)間對(duì)潷草葉蛋白得率的響應(yīng)面和等值線圖；圖3為潷草葉蛋白沉降pH與打漿時(shí)間對(duì)潷草葉蛋白得率的響應(yīng)面和等值線圖；圖4為潷草葉蛋白沉降溫度與潷草葉蛋白沉降pH對(duì)潷草葉蛋白得率的響應(yīng)面和等值線圖。
【具體實(shí)施方式】
`[0016]實(shí)施例1
[0017]參照?qǐng)D1所示，潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，包括以下步驟:
[0018]步驟1，取8月份采集的鮮嫩潷草莖葉，用蒸餾水洗凈，在常溫下晾干外表水，測(cè)定其含水量和重量后，將其直切成約0.5cm長(zhǎng)度片段；
[0019]步驟2，將步驟I所得潷草莖葉加入重量10倍的水中，用高速勻漿機(jī)將其制作成勻漿狀，然后將汁液完全壓濾出來；
[0020]步驟3,在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken的中心組合設(shè)計(jì)原理，以打衆(zhòng)時(shí)間、葉蛋白沉降溫度和葉蛋白沉降PH三個(gè)因素為自變量(分別以X1, X2, X3表示)，以潷草葉蛋白得率為響應(yīng)值設(shè)計(jì)了三因素三水平共15個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，其中15個(gè)實(shí)驗(yàn)點(diǎn)分為12個(gè)析因點(diǎn)和3個(gè)零點(diǎn)。
[0021]步驟4，以步驟2所得濾渣和步驟3葉蛋白沉淀后離心所得的上清液為原料，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取對(duì)潷草總黃酮制備影響較大的因素，根據(jù)正交設(shè)計(jì)法設(shè)計(jì)原理，設(shè)計(jì)四因素三水平的試驗(yàn)，研究堿提pH、提取溫度、提取時(shí)間及酸沉pH對(duì)潷草總黃酮得率的影響；然后將潷草總黃酮沉淀物進(jìn)行蒸餾水洗滌，乙醇溶解、抽濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮和冷凍干燥處理，得到總黃酮。
[0022]1.響應(yīng)面試驗(yàn)
[0023](I)響應(yīng)面試驗(yàn)具體包括如下幾個(gè)方面實(shí)驗(yàn):
[0024]X1:打衆(zhòng)時(shí)間(4min~6min)對(duì)_草葉蛋白得率的影響
[0025]X2:潷草葉蛋白沉降溫度(65°C~75°C)對(duì)潷草葉蛋白得率的影響
[0026]X3:潷草葉蛋白沉降pH (9~11)對(duì)潷草葉蛋白得率的影響
[0027](2)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)表:
[0028]表1三因素三水平響應(yīng)面分析試驗(yàn)設(shè)計(jì)表
[0029]
【權(quán)利要求】
1.潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，其特征在于:包括以下步驟: 步驟1，取潷草莖葉，洗凈晾干后，測(cè)定含水量和濕重，然后將其切成片段； 步驟2，將步驟I所得潷草莖葉加入9~11倍重量的水中，勻漿4~6min，然后壓濾得到潷草漿汁和濾餅； 步驟3，將步驟2所得潷草漿汁先在pH9~11、65~75°C條件下進(jìn)行加熱和堿性沉降，然后離心得上清液和沉淀，沉淀經(jīng)冷凍干燥即得潷草葉蛋白； 步驟4，將步驟2所得潷草漿汁和步驟3所得上清液混合，在pH9~11、70~90°C條件下提取30~90min，然后滴加酸液調(diào)節(jié)pH 2~4，離心，所得沉淀經(jīng)水洗、乙醇溶解、抽濾后，將濾液濃縮、冷凍干燥即得潷草葉總黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，其特征在于:所述步驟2中勻漿時(shí)間為5.5min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，其特征在于:所述步驟3中堿性沉降pH為10，沉降溫度為71 °C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的潷草鮮嫩莖葉中同時(shí)分級(jí)提取潷草葉蛋白和總黃酮的方法，其特征在于:所述步驟4中提取條件為pHll、溫度90°C，提取時(shí)間為30min，滴加酸液后混合液PH為3。`
【文檔編號(hào)】C07K1/14GK103819534SQ201410091468
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月13日
【發(fā)明者】王桃云, 薛凱, 陳子欣, 張慈安, 閔輝 申請(qǐng)人:蘇州科技學(xué)院