海參內(nèi)臟降壓活性肽及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海參內(nèi)臟降壓活性肽及其制備方法，其特點(diǎn)是，它由下述方法制成，海參內(nèi)臟沖洗浸泡，浸泡后撈出，控凈水，加蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；漿體殺菌、熱變性處理；冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶，恒溫酶解；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶10min，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液通過超濾膜，收集濾過液；將濾過液進(jìn)行脫苦處理；制成口服液形式、凍干品形式和噴霧干燥后的粉末形式的產(chǎn)品；產(chǎn)品安全性高，沒有毒副作用，降壓作用平穩(wěn)，還具有多功能性和易吸收的特點(diǎn)，同時具有抗消化作用，加工過程不產(chǎn)生三廢污染，環(huán)保。
【專利說明】海參內(nèi)臟降壓活性肽及其制備方法
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及海參內(nèi)臟加工【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地講是海參內(nèi)臟降壓活性肽及其制備方法。
[0002]技術(shù)背景:
1、高血壓的危害及現(xiàn)狀:高血壓是一種常見的心血管疾病，它發(fā)病率高，常伴有心臟、血管、肺以及腎臟等器官功能性或器質(zhì)性改變，是引發(fā)心、腦、腎和眼血管等各種并發(fā)癥和導(dǎo)致中風(fēng)、促進(jìn)動脈粥樣硬化、冠心病的一個重要危險(xiǎn)因子。高血壓早期階段一般沒有什么不適癥狀，直至發(fā)生臨床現(xiàn)象一心臟病發(fā)作、腦血管破裂，因此高血壓又被稱為“無聲殺手”；統(tǒng)計(jì)資料表明，高血壓發(fā)病率在發(fā)達(dá)國家達(dá)到20%以上，世界各國的平均發(fā)病率為10%-20%，且人群分布廣，包括老年人、中年人和兒童全世界每年因高血壓死亡的人數(shù)達(dá)1200 萬。
[0003]2、高血壓的分類與成因:高血壓一般有兩種類型:原發(fā)性高血壓和繼發(fā)性的高血壓，前者要是由于周圍小動脈血管口徑變小或血液粘滯度增加，造成外周阻力過高所致；而血容量與心輸出量的增高、血管的僵硬程度與血管的充盈程度均影響血壓的變化；同時植物性神經(jīng)系統(tǒng)對血壓的調(diào)節(jié)作用也是一個重要因素。此外影響血壓的任何環(huán)節(jié)發(fā)生功能性或器質(zhì)性病變，都會引起高血壓。這些因素主要是由遺傳、肥胖、缺鈣、膳食中鈉鹽過多、吸煙、情緒緊張或其他環(huán)境刺激等因素引起的，病程發(fā)展較慢。繼發(fā)性的高血壓，也叫癥狀性高血壓，是在某些疾病過程中并發(fā)的血壓升高，其成因主要有內(nèi)分泌病、腎臟疾病、心臟功能異常等。其中引起腎性高血壓的常見疾病有:①腎實(shí)質(zhì)性病變。以急性或慢性腎小球腎炎、腎盂、腎炎為最常見，其次有先天性腎臟病變(多囊腎、馬蹄腎、腎發(fā)育不全等)、腎結(jié)核、腎結(jié)石、腎腫瘤、繼發(fā)性的腎病變(各種結(jié)締組織疾病、糖尿病腎臟病變、腎淀粉樣病變、放射性腎炎、創(chuàng)傷)腎血管疾病。各種原因引起的腎動脈或其分支的狹窄，以動脈粥樣硬化、肌纖維增生最常見，非特異性動脈炎、移植排斥性纖維變性均可引起腎動脈缺血、血栓形成或栓塞而引起腎性高血壓；③尿路梗塞性疾病。如尿路結(jié)石、腎臟及尿路腫瘤等；④腎周圍的炎癥、膿腫、腫瘤、創(chuàng)傷、出血等也能引起血壓升高。血管病變引起的高血壓狹窄阻塞性病變，乳腺天性主動脈縮窄常引起上半身血壓升高；多發(fā)性大動脈炎常導(dǎo)致一側(cè)或雙側(cè)腎動脈近端不同程度阻塞，較嚴(yán)重者可引起頑固性血壓升高。引起高血壓的藥物有:女性口服避孕藥、長期應(yīng)用腦腎上腺皮質(zhì)激素等。
[0004]3、高血壓與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶:
I)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶:血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)是一種含鋅的二肽酶，廣泛分布在哺乳動物的組織中，各組織中的ACE是一種由單一肽鏈組成的糖蛋白。ACE最適pH值隨底物的不同而變 化并受氯離子的影響在氯離子存在下對于長肽底物如血管緊張素I或緩激肽，ACE最適pH值為7.5 ;對于三肽底物如:PHe-His-Leu、Hip-His-Leu或Hip-Gly-Gly其最適pH值為8.3。氯離子對底物水解速率的影響亦隨特定的底物不同而變化。氯離子能夠顯著提高ACE對血管緊張素1、PHe-His-Leu、Hip-His-Leu和Hip-Gly-Gly的水解速率，而緩激肽的水解受氯離子濃度的影響很小。
[0005]2) ACE對血壓的調(diào)節(jié)作用:在腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)和激肽釋放酶一激肽系統(tǒng)(KKS)中，ACE對機(jī)體血壓和心血管功能起著重要的調(diào)節(jié)作用。在RAS中，ACE處于核心地位，可以催化不具有活性的十肽血管緊張素I轉(zhuǎn)化為具有強(qiáng)烈收縮血管作用的八肽血管緊張素II，同時，血管緊張素II還能刺激促進(jìn)醛固酮的分泌進(jìn)而促進(jìn)腎臟對水、Na+、K+的重吸收，引起鈉貯量和血容量的增加，使血壓升高；此外，在KKS中，ACE能降解具有舒張血管作用及/或降壓作用的舒緩激肽，使之失去舒張血管和降壓作用，也使血壓升高。
[0006]因此，醫(yī)學(xué)界認(rèn)為，抑制ACE的活性是治療高血壓的一種重要而有效的方法。在研發(fā)治療高血壓的藥物的過程中，ACE的抑制成為重要的靶標(biāo)。目前，大量高效、特異的ACE抑制劑在治療高血壓病和充血性心力衰竭中發(fā)揮著重要作用。
[0007]4、現(xiàn)行高血壓藥物存在的弊端:目前，臨床常用的有五大降壓藥，有利尿劑、β -阻滯劑、α -阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，多數(shù)具有副作用，尤其是西藥類。高血壓一般很難徹底治愈，大多數(shù)高血壓病患者需要終身服用降壓藥，以控制血壓，因而降壓藥物的不良反應(yīng)也倍受患者重視。目前藥物的治療具有短效、多器官損傷作用，且絕大部分藥都是經(jīng)肝代謝腎排泄，對肝腎都有一定損害，并且引發(fā)高血壓所并發(fā)的各種代謝紊亂，以及其毒副作用將給高血壓患者的遠(yuǎn)期后患。[0008]5、食物蛋白源降壓肽的研究現(xiàn)狀:
I)降壓肽與ACE抑制劑的區(qū)別:降血壓肽和ACE抑制肽其實(shí)并不完全一樣。經(jīng)動物實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)證明具有抗高血壓作用的肽類物質(zhì)稱為降血壓肽，而經(jīng)體外活性檢測方法證明的肽類物質(zhì)稱為ACE抑制肽。降血壓肽對人體有作用，能夠使高血壓患者的血壓降低；而ACE抑制肽只是在體外對ACE有抑制作用，但不能保證經(jīng)口服后就一定具有降壓的作用。一些對ACE抑制活性并不高的肽卻能顯著降壓，這是因?yàn)檫@些肽類物質(zhì)經(jīng)過人體消化道時會被體內(nèi)的蛋白酶水解，可能被水解成抑制活性更高的片斷，也可能被水解成抑制活性較低或幾乎沒有活性的片斷。根據(jù)這一現(xiàn)象，可以把這些肽分為3類:(1) 口服后活性升高的肽，在口服后，經(jīng)胃腸蛋白酶分解成降壓活性更強(qiáng)的片斷，活性比原來提高8倍至多，而且前者在口服4h后血壓的降低量才達(dá)到最大，而后者在2h之后就降到最大，最小有效劑量分別為8mg/kg和2.25mg/kg ； (2) 口服后活性降低的肽,例如Saito等在米糟中得到一個四肽Tyr-Gly-Gly-Tyr，其IC5Q=16.2μπι01/1，但口服劑量達(dá)到100mg/kg時還沒有降壓效果。盡管這些肽對ACE有明顯的抑制活性，但它們可能在口服的過程中被人體內(nèi)的蛋白酶酶解成自由氨基酸或失活片斷；(3) 口服后活性幾乎不變的肽，例如Val-Trp、Ile-Tyr和Leu-1le-Tyr等。所以，要想使ACE抑制肽在體內(nèi)發(fā)揮作用，必須要保證在其到達(dá)作用靶點(diǎn)時，能夠保持它的完整形式或被酶解成有活性的片斷。
[0009]2)食物蛋白源降壓肽的降壓特點(diǎn):食物蛋白在母體蛋白序列中并不具有生物活性，只有經(jīng)過體內(nèi)或體外的酶解如在胃腸道消化以及食物加工后，分解為具有特定氨基酸序列的短肽，其活性才能被釋放出來，從而發(fā)揮降壓的作用。具有抑制ACE活性的肽有如下特點(diǎn):(1)這些肽的相對分子質(zhì)量比較低，大約包含2~12個氨基酸殘基。一般情況下，從N端延長某個二肽的肽鏈，它相應(yīng)三肽的抑制活性增強(qiáng)，但如果繼續(xù)延長，它的活性就會降低；(2)C端含有苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸的三肽或二肽，有比較高的抑制活性；
(3)在N端具有支鏈的疏水性氨基酸如纈氨酸和異亮氨酸，活性比較高，相反，在N端為脯氨酸則活性降低；(4) C端殘基上含有賴氨酸或精氨酸，可以提高肽的抑制活性，因?yàn)橘嚢彼峄蚓彼醾?cè)鏈上的胍或ε -氨基上的正電荷對抑制活性起著重要作用，取代C端的精氨酸殘基會導(dǎo)致其類似物活性基本喪失。目前，對ACE抑制肽的結(jié)構(gòu)分析還局限于對已知序列的肽進(jìn)行定性的分析，因此對其作用機(jī)制等方面還需要進(jìn)一步的研究。
[0010]3)食物蛋白源降壓肽的來源及種類:人們最初從蛇毒液中發(fā)現(xiàn)抑制肽，這些抑制肽長度一般5~13個氨基酸，大多數(shù)肽的C端為Ala-Pro和Pro-Pro，其中Pyr-Trp-Pro-Arg-Pro-Gln-1le-Pro-Pro對高血壓動物的降壓效應(yīng)最強(qiáng)，并曾經(jīng)用于體外注射治療人高血壓，自從該肽及其降壓作用發(fā)現(xiàn)以來，人們就以該肽作為模型藥物不斷進(jìn)行新的降壓藥物的設(shè)計(jì)，研究和生產(chǎn)出許多臨床使用非常有效的抑制劑，如現(xiàn)仍廣泛使用的卡托普利等。自1965年Ferreira首次在南美茅頭蝮蛇毒液中發(fā)現(xiàn)了 ACE抑制肽，不斷有新的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽從不同的天然食物蛋白資源中提取分離出來。隨后，大量的抑制肽從不同食物蛋白酶解物中被分離鑒定出來，這些食物蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白、魚蛋白、豬雞肌肉、雞蛋蛋白、血紅蛋白、血衆(zhòng)蛋白、月父原蛋白、養(yǎng)麥蛋白、小麥蛋白、玉米蛋白、大?蛋白、腎?蛋白、小紅豆蛋白、菜籽蛋白、酒糟蛋白、大蒜以及藻類蛋白等。由此可知，食物蛋白中存在著大量的具有不同分子特性的抑制肽片斷。
[0011 ] 6、食物蛋白源降壓肽的優(yōu)點(diǎn):與人工合成的ACE相比，食品原材料制備的ACE抑制肽具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn):(I)只對高血壓患者起到降壓的作用，對血壓正常者無降壓作用，因此不會產(chǎn)生降壓過度的問題；(2)這些肽是用食用級的酶在溫和條件下制得的，其安全性極高，無毒副作用；(3)它除了有降壓的功能外，往往還同時具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增強(qiáng)人體免疫力等作用；(4)具有較高的熱穩(wěn)定性、水溶性等優(yōu)點(diǎn)，因而又可作為功能因子添加到飲料、食品中去，市場前景極好。
[0012]7、目前食物原料制備的降壓活性肽存在的問題:1)雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)、并從許多食物蛋白(如花生蛋白、大豆蛋白、豬血蛋白和一些魚類蛋白)中制取了具有體外抑制ACE活性的肽，但是這些肽類不抗消化，體外測定有活性，口服后基本都沒有體內(nèi)降壓活性。因此，具有體外活性的ACE活性抑制肽很多，但是真正能夠抗消化、口服以后仍然具有降壓活性的卻非常少，是目前該領(lǐng)域發(fā)展緩慢的主要原因之一。
[0013]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是克服上述已有技術(shù)的不足，而提供一種海參內(nèi)臟降壓活性肽。
[0014]本發(fā)明的另一目的是提供一種海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法。
[0015]本發(fā)明主要解決現(xiàn)有的活性肽不抗消化，基本都沒有體內(nèi)降壓活性的問題。
[0016]本發(fā)明的技術(shù)方案是:海參內(nèi)臟降壓活性肽，其特殊之處在于，它由下述方法制成，海參內(nèi)臟沖洗浸泡，浸泡后撈出，控凈水，加蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；漿體殺菌、熱變性處理；冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶，恒溫酶解；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液通過超濾膜，收集濾過液；將濾過液進(jìn)行脫苦處理；制成口服液形式、凍干品形式和噴霧干燥后的粉末形式的產(chǎn)品。
[0017]進(jìn)一步的,所述的海參內(nèi)臟為海參腸或海參內(nèi)壁或二者混合。
[0018]本發(fā)明的海 參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特殊之處在于，包括如下工藝步驟:
a海參內(nèi)臟前處理:海參內(nèi)臟沖洗浸泡，浸泡后撈出，控凈水，加蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；b酶解:將勻漿后的漿體殺菌、熱變性處理；冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶，恒溫酶解；
c殺酶:酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液； d超濾:上清液通過超濾膜，收集濾過液；采用的超濾膜為截留分子量IKDalOKDa的； e脫苦:將濾過液進(jìn)行脫苦處理；
f產(chǎn)品劑型:制成口服液形式、凍干品形式和噴霧干燥后的粉末形式。
[0019]進(jìn)一步的，b步驟所述的熱變性處理，處理溫度60-100°C，最佳溫度為80°C，時間10分鐘。
[0020]進(jìn)一步的，b步驟所述的酶解加入中性蛋白酶的量為5000U/g原料，溫度為恒溫45°C，酶解9小時。
[0021]進(jìn)一步的，d步驟所述的超濾膜為截留分子量5KDa的。
[0022]進(jìn)一步的，e步驟所述的脫苦采用4種方法，第一種是加入濾過液重量1.5% β -環(huán)糊精，于60°C下包埋60min ;第二種加入濾過液重量0.5%粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭；第三種用香料掩蓋法；第四種先加入濾過液重量0.5%粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭后，再加入濾過液重量1.5%β -環(huán)糊精，于65°C下包埋30mino
[0023]本發(fā)明所述的海參內(nèi)臟降壓活性肽，經(jīng)過動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)可知:
(I)對血壓正常的兔子 沒有影響，對收縮壓在120mmHg左右的正常兔子灌胃海參內(nèi)臟降壓肽，血壓均在正常范圍內(nèi)波動，隨灌胃劑量加大，并不能導(dǎo)致其血壓降至正常值以下；海參內(nèi)臟降壓肽能對高血壓動物起到降壓作用，但對血壓正常的動物無降壓作用。也就是說，此降壓肽為實(shí)際無毒物質(zhì)。
[0024](2)對高血壓的兔子，也不會無限制降壓造成低血壓；對于高血壓的兔子，隨灌胃劑量的增大，血壓下降值變大，維持時間更長；但隨灌胃劑量的加大并不能使動物血壓無限地下降，當(dāng)灌胃劑量超過60mg/kg后,血壓下降20~24mmHg至正常血壓120mmHg左右，以后灌胃劑量再加大血壓也不會繼續(xù)下降，而是使血壓維持在正常血壓水平。
[0025](3)抗消化，分別用胃消化液、胰消化液、胃胰消化液等模擬人胃的消化過程對海參內(nèi)臟降壓肽模擬消化處理后，降壓效果幾乎不變。
[0026]本發(fā)明所述的海參內(nèi)臟降壓活性肽，與四種臨床常用化學(xué)合成降壓藥物:纈沙坦(ACE II受體阻滯劑)、貝那普利(ACEI)、北京O號(復(fù)方降壓藥)和促福達(dá)(鈣拮抗劑)相比較。
[0027]體外試驗(yàn)顯示:北京降壓O號抑制率最低，貝那普利抑制率最高達(dá)到64.9%，降壓肽次之，而纈沙坦和促福達(dá)沒有抑制效果。
[0028]體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在灌胃劑量正常條件下，鹽酸貝那普利的降壓幅度最大，降壓肽次之，其他效果均不太理想；而鹽酸貝那普利由于容易使血壓降到正常值以下，對病人是不利的，而且這類化學(xué)合成的藥物會引起咳嗽，味覺喪失，腎臟損傷及血管神經(jīng)性水腫等副作用，且作用時間短，停藥后血壓易反彈。
[0029]本發(fā)明所述的海參內(nèi)臟降壓活性肽與已有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著進(jìn)步，1、其食物蛋白來源的海參內(nèi)臟降血壓肽是在溫和條件下酶解而得到的，安全性高，沒有毒副作用，只對高血壓患者起到降壓作用，對血壓正常者無降壓作用，降壓作用平穩(wěn)，還具有多功能性和易吸收的特點(diǎn)；2、具有抗消化作用，口服后有體內(nèi)降壓活性；3、加工過程不產(chǎn)生三廢污染，環(huán)保。
[0030]【具體實(shí)施方式】:
為了更好地理解與實(shí)施，下面結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明；所舉實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并非用于限制本發(fā)明的范圍。
[0031]實(shí)施例1，稱取100g冰島海參的海參內(nèi)壁和海參腸的混合物，沖洗去泥沙雜質(zhì)，浸泡后撈出，控凈水，加200mL蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；將勻漿后的漿體殺菌、熱變性處理，處理溫度80°C，時間10分鐘；將打漿好的海參內(nèi)臟冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶(5000U/g原料)，在45°C溫度下恒溫酶解9小時；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液分別通過不同分子量的超濾膜，收集濾過液，需用的超濾膜為截留分子量5kDa的；然后進(jìn)行脫苦，先加入濾過液重0.5%的粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭后，再加入濾過液重1.5%β-環(huán)糊精，于65°C下包埋30min，使得降壓肽產(chǎn)生了緩釋效果，降壓維持時間更長，效果更好；按常規(guī)工藝制成口服液形式，口服液即使經(jīng)過120°C、30min的滅菌處理之后，降壓效果依然很好。
[0032]實(shí)施例2，稱取100g冰島海參的海參腸，沖洗去泥沙雜質(zhì)，浸泡后撈出，控凈水，加200mL蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；將勻漿后的漿體殺菌、熱變性處理，處理溫度60°C，時間10分鐘；將打漿好的海參腸冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶(5000U/g原料)，在45°C溫度下恒溫酶解9小時；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液分別通過不同分子量的超濾膜，收集濾過液，需用的超濾膜為截留分子量IKDa ;然后進(jìn)行脫苦，用香料掩蓋法；按常規(guī)工藝制成凍干品形式。
[0033]實(shí)施例3、稱取100g冰島海參的海參內(nèi)壁，沖洗去泥沙雜質(zhì)，浸泡后撈出，控凈水，加200mL蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；將勻漿后的漿體殺菌、熱變性處理，處理溫度100°C，時間10分鐘；將打漿好的海參腸冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶(5000U/g原料)，在45°C溫度下恒溫酶解9小時；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液分別通過不同分子量的超濾膜，收集濾過液，需用的超濾膜為截留分子量IOKDa的；然后進(jìn)行脫苦，加入濾過液重1.5%β -環(huán)糊精，于60°C下包埋60min，或加入濾過液重0.5%粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭；按常規(guī)工藝制成噴霧干燥后的粉末形式，研究中發(fā)現(xiàn)，冷凍會對降壓效果有影響，冷凍時間越長，所的產(chǎn)品的降壓效果越差。
[0034] 本發(fā)明所述的海參內(nèi)臟降壓活性肽的原料也可為除冰島海參外的其它品種海參。
【權(quán)利要求】
1.海參內(nèi)臟降壓活性肽，其特征在于，它由下述方法制成，海參內(nèi)臟沖洗浸泡，浸泡后撈出，控凈水，加蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿；漿體殺菌、熱變性處理；冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶，恒溫酶解；酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液；上清液通過超濾膜，收集濾過液；將濾過液進(jìn)行脫苦處理；制成口服液形式、凍干品形式和噴霧干燥后的粉末形式的產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海參內(nèi)臟降壓活性肽，其特征在于，所述的海參內(nèi)臟為海參腸或海參內(nèi)壁或二者混合。
3.權(quán)利要求1或2的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，包括如下工藝步驟: a海參內(nèi)臟前處理:海參內(nèi)臟沖洗浸泡，浸泡后撈出，控凈水，加蒸餾水，切碎，然后放入組織攪碎機(jī)中勻漿； b酶解:將勻漿后的漿體殺菌、熱變性處理；冷卻后，放入大燒杯，攪拌加入中性蛋白酶，恒溫酶解； c殺酶:酶解完成后，將水解液取出沸水滅酶lOmin，冷卻后將其過濾得到上清液； d超濾:上清液通過超濾膜，收集濾過液；采用的超濾膜為截留分子量IKDalOKDa的； e脫苦:將濾過液進(jìn)行脫苦處理； f產(chǎn)品劑型:制成口服液形式、凍干品形式和噴霧干燥后的粉末形式。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，b步驟所述的熱變性處理，處理溫度60-100°C，時間10分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，所述的處理溫度為80°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，b步驟所述的酶解加入中性蛋白酶的量為5000U/g原料，溫度為恒溫45°C，酶解9小時。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，d步驟所述的超濾膜為截留分子量5KDa的。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的的海參內(nèi)臟降壓活性肽的制備方法，其特征在于，e步驟所述的脫苦采用4種方法，第一種是加入濾過液重量1.5%β -環(huán)糊精，于60°C下包埋60min ；第二種加入濾過液重量0.5%粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭；第三種用香料掩蓋法；第四種先加入濾過液重量0.5%粉末活性炭，55°C下吸附20min，過濾除去活性炭后，再加入濾過液重量1.5%β -環(huán)糊精,于65°C下包埋30min。
【文檔編號】C07K1/34GK103911414SQ201410140520
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2014年4月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月10日
【發(fā)明者】劉凱, 徐蓮, 高瑩, 孫姿姿, 魏玉良 申請人:劉凱